一種不含明膠和人血白蛋白的疫苗凍干保護劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制品領(lǐng)域，具體涉及一種不含明膠和人血白蛋白的疫苗保護劑的 配方和使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 接種疫苗是預(yù)防流行性病毒的有效手段，可以降低傳染病的發(fā)病率和死亡率。隨 著疫苗的廣泛應(yīng)用和分子生物學和細胞生物學的飛速發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)，很多接種疫苗后出 現(xiàn)的不良反應(yīng)問題與疫苗產(chǎn)品的保護劑有直接關(guān)系，特別是凍干疫苗產(chǎn)品中的凍干保護 劑，其中的明膠或明膠衍生物能直接引起使被接種者發(fā)生過敏等變態(tài)反應(yīng)。為了減輕或避 免在疫苗使用過程中出現(xiàn)的由明膠引起的不良反應(yīng)，專家建議，使用明膠替代品或直接生 產(chǎn)不含明膠的疫苗產(chǎn)品（陳恬，水痘疫苗接種后的明膠過敏性蕁麻疹，《國外醫(yī)學》，1999年 (第 4 期），182)。
[0003] 現(xiàn)有疫苗產(chǎn)品多數(shù)是參考世界衛(wèi)生組織所頒發(fā)的生物制品規(guī)程為標準生產(chǎn)的，標 準中沒有對保護劑的明膠成分使用量加以限制。日本FDA于1986年批準的疫苗上市許可 及美國FDA批準的疫苗上市許可中，均沒有把明膠作為生產(chǎn)疫苗的禁用成分。在早期的專 利文獻中，大多數(shù)疫苗保護劑都含有明膠成分。
[0004] 國家藥典委員會在2007年7月17日至7月19日北京會議紀要中明確要求"作為 穩(wěn)定劑成分的明膠注射到人體后可發(fā)生過敏反應(yīng)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)進行取代明膠成分的相關(guān)研 究工作，以進一步提高制品的安全性"。
[0005] 國產(chǎn)明膠內(nèi)毒素含量偏高，而進口明膠有攜帶瘋牛病病毒的潛在風險，針對這一 問題，需研究一系列明膠的替代品來改進傳統(tǒng)的配方。近年來由于人血白蛋白來源越來越 有限，使得人血白蛋白價格不斷飆升，另外其易發(fā)生過敏反應(yīng)及有潛在傳染病源的風險，迫 使研究者研究一系列人血清白蛋白的替代品來改進傳統(tǒng)的配方。
[0006] 目前現(xiàn)有技術(shù)中不含明膠、人血清白蛋白的保護劑雖然降低了對人體的刺激性， 但是對疫苗的保護效果并不理想，使得疫苗在凍干過程中和儲存過程中的穩(wěn)定性下降，易 發(fā)生失效。因此，本領(lǐng)域中急需一種安全有效的無明膠、無人血清白蛋白疫苗凍干保護劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種不含明膠、不含人血白蛋白的新型疫苗凍干保護劑，使 內(nèi)毒素含量下降，不易發(fā)生過敏反應(yīng)，并且仍然能保持較高的穩(wěn)定性和較長的有效期。
[0008] 為了達到上述目的，本發(fā)明提供一種疫苗凍干保護劑，該凍干保護劑各成分在疫 苗半成品中的終濃度為：蔗糖1.5% -10%、右旋糖酐1.5% -3. 5%、山梨醇1% -2%、谷氨 酸鈉0. 8% -1. 2%、L-精氨酸0. 2% -1 %，配制保護劑的基質(zhì)液為199培養(yǎng)液或PBS緩沖 溶液或注射用水，并且所述凍干保護劑中不含明膠且不含人血清白蛋白；所述疫苗半成品 是指凍干前的液態(tài)疫苗。
[0009] 優(yōu)選地，本發(fā)明的疫苗凍干保護劑各成分在疫苗半成品中的終濃度為：蔗 糖3% -8%、右旋糖酐2 % -3%、山梨醇1% -2%、谷氨酸鈉0.8% -1.2%、L-精氨酸 0· 2%-1%〇
[0010] 更優(yōu)選地，本發(fā)明的疫苗凍干保護劑各成分在疫苗半成品中的終濃度為：蔗糖 5%、右旋糖酐3%、山梨醇1%、谷氨酸鈉1%、L-精氨酸0.2%。
[0011] 本發(fā)明凍干保護劑配方中的右旋糖酐為右旋糖酐70。
[0012] 所述的199培養(yǎng)液為無酚紅199培養(yǎng)基。
[0013] 本發(fā)明提供了上述疫苗凍干保護劑在制備凍干疫苗中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明提供了一種水痘減毒活疫苗凍干苗的制備方法，包括以下步驟：提供水痘 減毒活疫苗單次收獲液；按比例加入本發(fā)明的疫苗凍干保護劑至單次收獲液中，并除去細 胞碎片，制成水痘減毒活疫苗原液；
[0015] 將水痘減毒活疫苗原液按疫苗半成品中目標病毒滴度加入適量稀釋液配制成疫 苗半成品，使疫苗凍干保護劑中各成分在疫苗半成品中的終濃度為：蔗糖1. 5% -10%、右 旋糖酐1.5% -3. 5%、山梨醇1% -2%、谷氨酸鈉0.8% -1.2%、L-精氨酸0.2% -1% ;所 述稀釋液含有與本發(fā)明的凍干保護劑相同的成分，且各成分的濃度與本發(fā)明凍干保護劑在 疫苗半成品中的終濃度一致；所述疫苗半成品為凍干前的液態(tài)疫苗；
[0016] 疫苗半成品在2_8°C條件下，分裝，凍干。
[0017] 在本發(fā)明的一個實施例中，水痘減毒活疫苗半成品目標病毒滴度4. 81g PFU/ml。
[0018] 上述制備方法中，優(yōu)選地，使疫苗凍干保護劑中各成分在疫苗半成品中的終濃度 為：蔗糖3 % -8 %、右旋糖酐2 % -3 %、山梨醇1 % -2 %、谷氨酸鈉0. 8 % -1. 2 %、L-精氨酸 0. 2% -1%，更優(yōu)選地，使疫苗凍干保護劑中各成分在疫苗半成品中的終濃度為：蔗糖5%、 右旋糖酐3%、山梨醇1-2%、谷氨酸鈉1%、L-精氨酸0.2%。
[0019] 上述制備方法中，凍干的條件為：預(yù)凍階段最低溫度_40°C，達到最低溫度后維持 2小時；升華干燥階段最終溫度-20°C，達到最終溫度的時間為17小時，真空壓力控制在 0. 18mbar ;解吸干燥階段最終溫度28°C，真空壓力控制在0. 005 mbar，運行8小時。
[0020] 利用本發(fā)明提供的上述制備方法制備得到的一種水痘減毒活疫苗凍干產(chǎn)品也屬 于本發(fā)明的保護范圍。
[0021] 本發(fā)明同時提供了一種風疹減毒活疫苗凍干苗的制備方法，包括以下步驟：提供 風疹減毒活疫苗原液；按目標病毒滴度加入適量稀釋液并加入本發(fā)明的凍干保護劑配制成 疫苗半成品，使疫苗凍干保護劑中各成分在疫苗半成品中的終濃度為：蔗糖1. 5% -10%、 右旋糖酐1.5% -3. 5%、山梨醇1% -2%、谷氨酸鈉0.8% -1.2%、L-精氨酸0.2% -1% ; 所述稀釋液為風疹減毒活疫苗病毒維持液；所述疫苗半成品為凍干前的液態(tài)疫苗；
[0022] 疫苗半成品在2_8°C條件下，分裝，凍干。
[0023] 在本發(fā)明的一個實施例中，風疹減毒活疫苗半成品目標病毒滴度5. Olg CCID5q/ ml 〇
[0024] 上述制備方法中，優(yōu)選地，使疫苗凍干保護劑中各成分在疫苗半成品中的終濃度 為：蔗糖3 % -8 %、右旋糖酐2 % -3 %、山梨醇1 % -2 %、谷氨酸鈉0. 8 % -1. 2 %、L-精氨酸 0. 2% -1%，更優(yōu)選地，使疫苗凍干保護劑中各成分在疫苗半成品中的終濃度為：蔗糖5%、 右旋糖酐3%、山梨醇1-2%、谷氨酸鈉1%、L-精氨酸0.2%。
[0025] 上述制備方法中，凍干的條件為：預(yù)凍階段最低溫度_40°C，達到最低溫度后維持 2小時；升華干燥階段最終溫度-20°C，達到最終溫度的時間為17小時，真空壓力控制在 0. 18mbar ;解吸干燥階段最終溫度28°C，真空壓力控制在0. 005 mbar，運行8小時。
[0026] 利用本發(fā)明提供的上述制備方法制備得到的一種風疹減毒活疫苗凍干產(chǎn)品也屬 于本發(fā)明的保護范圍。
[0027] 本發(fā)明的凍干保護劑與現(xiàn)有技術(shù)的凍干保護劑相比，穩(wěn)定性結(jié)果無顯著性差異， 但是本發(fā)明的凍干保護劑由于不含明膠和人血白蛋白，提高了疫苗的安全性，減少了接種 疫苗的不良反應(yīng)。
【具體實施方式】
[0028] 以下實施例進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離 本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明 的范圍。
[0029] 若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段； 若未特別指明，實施例中所用試劑均為市售。
[0030] 實施例1
[0031] (1)取水痘減毒活疫苗單次收獲液，加入凍干保護劑，除去細胞碎片，即得水痘減 毒活疫苗原