專利名稱：新的氨基丙基次膦酸的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及對一種或多種GABAB受體具有親和性的新的化合物，并涉及其藥用鹽、溶劑化物和立體異構體。本發(fā)明還涉及它們的制備方法、含有所述治療活性化合物的藥物組合物并涉及所述活性化合物在治療中的用途。
背景技術：
反流胃食管反流疾病(GORD)是最常見的上部胃腸道疾病?，F行的治療旨在降低胃酸分泌，或者通過提高食管的清除率、食管下部括約肌緊張性和胃排空來降低食管與酸的接觸。較早時認為反流的主要機理依賴于低張的食管下部括約肌。但是，最近的研究(例如Holloway&Dent(1990)，Gastroenterol.Clin.N.Amer.19，517-535)業(yè)已表明大多數反流發(fā)作發(fā)生于瞬間食管下部括約肌松弛期間，下文中稱為TLOSR，即非吞咽引起的松弛。還已表明GORD患者中的胃酸分泌通常是正常的。
所以，需要降低TLOSR發(fā)生率并由此預防反流的化合物。
適于抑制食管下部括約肌松弛的含有局麻藥的藥物組合物公開于WO87/04077和US5,036,057。
最近，已表明GABAB-受體激動劑抑制TLOSR，其公開于WO98/11885。
GABAB受體激動劑GABA(4-氨基丁酸)是中樞和外周神經系統(tǒng)中的內源性神經遞質。按照慣例將GABA受體分為GABAA和GABAB受體亞型。GABAB受體屬于G蛋白偶聯(lián)受體的總類。GABAB受體激動劑被描述用于治療CNS紊亂，如脊柱強直、心血管疾病、哮喘、腸動力性疾病如應激性腸綜合征(IBS)中的肌肉松弛并用作促運動劑(prokinetic)和止咳劑。還已公開了GABAB受體激動劑用于治療嘔吐(WO96/11680)，且在最近如上所述用于抑制TLOSR(WO98/11885)。
研究得最深入的GABAB受體激動劑是巴氯芬(4-氨基-3-(氯苯基)丁酸)，其公開于瑞典專利No.CH449,046中。幾年來，巴氯芬已被用作鎮(zhèn)痙劑。EP0356128描述了特定的化合物(3-氨基丙基)甲基次膦酸作為強GABAB受體激動劑在治療中的用途。EP0181833公開了被取代的3-氨基丙基次膦酸，發(fā)現其對GABAB受體位點具有非常高的親和性。類似于巴氯芬，例如，該化合物可以用作肌松藥。EP0399949公開了(3-氨基丙基)甲基次膦酸的衍生物，其被描述為強的GABAB受體激動劑。據稱這些化合物用作肌松藥。EP0463969和FR2722192是有關4-氨基丁酸衍生物的兩個申請，它們在丁基鏈上的3位碳上具有不同的雜環(huán)取代基。就有關對GABAB受體的親和性及其肌肉松弛作用方面，J.Med.Chem.(1995)，38，3297-3312中討論了幾種次膦酸類似物的構效關系。在該文章中結論是，較巴氯芬而言，用3-氨基-2-羥基丙基甲基次膦酸的(S)-對映體獲得了較強的肌肉松弛作用，且沒有出現不需要的CNS作用。
在文獻中，亞磷原子上連接有氫原子的次膦酸也被稱作亞膦酸。它們是該化合物的兩種名稱，且這兩種名稱都是可以使用的。但是，我們?yōu)楸景l(fā)明的化合物選擇使用次膦酸這一名稱。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了式I的新化合物及其藥用鹽、溶劑化物和立體異構體， 其中R1表示氫原子，羥基，低級烷基，低級烷氧基或鹵素；R2表示羥基，巰基，鹵素或氧代基團；R3表示氫原子或低級烷基(任選地被羥基、巰基、低級烷氧基、低級硫代烷氧基或芳基取代)；R4表示氫原子，低級烷基(任選地被芳基取代)，或芳基；其中不包括
i)(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸的外消旋體，及ii)(2R/S，3R)-(3-氨基-2-羥基丁基)次膦酸。
在優(yōu)選的實施方案中，R1表示氫原子，低級烷基或鹵素；R2表示鹵素，羥基或氧代基團；R3表示氫原子；而R4表示氫原子；其中不包括(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸的外消旋體。
更優(yōu)選的化合物是(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸、(2R)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸、(2S)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸、(3-氨基-2-氟-1-甲基丙基)次膦酸、(3-氨基-2-氧代丙基)次膦酸、(2S)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸、(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸和(3-氨基-1-氟-2-羥基丙基)次膦酸。
在本發(fā)明的范圍內，應理解當R2是氧代基團時，R2和該碳原子之間的鍵是雙鍵。
在本發(fā)明的范圍內，應理解“低級”基團和化合物，例如，具有不超過7，特別是不超過4個碳原子。另外，一般性術語含義如下低級烷基是，例如，C1-C4烷基，如甲基、乙基、正丙基或正丁基，又如異丙基、異丁基、仲丁基或叔丁基，但也可以是C5-C7烷基基團如戊基、己基或庚基基團。
低級烷氧基是，例如，C1-C4烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基或正丁氧基，又如異丙氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基，但也可以是C5-C7烷氧基基團，如戊氧基、己氧基或庚氧基基團。
低級硫代烷氧基是，例如，C1-C4硫代烷氧基，如硫代甲氧基、硫代乙氧基、正硫代丙氧基或正硫代丁氧基，又如硫代異丙氧基、硫代異丁氧基、仲硫代丁氧基或叔硫代丁氧基，但也可以是C5-C7硫代烷氧基基團，如硫代戊氧基、硫代己氧基或硫代庚氧基基團。
鹵素原子序數不超過35的鹵素，如氟或氯，及不太優(yōu)選的溴。
本發(fā)明式I的化合物具有兩性特性并可以以內鹽的形式存在。它們還可以形成酸加成鹽和堿加成鹽。這些鹽特別是藥用酸加成鹽，以及與堿形成的藥用鹽。形成這些鹽的適宜的酸包括，例如，無機酸如氫氯酸、氫溴酸、硫酸或磷酸，或者有機酸如磺酸和羧酸。堿加成鹽為，例如，堿金屬鹽，如鈉或鉀鹽，或者堿土金屬鹽，如鈣或鎂鹽，以及銨鹽，如與氨氣或有機胺形成的鹽。這些鹽可以通過常規(guī)方法制備。
當在該分子中存在一個或多個立體中心時，式I的化合物可以是立體異構體混合物的形式，即非對映異構體和/或外消旋體的混合物，或者是單一的立體異構體的形式，即單一的對映異構體和/或非對映異構體。該化合物也可以是溶劑化物的形式，例如，水合物。
式I的所有化合物可以用于抑制TLOSR，并因此用于治療胃食管反流疾病。所述的抑制TLOSR還意味著式I的所述化合物可以用于治療嬰兒反胃。嬰兒反胃的有效處置將是改善由于攝入營養(yǎng)物的過度損失帶來的生長能力不足的重要手段。此外，這些新化合物可以用于治療GORD-相關性或非-GORD相關性哮喘，噯氣，咳嗽，疼痛，可卡因成癮，嗝逆，IBS，消化不良，嘔吐和感受傷害。
與現有技術中所述的(J.Med.Chem.(1995)3297-3312和TheGABA Receptors，第二版，S.J Enna和Norman Bowery編，Humana Press(1997)，特別是p.281-282)恰恰相反，盡管存在P-H鍵，本發(fā)明的化合物具有高得驚人的代謝能力。這些化合物還具有高得驚人的治療指數。
制備本發(fā)明的式I化合物可以通過下列方法之一制備。
A)式II的化合物 其中R1和R4如上述式I所定義，X是氫原子或保護基如-CCH3(OCH2CH3)2，Z是保護基如叔丁氧羰基，而Y是氫原子或保護基如低級烷基，其中該式II的化合物可以按照方案1用進行了適當N-保護的氨基酸酯(其中R3定義如上，W是保護基如低級烷基，而Z如式II中所定義)與適當保護的次膦酸衍生物(其中R1如上述式I所定義，X和Y如式II所定義)，及堿如二異丙基氨化鋰通過縮合反應來合成， 方案1a)如果需要R4不是氫原子，則為了引入R4，通過N-烷基化反應任選地轉化，并隨后通過水解反應得到式III的化合物 其中R1、R3和R4如式I所定義，并任選地將上述所得化合物III轉變?yōu)槭絀II的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絀II的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得游離的式III化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽，或b)通過還原反應轉化，如果需要R4不是氫原子，則任選地進行N-烷基化反應，并最后通過水解反應得到式IV的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，并任選地將上述所得化合物IV轉變?yōu)槭絀V的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絀V的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得游離的式IV化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽，或c)通過還原反應轉化，接著進行脫氧鹵代反應，如果需要R4不是氫原子，則為了引入R4任選地進行N-烷基化反應，并最后通過水解反應得到式V的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，而Halo是鹵原子，并任選地將上述所得化合物V轉變?yōu)槭絍的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絍的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得游離的式V化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽；或者B)式VI的化合物 其中R1和R3如上述式I所定義，X是氫原子或保護基如-CCH(OCH2CH3)2，T是可以轉變?yōu)?NH2基團的基團，Y是氫原子或保護基如低級烷基，其中該式VI的化合物可以按照方案2，用2，3-環(huán)氧丙基衍生物，如適當的N-被保護的2，3-環(huán)氧丙基胺衍生物或環(huán)氧氯丙烷衍生物(其中R1和R3如上述式I所定義)與通過O-甲硅烷基化活化的適當保護的次膦酸衍生物(其中X和Y如式VI中所定義)，及Lewis酸如無水ZnCl2通過縮合反應來合成， 方案2a)進行其中三甲基甲硅烷基被氫原子代替的反應，定義如式VI中所述的T基團轉變?yōu)?NHR4的反應，其中R4如上述式I所定義，并最后通過水解反應得到式IV的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，并任選地將上述所得化合物IV轉變?yōu)槭絀V的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絀V的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得游離的式IV化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽，或b)進行其中三甲基甲硅烷基被氫原子代替的反應，氧化反應，定義如式VI中所述的T基團轉變?yōu)?NHR4的反應，其中R4如上述式I所定義，并最后通過水解反應得到式III的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，并任選地將上述所得化合物III轉變?yōu)槭絀II的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絀II的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得游離的式III化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽，或c)進行其中三甲基甲硅烷基被氫原子代替的反應，脫氧鹵代反應，定義如式VI中所述的T基團轉變?yōu)?NHR4的反應，其中R4如上述式I所定義，并最后通過水解反應得到式V的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，而Halo是鹵原子，并任選地將上述所得化合物V轉變?yōu)槭絍的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絍的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得式V的游離化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽；或者C)式VII的化合物 其中R1如上述式I所定義，X是氫原子或保護基如-CCH3(OCH2CH3)2，U是吸電子基團，如-CN或-CO2Et，其可以轉變?yōu)?CH2NH2基團，而Y是氫原子或保護基如低級烷基，而Halo是鹵原子，其中該式VI I的化合物可以按照方案3通過用不飽和的化合物(其中R1如上述式I所定義，U和Halo如式VII中所定義)與通過O-甲硅烷基化反應活化的適當保護的次膦酸衍生物(其中X和Y如式VII中所定義)進行加成反應來合成， 方案3進行其中U基團轉變?yōu)?NHR4的反應，其中R4如上述式I所定義，并進行水解反應得到式VIII的化合物 其中R1和R4如上述式I所定義，而Halo是鹵原子，并任選地將上述所得化合物VIII轉變?yōu)槭絍III的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絍III的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得式VIII的游離化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽；或者D)式IX的化合物，任選地為單一的立體異構體 其中R1、R3和R4如式I所定義，Z是保護基如叔丁氧羰基而Halo是鹵原子，其中該式IX的化合物可以按照方案4通過用親電性的化合物(其中R1、R3和R4定義如上，L是離去基團如碘，Z和Halo定義如上)與通過O-甲硅烷基化反應活化的次膦酸進行取代反應來合成， 方案4通過水解反應轉變?yōu)槭絍的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，并任選地將上述所得化合物V轉變?yōu)槭絍的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絍的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得游離的式V化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽；或者E)式XI的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，X是氫原子或保護基如-CCH3(OCH2CH3)2，而Y是氫原子或保護基如低級烷基，其中該式XI的化合物可以按照方案4將不飽和的次膦酸衍生物(其中R1、R3和R4定義如式I)用H2S、硫醇離子(HS-)或被保護的巰基化合物如芐基硫醇處理，從而通過加成反應進行合成，其中保護基隨后除去， 方案5通過水解反應轉變得到式XII的化合物， 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，并任選地將上述所得化合物XII轉變?yōu)槭絏II的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絏II的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得式XII的游離化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽。
發(fā)明詳述本發(fā)明通過下列非限制性實施例進行詳述。
實施例1.(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸在氬氣氛下，向冰浴冷卻的(3-氨基-2-氟-3-氧代丙基)(二乙氧基甲基)次膦酸乙酯的THF(四氫呋喃)溶液中，加入1MBH-THF。10分鐘后，將此溶液加熱回流2.5小時。將此溶液冷卻至室溫并加入6NHCl(200mL)。通過旋轉蒸發(fā)除去THF并將此水層回流2.5小時。將此溶液冷卻并蒸發(fā)。殘余物通過離子交換柱色譜純化(DOWEX50WX-8-200，H+型，3.5×4.0cm)。此離子交換樹脂用2∶1甲醇/水(400mL)預洗。溶解于1∶1甲醇/水的此粗品加樣到該柱上并用1∶1甲醇/水(400mL)洗滌。洗脫液變?yōu)?∶1甲醇/濃氫氧化銨。合并這兩個餾份(共150mL)并蒸發(fā)得到645mg(34％)的(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸，為白色固體。數據mp203-207℃；Rf＝0.35(60∶40∶1甲醇，二氯甲烷，濃氫氧化銨)；1H NMR(300MHz，D2O)δ7.11(d，J＝528Hz，1H)，5.18(dm，J＝54Hz，1H)，3.28-3.45(m，2H)，1.65-2.23(m，2H)；13C NMR(125MHz，D2O+二噁烷)δ87.8(d，J＝170Hz)，44.3(dd，J＝12.6，21.6Hz)，35.6(dd，J＝20.2，86.5Hz)；APIMSm/z＝142(M+H)+。
實施例2.(2S)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸將(2S)-(3-氨基-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(1.0g，3.5mmol)和濃鹽酸(50mL)的混合物加熱回流2小時。將此溶液冷卻至室溫并蒸發(fā)。此殘余物溶解于甲醇(100ml)并在生物學用1，2-環(huán)氧丙烷(2ml)處理。將此混合物攪拌5小時后，通過傾析溶劑收集沉淀的固體。此固體用氬氣流干燥得到220mg(45％)的(2S)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸，為白色固體。數據1H NMR(300MHz，D2O)δ7.1(d，J＝540Hz，1H)，4.2(m，1H)，2.9-3.2(m，2H)，1.7-2.0(m，2H)；31P NMR(121MHz，D2O)δ24.2(d，J＝522Hz)；FABMSm/z＝140(M+H)+；[α]D在20℃＝+8°(0.5％在0.1M HCl中)。
實施例3.(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸將乙基(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯(0.9g，3.2mmol)和濃鹽酸(50mL)的混合物加熱回流2小時。將此溶液冷卻至室溫并蒸發(fā)。此殘余物溶解于甲醇(50ml)并在室溫下用1，2-環(huán)氧丙烷(3ml)處理。將此混合物攪拌5小時后，通過傾析溶劑收集沉淀的固體。此固體用氬氣流干燥得到260mg(59％)的(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸，為白色固體。數據1H NMR(300MHz，D2O)δ7.1(d，J＝540Hz，1H)，4.2(m，1H)，2.9-3.2(m，2H)，1.7-2.0(m，2H)；31P NMR(121MHz，D2O)δ23.9(d，J＝525Hz)；FABMSm/z＝140(M+H)+；[α]D在20℃下＝-8°(0.5％在0.1M HCl中)。
實施例4.(3-氨基-2-氧代丙基)次膦酸將[3-[N-(叔丁氧羰基)氨基]-2-氧代丙基](1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(8.11g，21.0mmol)溶解于3N HCl(400mL)，先向此溶液中通入氮氣去氧。室溫下將此混合物攪拌14小時并再進行濃縮。此殘余物與甲醇共蒸發(fā)。再將此殘余物溶解于甲醇(10mL)并加入1，2-環(huán)氧丙烷(10mL)。將此混合物攪拌6小時并過濾收集所得沉淀。此固體用冷甲醇洗滌并在50℃下真空干燥得到2.1g(73％)的(3-氨基-2-氧代丙基)次膦酸，為米色固體。數據mp126-127℃；Rf＝0.64(85∶15甲醇，水)；1H NMR(300MHz，MHz，D2O)δ7.13(d，J＝551Hz，1H)，4.14(s，2H)，3.14(d，J＝18Hz，2H)；13C NMR(75MHz，D2O+二噁烷)δ199.5，49.2，47.3(d，J＝69Hz)；FABMSm/z＝138(M+H)+。
實施例5.(2R)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸將次磷酸銨(73.8g，0.89mol)加入到裝備有機械攪拌器、溫度計、加液漏斗和氬氣擴散器的三頸2L燒瓶中。室溫下將此燒瓶置于水浴中并加入N，O-雙-(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(215mL，0.87mol-BSA)，加入速度應維持在冰浴冷卻下內部溫度低于38℃(約30分鐘)。BSA加畢，將此反應混合物加熱至45-48℃并在此溫度下維持1小時。將此反應冷卻至室溫并將(2R)-2-氟-3-碘丙基氨基甲酸叔丁基酯(27.3g，0.09mol)的二氯甲烷(300mL)溶液加入到此反應混合物中。再將此反應室溫下攪拌18小時。并將此反應混合物冷卻至0℃并小心地用甲醇(275mL)，然后用水(32mL)停止反應。將此反應混合物攪拌30分鐘，之后過濾此反應并用甲醇洗滌此固體。濃縮濾液并將此殘余物置于高真空下(0.1mmHg)過夜。粗品殘余物用二氯甲烷、甲醇、濃氫氧化銨溶液(80∶20∶1)研磨并過濾。減壓濃縮濾液并再次研磨。將此粗濃縮物轉移至2L燒瓶中，溶解于甲醇(375mL)并置于室溫水浴中。加入氯化氫氣體的乙酸乙酯飽和溶液(500mL)并將此混合物攪拌3小時。將此反應混合物過濾并將固體用甲醇和乙酸乙酯的混合物(90∶10)洗滌。減壓濃縮濾液并將此粗品通過Dowex50WX8-200目H+型(500g，8×15cm)柱，用1∶1甲醇/水洗脫，直到經TLC分析再檢測不到物質。所需粗品再用1∶3濃氫氧化銨溶液/甲醇洗脫。該產物進一步通過柱色譜純化，用氯仿、甲醇、濃氫氧化銨溶液(6∶3∶1)洗脫得到(2R)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸，為白色固體(3.12g，24％)。
1H NMR(300MHz，D2O)δ7.90(s，0.5H)，6.15(s，0.5H)，5.12-5.29(m，0.5H)，4.92-5.10(m，0.5H)，3.12-3.42(m，2H)，1.74-2.26(m.2H)。
實施例6.(2S)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸將次磷酸銨(58.1g，0.70mol)加入到裝備有機械攪拌器、溫度計、加液漏斗和氬氣擴散器的三頸2L燒瓶中。加入N，O-雙-(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(175.9mL，0.71mol-BSA)，加入速度應維持內部溫度在35-40℃。BSA加畢，將此反應混合物加熱至35-40℃下維持45分鐘。加入二氯甲烷(150mL)并將此混合物在35-40℃下再攪拌45分鐘。將此反應冷卻至室溫并將(2S)-2-氟-3碘丙基氨基甲酸叔丁基酯(42.5g，0.14mol)的二氯甲烷(300mL)溶液加入到此反應混合物中。此反應再在室溫下攪拌過夜。此反應混合物冷卻至0℃并小心地用甲醇(150mL)，然后用水(60mL)停止反應。濃縮此反應并將此殘余物置于高真空下(0.1mmHg)。通過加入濃氫氧化銨(50mL)，將此殘余物調節(jié)至約pH8，然后加入二氯甲烷(400mL)和甲醇(250mL)。將所得固體過濾并濃縮濾液。此殘余物用二氯甲烷、甲醇、濃氫氧化銨溶液(80∶20∶1；400mL)研磨并過濾。減壓濃縮濾液并將此粗濃縮物溶解于甲醇(400mL)。加入氯化氫氣體的乙酸乙酯飽和溶液(600mL)并將此混合物攪拌3小時。將此反應混合物過濾并減壓濃縮濾液。此粗品通過Dowex50WX8-200目H+型(450g)柱，用1∶1甲醇/水洗脫，直到經TLC分析再檢測不到物質。所需粗品再用1∶3濃氫氧化銨溶液/甲醇洗脫。該產物進一步通過柱色譜純化，用二氯甲烷、甲醇、濃氫氧化銨溶液(6∶3∶1)洗脫得到(2S)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸，為白色固體(3.46g，17％)。1HNMR(300MHz，D2O)δ7.90(s，0.5H)，6.15(s，0.5H)，5.12-5.29(m，0.5H)，4.92-5.10(m，0.5H)，3.12-3.42(m，2H)，1.74-2。
實施例7.(3-氨基-1-氟-2-羥基丙基)次膦酸(3-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-1-氟-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(180mg，4.5mmol)溶解于甲醇(2mL)，用3N鹽酸(20mL，60.0mmol，在用前立即用氬氣噴霧)。在氬氣氛下將此混合物室溫下攪拌6小時。將此反應混合物減壓濃縮，此粗品再溶解于甲醇(5mL)；殘留的水通過減壓下與甲醇共蒸發(fā)除去。此粗品(70mg)通過柱色譜純化(1×10cm柱)，用二氯甲烷、甲醇、濃氫氧化銨(6∶3∶1)洗脫。將含產物的餾份減壓濃縮，與乙腈(2×10ml)、然后與甲醇(1×10mL)共蒸發(fā)并在高真空(0.1mmHg)下干燥過夜。此方法得到(3-氨基-1-氟-2-羥基丙基)次膦酸，為白色固體(40mg，56％)。1HNMR(300MHz，D2O)δ7.93(s，0.5H)，6.11(s，0.5H)，4.60-4.20(m，2H)，3.42-3.08(m，2H)。
實施例8.(3-氨基-2-氟-1-甲基丙基)次膦酸在氬氣氛下，向冰浴冷卻的3-氨基-2-氟-1-甲基-3-氧代丙基(二乙氧基甲基)次膦酸酯(1.6g，5.3mmol)的THF(15ml)溶液中，加入1M BH3-THF(12.3mL，12.3mmol)。10分鐘后，將此溶液加熱回流3小時。將此溶液冷卻至室溫并滴加6NHCl(100mL)。通過旋轉蒸發(fā)除去THF并再加入6NHCl(100mL)。將此混合物回流3小時。將此溶液冷卻，蒸發(fā)，與水、然后與乙醇共蒸發(fā)。此殘余物通過離子交換色譜純化(DOWEX50WX-8-200，H+型，3.5×4.0cm)。此離子交換樹脂用2∶1甲醇/水預洗。將溶解于1∶1甲醇/水的此粗品加樣到該柱上并用1∶1甲醇/水洗滌。洗脫液變?yōu)?∶1甲醇/濃氫氧化銨。合并適當的餾份并蒸發(fā)得到150mg(15％)的(3-氨基-2-氟-1-甲基丙基)次膦酸的非對映異構體混合物，為油狀物。數據NMR(400MHz，D2O)δ6.2-7.8(m，1H)，4.8-5.2(m，1H)，3.2-3.5(m，2H)，1.8-2.2(m，1H)，1.0-1.2(m，3H)；MSm/z＝156(M+H)+。
下列中間體用于制備本發(fā)明的化合物。
中間體實施例I1. 3-[(二乙氧基甲基)(乙氧基)磷?；?-2-氟丙酸乙酯(實施例1化合物的的中間體)將乙基(二乙氧基甲基)次膦酸酯(26.0g，133mmol)和1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(28mL，133mmol)在氬氣氛下加熱回流2小時。將此混合物冷卻至室溫并加入氟丙烯酸酯(10.5g，89.0mmol)。將這些試劑在氬氣氛下加熱至60℃，保持3天。將此混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯(300mL)稀釋，用1N HCl(2×150mL)和飽和氯化鈉(100mL)洗滌。有機層用硫酸鎂干燥，過濾，并蒸發(fā)得到32.0g的黃色油狀物。此殘余物通過柱色譜在濕填充的硅膠柱(6×30cm)純化，用97∶3的二氯甲烷/甲醇洗脫。合并適當的餾份并蒸發(fā)得到16.0g(57％)的3-[(二乙氧基甲基)(乙氧基)磷?；?-2-氟丙酸乙酯，為清澈的油狀物。數據1HNMR(300MHz，CDCl3)δ5.32(dm，1H)，4.67-4.77(m，1H)，4.18-4.32(m，2H)，3.58-3.91(m，4H)，2.30-2.62(m，2H)，1.20-1.41(m，9H)。
實施例I2.(3-氨基-2-氟-3-氧代丙基)(二乙氧基甲基)次膦酸乙酯(實施例1化合物的中間體)向3-[(二乙氧基甲基)(乙氧基)磷?；?-2-氟丙酸乙酯(16.0g，51.1mmol)的乙醇(22mL)溶液中，加入濃氫氧化銨(14.8N，3.5mL，51.1mmol)。將此溶液攪拌16小時并蒸發(fā)。此殘余物通過柱色譜在濕填充的硅膠柱(7×37cm)上純化，用96.5∶3.5二氯甲烷/甲醇洗脫。合并適當的餾份并蒸發(fā)得到3.43g(27％)的(3-氨基-2-氟-3-氧代丙基)(二乙氧基甲基)次膦酸乙酯，為清澈的油狀物。數據1HNMR(300MHz，CDCl3)δ56.43(s，1H)，5.70(s，1H)，5.21-5.49(dm，1H)，4.7(dd，1H)，4.18-4.31(m，2H)，3.65-3.91(m，4H)，2.21-2.81(m，2H)，1.30-1.40(m，3H)，1.20-1.28(m，6H)。
實施例13.(2R)-(3-氯-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(實施例2化合物的中間體)將(二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(15.0g，71mmol)和甲苯的混合物蒸發(fā)至干，將此殘余物和1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(13.2g，82mmol)在氬氣氛下加熱回流3小時。將此混合物冷卻至室溫并蒸發(fā)。加入(R)-環(huán)氧氯丙烷(6.6g，71mmol)和無水氯化鋅(2.5g，18mmol)并在氬氣氛下將這些試劑加熱至60℃過夜。將此混合物冷卻至室溫，用二氯甲烷和水稀釋。有機層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，并蒸發(fā)得到20.7g的黃色油狀物。此殘余物溶解于含1％乙酸的甲醇(150mL)并將此溶液攪拌過夜。除去溶劑得到17.7g(82％)的(2R)-(3-氯-2-羥基丙基)(1，1二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，為清澈的油狀物。數據1HNMR(500MHz，CDCl3)δ4.3-4.4(m，1H)，4.1-4.3(m，2H)，3.5-3.8(m，4H)，1.9-2.4(m，2H)，1.5(dd，J2.3，11.4Hz，3H)，1.32-1.37(m，3H)，1.18-1.24(m，6H)。
實施例I4.(2S)-(3-氨基-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(實施例2化合物的中間體)將(2R)-(3-氯-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(5.0g，17mmol)的含9％氨氣的乙醇溶液在室溫下在高壓釜中攪拌4天，并在60℃下再攪拌1天。將此溶液蒸發(fā)并將此殘余物通過柱色譜在濕填充的硅膠柱上純化，用含5％三乙胺的二氯甲烷/甲醇(5-8％MeOH)洗脫。合并適當的餾份，蒸發(fā)并用二氯甲烷和水稀釋。通過加入幾mL的10％碳酸鈉水溶液，調節(jié)水層的pH并重復地用二氯甲烷萃取。合并的有機層用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到1.2g(26％)的(2S)-(3-氨基-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，為清澈的油狀物。數據1HNMR(300MHz，CDCl3)δ4.40-4.55(b，1H)，4.10-4.30(m，2H)，3.55-3.80(m，4H)，3.20-3.30(m，1H)，3.00-3.10(m，1H)，2.00-2.40(m，2H)，1.45-1.53(dd，J＝3.4，11.7Hz，3H)，1.30-1.40(m，3H)，1.15-1.25(m，6H)。
實施例I5.(2S)-(3-氯-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(實施例3化合物的中間體)將(二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(15.0g，71mmol)和甲苯的混合物蒸發(fā)至干后，將此殘余物和1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(13.2g，82mmol)在氬氣氛下加熱回流3小時。將此混合物冷卻至室溫并蒸發(fā)。加入(S)-環(huán)氧氯丙烷(6.6g，71mmol)和無水氯化鋅(2.5g，18mmol)并在氬氣氛下將這些試劑加熱至60℃過夜。將此混合物冷卻至室溫，用二氯甲烷和水稀釋。有機層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，并蒸發(fā)得到20.7g的黃色油狀物。此殘余物溶解于甲醇(150mL)含1％乙酸并將此溶液攪拌過夜。除去溶劑得到16.8g(79％)的(2S)-(3-氯-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，為清澈的油狀物。數據1HNMR(500MHz，CDCl3)δ4.4(m，1H)，4.2-4.3(m，2H)，3.6-3.8(m，4H)，1.9-2.4(m，2H)，1.5(dd，J＝2.3，11.4Hz，3H)，1.32-1.37(m，3H)，1.18-1.24(m，6H)。
實施例I6.(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)(1，I-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(實施例3化合物的中間體)將(2S)-(3-氯-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(5.0g，17mmol)的含9％氨氣的乙醇溶液室溫下在高壓釜中攪拌6天，并在55℃下再攪拌1天。將此溶液蒸發(fā)并將此殘余物通過柱色譜在濕填充的硅膠柱上純化，用含5％三乙胺的二氯甲烷/甲醇(5-8％MeOH)洗脫。合并適當的餾份，蒸發(fā)并用二氯甲烷和水稀釋。通過加入幾mL的10％碳酸鈉水溶液調節(jié)水層的pH并重復地用二氯甲烷萃取。合并的有機層用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到0.9g(19％)的(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，為清澈的油狀物。數據1HNMR(500MHz，CDCl3)δ4.1-4.3(m，2H)，4.05(b，1H)，3.60-3.80(m，4H)，2.4-2.9(m，2H)，1.7-2.1(m，2H)，1.4-1.5(dd，3H)，1.3-1.4(m，3H)，1.2(m，6H)。
實施例I7.[3-[N-(叔丁氧羰基)氨基1-2-氧代丙基](1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(實施例4化合物的中間體)向二異丙基胺(3.0mL，21mmol)的THF(5mL)溶液中，在-10℃下滴加n-BuLi(2.5M在己烷中，8.6mL，21mmol)。10分鐘后，將此反應冷卻至-78℃并滴加(1，1-二乙氧基乙基)(甲基)次膦酸乙酯(4.80g，21.0mmol)的THF(5mL)溶液。加畢，將此溶液在-78℃下攪拌1小時。滴加N-Boc-甘氨酸甲酯(810mg，4.3mmol)的THF(15mL)溶液。加畢，將此反應混合物攪拌45分鐘。加入乙酸(1.2mL，21mmol)并將此反應混合物升溫至室溫。此反應混合物在二氯甲烷和水之間分配并分層。水層用二氯甲烷萃取一次。合并的有機萃取物用硫酸鎂干燥，過濾，并蒸發(fā)得到4.89g的油狀物。此殘余物通過柱色譜純化，在100g硅膠上用乙酸乙酯洗脫。收集適當的餾份得到1.2g(74％)的[3-[N-(叔丁氧羰基)氨基1-2-氧代丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，為油狀物。數據1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.48(s，1H)，4.10-4.30(m，2H)，4.17(d，2H)，3.60-3.80(m，4H)，3.01-3.30(m，2H)，1.52(d，3H)，1.43(s，9H)，1.32(t，3H)，1.19(t，6H)。
實施例I8.(2R)-3-(二芐基氨基)-2-氟-1-丙醇(實施例5化合物的中間體)在氮氣氛下將硼氫化鋰(5.3g，0.24mol)懸浮于THF(200mL)中并在攪拌下冷卻至-15℃。將(2R)-3-(二芐基氨基)-2-氟丙酸甲酯(56.6g，0.19mol)懸浮于THF(250mL)中并在1小時內滴加到該混合物中；在加入期間內部溫度維持低于-10℃。加畢，將此反應混合物升溫至室溫并在此溫度下攪拌17小時。此反應混合物冷卻至0℃并小心地用飽和氯化銨水溶液(300mL)停止反應。此反應混合物用乙酸乙酯(2×200mL)萃取并將此有機相減壓濃縮。將粗品殘余物溶解于2N鹽酸(200mL，pH＝約2)并將此水相用乙醚(2×200mL)洗滌。用在鹽水中的80％氫氧化銨將水相堿化(pH＝約10)，用乙酸乙酯(3×200mL)萃取，用無水硫酸鈉(10g)干燥，過濾并減壓濃縮得到(2R)-3-(二芐基氨基)-2-氟-1-丙醇(48g，93％)，為黃色油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.15-7.38(m，10H)，4.65-4.78(m，0.5H)，4.48-4.58(m，0.5H)，3.50-3.82(m，6H)，2.70-2.88(m，2H)。
實施例I9.(2R)-3-氨基-2-氟-1-丙醇(實施例5化合物的中間體)將(2R)-3-(二芐基氨基)-2-氟-1-丙醇(29.2g，0.11mol)溶解于乙醇(300mL)。加入10％(重量)氫氧化鈀(II)碳(5.0g)并將該混合物加入到Parr混合器中并在氫氣氛(55psi)下?lián)u動6小時。當再觀察不到氫氣吸收時，將該混合物通過硅藻土墊(20g)過濾。將新的一批氫氧化鈀(II)(5g)加入到此乙醇混合物中并在上述氫化條件下再反應17小時。將粗反應混合物通過硅藻土過濾并減壓濃縮得到(2R)-3-氨基-2-氟-1-丙醇為淡黃色油狀物(9.6g，96％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.78-5.00(brs，3H)，4.49-4.62(m，0.5H)，4.32-4.46(m，0.5H)，3.54-3.70(m，2H)，2.70-2.96(m，2H)。
實施例I10.(2R)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯(實施例5化合物的中間體)將(2R)-3-氨基-2-氟-1-丙醇(4.6g，49mmol)溶解于25％二噁烷水溶液(160mL)中，加入碳酸鉀(7.1g，51mmol)并將該混合物冷卻至0℃。分兩批加入二碳酸二叔丁基酯(11.6g，53mmol)。然后將此混合物升溫至室溫過夜。將粗反應混合物濃縮至干，加入水(150mL)，接著加入飽和硫酸氫鉀水溶液(直到pH＝約3)。有機物用二氯甲烷(2×150mL)萃取，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮得到(2R)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯(9.5g，100％)，為無色油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)4.82-5.04(brs，1H)，4.62-4.72(m，0.5H)，4.48-4.58(m，0.5H)，3.62-3.72(m，2H)，3.32-3.62(m，2H)，3.20-3.44(brs，1H)，1.48(s，9H)。
實施例I11.(2R)-2-氟-3-碘丙基氨基甲酸叔丁基酯(實施例5化合物的中間體)室溫下將咪唑(26.6g，0.39mol)溶解于二氯甲烷(400mL)。加入碘(102.5g，0.39mol)并將此反應混合物室溫下攪拌10分鐘，然后冷卻至0℃。在10分鐘內分批加入三苯基膦(102.5g，0.39mol)，使內部溫度維持低于10℃。滴加(2R)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯(60.4g，0.31mol)的二氯甲烷(100mL)溶液。(2R)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯加畢后，再加入二氯甲烷(200mL)。將此反應混合物升溫至室溫并繼續(xù)攪拌17小時。將此反應混合物通過Celite(50g)過濾并再用二氯甲烷洗滌。減壓濃縮濾液并通過硅膠柱色譜純化，用二氯甲烷洗脫。此方法得到(2R)-2-氟-3-碘丙基氨基甲酸叔丁基酯，為白色固體(64.7g，68％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.80-5.10(brs，1H)，4.58-4.72(m，0.5H)，4.42-4.56(m，0.5H)，3.48-3.70(m，1H)，3.20-3.46(m，3H)，1.48(s，9H)。
實施例I12.(2S)-3-(二芐基氨基)-2-氟丙酸甲酯(實施例6化合物的中間體)將(2R)-2-(二芐基氨基)-3-羥基丙酸甲酯(231.7g，0.77mol)溶解于THF(850mL)中并緩慢滴加DAST(196g，1.2mol)的THF(400mL)溶液。一旦加畢，將此反應再攪拌1.5小時。TLC分析表明了起始物的消耗。將此反應再冷卻至0℃并通過緩慢加入水(1.51)停止反應，接著通過加入固體碳酸氫鈉進行中和。一旦變?yōu)橹行裕尤霛鈿溲趸@/飽和氯化鈉溶液1∶1的混合物并將此反應用乙酸乙酯萃取并減壓濃縮。粗品混合物通過硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯∶己烷(1∶4)洗脫得到所需的化合物(188.3g，62％)，為油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.18-7.38(m，10H)，5.12-5.17(m，0.5H)，4.95-5.00(m，0.5H)，3.81-3.87(m，2H)，3.69(s，3H)，3.49-3.55(m，2H)，2.90-3.12(m，2H)。
實施例I13.(2S)-3-(二芐基氨基)-2-氟-1-丙醇(實施例6化合物的中間體)在氮氣氛下將硼氫化鋰(17.7g，0.81mol)懸浮于THF(400mL)中并在攪拌下冷卻至-15℃。將(2S)-3-(二芐基氨基)-2-氟丙酸甲酯(188.3g，0.62mol)懸浮于THF(400mL)中并滴加到該混合物中。加畢，將此反應混合物升溫至室溫并在此溫度下攪拌3小時。TLC分析表明起始物完全反應。將此反應混合物冷卻至0℃并小心地用飽和氯化銨水溶液(300mL)停止反應。在加入水(400mL)然后將此反應混合物用乙酸乙酯萃取，并將此有機相減壓濃縮。粗品殘余物溶解于2N鹽酸，并將此水相用乙醚洗滌兩次。用在鹽水中的80％氫氧化銨將此水相堿化(pH＝約10)，用乙酸乙酯萃取，用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮得到(2S)-3-(二芐基氨基)-2-氟-1-丙醇(156.6g，92％)，為黃色油狀物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.15-7.38(m，10H)，4.65-4.78(m，0.5H)，4.48-4.58(m，0.5H)，3.50-3.82(m，6H)，2.70-2.88(m，2H)。
實施例I14.(2S)-3-氨基-2-氟-1-丙醇(實施例6化合物的中間體)將(2S)-3-(二芐基氨基)-2-氟-1-丙醇(39.1g，0.14mol)溶解于乙醇(300mL)。加入10wt.％氫氧化鈀(II)碳(5.0g)并將該混合物置于Parr混合器中并在氫氣氛下(55psi)搖動過夜。當再觀察不到氫氣吸收時，將該混合物通過硅藻土墊過濾。將新的一批氫氧化鈀(II)(5g)加入到此乙醇混合物中并在上述氫化條件下再反應12小時。再一次，當再觀察不到氫氣吸收時，將該混合物通過硅藻土墊過濾。將新的一批氫氧化鈀(II)(5g)加入到此乙醇混合物中并在上述氫化條件下再反應12小時。粗反應混合物通過硅藻土過濾并減壓濃縮得到(2S)-3-氨基-2-氟-1-丙醇，為淡黃色油狀物(13.3g，100％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.78-5.00(brs，3H)，4.49-4.62(m，0.5H)，4.32-4.46(m，0.5H)，3.5 4-3.70(m，2H)，2.70-2.96(m，2H)。
實施例I15.(2S)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯(實施例6化合物的中間體)將(2S)-3-氨基-2-氟-1-丙醇(38.6g，0.41mol)溶解于25％二噁烷水溶液(1.4L)，加入碳酸鉀(60.1g，0.43mol)，接著加入二叔丁基二碳酸酯(99.5g，0.46mol)。將此混合物攪拌過夜。TLC分析表明起始物完全反應。將粗反應混合物濃縮至干。加入水(300mL)，接著加入飽和硫酸氫鉀水溶液(直到pH＝約3)。有機物用二氯甲烷萃取兩次，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮得到(2S)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯(79.5g，99％)，為淡黃色油狀物。NMR(300MHz，CDCl3)δ4.82-5.04(br s，1H)，4.62-4.72(m，0.5H)，4.48-4.58(m，0.5H)，3.62-3.72(m，2H)，3.32-3.62(m，2H)，3.20-3.44(brs，1H)，1.48(s，9H)。
實施例I16.(2S)-2-氟-3-碘丙基氨基甲酸叔丁基酯(實施例6化合物的中間體)室溫下將咪唑(19.8g，0.29mol)溶解于二氯甲烷(900mL)。加入碘(73.9g，0.29mol)并將此混合物室溫下攪拌10分鐘，然后冷卻至0℃。在10分鐘內分批加入三苯基膦(76.3g，0.29mol)，使內部溫度維持低于10℃。滴加(2S)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯(45.0g，0.23mol)的二氯甲烷(300mL)溶液。將此反應混合物升溫至室溫并繼續(xù)攪拌12小時。將此反應混合物通過硅藻土墊過濾并再用二氯甲烷洗滌。減壓濃縮濾液并通過硅膠柱色譜純化，用二氯甲烷洗脫。此方法得到(2S)-2-氟-3-碘丙基氨基甲酸叔丁基酯，為無色油狀物(42.5g，62％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.80-5.10(br s，1H)，4.58-4.72(m，0.5H)，4.42-4.56(m，0.5H)，3.48-3.70(m，1H)，3.20-3.46(m，3H)，1.48(s，9H)。
實施例117.乙基(氟甲基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯(實施例7化合物的中間體)在耐壓燒瓶中在氮氣氛下將氫化鈉(1.4g，57.1mmol)懸浮于THF(50mL)中并在攪拌下冷卻至-10℃。在10分鐘內向該混合物中滴加(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯(10.0g，47.6mmol)的THF(20mL)溶液；在加入期間內部溫度維持低于0℃。加畢，此反應混合物在此溫度下攪拌90分鐘。將此燒瓶冷卻至-78℃并將氯氟甲烷氣體(9.7g，142.8mmol)壓縮到此反應混合物中。移除隔板并用螺紋塞將此燒瓶密封。然后將此燒瓶升溫至室溫并在50℃下加熱24小時。將此反應混合物冷卻至0℃并小心地用水(25mL)停止反應。將二氯甲烷(50mL)加入到此反應混合物中并將此乳液通過硅藻土墊(20g)過濾。水相用二氯甲烷(2×100mL)萃取，用無水硫酸鎂干燥，并將此有機相減壓濃縮得到此粗品，為淡黃色油狀物(6.93g)。將粗品殘余物通過硅膠柱(6×25cm柱)進行色譜純化，用在己烷中的20％丙酮洗脫。此方法得到乙基(氟甲基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯為清澈的無色油狀物(4.4g，42％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.94-4.54(m，2H)，4.32-4.20(m，2H)，3.82-3.54(m，4H)，1.60-1.44(m，3H)，1.40-1.28(m，3H)，1.26-1.08(m，6H)。
實施例118.乙基(3-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-1-氟-2-氧代丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯(實施例7化合物的中間體)向二異丙基胺(2.5mL，14.5mmol，3.5eq)的THF(30mL)溶液中在-10℃下滴加(約10分鐘)n-BuLi(1.4M在己烷中，9.0mL，14.5mmol)。10分鐘后，將此反應冷卻至-78℃，并在10分鐘內滴加乙基(氟甲基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯(2.0g，8.26mmol，2eq)的THF(10mL)溶液。加畢，將此反應混合物在-78℃下攪拌1小時。在10分鐘內，滴加N-Boc-甘氨酸甲酯(0.8g，4.1mmol)的THF(10mL)溶液，使內部溫度維持低于-70℃。加畢，將此反應在-78℃下攪拌1小時。用乙酸(1mL，14.5mmol)停止反應，然后升溫至室溫。將飽和氯化鈉水溶液(75mL)加入到此反應中并分離有機相。在用乙酸乙酯(2×75mL)萃取水相。合并的有機相用無水硫酸鈉干燥并減壓濃縮得到此粗品，為淡黃色油狀物(2.69g)。將此粗品通過柱色譜純化(2×35cm柱)，用在己烷中的40％乙酸乙酯洗脫。此方法得到乙基(3-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-1-氟-2-氧代丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯為清澈無色油狀物(0.73g，44％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.78-5.24(m，2H)，4.52-4.08(m，4H)，3.94-3.50(m，4H)，1.62-1.51(m，3H)，1.50-1.32(m，3H)，1.42(s，9H)，1.30-1.12(m，6H)。
實施例I19.乙基(3-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-1-氟-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯(實施例7化合物的中間體)向乙基(3-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-1-氟-2-氧代丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯(0.7g，1.8mmol)的甲醇(30mL)溶液中，在-5℃下在氮氣氛下一批加入硼氫化鈉(76mg，2.0mmol)。發(fā)生微弱的放熱；但是，內部溫度維持低于-2℃。將此反應混合物在0℃下攪拌1小時。此反應混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)停止反應。將粗品混合物減壓濃縮。粗品殘余物用乙酸乙酯(30mL)萃取，用飽和氯化鈉水溶液溶液(5mL)洗滌并用無水硫酸鎂干燥。減壓下除去溶劑得到此粗品，為淡黃色油狀物(580mg)。通過柱色譜純化得到2個餾份，其似乎與乙基(3-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-1-氟-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸酯的不同非對映異構體相吻合。極性小的餾份似乎是兩種非對映異構體的1∶1的混合物(210mg，29％)。而通過1H NMR分析判斷極性較大的餾份主要是一種非對映異構體(190mg，26％)。極性較大化合物的1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.32-5.04(br s，1H)，4.88-4.82(m，0.5H)，4.72-4.68(m，0.5H)，4.40-4.08(m，4H)，3.90-3.26(m，6H)，1.66-1.52(m，3H)，1.50-1.32(m，3H)，1.44(s，9H)，1.30-1.12(m，6H)。
實施例I20. 3-[(二乙氧基甲基)(乙氧基)磷酰基]-2-氟丁酸乙酯(實施例8化合物的中間體)將乙基(二乙氧基甲基)次膦酸酯(21.7.0g，110mmol)和1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(23.3mL，110mmol)的混合物在氬氣氛下加熱回流2小時。將此混合物冷卻至室溫并加入2-氟丁-2-烯酸乙酯的非對映異構體混合物(14.6g，110mmol)。在氬氣氛下將這些試劑加熱至80℃，保持1天，并加熱至120℃，保持2小時。將此混合物冷卻至室溫并再加入三甲基甲硅烷基活化的乙基(二乙氧基甲基)次膦酸酯(其由乙基(二乙氧基甲基)次膦酸酯(21.7.0g，110mmol)和1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(23.3mL，110mmol)按照與上述相同的方式制備)。將此混合物加熱至100℃，保持3天，并加入另一批三甲基甲硅烷基活化的乙基(二乙氧基甲基)次膦酸酯。在氬氣氛下將此混合物加熱至100℃，保持3天，冷卻至室溫，再用乙酸乙酯(300mL)稀釋。將此溶液用1N HCl(2×200mL)和飽和氯化鈉洗滌。有機層用硫酸鎂干燥，過濾，并蒸發(fā)得到42.0g的黃色油狀物。此殘余物通過柱色譜在濕填充的硅膠柱上純化，用二氯甲烷、然后用98∶2二氯甲烷/甲醇洗脫。合并適當的餾份并蒸發(fā)得到3.6g(10％)的3-[(二乙氧基甲基)(乙氧基)磷?；鵠-2-氟丁酸乙酯，為清澈油狀物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.9-5.6(m，1H)，4.7-4.8(m，1H)，4.2-4.4(m，4H)，3.6-4.0(m，4H)，2.6-2.9(m，1H)，1.2-1.4(m，12H)。
實施例I21. 3-氨基-2-氟-1-甲基-3-氧代丙基(二乙氧基甲基)次膦酸乙酯(實施例8化合物的中間體)向3-[(二乙氧基甲基)(乙氧基)磷?；鵠-2-氟丁酸乙酯(1.8g，5.5mmol)的乙醇(3mL)溶液中，加入濃氫氧化銨(14.8M，0.5mL，7.4mmol)。在40℃下將此溶液攪拌24小時，然后蒸發(fā)得到1.6g(97％)的3-氨基-2-氟-1-甲基-3-氧代丙基(二乙氧基甲基)次膦酸乙酯的非對映異構體混合物，為清澈的油狀物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.7-6.7(m，2H)，4.9-5.5.6(m，1H)，4.7-4.8(m，1H)，4.1-4.4(m，2H)，3.8-4.0(m，4H)，2.8-3.0(m，1H)，1.2-1.4(m，12H)。
藥物制劑在藥物制劑中本發(fā)明的式I的化合物可以用作活性組分，該藥物制劑可以口服、直腸、硬膜外、靜脈內、肌肉內、皮下、鼻內給藥及通過輸液或任何其它適宜的給藥途徑給藥。優(yōu)選的給藥方式是口服或通過注射/輸液。
這些藥物制劑含有本發(fā)明的化合物及與之混合的一種或多種藥用組分。通過已知的制藥方法制備完美的劑型。通常活性化合物的量占該制劑重量的0.1-95％，對于非腸道使用制劑中優(yōu)選0.2-20％(重量)，而對于口服給藥制劑優(yōu)選1-50％(重量)。
在制備含有本發(fā)明化合物的口服給藥的固體單位劑型形式的藥物制劑中，所選化合物可以與固體藥用組分(其中例如崩解劑和潤滑劑)。然后將該混合物加工為顆粒劑、片劑、膠囊或小藥囊。
直腸給藥用單位劑型可以制成栓劑形式；明膠直腸膠囊形式；即配的小灌腸劑形式；或在給藥前當時在適宜的溶劑中重新溶解的干燥的小灌腸劑形式。
口服給藥用液體制劑可以制備為糖漿或混懸劑形式，或者使用前在適宜的溶劑中重新溶解的干燥的混合物形式。
非腸道給藥用溶液劑可以制備為本發(fā)明化合物在藥用溶劑中的溶液劑并分裝在安瓿或小瓶中。也可以將它們制備為干粉制劑，在使用前臨時在適宜的溶劑中重新配制。
活性化合物的典型日劑量依賴于多種因素如每個患者的各別需要、給藥途徑和疾病。一般來說，劑量應為1μg至100mg每天每千克體重，優(yōu)選10μg至20mg每天每千克體重。
生物學研究[3H]GABA放射配體結合試驗由Sprague Dawley雄性大鼠的全腦基本上按照以前所述的方法(Zukin等，(1974)，Proc.Natl.Acad.USA71，4802-4807)制備大鼠突觸膜。由Olpe等改進的[3H]GABA競爭試驗((1990)Eur.J.Pharmacol.187，27-38)，在200μl TCI(Tris異四氫煙酸鈣)緩沖液(50mM Tris(三(羥基甲基)氨基甲烷)，pH7.4，2.5mM CaCl2和40μM異四氫煙酸)中用96孔板進行，其中含有20nM[3H]GABA(特異活性3兆兆貝可(TBq)/mmol)，被測化合物或溶劑以及80μg突觸膜蛋白。室溫下孵育12-20分鐘后，通過玻璃纖維過濾器(Printed filtermat B過濾器，Wallac)快速過濾來終止孵育，該過濾器用0.3％聚乙烯亞胺預處理，使用96孔板細胞收集器(Skatron或Tomtec)。過濾器用含50mM Tris(三(羥基甲基)氨基甲烷)和2.5mM CaCl2，pH7.4的緩沖液在4℃下洗滌，然后在55℃下干燥。將MeltiLex B/HS閃爍器劑薄片(Wallac)熔融在該過濾器上，并在Microbeta閃爍計數器(Wallac)中檢測放射性。
結果和討論發(fā)現本發(fā)明化合物對GABAB受體具有高的親和性和效力，這在結合和回腸試驗中分別由低IC50和EC50顯示。還發(fā)現在動物模型中當靜脈內及口服給藥時這些化合物降低TLOSR。與文獻中已對具有P-H鍵的3-氨基丙基次膦酸衍生物所下斷言相反，我們發(fā)現本發(fā)明化合物在動物模型中具有高度的代謝穩(wěn)定性。此外，未觀察到CNS副作用(通過在小鼠中體溫的降低來檢測)或只在非常高的劑量下才觀察到。因此，治療劑量(在狗模型中抑制TLOSR)和劑量引起的副作用(在小鼠模型中)的差異意想不到地高。
權利要求
1.式I的化合物及其藥用鹽、溶劑化物和立體異構體， 其中R1表示氫原子，羥基，低級烷基，低級烷氧基或鹵素；R2表示羥基，巰基，鹵素或氧代基團；R3表示氫原子或低級烷基(任選地被羥基、巰基、低級烷氧基、低級硫代烷氧基或芳基取代)；R4表示氫原子，低級烷基(任選地被芳基取代)或芳基；不包括i)(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸的外消旋體，及ii)(2R/S，3R)-(3-氨基-2-羥基丁基)次膦酸。
2.權利要求1所述的化合物，其中R1表示氫原子，低級烷基或鹵素；R2表示鹵素，羥基或氧代基團；R3表示氫原子；而R4表示氫原子，其中不包括(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸的外消旋體。
3.權利要求1所述的化合物，選自3-氨基-2-氟丙基)次膦酸，(2R)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸，(2S)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸，(3-氨基-2-氟-1-甲基丙基)次膦酸，(3-氨基-2-氧代丙基)次膦酸，(2S)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸，(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸和(3-氨基-1-氟-2-羥基丙基)次膦酸。
4.權利要求3所述的化合物，其是(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸。
5.權利要求3所述的化合物，其是(2R)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸。
6.權利要求3所述的化合物，其是(2S)-(3-氨基-2-氟-丙基)次膦酸。
7.權利要求3所述的化合物，其是(3-氨基-2-氟-1-甲基丙基)次膦酸。
8.權利要求3所述的化合物，其是(3-氨基-2-氧代丙基)次膦酸。
9.權利要求3所述的化合物，其是(2S)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸。
10.權利要求3所述的化合物，其是(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)次膦酸。
11.權利要求3所述的化合物，其是(3-氨基-1-氟-2-羥基丙基)次膦酸。
12.權利要求1-11任一項所述的化合物，用于治療。
13.權利要求1-11任一項所述的化合物在制備抑制瞬間食管下部括約肌松弛的藥物中的用途。
14.權利要求1-11任一項所述的化合物在制備治療胃食管反流疾病的藥物中的用途。
15.權利要求1-11任一項所述的化合物在制備治療嬰兒反胃的藥物中的用途。
16.權利要求1-11任一項所述的化合物在制備治療GORD-相關性或非-GORD相關性哮喘、噯氣、咳嗽、疼痛、可卡因成癮、嗝逆、IBS、消化不良、嘔吐或感受傷害的藥物中的用途。
17.治療瞬間食管下部括約肌松弛的方法，該方法包括用含有權利要求1-11任一項所述的化合物的藥物制劑治療所述病癥的患者。
18.治療胃食管反流疾病的方法，該方法包括用含有權利要求1-11任一項所述的化合物的藥物制劑治療所述病癥的患者。
19.治療嬰兒反胃的方法，該方法包括用含有權利要求1-11任一項所述的化合物的藥物制劑治療所述病癥的患者。
20.治療CORD-相關性或非-GORD相關性哮喘、噯氣、咳嗽、疼痛、可卡因成癮、嗝逆、IBS、消化不良、嘔吐或感受傷害的方法，該方法包括用含有權利要求1-11任一項所述的化合物的藥物制劑治療所述病癥的患者。
21.藥物制劑，其中含有治療可接受量的權利要求1-11任一項所述的化合物作為活性組分，其任選地與稀釋劑，賦形劑或惰性載體混合。
22.用于抑制瞬間食管下部括約肌松弛的權利要求21的藥物制劑。
23.用于治療胃食管反流疾病的權利要求21的藥物制劑。
24.用于治療嬰兒反胃的權利要求21的藥物制劑。
25.制備權利要求1-11任一項所述的化合物的方法，其中A)式II的化合物 其中R1和R3如上述式I所定義，X是氫原子或保護基如-CCH3(OCH2CH3)2，Z是保護基如叔丁氧羰基而Y是氫原子或保護基如低級烷基，a)如果需要R4不是氫原子，則為了引入R4，通過N-烷基化反應任選地轉化，并隨后通過水解反應得到式III的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，或b)通過還原反應轉化，如果需要R4不是氫原子，則任選地進行N-烷基化反應，并最后通過水解反應得到式IV的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，或c)通過還原反應轉化，接著進行脫氧鹵代反應，如果需要R4不是氫原子，則為了引入R4任選地進行N-烷基化反應，并最后通過水解反應得到式V的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義Halo是鹵原子，并任選地將任何上述所得化合物III、IV或V轉變?yōu)槭絀II、IV或V的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)橛坞x的式III、IV或V的化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得式III、IV或V的游離化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽；或B)式VI的化合物 其中R1和R3如上述式I所定義，X是氫原子或保護基如-CCH3(OCH2CH3)2，T是可以轉變?yōu)?NH2基團的基團，而Y是氫原子或保護基如低級烷基，a)進行其中三甲基甲硅烷基被氫原子代替的反應，定義如式VI中所述的T基團轉變?yōu)?NHR4的反應，其中R4如上述式I所定義，并最后通過水解反應得到式IV的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，或b)進行其中三甲基甲硅烷基被氫原子代替的反應，氧化反應，定義如式VI中所述的T基團轉變?yōu)?NHR4的反應，其中R4如上述式I所定義，并最后通過水解反應得到式III的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，或c)進行其中三甲基甲硅烷基被氫原子代替的反應，脫氧鹵代反應，定義如式VI中所述的T基團轉變?yōu)?NHR4的反應，其中R4如上述式I所定義，并最后通過水解反應得到式V的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，而Halo是鹵原子，并任選地將任何上述所得化合物III、IV或V轉變?yōu)槭絀II、IV或V的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體和/或將所得鹽轉變?yōu)橛坞x的式III、IV或V的化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得式III、IV或V的游離化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽；或C)式VII的化合物 其中R1如上述式I所定義，X是氫原子或保護基如-CCH3(OCH2CH3)2，U是吸電子基團，如-CN或CO2Et，其可以轉變?yōu)?CH2NH2基團，而Y是氫原子或保護基如低級烷基，而Halo是鹵原子，進行其中U基團轉變?yōu)?NHR4的反應，其中R4如上述式I所定義，并進行水解反應得到式VIII的化合物 其中R1和R4如上述式I所定義，而Halo是鹵原子，并任選地將所得化合物轉變?yōu)槭絍III的另一種化合物和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絍III的游離化合物和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽和/或將所得式VIII的游離化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽；或D)式IX的化合物，任選地為單一的立體異構體 其中R1、R3和R4如式I所定義，Z是保護基如叔丁氧羰基而Halo是鹵原子，通過水解反應轉變?yōu)槭絍的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，并任選地將所得化合物轉變?yōu)槭絍的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絍的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽，和/或將所得式V的游離化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽；或E)式XI的化合物 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，X是氫原子或保護基如-CCH3(OCH2CH3)2，而Y是氫原子或保護基如低級烷基，通過水解反應轉變得到式XII的化合物， 其中R1、R3和R4如上述式I所定義，并任選地將所得化合物轉變?yōu)槭絏II的另一種化合物，和/或將所得異構體的混合物分離為單一的異構體，和/或將所得鹽轉變?yōu)槭絏II的游離化合物，和/或轉變?yōu)榱硪环N鹽和/或將所得式XII的游離化合物轉變?yōu)橄鄳谏鲜龆x的鹽。
26.選自如下的化合物3-[(二乙氧基甲基)(乙氧基)磷?；鵠-2-氟丙酸乙酯，(3-氨基-2-氟-3-氧代丙基)(二乙氧基甲基)次膦酸乙酯，(2R)-(3-氯-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，(2 S)-(3-氨基-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，(2S)-(3-氯-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，(2R)-(3-氨基-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，[3-[N-(叔丁氧羰基)氨基]-2-氧代丙基](1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，(2R)-3-(二芐基氨基)-2-氟-1-丙醇，(2R)-3-氨基-2-氟-1-丙醇，(2R)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯，(2R)-2-氟-3-碘丙基氨基甲酸叔丁基酯，(2S)-3-(二芐基氨基)-2-氟丙酸甲酯，(2S)-3-(二芐基氨基)-2-氟-1-丙醇，(2S)-3-氨基-2-氟-1-丙醇，(2S)-2-氟-3-羥基丙基氨基甲酸叔丁基酯，(2S)-2-氟-3-碘丙基氨基甲酸叔丁基酯，(氟甲基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，(3-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-1-氟-2-氧代丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，(3-(N-(叔丁氧羰基)氨基)-1-氟-2-羥基丙基)(1，1-二乙氧基乙基)次膦酸乙酯，3-[(二乙氧基甲基)(乙氧基)磷酰基]-2-氟丁酸乙酯，及3-氨基-2-氟-1-甲基-3-氧代丙基(二乙氧基甲基)次膦酸乙酯。
全文摘要
對一種或多種GABA
文檔編號C07FGK1409716SQ00816898
公開日2003年4月9日 申請日期2000年12月4日 優(yōu)先權日1999年12月9日
發(fā)明者T·埃勒布林, P·古佐, A·霍爾門, T·奧爾松, M·斯萬松, S·馮翁格 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司