一種小鼠mcao模型用的線栓的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生命科學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種用于小鼠MCAO模型的線栓的制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002]腦卒中是一種急性腦血管病的總稱，臨床表現(xiàn)為偏癱、失語(yǔ)等癥狀，具有高致死率、高致殘率和高復(fù)發(fā)率等特點(diǎn)。最新研宄顯示腦卒中已嚴(yán)重威脅人們的生命和生活質(zhì)量，其中尤以缺血性腦卒中位列患者第一位，占所有腦卒中患者的80%左右。
[0003]缺血性腦卒中動(dòng)物模型是研宄腦缺血損傷和治療的基礎(chǔ)，大腦中動(dòng)脈是缺血性腦卒中的好發(fā)部位，因此常采用大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)動(dòng)物模型作為研宄基礎(chǔ)，其中線栓法大腦中動(dòng)脈腦缺血模型是研宄缺血性腦損傷動(dòng)物模型的首選造模方法，該模型是目前研宄局灶性腦缺血/再灌注損傷最廣泛的動(dòng)物模型，具有無(wú)需開顱、創(chuàng)傷極小、腦缺血部位較恒定、腦梗死與臨床病理過(guò)程一致等優(yōu)點(diǎn)。然而，一直以來(lái)該模型多用于大鼠的研宄，但由于大鼠具有成本高、體積大、不便飼養(yǎng)特別是單支試劑使用成本是小鼠的數(shù)十倍甚至更多，且不滿足腦缺血基因水平研宄等諸多因素，越來(lái)越多的研宄采用小鼠來(lái)制備此模型。然而，由于手術(shù)操作復(fù)雜、小鼠體型小、手術(shù)耐受力較差，增加了制備腦缺血模型的難度，其穩(wěn)定性和可靠性也是亟待解決的關(guān)鍵問題。但是，我們?cè)谘绣持邪l(fā)現(xiàn)只要線栓做好，對(duì)血管機(jī)械損傷小，腦梗死區(qū)域穩(wěn)定，梗塞體積穩(wěn)定，重復(fù)性好，模型成功率就接近100%，術(shù)后存活率也很尚。因此，MCAO線檢是制備局部腦缺血t旲型非常關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)材料。
[0004]目前，MCAO線栓的制作方法有采用單線尼龍線、鼠須、釣魚線等，但多選用一定直徑的普通單線尼龍線，在頭端包被一定的硅膠。但普通的單線尼龍線軟硬度不夠理想，在一定溫度的液體中易變軟，在血管彎處易停止，入顱比較困難，大大增加了插線的難度使模型成功率下降，也增加了出血和死亡風(fēng)險(xiǎn)；用鼠須代替尼龍線雖然較尼龍線有良好的彈性和硬度，但是鼠須直徑不統(tǒng)一，對(duì)其頭端不易進(jìn)行處理，難以造成完全阻塞。對(duì)栓線頭端的處理目的是在造模過(guò)程中對(duì)血管的損傷減到最低，梗塞灶更加穩(wěn)定及較高的長(zhǎng)期存活率等。常用的涂膠法有石蠟包裹、硅膠包被、聚己烯醇栓線等，其中石蠟包裹的容易脫落；硅膠包被出的線栓雖梗死面積相對(duì)穩(wěn)定，但是沒有膨脹效果，使梗死不完全，而且死亡率較高、不易長(zhǎng)時(shí)間觀察研宄；聚己烯醇線栓硬度不夠同時(shí)遇到血液會(huì)膨脹，使進(jìn)線不順利。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法，進(jìn)而改進(jìn)線栓的特性，使之更適合用于建立小鼠MCAO模型，提高小鼠的術(shù)后存活率，降低MCAO模型的制作難度與成本。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法，該線栓通過(guò)材料的選擇與準(zhǔn)備、線栓原線頭端的包被以及在包被后的標(biāo)記制得，其具體的步驟如下:
(I)材料的選擇與準(zhǔn)備將聚四氟乙烯樹脂在300°C下拉成直徑為0.065-0.0lmm的絲狀物后，在350°C條件下，用二氧化鈦涂布于該絲狀物表面得到制作線栓的線栓原線，然后按照重量將15%的硅乳液、34%的聚乙烯吡咯烷酮、23 %的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12 %的聚四氟乙烯在250~300°C下超聲震蕩后混合形成用于包被的包被材料；
(2)線栓原線頭端的包被
首先從所制得的線栓原線上截取20± 1.0mm作為線栓原線線段，將該線段兩端加工成正圓并與所述線栓原線端部的直徑保持一致，然后選擇其中一端作為線栓原線的頭端，將該頭端包埋于步驟(I)所制得的包被材料中，然后將線栓原線的頭端拉出包被材料即可完成對(duì)線栓原線頭端的包被；
(3)包被后的標(biāo)記
在頭端包被后的線栓原線線段上，距離包被的端部ll~12mm，環(huán)繞線栓原線線段一周進(jìn)行標(biāo)記，然后將線栓原線線段晾干即可得到小鼠MCAO模型用的線栓。
[0007]在對(duì)線栓原線頭端進(jìn)行包被的過(guò)程中，線栓原線頭端在包被材料停留l~3s后，再將線栓原線頭端拉出包被材料。
[0008]本發(fā)明所制作的線栓在使用前可以將其浸泡在含有肝素鈉的生理鹽水中備用，以減少線栓周圍的血栓形成。
[0009]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
第一，本發(fā)明所做的線栓大小一致、硬度彈性適中、線栓頭端圓鈍光滑，使線栓能順利進(jìn)入大腦中動(dòng)脈，并且插入后的線栓可隨血管的彎曲而，減少了對(duì)血管的機(jī)械損傷，阻塞更徹底更可靠、腦缺血范圍穩(wěn)定、腦梗塞體積穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單，模型成功率高，小鼠死亡率低；第二，本發(fā)明采用先包被后標(biāo)記的方法，可以避免先標(biāo)記后進(jìn)行包被的過(guò)程中包被材料會(huì)遮擋甚至覆蓋標(biāo)記的情況，并且先標(biāo)記后包被的時(shí)候，由于包被材料的多少，使得包被的端部與標(biāo)記之間的距離會(huì)大于標(biāo)記時(shí)標(biāo)記處和線栓頭端端部之間的距離，進(jìn)而影響在插線時(shí)對(duì)進(jìn)線長(zhǎng)度的判斷，而采用本發(fā)明先包被后標(biāo)記的方法，則可以很好地避免這個(gè)問題，準(zhǔn)確的掌控進(jìn)線的長(zhǎng)度；
第三，本發(fā)明所做的線栓原線為非毛管性的，光滑程度接近真絲，對(duì)組織損傷非常微弱，并且涂布二氧化鈦，在光照條件下，二氧化鈦會(huì)發(fā)生氧化還原反應(yīng)，具有殺菌的效果，使得制作后的線栓更好的保持無(wú)菌狀態(tài)；
第四，本發(fā)明所用的包被材料為一種透明高分子抗菌材料，能減少小鼠的顱內(nèi)感染幾率，并且可以減少對(duì)血管的刺激，從而提高模型制作后小鼠的存活率，并且，在制作該透明高分子抗菌材料的原料中，硅乳液可以降低材料的表面張力，聚乙二醇使包被材料具有一定的抗凝性；
第五，本包被過(guò)程中，線栓原線的頭端在包被材料中停留l~3s，可以有利于線栓原線的頭端吸附包被材料，使其具有一定的硬度與韌性，并且包被材料與線栓原線之間的結(jié)合更加緊密，在制作模型的過(guò)程中，不會(huì)出現(xiàn)包被脫落的情況，但是如果停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則會(huì)使得制作出來(lái)的線栓頭端硬度較大，再插入血管的過(guò)程中容易對(duì)血管內(nèi)壁造成機(jī)械損傷，不利于模型的制作；
第六，在使用中，線栓在肝素鈉中浸泡后，可以減少線栓周圍血栓的形成，有利與拔線再灌注時(shí)線栓的拔出，而且在拔出線栓后能保持血流通暢，不會(huì)因?yàn)樾纬裳ǘ钄嘌鳌?br>【具體實(shí)施方式】
[0010]下面通過(guò)【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0011]實(shí)施例1:一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法，通過(guò)制作材料的選擇與準(zhǔn)備、頭端包被以及包被后的標(biāo)記，最后得到適用于小鼠MCAO模型制作的線栓，其具體的制作方法如下:
1、制作材料的選擇與準(zhǔn)備
1.1、線栓材料
將聚四氟乙烯樹脂在300°C下拉成直徑為0.065mm的絲狀物后，在350°C條件下，用二氧化鈦涂布于該絲狀物表面得到制作線栓的原線，所制作的線栓原線的自然張力為1.96N，牽引張力為1.67±0.78 N ；
1.2、頭端的包被材料
用于線栓頭端包被的包被材料為透明高分子抗菌材料，該透明高分子抗菌材料是由15 %的硅乳液、34 %的聚乙烯吡咯烷酮、23 %的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12 %的聚四氟乙烯在250°C下超聲震蕩后混合而成的；
2、頭纟而包被
2.1、線栓原線的加工
將上述所制作的線栓原線放置在顯微鏡下后，測(cè)量其端部的直徑后，垂直截取長(zhǎng)度為19mm的線栓原線線段，并且將得到的線栓原線線段的兩端加工成正圓，其直徑與加工前的線栓原線端部的直徑保持一致；
2.2、包被
將步驟1.2中制得的包被材料置于顯微鏡下的玻璃平面上，然后將步驟2.1中加工所得的線栓原線線段的一端選作頭端，并使用顯微鑷