沙苑子總黃酮在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的應用
【專利摘要】本發(fā)明涉及沙苑子總黃酮在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的應用，可有效解決圍絕經期抑郁癥的治療用藥問題，方法是，將沙苑子粉碎成粗粉，用石油醚回流提取，脫脂，棄去石油醚；沙苑子藥渣揮干石油醚，用乙醇浸泡，回流提取，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，用蒸餾水分散，得樣品液；樣品液上AB?8型大孔吸附樹脂，依次用蒸餾水、質量濃度10%的乙醇、質量濃度80%的乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，加等體積石油醚萃取，揮盡有機溶劑，水層冷凍干燥，冷凍干燥，粉碎，得沙苑子總黃酮。本發(fā)明原材料豐富，制備方法簡單，有效解決了圍絕經期抑郁癥的治療用藥問題，是療圍絕經期抑郁癥藥物上的創(chuàng)新。
【專利說明】
沙苑子總黃酬在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明設及醫(yī)藥，特別是一種沙苑子總黃酬在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的 應用。
【背景技術】
[0002] 沙苑子又稱扁莖黃蓄（學名：Astragaluscomplana化S)是豆科黃巧屬的植物，是中 國的特有植物。分布于中國大陸的河南、東北、華北等地，生長于海拔1，〇〇〇米至1，700米的 地區(qū)，常生于路邊、溝岸、草坡和干草場。
[0003] 種子入藥，有補腎固精、清肝明目之效，主治腰膝酸痛、遺精早泄、遺尿、尿頻、白 帶、神經衰弱及視力減退、糖尿病等癥。
[0004] 圍絕經期抑郁癥是一種情緒障礙，不少婦女在絕經前數(shù)年就已經出現(xiàn)輕微的情緒 障礙。多半周期性地出現(xiàn)在月經來潮前數(shù)天，而在月經來潮后自然緩解，即"經前綜合征"。 運些患者圍絕經期抑郁癥的發(fā)病危險可能增加，嚴重影響著患者的身體健康。
[0005] 現(xiàn)雖有治療圍絕經期抑郁癥的多種藥物，但由于種種原因，其使用和療效并不盡 人意，因此，治療圍絕經期抑郁癥藥物上的改進和創(chuàng)新是本領域技術人員一直研究解決的 技術問題，但至今未見有沙苑子提取物總黃酬在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的公開報 導。

【發(fā)明內容】

[0006] 針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種沙苑子總黃 酬在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的應用，可有效解決圍絕經期抑郁癥的治療用藥問 題。
[0007] 本發(fā)明解決的技術方案是，將沙苑子粉碎成粗粉，用石油酸回流提取，脫脂，棄去 石油酸;沙苑子藥渣揮干石油酸，用乙醇浸泡，回流提取，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至 無醇味，用蒸饋水分散，得樣品液;樣品液上AB-8型大孔吸附樹脂，依次用蒸饋水、質量濃度 10 %的乙醇、質量濃度80 %的乙醇洗脫，收集80 %乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，加 等體積石油酸萃取，揮盡有機溶劑，水層冷凍干燥，冷凍干燥，粉碎，得沙苑子總黃酬。
[000引該沙苑子總黃酬有效用于制備治療圍絕經期抑郁癥的藥物，實現(xiàn)沙苑子總黃酬在 制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的應用。
[0009] 本發(fā)明原材料豐富，制備方法簡單，有效解決了圍絕經期抑郁癥的治療用藥問題， 是治療圍絕經期抑郁癥藥物上的創(chuàng)新，具有很強的實際應用價值。
【具體實施方式】
[0010] W下結合具體情況對本發(fā)明的【具體實施方式】作詳細說明。
[0011] 本發(fā)明在具體實施中，是由W下方法實現(xiàn)的。
[0012] -種沙苑子總黃酬在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的應用，所述的沙苑子總黃 酬是，將沙苑子粉碎成過20-30目篩的粗粉，先加粗粉10倍重量的石油酸(沸程60-90°C)回 流提取化，脫脂，棄去石油酸;再加粗粉10倍重量的石油酸回流提取化，脫脂，棄去石油酸； 沙苑子藥渣揮干石油酸，加沙苑子粗粉10倍重量質量濃度80 %的乙醇浸泡0.化，回流提取2 次，每次化，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，加蒸饋水分散至相當于含生藥量 0.3g/ml，得樣品液;樣品液上AB-8型大孔吸附樹脂，先用2倍柱體積蒸饋水洗脫，棄去水液； 繼用4倍柱體積、質量濃度10%的乙醇洗脫，棄去洗脫液;再用6倍柱體積、質量濃度80%的 乙醇洗脫，收集質量濃度80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，加等體積的石油酸萃取 1次，棄去石油酸;揮盡有機溶劑，水層冷凍干燥，粉碎，得沙苑子總黃酬。
[0013] 本發(fā)明沙苑子總黃酬經實地試驗，可有效用于制備治療圍絕經期抑郁癥的藥物， 實現(xiàn)沙苑子總黃酬在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的應用，有關試驗資料如下：
[0014] 1.材料與方法 [00巧]1.1實驗材料
[0016] 1.1.1實驗動物
[0017] SD大鼠；雌性;SPF級體重:250-270g;提供單位：山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，動物 合格證號:0021925;實驗室合格證號:SYXK(豫)2010-001
[001引 1.1.2實驗藥物 [0019] 沙苑子總黃酬
[0020] 更年安膠囊，山西天星制藥有限公司生產，批號140112;大豆異黃酬維E軟膠囊，威 海紫光生物科技開發(fā)有限公司生產，批號14040301。
[0021] 1.3實驗試劑：
[0022] 大鼠 E2、T、Gn畑、LH、FSH、化-2、86?、0斗？、肥、5-肌、〇4檢測試劑盒，3&〇公司，批號 20150101A;抗邸多克隆抗體:北京博奧森生物工程有限公司，批號bs-0122R;抗AR多克隆抗 體，武漢博±德生物工程有限公司。批號11D53;抗Bcl-2多克隆抗體:武漢博±德生物工程 有限公司，批號196841;抗Bax多克隆抗體:武漢博±德生物工程有限公司，批號13CM400A; 兔-IgG免疫組化試劑盒，武漢博±德生物工程有限公司，批號06K12A10;簇甲基纖維素鋼， 天津市恒星化學試劑制造有限公司，批號20140106;注射用青霉素鋼，華北制藥股份有限公 司生產，批號F4013504;甲醒溶液(分析純），煙臺市雙雙化工有限公司生產，批號20141003; 0.9%氯化鋼注射液，河南科倫藥業(yè)有限公司生產，批號C114092201-2;水合氯醒，天津市光 復精密化工研究所生產，批號20120807;酒精，新鄉(xiāng)市Ξ偉消毒制劑有限公司生產，批號 20140905。
[00剖 1.4實驗儀器
[0024] TDZ4-WS臺式低速離屯、機，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司；I0RAD-680酶標儀， eSOMicroplate Reader，Bi〇-Rad Laboratories;0FT-100開場活動試驗箱，成都泰盟軟件 有限公司;BX61電動顯微鏡，日本OLYMPUS公司；888-2766A肥LLWASH，賽默飛世爾（上海)儀 器有限公司；JZ19600手動移液器，美國賽默飛世爾科技有限公司；皿S-21-8型電熱恒溫水 浴鍋，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；
[0025] BCD-248T型冰箱，新飛電器有限公司；JM 1000電子砰，余姚記銘稱重校驗設備有 限公司;AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；FCD-3000電熱鼓風干燥箱， 北京科偉永興儀器有限公司;Forma 900系列超低溫冰箱，美國賽默飛世爾科技公司;X3R高 速冷凍離屯、機，美國賽默飛世爾科技有限公司。
[0026] 1.2實驗方法
[0027] 1.2.1造模與給藥
[002引取體重250-270g雌性wistar大鼠100只，隨機取12只作為空白組，做假手術處理， 其余大鼠造更年期模型。大鼠稱重后腹腔注射10%水合氯醒(0.3ml/100g)麻醉后腹位固 定，然后從大鼠背部最末肋骨下，距脊柱約2cm交叉處剪毛，消毒后切開皮膚和背肌，切開長 約1cm，切口視野可見一乳白色的脂肪團；用小綴子輕輕夾住脂肪團拉出切口外，分離脂肪 團，即可見到一團細線狀不規(guī)則，呈黃紅色的組織，即為卵巢。剪取時先將卵巢下輸卵管(包 括脂肪）用細線結扎，完全摘除左側卵巢，右側摘除80%。術后順勢將組織放回腹腔中，縫合 肌肉及皮膚。造模過程分兩批進行。術后精屯、飼養(yǎng)，肌肉注射青霉素20萬u/kg(每只0.1ml) W防感染，連續(xù)3d，每天1次。手術5d后開始對手術大鼠逐只進行陰道涂片檢查，每天1次，連 續(xù)5d，涂片呈現(xiàn)動情反應的大鼠棄去不用，選擇72只去勢完全的大鼠隨機均勻分為6組供實 驗用，分別為模型組，更年安膠囊組，大豆異黃酬維E軟膠囊組，大、中、小劑量沙苑子總黃酬 組。每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥35天。給藥5天后，空白組大鼠6只/籠飼養(yǎng)，正常飲食飲水， 不給任何刺激;造模型6組均為每籠飼養(yǎng)1只大鼠，每天隨機給予6種不同刺激。6種應激因子 按隨機方法在18d內應用:①潮濕墊料(g墊料，ml水），②冰水游泳(4°C，5min)，③熱應激(45 °C，5min)，④通宵照明（24h)，⑤禁水(24h)，⑥禁食(24h)。每天隨機給予一種刺激，每種刺 激不能連續(xù)出現(xiàn)，連續(xù)18d。
[0029] 配藥:0.5 % CMC配制方法:稱取簇甲基纖維素鋼4g，用蒸饋水配成800ml。
[0030] (1)大、中、小劑量沙苑子總黃酬組給藥劑量分別為〇.20g/kg、0.10g/kg、0.05g/kg (給藥體積Iml/lOOg)。配置方法:分別稱取沙苑子總黃酬2.0肖、1.0肖、0.5肖，先混懸于少量的 0.5 % CMC溶液，然后再定容到100ml，混勻，即為所需沙苑子總黃酬大、中、小劑量混懸液。
[0031] (2)更年安膠囊(0.45g/kg，用蒸饋水配成0.045g/ml，lml/100g，相當于臨床用量 的10倍）；配置方法：取更年安膠囊15粒，先混懸于少量的0.5%CMC溶液，然后再定容到 100ml，混勻，即為所需更年安膠囊混懸液。
[0032] (3)大豆異黃酬維E軟膠囊(0.167g/kg，用蒸饋水配成0.0167g/ml，lml/100g，相當 于臨床用量的10倍）；配置方法:取大豆異黃酬膠囊4粒，先混懸于少量的0.5%CMC溶解，然 后再定容到120ml，混勻，即為所需大豆異黃酬膠囊混懸液。
[0033] 給藥：更年安膠囊組灌服更年安膠囊混懸液（0.45mg/kg，相當于臨床劑量的10 倍），大豆異黃酬軟膠囊組灌服大豆異黃酬軟膠囊混懸液(〇.167mg/kg，相當于臨床劑量的 10倍），空白組和模型組分別灌服同體積〇.5%CMC溶液(灌胃體積均為Iml/lOOg)，大、中、小 劑量沙苑子總黃酬組，分別按組別灌服大、中、小劑量沙苑子總黃酬(給藥劑量分別為〇.2g/ kg、0. l/kg、0.05g/kg，給藥體積Iml/lOOg)。每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥35天。
[0034] 1.2.2觀察項目及檢測方法
[0035] 1.2.2.1 觀察項目
[0036] 各組大鼠于刺激結束后第一天時測定開場活動(Open field)。第2天進行大鼠強 迫游泳實驗:ii量大鼠4min內，2-4min的不動時間。于第3-4天進行糖水消耗實驗，計算動物 2地飲用1%糖水的量。
[0037] 末次灌胃后化(禁食15小時），摘眼球取血，分離血清，測定血清中E2、T、Gn畑、LH、 FSH、比-2、BGP的含量;血漿β-ΕΡ的含量。解剖大鼠，取腦勻漿，測腦組織勻漿中肥、5-HT、DA 含量;摘除胸腺、脾臟、子宮和剩余20%卵巢組織，稱量其濕重并計算胸腺、脾臟、子宮的臟 器指數(shù)(臟器指數(shù)=臟器濕重mg/大鼠體重g)，然后取腦中下丘腦和垂體，將左側下丘腦、垂 體、子宮W、卵巢及胸腺、脾臟固定于10%甲醒溶液中，石蠟包埋，切片，用免疫組化法測下 丘腦、垂體、卵巢、子宮中邸表達，下丘腦、垂體中43、13(31-2、13曰義表達。
[003引1.2.2.2檢測方法
[0039] (l)Openfield 法測試
[0040] 各組大鼠于刺激結束后第一天測定大鼠開場活動(Open field),觀察大鼠3min內 站立次數(shù)和水平活動距離。
[0041] (2)強迫游泳實驗
[0042] 刺激結束后第2天進行大鼠強迫游泳實驗：將大鼠單獨放入圓柱形游泳筒，水溫 (23~25)°C，測量大鼠4min內，2-4min的不動時間。
[0043] (3)糖水攝入量測試
[0044] 刺激結束后第3-4天測試各組大鼠1 %薦糖水消耗量，測試前禁水12小時，測定24 小時內薦糖水攝入量，同時禁食24h。
[0045] (4)試劑盒測定方法：
[0046] 血清標本的獲取:使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激， 收集血液后，3000轉離屯、10分鐘將血清和紅細胞迅速小屯、的分離。
[0047] 血漿標本的獲?。篧肝素抗凝管存放血液樣本，抗凝。后W3000轉離屯、30分鐘，取 上清液。
[004引組織勻漿標本的獲取:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離屯、10分鐘取上清。
[0049] 大鼠雌二醇化OELISA檢測試劑盒測定方法同實驗1中雌二醇測定法:其中，標準 品（S0-S5)濃度依次為:0、4、8、16、32、64pmol/L。
[0050] 大鼠黃體生成素(LH化LISA檢測試劑盒測定測定方法同雌二醇，其中，標準品（S0- S5)濃度依次為:0、3、6、12、24、48mIU/mL。
[0051 ]大鼠促卵泡素(F甜化LISA檢測試劑盒測定方法同雌二醇，其中，標準品（S0-S5)濃 度依次為:0、0.75、1.5、3、6、12IU/mL。
[0052] 大鼠促性腺激素釋放激素(Gn畑化LISA檢測試劑盒測定方法同雌二醇。其中，標準 品（S0-S5)濃度依次為:0、5、10、20、40、80mIU/mL。
[0053] 大鼠白細胞介素2(IL-2化LISA檢測試劑盒測定方法同雌二醇。其中，標準品（S0- S5)濃度依次為:0、100、200、400、800、1600pg/mL。
[0054] 大鼠骨巧素(BGP化LISA檢測試劑盒測定方法同雌二醇。其中，標準品（S0-S5)濃度 依次為:0、0.75、1.5、3、6、12ng/mL。
[0055] 大鼠 β-內啡膚(β-ΕΡ化LISA檢測試劑盒測定方法同雌二醇。其中，標準品（S0-S5) 濃度依次為:〇、3、6、12、24、48pg/mL。
[0056] 大鼠睪酬(T化LISA檢測試劑盒測定方法同雌二醇。其中，標準品（S0-S5)濃度依次 為:0、20、40、80、160、320pg/mL。
[0057] 大鼠多己胺(DA化LISA檢測試劑盒測定方法同雌二醇。其中，標準品（S0-S5)濃度 依次為:0、100、200、400、800、1600pg/mL。
[005引大鼠巧圣色胺(5-HT化LISA檢測試劑盒測定方法同雌二醇。其中，標準品（S0-S5)濃 度依次為:0、7.5、15、30、60、120ng/mL。
[0059] (5)免疫組化檢測方法：同實驗一。
[0060] 1.2.3統(tǒng)計學處理方法
[0061] 數(shù)據(jù)分析用SPSS17.0醫(yī)用統(tǒng)計包進行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計學處理，計量資料用平均數(shù) ±標準差(婦A)表示，各組間比較采用單因素方差分析，方差檢驗齊者用LS的去，方差不齊者 用Games-Howell法檢驗，等級資料采用Ridit檢驗。
[0062] 2.結果
[0063] 2.1對圍絕經期合并抑郁模型大鼠行為學的影響
[0064] 對圍絕經期合并抑郁模型大鼠曠場活動的影響(見表1)
[00化]表1沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠曠場活動的影響(xis)
[0066]
[0067] 注:與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0068] 由上表可看出，與空白組相比，模型組大鼠的活動距離和站立次數(shù)都顯著減少(P< 0.01);反映了大鼠對新鮮環(huán)境的好奇程度降低。與模型組比較，大劑量沙苑子總黃酬與更 年安膠囊、大豆異黃酬軟膠囊均能使圍絕經期合并抑郁大鼠活動距離和站立次數(shù)顯著增加 (P<0.01)。中、小劑量對活動距離又增加趨勢；中劑量能夠顯著增加站立次數(shù)(P<0.05)，小 劑量對站立吃素有增加趨勢。
[0069] 對圍絕經期合并抑郁模型大鼠強迫游泳和糖水攝入量的影響(見表2)
[0070] 表2沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠強迫游泳不動時間和糖水攝入量的影響 (社S)
[0071]
[0072]
[0073] 注:與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0074] 由上表可W看出，與空白組比，模型組大鼠的強迫游泳不動時間顯著延長（P< 0.01)，糖水攝入量顯著下降(P<〇.01);說明圍絕經期合并抑郁大鼠對不利環(huán)境的絕望程度 升高，對獎賞的反應降低。與模型相比，更年安膠囊、大豆異黃酬軟膠囊能使大鼠強迫游泳 不動時間顯著縮短(P<〇.01)，糖水攝入量顯著增加(P<〇.01);大劑量能夠明顯減少不動時 間（P<0.05)，顯著增加糖水攝入量(P<0.01);中劑量對不懂時間有縮短趨勢，能夠明顯增加 糖水攝入量(P<〇.05);小劑量又縮短不動時間和增加糖水攝入量的趨勢。
[0075] 2.2對圍絕經期合并抑郁模型大鼠臟器指數(shù)的影響
[0076] 對圍絕經期合并抑郁模型大鼠胸腺、脾臟、子宮指數(shù)的影響(見表3)
[0077] 表3沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠胸腺、脾臟、子宮指數(shù)的影響(虹S)
[007引
[0079] 注:與模型組比較，沖 <0.05，**0.31P<0.01
[0080] 由上表可看出，與空白組比，模型組大鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、子宮指數(shù)顯著下 降(P<0.01)，說明不完全摘除卵巢所致圍絕經期大鼠模型出現(xiàn)胸腺、脾臟和子宮萎縮。與模 型組比，更年安膠囊、大豆異黃酬軟膠囊可顯著提高圍絕經期模型合并抑郁大鼠胸腺和子 宮指數(shù)(P<〇.01);大劑量沙苑子總黃酬、更年安膠囊、大豆異黃酬軟膠囊可明顯提高圍絕經 期合并抑郁大鼠的脾臟指數(shù)(P<〇.05);大劑量能夠明顯升高胸腺指數(shù)(P<0.05)，顯著升高 子宮指數(shù)(P<〇.01);中、小劑量對脾臟、胸腺、子宮指數(shù)有升高趨勢。
[0081] 2.3對圍絕經期合并抑郁模型大鼠血清、血漿生化指標的影響
[0082] 各組大鼠血清中E2、T、LH、F甜、GnRH、比-2、BGP含量，血漿β-ΕΡ含量，見表4。
[0083] 表4沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠 Gn畑、LH、F甜的影響(X + S)
[0084]
[0085] 注：與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0086] 由上表可W看出，與空白組比較，模型組大鼠血清的GnRH、LH、F甜含量均顯著升高 (P<0.01);說明不完全摘除卵巢致圍絕經期大鼠模型內分泌素亂，下丘腦和垂體分泌的相 關激素的水平發(fā)生素亂。與模型組相比，大豆異黃酬能顯著降低Gn畑水平(P<0.01)，大劑量 和更年安能夠明顯降低GnRH水平(P<0.05);更年安能顯著降低LH水評(P<0.01)，大劑量和 大豆異黃酬能夠明顯降低LH水平(P<0.05);大劑量、大豆異黃酬，更年安能夠顯著降低FSH 水平(P<0.01);中小劑量能夠明顯降低F甜水評(P<0.05)，對Gn畑、LH水平有降低趨勢。
[0087] 表5沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠血清E2、T的的影響(X生S)
[008引
[0089] 注：與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0090] 由上表可知，與空白組比較，模型組大鼠的血清E2、T水平顯著下降(P<0.01 )，說明 不3.46完全摘除卵巢致圍絕經期大鼠模型性激素素亂，圍絕經期大鼠模型復制成功。與模 型組比較，更年安膠囊、大豆異黃酬軟膠囊使圍絕經期合并抑郁模型大鼠 E2水平顯著升高 (P<0.01)，大劑量使E2水平明顯升高(P<0.05);中、小劑量沙苑子總黃酬使圍絕經期合并抑 郁模型大鼠 E2水平有升高趨勢;更年安使T水平顯著升高(P<0.01 )，大劑量和大豆異黃酬使 使T水平明顯升高(P<0.05)，中、小劑量沙苑子總黃酬使T水平有升高的趨勢。
[0091] 表5沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠血漿β-ΕΡ、血清IL-2、BGP的的影響(:x±s)
[0092]
[0093] 注:與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0094] 由上表可W看出，與空白組比較，模型組大鼠的血漿β-ΕΡ、血清比-2、BGP水平均顯 著下降(P<0.01)，說明不完全摘除卵巢所致圍絕經期大鼠下丘腦分泌功能的素亂，模型機 體免疫力與骨巧質有所降低。與模型組比較，更年安膠囊、大豆異黃酬軟膠囊可顯著升高血 漿β-ΕΡ和血清化-2、BGP的水平(P<0.01);大劑量可顯著升高血漿β-ΕΡ誰平(P<0.05)，中小 劑量對血漿β-ΕΡ誰平有升高趨勢；大中小劑量可使血清IL-2水評明顯升高(P<0.05);大中 劑量可使BGP水評明顯升高(P<0.05)，小劑量對其有升高趨勢。
[00M] 4對對圍絕經期合并抑郁模型大鼠腦組織勻漿液中生化指標的影響
[0096] 對圍絕經期合并抑郁模型大鼠腦組織勻漿液中5-HT、DA的影響，見表6.
[0097] 表的少苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠腦勻漿中5-HT、DA的的影響u±s)
[009引
[0099]
[0100] 注:與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0101] 由上表可知，與空白組比，模型組大鼠腦勻漿中的5-HT、DA水平均顯著降低（P< 0.01)，說明造小鼠慢性應激抑郁模型成功。與模型組比，大劑量沙苑子總黃酬、更年安膠囊 和大豆異黃酬軟膠囊可顯著提高腦勻漿中的5-HT水平(P<0.01)，中劑量沙苑子總黃酬可明 顯提高5-HT水平(P<0.05);更年安膠囊、大豆異黃酬軟膠囊、大劑量沙苑子總黃酬均可顯著 提高腦勻漿中的DA水平(P<0.01)，中、小劑量沙苑子總黃酬具有升高腦勻漿中的DA水平的 趨勢。小劑量具有升高腦勻漿中5-HT水平的趨勢。
[0102] 2.5對對圍絕經期合并抑郁模型大鼠邸、AR、BAX、B化-2在相應組織中表達的影響
[0103] 對對圍絕經期合并抑郁模型大鼠子宮、卵巢、垂體、下丘腦中邸的表達，垂體和下 丘腦中AR、BAX、B化-2表達的影響。見表7。
[0104] 表7沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠雌激素受體化R)表達的影響(平均光密度）
(xis)
[0105]
[0106] 注:與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0107] 表8沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠雄激素受體(AR)表達的影響(平均光密度） ix±：s)
[010 引
[0109]
[0110] 注:與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0111] 由上表可W看出，與空白組比較，模型大鼠各組織ER、AR的表達均顯著降低（P< 0.01)，說明不完全摘除卵巢合并慢性刺激所致圍絕經期合并抑郁大鼠模型機體相關組織 分布的性激素受體有所降低，從而降低了雌雄激素的生物效應。與模型組比較，大劑量沙苑 子總黃酬、更年安膠囊和大豆異黃酬軟膠囊能夠顯著升高ER在子宮、卵巢、垂體、下丘腦的 表達(P<0.01)，中劑量顯著升高邸在卵巢、垂體、下丘腦的表達(P<0.01)，小劑量邸在卵巢、 垂體的表達(P<0.01);
[0112] 更年安和大豆異黃酬顯著升高AR在垂體、下丘腦的表達(P<0.01)，大中劑量顯著 升高AR在垂體的表達(P<0.01)，大劑量明顯升高AR在下丘腦的表達(P<0.05)。
[0113] 表9沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠 ΒΑΧ表達的影響(平均光密度超)
[0114]
[0115] 注：與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0116] 表10沙苑子總黃酬對圍絕經期抑郁大鼠 Βα-2表達的影響(平均光密度）
[0117]
[0118] 注:與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0119] 由上表可W看出，與空白組相比，模型大鼠下丘腦和垂體中Bcl-2水平顯著降低、 Bax水平均顯著升高(vvP<0.01)，說明不完全摘除卵巢合并慢性刺激所致圍絕經期合并抑 郁大鼠模型機體細胞調亡增加。與模型組比較，大、中劑量沙苑子總黃酬、更年安膠囊、大豆 異黃酬軟膠囊均可顯著降低垂體、下丘腦中Bax水平(P<0.01);中劑量可顯著降低下丘腦中 Bax水平(P<0.01)，明顯可降低垂體中Bax水平(P<0.05);小劑量明顯可降低垂體中Bax水平 (P<0.05);
[0120] 更年安、大豆異黃酬可顯著升高Bcl-2在垂體、下丘腦中的表達(P<0.01);大劑量 可明顯升高Bcl-2在垂體的表達(P<0.05)，中小劑量可顯著升高Bcl-2在垂體的表達(P< 0.01);大劑量可顯著顯著升高Bd-2在下丘腦的表達。
[0121] 3.結論
[0122] 沙苑子總黃酬對大鼠圍絕經期抑郁模型有好的改善作用，沙苑子總黃酬能使圍絕 經期合并抑郁大鼠活動距離和站立次數(shù)顯著增加，對活動距離有增加的趨勢；能夠顯著增 加站立次數(shù)。沙苑子總黃酬能夠明顯減少不動時間，顯著增加糖水攝入量。沙苑子總黃酬可 明顯提高圍絕經期合并抑郁大鼠的脾臟指數(shù)，能夠明顯升高胸腺指數(shù)，顯著升高子宮指數(shù)。 沙苑子總黃酬能夠明顯降低GnRH水平、明顯降低LH水平、顯著降低F細水平。沙苑子總黃酬 使圍絕經期合并抑郁模型大鼠 E2水平有升高趨勢，使T水平明顯升高。沙苑子總黃酬可顯著 升高血漿β-ΕΡ水平，使血清IL-2水平明顯升高。沙苑子總黃酬可明顯提高5-HT水平，沙苑子 總黃酬可顯著提高腦勻漿中的DA水平。沙苑子總黃酬能夠顯著升高邸在子宮、卵巢、垂體、 下丘腦的表達;顯著升高AR在垂體的表達，明顯升高AR在下丘腦的表達。沙苑子總黃酬可顯 著降低垂體、下丘腦中Bax水平，明顯可降低垂體中Bax水平(Ρ<0.05);沙苑子總黃酬可明顯 升高Bd-2在垂體的表達，可顯著升高Bcl-2在垂體的表達，可顯著顯著升高Bd-2在下丘腦 的表達，有效用于制備治療圍絕經期抑郁癥的藥物，開拓了治療圍絕經期抑郁癥藥物上的 新途徑，是藥物上的創(chuàng)新，具有實際的應用價值。
【主權項】
1. 一種沙苑子總黃酮在制備治療圍絕經期抑郁癥藥物中的應用，所述的沙苑子總黃酮 是，將沙苑子粉碎成過20-30目篩的粗粉，先加粗粉10倍重量的石油醚回流提取lh，脫脂，棄 去石油醚;再加粗粉10倍重量的石油醚回流提取lh，脫脂，棄去石油醚;沙苑子藥渣揮干石 油醚，加沙苑子粗粉10倍重量質量濃度80%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，每次lh，濾過，合 并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，加蒸餾水分散至相當于含生藥量〇.3g/ml，得樣品液;樣品 液上AB-8型大孔吸附樹脂，先用2倍柱體積蒸餾水洗脫，棄去水液;繼用4倍柱體積、質量濃 度10%的乙醇洗脫，棄去洗脫液;再用6倍柱體積、質量濃度80%的乙醇洗脫，收集質量濃度 80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，加等體積的石油醚萃取1次，棄去石油醚;揮盡有 機溶劑，水層冷凍干燥，粉碎，得沙苑子總黃酮。
【文檔編號】A61K36/481GK105998160SQ201610406769
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月8日
【發(fā)明人】苗明三, 苗艷艷, 王燦
【申請人】河南中醫(yī)學院