高溫死端抗體過濾的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及濃縮的含有蛋白的溶液，具體涉及濃縮的含有抗體的溶液，尤其是這些濃縮的含有抗體的溶液的過濾。
【背景技術(shù)】
[0002]多種含有可注射蛋白的溶液尤其是含有抗體的溶液供應(yīng)到市場上。用那些溶液進(jìn)行皮下注射，導(dǎo)致了由于注射體積的限制而產(chǎn)生的對溶液中高濃度蛋白的需求。
[0003]尤其對于高度濃縮的蛋白溶液而言，因?yàn)槿芤赫扯雀?，通過將溶液泵過過濾器諸如0.22 μ的過濾器進(jìn)行除菌/微生物過濾可能非常繁瑣或是不可能的，并且可導(dǎo)致非常低的產(chǎn)率和極低的過濾能力。其還經(jīng)常導(dǎo)致濾液中蛋白含量的降低以及低過濾能力。結(jié)果是可能需要使用高壓來保持流動(dòng)。這種高壓向蛋白施加應(yīng)激并可導(dǎo)致更高的雜質(zhì)率。
[0004]大多數(shù)蛋白在高溫下不穩(wěn)定，并因此在高于+30 °C的升高的溫度下可能變性和失去活性。這限制了在過濾時(shí)使用升高高度濃縮蛋白溶液的溫度來降低粘度。然而，出乎意料地，抗體似乎在較高的溫度下(高達(dá)50-70 0C )非常穩(wěn)定，使得在較高的溫度下過濾抗體可行。
[0005]發(fā)明概述
本發(fā)明提供一種高度濃縮的抗體和/或片段溶液過濾的方法。本發(fā)明還提供一種包含濃度高于100 g/L的抗體或/和其片段的高度濃縮的溶液過濾的方法，其中所述溶液在過濾過程中被加熱到高于30 °0的溫度。
[0006]本發(fā)明還提供一種高度濃縮的抗體溶液過濾的方法，其中所述抗體或其片段以高于200 g/L的濃度存在，其中所述溶液在過濾過程中被加熱到高于30 °C的溫度。本發(fā)明還提供了一種在高度濃縮的抗體溶液過濾的過程中增加過濾產(chǎn)率的方法。本發(fā)明還提供一種在高度濃縮的抗體溶液過濾的過程中保持過濾器流速恒定的方法。此外，本發(fā)明提供一種在高度濃縮的抗體溶液過濾的過程中增加過濾器流速的方法。
【具體實(shí)施方式】
[0007]如上文解釋的，在室溫過濾高度濃縮的蛋白溶液很慢，可能導(dǎo)致蛋白的低回收或產(chǎn)率，并且還可能顯示濾液中蛋白含量的降低，同時(shí)顯示低的過濾能力。一種傳統(tǒng)的解決方法是在過濾過程中施加高壓以保持流動(dòng)。這種使用高壓向蛋白施加了應(yīng)激，可導(dǎo)致蛋白變性并增加其他產(chǎn)物相關(guān)的雜質(zhì)。
[0008]令人驚訝地發(fā)現(xiàn)抗體在較高的溫度(高于30 °C)下比預(yù)期的更穩(wěn)定，因此可適當(dāng)?shù)卦诒阮A(yù)期更高的溫度下進(jìn)行高度濃縮的抗體溶液的過濾。這種在升高的溫度下過濾高度濃縮的抗體溶液顯著提高了過濾速度和過濾能力而沒有蛋白變性。此外，提高了蛋白回收或產(chǎn)率，維持了濾液中的蛋白含量。
[0009]如所證明的，剛好位于過濾器之前以加熱泵過過濾器的溶液的內(nèi)置(inline)換熱器顯著減少了過濾時(shí)間并增加了過濾的產(chǎn)率，或者可用其他方式進(jìn)行溶液加熱，即通過將過濾器置于適當(dāng)溫度下的烤箱/水浴中。
[0010]如本文所用的術(shù)語“蛋白”、“多肽”和“肽”指由通過肽鍵連接的至少5個(gè)組分氨基酸組成的化合物。該組分氨基酸可以來自由遺傳密碼編碼的氨基酸組，它們也可以為不是由遺傳密碼編碼的天然氨基酸，以及合成氨基酸。不是由遺傳密碼編碼的天然氨基酸是例如，羥脯氨酸，y_羧基谷氨酸(y-carboxylglutamate)，鳥氨酸，磷酸絲氨酸，D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包括通過化學(xué)合成制備的氨基酸，即遺傳密碼編碼的氨基酸的D-異構(gòu)體，諸如D-丙氨酸和D-亮氨酸，Aib (a-氨基異丁酸)，Abu (α-氨基丁酸)，Tle(叔丁基甘氨酸)，β -丙氨酸，3-氨基甲基苯甲酸和鄰氨基苯甲酸。
[0011]術(shù)語“抗體”涵蓋了單克隆抗體(包括具有免疫球蛋白Fe區(qū)的全長抗體)，具有多表位特異性的抗體組合物，雙特異性抗體，雙體，和單鏈分子，以及抗體片段(例如，F(xiàn)ab,F(ab’)2，和 Fv)。
[0012]如本文所用的術(shù)語“單克隆抗體”指從實(shí)質(zhì)上均質(zhì)的抗體群獲得的抗體，S卩，除了可少量存在的可能的天然發(fā)生的突變之外，組成該群體的個(gè)體抗體是相同的。單克隆抗體是高度特異性的，針對單個(gè)抗原位點(diǎn)。此外，與通常包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的傳統(tǒng)(多克隆)抗體制備物相反，各單克隆抗體針對抗原上的單個(gè)決定簇。除了它們的特異性之外，單克隆抗體的優(yōu)勢還在于它們是通過雜交瘤培養(yǎng)而合成的，未被其他免疫球蛋白污染。修飾語“單克隆”表明抗體的特征是從實(shí)質(zhì)上均質(zhì)的抗體群獲得的，不解釋為需要通過任何特定的方法來生產(chǎn)抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過由Kohler等人，Nature, 256: 495 (1975)首先描述的雜交瘤方法制備，或可通過重組DNA方法制備(參見，例如美國專利N0.4，816，567)?！皢慰寺】贵w”還可用例如Clackson等人，Nature, 352: 624-628 (1991)和 Marks 等人，J.Mol.B1l., 222: 581-597 (1991)所述的技術(shù)從噬菌體抗體文庫分離。
[0013]本文的單克隆抗體可擴(kuò)展到包括“嵌合”抗體(免疫球蛋白)，在所述“嵌合”抗體中，重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源或?qū)儆谔囟ǖ目贵w類別或亞類，而所述鏈的剩余部分與衍生自另一個(gè)物種的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源或?qū)儆诹硪粋€(gè)抗體類別或亞類；以及這種抗體的片段，只要它們顯示出所需的生物學(xué)活性(美國專利 N0.4,816, 567; Morrison 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 81:6851-6855 (1984))。
[0014]可配制在本發(fā)明穩(wěn)定組合物中的合適抗體的例子包括:3F8、阿巴伏單抗(Abagovomab)、阿昔單抗(Abciximab)、ACZ885 (卡那單抗(canakinumab))、阿達(dá)木單抗(Adalimumab)、阿德木單抗(Adecatumumab)、阿非莫單抗(Afelimomab)、阿福圖珠單抗(Afutuzumab)、培化阿珠單抗(Alacizumab pegol)、阿侖單抗(Alemtuzumab)、噴替酸阿妥莫單抗(AItumomab pentetate)、馬安那莫單抗(Anatumomab mafenatox)、安蘆珠單抗(Anrukinzumab) (IMA-638)、阿泊珠單抗(Apolizumab)、阿西莫單抗(Arcitumomab)、阿塞珠單抗(Aselizumab)、阿利珠單抗(Atlizumab)(托珠單抗(tocilizumab))、阿托木單抗(Atorolimumab)、巴匹珠單抗(Bapineuzumab)、巴利昔單抗(Basiliximab)、巴土昔單抗(Bavituximab)、貝妥莫單抗(Bectumomab)、貝利木單抗(Belimumab)、柏替莫單抗(Bertilimumab)、貝索單抗(Besilesomab)、貝伐單抗(Bevacizumab)、比西單抗(Biciromab)、比伐單抗美登素(Bivatuzumab mertansine)、蘭妥莫單抗(Blinatumomab)、布仁妥昔單抗維度丁(Brentuximab vedotin)、布奇努單抗(Briakinumab)、卡那單抗(Canakinumab)、莫坎妥珠單抗美登素(Cantuzumab mertansine)、卡羅單抗噴地肽(Capromab pendetide)、卡妥索單抗(Catumaxomab)、西利珠單抗(Cedelizumab)、賽妥珠單抗(Certolizumab pegol)、西妥昔單抗(Cetuximab)、泊西他珠單抗(Citatuzumabbogatox)、西妥木單抗(Cixutumumab)、克立昔單抗(Clenoliximab)、克利伐珠單抗(Clivatuzumab tetraxetan)、CNT0148 (戈利木單抗(golimumab))、CNTO 1275 (優(yōu)特克單抗(ustekinumab))、可那木單抗(Conatumumab)、達(dá)西珠單抗(Dacetuzumab)、達(dá)克珠單抗(Daclizumab)、地舒單抗(Denosumab)、地莫單抗(Detumomab)、阿托度單抗(Dorlimomab aritox)、多利昔珠單抗(Dorlixizumab)、依美昔單抗(Ecromeximab)、依庫珠單抗(Eculizumab)、埃巴單抗(Edobacomab)、依決洛單抗(Edrecolomab)、依法珠單抗(Efalizumab)、依夫單抗(Efungumab)、艾西莫單抗(Elsilimomab)、培戈賴莫單抗(Enlimomab pegol)、西依匹莫單抗(Epitumomab cituxetan)、依帕珠單抗(Epratuzumab)、厄利珠單抗(Erl izumab)、厄馬索單抗(Ertumaxomab)、埃達(dá)珠單抗(Etaracizumab)、艾韋單抗(Exbivirumab)、法索單抗(Fanolesomab)、法拉莫單抗(Faralimomab)、非維珠單抗(Felvizumab)、非扎奴單抗(Fezakinumab)、芬妥木單抗(Figitumumab)、芳妥珠單抗(Fontolizumab)、福拉韋單抗(Foravirumab)、夫蘇木單抗(Fresolimumab)、加利昔單抗(Galiximab)、甘藤如單抗(Gantenerumab)、加維莫單抗(Gavilimomab)、吉妥珠單抗奧佐米星(Gemtuzumab ozogamicin)、戈利木單抗(Golimumab)、戈利昔單抗(Gomiliximab)、伊巴珠單抗(Ibalizumab)、替伊莫單抗(Ibritumomab tiuxetan)、伊戈伏單抗(Igovomab)、英西單抗(Imciromab)、英利昔單抗(Infliximab)、英妥木單抗(Intetumumab)、伊諾莫單抗(Inolimomab)、伊珠單抗奧佐米星(Inotuzumab ozogamicin)、伊匹木單抗(Ipilimumab)、伊妥木單抗(Iratumumab)、凱利昔單抗(Keliximab)、拉貝珠單抗(Labetuzumab)、來金珠單抗(Lebrikizumab)、來馬索單抗(Lemalesomab)、樂地單抗(Lerdelimumab)、來沙木單抗(Lexatumumab)、利韋單抗(Libivirumab)、林妥珠單抗(Lintuzumab)、魯卡木單抗(Lucatumumab)、魯昔單抗(Lumiliximab)、馬帕木單抗(Mapatumumab)、馬司莫單抗(Maslimomab)、馬妥珠單抗(Matuzumab)、美泊利單抗(Mepolizumab)、美替木單抗(Metelimumab)、米拉珠單抗(Milatuzumab)、明瑞莫單抗(Minretumomab)、米妥莫單抗(Mitumomab)、莫羅木單抗(Morolimumab)、莫他珠單抗(Motavizumab)、莫羅單抗-CD3 (Muromonab_CD3)、MY0-029 (司他莫單抗(stamulumab))、他那可單抗(Nacolomab tafenatox)、他那莫單抗(Naptumomab estafenatox)、那他珠單抗(Natalizumab)、奈巴庫單抗(Nebacumab)、奈昔木單抗(Necitumumab)、奈瑞莫單抗(Nerelimomab)、尼妥珠單抗(Nimotuzumab)、疏諾莫單抗(Nofetumomab merpentan)、奧瑞珠單抗(Ocrelizumab)、奧度莫單抗(Odulimomab)、奧法木單抗(Ofatumumab)、奧馬珠單抗(Omalizumab)、莫奧珠單抗(Oportuzum