基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)?細(xì)胞?三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織及其制備
【專利摘要】本發(fā)明涉及基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)?細(xì)胞?三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織及其制備方法，是用于泌尿系統(tǒng)修復(fù)的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)?細(xì)胞?三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織及其制備方法，所述基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)?細(xì)胞?三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織至少包含復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠和上皮細(xì)胞；所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠為以生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料為骨架的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠；所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料是由生物相容性良好的纖維纏繞形成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)材料。本發(fā)明的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)?細(xì)胞?三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的仿生組織可以根據(jù)膀胱結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬，在泌尿系統(tǒng)中具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】
基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織及其制備
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，特別是涉及用于泌尿系統(tǒng)修復(fù)的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織及其制備方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]目前，泌尿系統(tǒng)修復(fù)重建主要包括膀胱和尿道。復(fù)雜性膀胱和尿道的修復(fù)重建仍是泌尿外科手難題之一，選擇合適的替代材料進(jìn)行膀胱和尿道重建對(duì)于治療神經(jīng)源性膀胱、尿道狹窄等疾病至關(guān)重要。目前，在泌尿系統(tǒng)修復(fù)重建中，主要采用多種自身組織材料， 如陰莖或包皮皮瓣、頰黏膜、舌黏膜及結(jié)腸黏膜。但是，這仍存在以“犧牲正常組織為代價(jià)， 以手術(shù)創(chuàng)傷修復(fù)組織缺損”的缺陷，不可避免引起患者取材部位的并發(fā)癥，比如，張口受限， 味覺異常，腸梗阻等。[〇〇〇3]組織工程的興起和發(fā)展為泌尿系統(tǒng)疾病的修復(fù)重建開辟了新的治療途徑。各種可降解的生物材料已成功用于泌尿系疾病的修復(fù)重建中。目前應(yīng)用在泌尿系疾病重建中的支架材料主要有脫細(xì)胞組織基質(zhì)和可降解高分子材料兩大類;但前者作為二維細(xì)胞外基質(zhì)支架，結(jié)構(gòu)難于調(diào)節(jié)，不能完全模擬體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的復(fù)雜三維細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境;后者缺乏細(xì)胞識(shí)別信號(hào)，不利于細(xì)胞識(shí)別黏附，而且降解時(shí)所形成的酸性環(huán)境及其降解產(chǎn)物還會(huì)引起周圍組織的無菌性炎性反應(yīng)。所以，制備一種具有三維天然細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)、具有細(xì)胞生物信號(hào)和生物相容性良好的生物材料進(jìn)行泌尿系修復(fù)重建將是組織工程未來的一個(gè)發(fā)展方向。
[0004]水凝膠是水分含量較高的三維交聯(lián)多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，它具有仿天然細(xì)胞外基質(zhì)的特性。其生物降解性和生物相容性可以臨時(shí)提供細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖的微環(huán)境。同時(shí)，通過調(diào)節(jié)各種參數(shù)(比如，濃度、交聯(lián)密度等)，水凝膠的物理化學(xué)(電荷、孔徑等)和機(jī)械特性(硬度、張力強(qiáng)度等)容易達(dá)到理想狀態(tài)，滿足組織工程重建的要求。所以，在組織工程領(lǐng)域，水凝膠已經(jīng)吸引了越來越多的關(guān)注，
[0005]凡是水溶性或親水性的高分子，通過一定的化學(xué)交聯(lián)或物理交聯(lián)，都可以形成水凝膠。這些高分子按其來源可分為天然和合成兩大類。天然的親水性高分子包括多糖類(淀粉、纖維素、海藻酸、透明質(zhì)酸、殼聚糖等)和多肽類(膠原、聚L-賴氨酸、聚L-谷胺酸等)。合成的親水高分子包括醇、丙烯酸及其衍生物類(聚丙烯酸，聚甲基丙烯酸，聚丙烯酰胺，聚N-聚代丙烯酰胺等)。天然水凝膠具有良好的生物相容性和生物降解性，廣泛受到人們的關(guān)注。
[0006]天然高分子水凝膠網(wǎng)絡(luò)鍵合的不同，可分為物理凝膠和化學(xué)凝膠。物理凝膠是通過物理作用力如靜電作用、氫鍵、鏈的纏繞等形成的，這種凝膠是非永久性的，通過加熱凝膠可轉(zhuǎn)變?yōu)槿芤?，所以也被稱為假凝膠或熱可逆凝膠。例如明膠通過降低溫度即可形成凝膠，而膠原通過升高溫度形成凝膠，絲素蛋白溶液在高壓條件下能形成水凝膠?；瘜W(xué)凝膠是由化學(xué)鍵交聯(lián)形成的三維網(wǎng)絡(luò)聚合物，是永久性的，又稱為真凝膠。例如先在透明質(zhì)酸羧基上引入呋喃基團(tuán)，利用兩端修飾馬來酰亞胺的PEG與呋喃環(huán)化學(xué)交聯(lián)成膠。但是這些物質(zhì)都是單一組分，無法完全模擬由多種組分混合構(gòu)成的天然組織，提供的生物學(xué)功能也十分有限。細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠不僅具有組織再生所必需的結(jié)構(gòu)和功能分子，而且其結(jié)構(gòu)構(gòu)成更符合生理情況。所以，細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠可能是未來組織工程中一種極具潛力的生物材料。所以，BAM水凝膠可能是理想的修復(fù)泌尿系組織器官的生物材料。水凝膠作為含水量較多的材料，其機(jī)械性能較差，不能承受較大的機(jī)械牽拉和縫合剪切力，而泌尿系組織器官需要儲(chǔ)存、引流尿液，需要承受尿液所產(chǎn)生的較大張力與剪切力。所以，水凝膠較差的機(jī)械性能制約了其在泌尿系組織修復(fù)重建中的應(yīng)用。
[0007]通過增強(qiáng)水凝膠的力學(xué)性能才能更有效地發(fā)揮其作用。為了提高水凝膠的力學(xué)性能，許多研究工作者做出了改進(jìn)，專利公開號(hào)104487103 A公開了一種纖維增強(qiáng)水凝膠復(fù)合材料的方法即在水凝膠主體中加入纖維分散體的方式。專利公開號(hào)105085791 A公開了一種疏水微球增韌增強(qiáng)物理交聯(lián)雙網(wǎng)絡(luò)水凝膠的制備方法。但都更傾向于改變凝膠主體的結(jié)構(gòu)來達(dá)到增強(qiáng)力學(xué)性能的效果，改變了凝膠的原有屬性，如透明度降低，內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。同時(shí)影響水凝膠內(nèi)部存在的迀移成分如藥物、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等，從而使整個(gè)凝膠的功能失效。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織及其制備方法，是用于泌尿系統(tǒng)修復(fù)的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)仿生組織及其制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)結(jié)構(gòu)強(qiáng)度不足以及內(nèi)部有效添加成分的迀移速度過快的技術(shù)問題。本發(fā)明采用生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料為骨架制備復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，可以達(dá)到增強(qiáng)的效果。同時(shí)，提出基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，形成三明治結(jié)構(gòu)，然后根據(jù)膀胱結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬，在泌尿系統(tǒng)修復(fù)中具有很好的應(yīng)用前景。
[0009]本發(fā)明中，術(shù)語“水凝膠前驅(qū)體”指可用于形成水凝膠之前的一種存在形式。
[0010]本發(fā)明的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，至少包含復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠和上皮細(xì)胞;所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠為以生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料為骨架的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料是由生物相容性良好的纖維纏繞形成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)材料。植入生物體后，不會(huì)產(chǎn)生炎癥、 排異反應(yīng)等。所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料是指植入生物體內(nèi)，不產(chǎn)生炎癥及排斥反應(yīng)等，且具有良好的生物降解性。
[0011]作為優(yōu)選的技術(shù)方案:[〇〇12]如上所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料為天然的或合成的生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料;所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料中的纖維直徑為500nm?3wii，孔徑范圍為1.， 孔隙率為65%-90%，且微孔分布均勻;所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的主要成分為水，孔隙率為50%-90%，孔徑范圍為10M1-450M1;所述脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的脫細(xì)胞基質(zhì)為取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì);所述生物相容性良好的纖維為絲素蛋白纖維、聚乙交酯丙交酯纖維或聚己內(nèi)酯纖維。
[0013]如上所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，所述至少包含復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠和上皮細(xì)胞為以下情形之一:
[0014]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與上皮細(xì)胞結(jié)合情形:
[0015]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上種植上皮細(xì)胞；
[0016]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，且在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠之間種植上皮細(xì)胞；
[0017]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，上皮細(xì)胞種植在膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面；
[0018]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，上皮細(xì)胞種植在兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠之間；
[0019] 或者，進(jìn)一步地，還包括以下情形之一:
[0020]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與平滑肌細(xì)胞結(jié)合情形:[0021 ]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面種植平滑肌細(xì)胞；[〇〇22]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，且在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠之間種植平滑肌細(xì)胞；
[0023]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，平滑肌細(xì)胞種植在膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面；
[0024]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，平滑肌細(xì)胞種植在兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠之間；
[0025]所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠為膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料整體或局部復(fù)合;所述整體復(fù)合是指膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠內(nèi)整體包含生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料;所述局部復(fù)合是指生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面和下表面及其淺表層與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠復(fù)合；[〇〇26]如上所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中還含有迀移成分，所述迀移成分分散包裹在所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中。[〇〇27]如上所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，所述迀移成分是指迀移成分分散在膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中，但不產(chǎn)生任何化學(xué)反應(yīng);所述迀移成分為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、胰島素、阿司匹林、酮洛芬、舒體安通或非那雄胺中的一種或幾種。 [〇〇28]如上所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的存放溫度在4°C?40°C。[〇〇29]本發(fā)明還提供了基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，所述制備方法為浸泡法、涂覆法或噴涂法。
[0030]如上所述的制備方法，首先制備膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液，然后浸泡、涂覆或噴涂，再在37°c下靜置數(shù)分鐘即形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;通常靜置3?30min 即可。
[0031]所述浸泡為:
[0032]在凝膠未形成之前，將生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料浸泡于所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液；
[0033]所述涂覆為:
[0034]在凝膠未形成之前，將所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液涂覆在生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面、下表面或上下兩個(gè)表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);或進(jìn)一步將生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料貼合于所涂覆的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液層，形成多層生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu)；[〇〇35]所述噴涂為:
[0036]在凝膠未形成之前，將所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液噴涂在生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面、下表面或上下兩個(gè)表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);或進(jìn)一步將生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料貼合于所噴涂的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液層，形成多層生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu)。
[0037]膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)制成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液的制備；
[0038]將制好的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)材料進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約 1 /1 〇脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0 lmo 1 /L，其中再加入大約1 / 9脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0.lmol/L，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。
[0039]如上所述的制備方法，所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的制備為靜電紡絲法或二維編織法。
[0040]如上所述的制備方法，膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液的制備過程中還加入迀移成分。
[0041]本發(fā)明的作用機(jī)理為:
[0042]水凝膠是分子鏈發(fā)生交聯(lián)而形成的分子尺度的三維網(wǎng)絡(luò)，迀移成分從其中緩釋主要與迀移成分在凝膠中的擴(kuò)散速度有關(guān)。該擴(kuò)散速度第一方面和水凝膠結(jié)構(gòu)有關(guān)，即水凝膠的三維網(wǎng)絡(luò)密度、網(wǎng)絡(luò)孔徑大小及分布、交聯(lián)強(qiáng)度、電荷分布和強(qiáng)度;第二方面和藥物結(jié)構(gòu)和含量有關(guān)，如藥物尺寸、載藥量、藥物分子量、負(fù)載部位、藥物電荷分布和強(qiáng)度;第三方面和環(huán)境響應(yīng)條件有關(guān)，即外界溫度、pH值、電場(chǎng)、磁場(chǎng)、光等。[〇〇43]三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料是纖維相互貫穿交錯(cuò)形成的三維網(wǎng)絡(luò)狀體型材料，屬于微納米尺度的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，力學(xué)性能優(yōu)異，可用于增強(qiáng)水凝膠并獲得具有各向同性機(jī)械行為特征的復(fù)合材料結(jié)構(gòu)，同時(shí)三維纖維網(wǎng)絡(luò)中的纖維直徑為500nm?3wn，孔徑范圍為1.0wn-9y m，孔隙率為65%-90%，且微孔分布均勻。
[0044]鑒于上述，本發(fā)明提供了一種復(fù)合脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的制備方法，即將脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料通過噴涂法、浸泡法、涂覆法進(jìn)行物理復(fù)合。水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為50%_90%，孔徑范圍為10M1-450M1，因此其孔徑大于三維纖維網(wǎng)絡(luò)的孔徑。兩者復(fù)合后，水凝膠中的大孔結(jié)構(gòu)會(huì)被三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)全部或部分填充。一方面，三維纖維網(wǎng)絡(luò)在水凝膠中起到三維骨架的作用，從而增強(qiáng)了水凝膠的力學(xué)性能。另一方面，三維纖維網(wǎng)絡(luò)會(huì)填充水凝膠中原由水占據(jù)的部分空隙，也會(huì)在水凝膠的構(gòu)筑聚合物中混合部分纖維。由于三維纖維網(wǎng)絡(luò)的密度大于水，藥物在復(fù)合水凝膠中的擴(kuò)散速度慢于在無三維纖維網(wǎng)絡(luò)水凝膠中的擴(kuò)散速度，因此會(huì)延緩水凝膠中藥物向材料外部的緩釋。另外，當(dāng)水凝膠構(gòu)筑聚合物中混合部分纖維時(shí)，由于三維纖維網(wǎng)絡(luò)聚合物中未負(fù)載藥物，因此負(fù)載于水凝膠中的藥物擴(kuò)散速度也會(huì)被延緩。上述兩個(gè)原因會(huì)導(dǎo)致復(fù)合水凝膠中的藥物緩釋時(shí)間更加持久。通過選擇具有不同孔徑、纖維直徑、孔隙率的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料，或通過改變?nèi)S纖維網(wǎng)絡(luò)聚合物與水凝膠構(gòu)筑聚合物的復(fù)合方式、復(fù)合密度，可調(diào)節(jié)復(fù)合水凝膠的強(qiáng)度和藥物擴(kuò)散行為。
[0045]由于三維纖維網(wǎng)絡(luò)與水凝膠網(wǎng)絡(luò)分屬于不同尺度的三維網(wǎng)絡(luò)，三維纖維網(wǎng)絡(luò)與水凝膠的復(fù)合并不會(huì)改變水凝膠的主體三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，如交聯(lián)密度、水凝膠材料與藥物的相互作用以及水凝膠的環(huán)境響應(yīng)性。
[0046]膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)主要來源于人或哺乳動(dòng)物膀胱、組織，是將完整的組織去除細(xì)胞及抗原成分所得到的完整的細(xì)胞外基質(zhì)，由膠原、多糖、糖蛋白和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子組成， 有良好的生物相容性和生物降解性。因此，以生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料為骨架的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠復(fù)合體系具有良好的生物相容性，能應(yīng)用于生物組織工程，能用于組織修復(fù)，且滿足不同部位不規(guī)則形狀的修復(fù)需要。
[0047]組織器官都有共性，是粘膜(又稱上皮)和平滑肌組成的官腔結(jié)構(gòu)，不同組織需要的細(xì)胞主要分為兩大類，上皮(粘膜)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，至于神經(jīng)和血管組織，其含量相對(duì)于上皮和平滑肌少得多，因此我們只需引入因子，再植入體內(nèi)后依靠周圍組織長(zhǎng)入即可。因此，將脫細(xì)胞基質(zhì)/細(xì)胞/三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料制備成三明治結(jié)構(gòu)，然后根據(jù)膀胱結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬，對(duì)三明治結(jié)構(gòu)進(jìn)行布局與排列，形成基于脫細(xì)胞基質(zhì)/細(xì)胞/三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的仿生組織，在泌尿系統(tǒng)修復(fù)中具有很好的應(yīng)用前景。[〇〇48] 有益效果
[0049](1)本發(fā)明中膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠克服傳統(tǒng)的天然水凝膠組分單一、生物功能單一的缺點(diǎn)。
[0050](2)本發(fā)明的三維纖維網(wǎng)絡(luò)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的直接復(fù)合，不會(huì)改變凝膠本身結(jié)構(gòu)就能達(dá)到增強(qiáng)水凝膠的機(jī)械性能目的。同時(shí)，三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與BAM水凝膠復(fù)合，賦予三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的生物活性，利用細(xì)胞的識(shí)別、黏附與生長(zhǎng)(因?yàn)樗z的前驅(qū)體溶液復(fù)合在三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)表面，其固有的生物活性物質(zhì)能滲透至三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)內(nèi)。而三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的纖維能填補(bǔ)水凝膠內(nèi)的水孔隙，增強(qiáng)水凝膠的機(jī)械性能及釋放迀移成分的緩釋效果。所以，這樣真正達(dá)到了血肉相連，你中有我，我中有你，混為一體的效果)。
[0051](3)相對(duì)于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠內(nèi)部疏松多孔的結(jié)構(gòu)，三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)致密， 對(duì)于水凝膠中藥物、活性因子的包裹致密，能起到緩釋的效果，降低藥物的釋放速度，從而提尚其利用率。[〇〇52](4)本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單易行，制備的復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠具有良好的三維空間結(jié)構(gòu)、力學(xué)性能良好，良好的生物相容性，可廣泛應(yīng)用生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中。[〇〇53](5)基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的仿生組織可根據(jù)膀胱結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬，在泌尿系統(tǒng)修復(fù)中具有很好的應(yīng)用前景?！靖綀D說明】
[0054]圖1為復(fù)合水凝膠的掃描電子顯微鏡圖；[〇〇55]圖2為實(shí)施例1制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇56]圖3為實(shí)施例2制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇57]圖4為實(shí)施例3制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇58]圖5為實(shí)施例4制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇59]圖6為實(shí)施例5制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；
[0060]圖7為實(shí)施例6制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；
[0061]圖8為實(shí)施例7制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇62]圖9為實(shí)施例8制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇63]圖10為實(shí)施例9制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇64]圖11為實(shí)施例10制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇65]圖12為實(shí)施例11制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇66]圖13為實(shí)施例12制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇67]圖14為實(shí)施例13制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖；[〇〇68]圖15為實(shí)施例14制備所得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的示意圖。
[0069]圖中:1是上皮細(xì)胞，2是膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，3是復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠， 4為平滑肌細(xì)胞
[0070]3-1為生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面及其淺表層與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠復(fù)合的局部復(fù)合的復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的上表面及其淺表層；
[0071]3-2為局部復(fù)合的復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料?！揪唧w實(shí)施方式】
[0072]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。[〇〇73]本發(fā)明的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，為至少包含復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠和上皮細(xì)胞，所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，為以生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料為骨架的水凝膠，即膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠內(nèi)包含生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料;所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料是由生物相容性良好的纖維纏繞形成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)材料，植入生物體后，不會(huì)產(chǎn)生炎癥、排異反應(yīng)等。圖1為復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的掃描電子顯微鏡圖，從圖中可以看出，水凝膠作為疏松層，與三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)作為致密層緊密連接，并且相互貫通。所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)為天然的或合成的生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò);所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)中的纖維直徑為500nm?3wii，孔徑范圍為1.0M1-9M1(所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的纖維孔徑不超過20mi)，孔隙率為65%-90%，且微孔分布均勻;所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為50%-90%，孔徑范圍為10仰1-450仰1。
[0074]所述至少包含復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠和上皮細(xì)胞為以下情形之一:
[0075]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與上皮細(xì)胞結(jié)合情形:
[0076]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上種植上皮細(xì)胞；
[0077]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋水凝膠，且在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與水凝膠之間種植上皮細(xì)胞；
[0078]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面；
[0079]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，上皮細(xì)胞種植在兩層水凝膠之間；
[0080]或者，進(jìn)一步地，還包括以下情形之一:[0081 ]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與平滑肌細(xì)胞結(jié)合情形:
[0082]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面種植平滑肌細(xì)胞；[〇〇83]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，且在復(fù)合脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與水凝膠之間種植平滑肌細(xì)胞；
[0084]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，平滑肌細(xì)胞種植在水凝膠下表面；
[0085]復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，平滑肌細(xì)胞種植在兩層水凝膠之間；[〇〇86]所述生物相容性良好的纖維為絲素蛋白纖維、聚乙交酯丙交酯纖維或聚己內(nèi)酯纖維等；
[0087]所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)為取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)。
[0088]所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中還含有迀移成分，所述迀移成分分散包裹在所述脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中。
[0089]所述迀移成分是指迀移成分分散在膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中，但不產(chǎn)生任何化學(xué)反應(yīng);所述迀移成分為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、胰島素、阿司匹林、酮洛芬、舒體安通或非那雄胺中的一種或幾種。
[0090]所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的存放溫度在4°C?40°C。
[0091]實(shí)施例1
[0092]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.01m〇l/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的1 〇 X PBS，其中PBS的濃度為0.0 lmo 1 /L，再加入胰島素，其中胰島素與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比0.05:100,形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液涂覆在通過三維編織法制備的纖維直徑為3WH， 孔徑范圍為8-9mi，孔隙率為90%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面，形成一層三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37 °C下靜置30min，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為90%，孔徑范圍為400-450M1，存放溫度為40°C;再在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠表面涂覆一層前驅(qū)體溶液，在37 °C下靜置5min繼續(xù)凝膠，使復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋水凝膠，把上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋水凝膠，上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面的脫細(xì)胞基質(zhì)/ 細(xì)胞/三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖2所示。[〇〇93] 實(shí)施例2
[0094]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.01m〇l/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的1 〇 X roS，其中roS的濃度為0.0 lmo 1 /L，再加入阿司匹林，其中阿司匹林與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比1:20,形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液噴涂在通過三維編織法制備的纖維直徑為3WH， 孔徑范圍為8-9mi，孔隙率為90%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面，形成一層三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37 °C下靜置3min，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為70%，孔徑范圍為15-60WH，存放溫度為8°C ;在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠表面種植上皮細(xì)胞，再在種植上皮細(xì)胞的復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠表面噴涂一層前驅(qū)體溶液，再在37 °C下靜置9min，繼續(xù)凝膠，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋水凝膠，且在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與水凝膠之間種植上皮細(xì)胞的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖3所示。[〇〇95] 實(shí)施例3
[0096]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法:制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.01mol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 X PBS，其中PBS的濃度為0.0ImoI/L，再加入酮洛芬，其中酮洛芬與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比1:10，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液涂覆在通過三維編織法制備的纖維直徑為1.8μπι，孔徑范圍為3-5μπι，孔隙率為80%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面，形成一層三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37 °C下靜置9min，形成復(fù)合脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為78%，孔徑范圍為150-200μπι，存放溫度為10°C ;再在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠表面涂覆一層前驅(qū)體溶液，在37 °C下靜置5min繼續(xù)凝膠，使復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋水凝膠，把上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面，然后在種植上皮細(xì)胞的復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠表面涂覆一層前驅(qū)體溶液，再在37 °C下靜置9min，繼續(xù)凝膠，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋兩層水凝膠，上皮細(xì)胞種植在兩層水凝膠之間的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖4所示。
[0097]實(shí)施例4
[0098]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的1 X PBS，其中PBS的濃度為0.0 Imo I /L，再加入血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，其中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比0.025:100，形成脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為500nm，孔徑范圍為1-2μm，孔隙率為65%，且將微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料裁剪成直徑為14mm的圓片，浸泡于上述2mL膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液中，形成絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料孔隙中含有膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠構(gòu)筑聚合物，膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠孔隙中也含有三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的相互包含結(jié)構(gòu);再在37 °C下靜置3min，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為50%，孔徑范圍為10-50μπι，存放溫度為4°C;然后在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)上表面種植上皮細(xì)胞，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上種植上皮細(xì)胞的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖5所示。
[0099]實(shí)施例5
[0100]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入舒體安通，其中舒體安通與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比1:18，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將靜電紡絲法制備的微孔分布均勻生物相容性良好的聚己內(nèi)酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料浸泡于上述2mL膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液中，形成聚己內(nèi)酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料孔隙中含有膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠構(gòu)筑聚合物，膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠孔隙中也含有三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的相互包含結(jié)構(gòu)；纖維直徑為1.8μπι，孔徑范圍為6.5-7.Ομπι，孔隙率為79 % ;再在37 °C下靜置15min，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為80%，孔徑范圍為150-250μπι，存放溫度為20°C ;然后在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠材料表面種植上皮細(xì)胞，再噴涂一層包含上皮細(xì)胞的水凝膠前驅(qū)體溶液，在37°C下靜置15min繼續(xù)凝膠，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與水凝膠之間種植上皮細(xì)胞的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖6所示。
[0101]實(shí)施例6
[0102]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入非那雄胺，其中非那雄胺與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比1:5，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將通過三維編織法制備的纖維直徑為2.5μπι，孔徑范圍為5-6μπι，孔隙率為85 %，且微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料浸泡于上述2mL膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液中，形成絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料孔隙中含有膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠構(gòu)筑聚合物，膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠孔隙中也含有三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的相互包含結(jié)構(gòu)；再在37°C下靜置ISmin，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為70%，孔徑范圍為250-300μπι，存放溫度為30°C ;在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的上下表面分別種植上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖7所示。
[0103]實(shí)施例7
[0104]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 X PBS，其中PBS的濃度為0.01mol/L，再加入胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的混合物，其中胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的質(zhì)量比為2:5，胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比0.1:100，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液噴涂在通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為1.9μπι，孔徑范圍為6.9-8.5μπι，孔隙率為78%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上、下表面，形成一層三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37°C下靜置25min，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為66%，孔徑范圍為300-360μπι，存放溫度為25°C;再在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上下表面分別涂覆一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37 V下靜置15min繼續(xù)凝膠，然后在將上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面，平滑肌細(xì)胞種植在水凝膠下表面，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖8所示。
[0105]實(shí)施例8
[0106]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 XPBS，其中I3BS的濃度為0.0lmol/L，再加入阿司匹林和酮洛芬的混合物，其中阿司匹林和酮洛芬的質(zhì)量為3:2，阿司匹林和酮洛芬與脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比1:9，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液涂覆在通過三維編織法制備的纖維直徑為1.6μπι，孔徑范圍為5.5-6.6μπι，孔隙率為81 %，且微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上下表面;形成一層三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37°C下靜置20min，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為70%，孔徑范圍為300-350μπι，存放溫度為30°C;再在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上下表面分別種植上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，然后在上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞表面分別涂覆一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37°C下靜置24min繼續(xù)凝膠，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖9所示。
[0107]實(shí)施例9
[0108]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 X PBS，其中PBS的濃度為0.01mol/L，再加入酮洛芬和舒體安通的混合物，其中酮洛芬和舒體安通的質(zhì)量比為3:4，酮洛芬和舒體安通與脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比2:7，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液噴涂在通過三維編織法制備的纖維直徑為2.5μπι，孔徑范圍為7-7.8μπι，孔隙率為70%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上下兩個(gè)表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37 °C下靜置ISmin，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;再在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上下表面分別涂覆一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37°C下靜置15min繼續(xù)凝膠，然后在將上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面，平滑肌細(xì)胞種植在水凝膠下表面，然后在上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞表面分別涂覆一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37 °C下靜置15min繼續(xù)凝膠，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖10所示;膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為65%，孔徑范圍為320-400μπι，存放溫度為35 °C。
[0109]實(shí)施例10
[0110]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 XPBS，其中I3BS的濃度為0.0lmol/L，再加入阿司匹林、酮洛芬和舒體安通的混合物，其中阿司匹林、酮洛芬和舒體安通的質(zhì)量比為2:1:3，阿司匹林、酮洛芬和舒體安通與脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比1:10，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將通過三維編織法制備的纖維直徑為900nm，孔徑范圍為1_3μπι，孔隙率為65%，且微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料浸泡于上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液，形成絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料孔隙中含有膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠構(gòu)筑聚合物，膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠孔隙中也含有三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的相互包含結(jié)構(gòu);再在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠材料上下表面分別種植上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，然后在上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞表面分別涂覆一層水凝膠，繼續(xù)凝膠，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖11所示;復(fù)合脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為70 %，孔徑范圍為380-430μπι，存放溫度為5°C。
[0111]實(shí)施例11
[0112]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 X PBS，其中PBS的濃度為0.01mol/L，再加入胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的混合物，其中胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的質(zhì)量比為2:5，胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比0.1:100，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液噴涂在通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為
1.9μπι，孔徑范圍為6.9-8.5μπι，孔隙率為78%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上、下表面，形成一層三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37°C下靜置25min，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;再在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上下表面分別涂覆一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37°C下靜置15min繼續(xù)凝膠，然后在將上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面，平滑肌細(xì)胞種植在水凝膠下表面，然后在平滑肌細(xì)胞表面涂覆一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37 °C下靜置ISmin繼續(xù)凝膠，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖12所示;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為66 %，孔徑范圍為300-360μπι，存放溫度為25 °C。
[0113]實(shí)施例12
[0114]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 X PBS，其中PBS的濃度為0.01mol/L，再加入胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的混合物，其中胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的質(zhì)量比為2:5，胰島素和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比0.1:100，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液涂覆在通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為1.9μπι，孔徑范圍為6.9-8.5μπι，孔隙率為78%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上、下表面，形成一層三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37 °C下靜置28min，形復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;再在復(fù)合一側(cè)膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面涂覆一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37°C下靜置15min繼續(xù)凝膠，然后在將上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面，在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面種植平滑肌細(xì)胞，再在平滑肌細(xì)胞表面噴涂一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37 °C下靜置1min繼續(xù)凝膠，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖13所示;膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為66 %，孔徑范圍為300-360μπι，存放溫度為25 °C。
[0115]實(shí)施例13
[0116]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的10 XPBS，其中PBS的濃度為0.0lmol/L，再加入酮洛芬和舒體安通的混合物，其中酮洛芬和舒體安通的質(zhì)量比為3:4，酮洛芬和舒體安通與脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比2:7，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將上述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液噴涂在通過三維編織法制備的纖維直徑為2.5μπι，孔徑范圍為7-7.8μπι，孔隙率為70%，且微孔分布均勻生物相容性良好的聚乙交酯丙交酯纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上下表面，形成一層生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);再在37 °C下靜置ISmin，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;再在一側(cè)復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠表面噴涂一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37 °C下靜置15min繼續(xù)凝膠，然后在將上皮細(xì)胞種植在水凝膠上表面，在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面種植平滑肌細(xì)胞，再在上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞表面分別涂覆一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37 °C下靜置Smin繼續(xù)凝膠，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖13所示;膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為65 %，孔徑范圍為320-400μπι，存放溫度為35°C。
[0117]實(shí)施例14
[0118]基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織的制備方法，制備好取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì)材料，進(jìn)行冷凍干燥后再冷凍研磨，打碎成粉末;在鹽酸溶液中用胃蛋白酶消化膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)粉末約48h，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液，加入大約1/10膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的NaOH，其中NaOH的濃度為0.0lmol/L，再加入大約1/9膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)預(yù)凝膠溶液體積的1 X PBS，其中PBS的濃度為0.0 Imo I /L，再加入血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，其中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的質(zhì)量比0.025:100，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)凝膠前驅(qū)體溶液。在凝膠未形成之前，將通過靜電紡絲法制備的纖維直徑為500nm，孔徑范圍為1-2μπι，孔隙率為65%，且將微孔分布均勻生物相容性良好的絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料裁剪成直徑為14mm的圓片，浸泡于上述2mL膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)前驅(qū)體溶液中，形成絲素蛋白纖維網(wǎng)絡(luò)材料孔隙中含有膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠構(gòu)筑聚合物，膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠孔隙中也含有三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的相互包含結(jié)構(gòu);再在37°C下靜置3min，形成復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上下表面分別種植上皮細(xì)胞平滑肌細(xì)胞，在平滑肌細(xì)胞噴涂一層水凝膠前驅(qū)體溶液，在37 °C下靜置9min繼續(xù)凝膠，形成膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，即為基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，如圖15所示;復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的主要成分為水，孔隙率為50%，孔徑范圍為10-50μ111，存放溫度為4°(:。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，其特征是:所述基于膀胱脫 細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織至少包含復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠和上皮細(xì) 胞;所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠為以生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料為骨架的膀 胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠;所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料是由生物相容性良好的纖 維纏繞形成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)材料。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，其特 征在于，所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料為天然的或合成的生物相容性良好的三 維纖維網(wǎng)絡(luò)材料;所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料中的纖維直徑為500nm?3wii， 孔徑范圍為1M1-9M1，孔隙率為65%-90%，且微孔分布均勻;所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的 主要成分為水，孔隙率為50%_90%，孔徑范圍為10WH-450WH;所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠 的脫細(xì)胞基質(zhì)為取自膀胱的脫細(xì)胞基質(zhì);所述生物相容性良好的纖維為絲素蛋白纖維、聚 乙交酯丙交酯纖維或聚己內(nèi)酯纖維。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，其特 征在于，所述至少包含復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠和上皮細(xì)胞為以下情形之一:復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與上皮細(xì)胞結(jié)合情形:復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上種植上皮細(xì)胞；復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，且在復(fù)合脫細(xì)胞基質(zhì) 水凝膠與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠之間種植上皮細(xì)胞；復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，上皮細(xì)胞種植在膀胱 脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面；復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠上表面覆蓋兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，上皮細(xì)胞種植在 兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠之間；或者，進(jìn)一步地，還包括以下情形之一:復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與平滑肌細(xì)胞結(jié)合情形:復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面種植平滑肌細(xì)胞；復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，且在復(fù)合膀胱脫細(xì)胞 基質(zhì)水凝膠與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠之間種植平滑肌細(xì)胞；復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，平滑肌細(xì)胞種植在膀 胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面；復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠下表面覆蓋兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠，平滑肌細(xì)胞種植 在兩層膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠之間；所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠為膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠與所述生物相容性良好的 三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料整體或局部復(fù)合;所述整體復(fù)合是指膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠內(nèi)整體包含 生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料;所述局部復(fù)合是指生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò) 材料的上表面和/或下表面及其淺表層與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠復(fù)合。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，其特 征在于，所述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中還含有迀移成分，所述迀移成分分散包裹在所 述復(fù)合膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，其特征在于，所述迀移成分是指迀移成分分散在脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠中，但不產(chǎn)生任何化學(xué)反應(yīng)； 所述迀移成分為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、胰島素、阿司匹林、酮洛芬、舒體安通或非那雄胺中的 一種或幾種。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)-細(xì)胞-三維纖維網(wǎng)絡(luò)的仿生組織，其特 征在于，所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠的存放溫度在4°C?40°C。7.—種如權(quán)利要求1、2、3或6中任一仿生組織的制備方法，其特征是:所述制備方法為 浸泡法、涂覆法或噴涂法。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法，首先制備膀胱脫細(xì)胞 基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液，然后浸泡、涂覆或噴涂，再在37°C下靜置3?30min即形成復(fù)合脫細(xì) 胞基質(zhì)水凝膠；所述浸泡為:在凝膠未形成之前，將生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料浸泡于所述膀胱脫細(xì)胞基 質(zhì)前驅(qū)體溶液；所述涂覆為:在凝膠未形成之前，將所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液涂覆在生物相容性良好 的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面、下表面或上下兩個(gè)表面，形成一層生物相容性良好的三維 纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);或進(jìn)一步將生物相容 性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料貼合于所涂覆的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液層，形成多 層生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊 結(jié)構(gòu)；所述噴涂為:在凝膠未形成之前，將所述膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液噴涂在生物相容性良好 的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料的上表面、下表面或上下兩個(gè)表面，形成一層生物相容性良好的三維 纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊結(jié)構(gòu);或進(jìn)一步將生物相容 性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)材料貼合于所噴涂的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液層，形成多 層生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液構(gòu)成的層疊 結(jié)構(gòu)。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述生物相容性良好的三維纖維網(wǎng)絡(luò) 材料的制備為靜電紡絲法或三維編織法。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)水凝膠前驅(qū)體溶液 的制備過程中還加入迀移成分。
【文檔編號(hào)】A61L27/28GK106075597SQ201610395766
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月6日 公開號(hào)201610395766.3, CN 106075597 A, CN 106075597A, CN 201610395766, CN-A-106075597, CN106075597 A, CN106075597A, CN201610395766, CN201610395766.3
【發(fā)明人】張耀鵬, 宋魯杰, 黃建文, 邵惠麗, 傅強(qiáng), 蔣丹, 胡學(xué)超
【申請(qǐng)人】東華大學(xué)