專利名稱：硫醚呋喃硝酮化合物的制作方法
相關(guān)申請的交叉參考文獻(xiàn)本申請要求保護(hù)下列美國專利申請的權(quán)益1998年1月16日申請的60／071，626號美國在先申請，該申請?jiān)诖苏w引入作為參考。
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及新的硫醚呋喃硝酮類化合物及其作為治療試劑和分析試劑的應(yīng)用。更具體地說，本發(fā)明涉及新硫醚呋喃硝酮類化合物及其作為用于治療和／或預(yù)防哺乳動物神經(jīng)性、自身免疫性和炎癥疾病的治療試劑和作為自由基分析試劑的應(yīng)用。
現(xiàn)有技術(shù)早老性癡呆(Alzheimer’s disease)是一種神經(jīng)變性疾病，其中腦中的神經(jīng)細(xì)胞被系統(tǒng)地破壞，導(dǎo)致進(jìn)行性記憶喪失和精神錯亂并最終導(dǎo)致死亡。國家老年研究院(The National Institute on Aging(NIA))最近估計(jì)目前在美國約有4百萬人患有早老性癡呆。目前對于有效地預(yù)防該疾病或消除其癥狀尚缺乏治療方法。
近年來，對早老性癡呆的病因?qū)W理解取得了明顯的進(jìn)步。例如，現(xiàn)在知道患有早老性癡呆的病人在它們的腦神經(jīng)細(xì)胞周圍或之間發(fā)展成淀粉樣斑狀沉積。這些斑狀沉積由一種小分子肽的絲狀聚合體組成，其中的小分子肽稱為淀粉樣β-肽或Aβ。這種斑狀沉積起初在腦部的海馬和皮層區(qū)域(同記憶和認(rèn)知相關(guān)的區(qū)域)形成，然后隨著疾病的進(jìn)展擴(kuò)展到其它區(qū)域。原纖維和斑的沉積也在周圍支持細(xì)胞(稱神經(jīng)膠質(zhì))的炎癥后發(fā)生，這可能引起進(jìn)一步的神經(jīng)元損失。最后，許多早老性癡呆腦部的神經(jīng)細(xì)胞發(fā)展成微管相關(guān)蛋白的纏結(jié)，稱為tau，其被認(rèn)為是損害神經(jīng)細(xì)胞的反應(yīng)。
對早老性癡呆的潛在機(jī)理的理解進(jìn)程導(dǎo)致開發(fā)出各種體內(nèi)體外模型用于識別對預(yù)防和治療早老性癡呆和其它神經(jīng)變性疾病有效的化合物。在一種這樣的體外模型中，評價(jià)化合物干擾Aβ(1-40)或Aβ(1-42)β-折疊片形成的能力。由于淀粉樣β-肽的沉積和早老性癡呆的形成有關(guān)，如果化合物能夠有效地破壞Aβ(1-40)β-折疊片的形成，則這些化合物可能能夠用于預(yù)防和／或治療早老性癡呆有關(guān)的淀粉樣沉積。
在另一種體外模型中，評價(jià)化合物在大鼠胚胎海馬的神經(jīng)元／星形細(xì)胞培養(yǎng)物中抵抗Aβ(25-35)誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞損失的保護(hù)能力。如上所論述的那樣，患有早老性癡呆的病人會遭受神經(jīng)元細(xì)胞的進(jìn)行性損失。因此，在這種體外測試中有效的化合物可能能夠用于降低或預(yù)防患有早老性癡呆或其它神經(jīng)變性疾病的神經(jīng)元細(xì)胞損失。
第三種體外早老性癡呆模型是基于這樣的觀測在用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的人單核細(xì)胞中，β-淀粉樣蛋白增加細(xì)胞因子例如白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNFα)的釋放。IL-1β、IL-6和TNFα是同炎癥和免疫反應(yīng)相關(guān)的蛋白質(zhì)。如前所述，在早老性癡呆病人的腦中，原纖維的沉積同周圍支持細(xì)胞炎癥有關(guān)。參見S．D．Yan等，美國國家科學(xué)院院報(bào)(Proc．Natl．Acad．Sci．USA)94．5296(1997)。因此，在這種體外測試中有效的化合物可能能夠用于降低和／或預(yù)防同早老性癡呆有關(guān)的炎癥。
另外，IL-1β、IL-6、TNFα和其它細(xì)胞因子的高含量與許多炎癥和自身免疫性癥狀有關(guān)，包括膿毒性休克(septic shock)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)性紅斑麻風(fēng)病、腦膜炎雙球菌性腦膜炎、多發(fā)性硬化和全身性狼瘡(systemic lupus)等。參見L．Sekut等．，藥物新聞?wù)雇?Drug NewsPerspect．)1196．9，261；和A．Waage等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志(J．Exp．Med．)1989，170，1859-1867。因此，抑制這些細(xì)胞因子產(chǎn)生的化合物可能能夠用于治療這樣的炎癥和自身免疫性癥狀。
在另外一種體外模型中，評估了化合物在大鼠胚胎皮層細(xì)胞培養(yǎng)物中降低細(xì)胞因子引起的神經(jīng)元細(xì)胞損傷的作用。如上所述，細(xì)胞因子與很多種免疫和自身免疫疾病有關(guān)。因此，如果化合物在體外試驗(yàn)中有效的話，則有可能減緩或預(yù)防免疫或自身免疫癥狀。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些新的硫醚呋喃硝酮化合物能夠有效地抑制Aβ(1-42)β-折疊片的形成和／或抑制細(xì)胞因子例如IL-1β的釋放和／或降低細(xì)胞因子引發(fā)的神經(jīng)元細(xì)胞損傷。因此，這樣的化合物能夠用于預(yù)防和／或治療哺乳動物的神經(jīng)變性、自身免疫和炎癥癥狀。
本發(fā)明的硫醚呋喃硝酮化合物還可用作檢測自由基的分析試劑。在這方面，本發(fā)明的化合物通過和不穩(wěn)定自由基反應(yīng)形成相對穩(wěn)定的自由基自旋加成物(可通過電子自旋共振(ESR)光譜觀測)，這樣本發(fā)明的化合物用作“自旋穩(wěn)定劑”(“spin traps”)。因此，如果用作自旋穩(wěn)定劑，本發(fā)明的化合物可以允許應(yīng)用ESR和相關(guān)技術(shù)鑒別和研究自由基。
發(fā)明概述本發(fā)明提供新的硫醚呋喃硝酮化合物，該化合物用作治療和／或預(yù)防哺乳動物的神經(jīng)性、自身免疫性和炎癥性疾病的治療試劑和用作檢測自由基的分析試劑。具體地說，本發(fā)明的化合物用于預(yù)防和／或治療早老性癡呆。
因此，在組合物的一個方面，本發(fā)明涉及式I的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體和外消旋體及其可藥用鹽 其中R1選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和環(huán)烯基；各R2分別選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、烷氧基、取代烷氧基、環(huán)烷基和鹵素；R3選自氫、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基和環(huán)烷基烷基；R4選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和環(huán)烯基；n是0～2的整數(shù)。
在優(yōu)選的實(shí)例中，R1是取代苯基，如下式所示 其中各R5分別選自烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基、烷氧基、取代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、環(huán)烷氧基、?；?、?；被被驶?、烷氧基羰基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、磺基、烷硫基和NR6R7，其中R6和R7分別選自氫、烷基、取代烷基或芳基；或者兩個相鄰的R5共同形成亞烷基或亞烷二氧基基團(tuán)；m是1～5的整數(shù)。
優(yōu)選地，R5選自烷基、烷氧基、取代烷氧基、?；被?、烷硫基。更優(yōu)選的，R5是甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙酰胺基或甲硫基。優(yōu)選當(dāng)m為1時(shí)，R5位于硫基硫原子的對位。
優(yōu)選m是1～3的整數(shù)，更優(yōu)選m是1或2。
特別優(yōu)選的R1基團(tuán)包括2-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基、3，5-二甲基苯基、4-乙酰胺基苯基和4-甲硫基苯基。
如果存在的話，R2優(yōu)選為烷基。更優(yōu)選R2為低級烷基。
R3優(yōu)選選自氫和烷基。更優(yōu)選R3為氫。
優(yōu)選R4選自烷基、取代烷基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基和環(huán)烷基烷基。更優(yōu)選的，R4是烷基、取代烷基或環(huán)烷基。進(jìn)一步優(yōu)選R4是烷基或環(huán)烷基。
特別優(yōu)選的R4基團(tuán)包括正丙基、異丙基、2，2-二甲基-3-羥基丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、環(huán)戊基、正己基、環(huán)己基和2，4，4-三甲基戊-2-基(叔辛基)。更進(jìn)一步優(yōu)選的R4基團(tuán)包括異丙基、叔丁基和環(huán)己基。
優(yōu)選的，n是0或1。更優(yōu)選的，n是0。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式II的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體和外消旋體及其可藥用鹽 其中R8選自烷基、烷氧基、?；被?、三氟甲氧基和烷硫基；R9選自烷基和環(huán)烷基；p是1～3的整數(shù)、在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R8為甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙酰胺基或甲硫基、優(yōu)選的，p為1時(shí)R8基團(tuán)處于硫基硫原子的對位。
優(yōu)選p為1或2。
特別優(yōu)選的R9基團(tuán)包括正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、環(huán)戊基、正己基、環(huán)己基和2，4，4-三甲基戊-2-基(叔辛基)。更進(jìn)一步優(yōu)選的R9基團(tuán)包括異丙基、叔丁基和環(huán)己基。
特別優(yōu)選的硫醚呋喃硝酮化合物具有如表1中所示的結(jié)構(gòu)。表中cyclohexyl表示環(huán)己基，cyclopentyl表示環(huán)戊基。
表I
因此，在另一個組合物方面，本發(fā)明涉及下列各個獨(dú)立的化合物α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(2-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)己基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(3，5-二甲基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-乙酰胺基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-乙基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-甲硫基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-異丙基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)己基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-正丁基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-正丙基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-異丙基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-正丙基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-2，4，4-三甲基戊-2-基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-2，4，4-三甲基戊-2-基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)戊基硝酮，和α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)戊基硝酮。
在本發(fā)明組合物的另一方面，本發(fā)明涉及含有可藥用載體和有效藥物量的式I化合物的藥用組合物 其中R1-R4如上定義。
在另外的組合物方面，本發(fā)明涉及含有可藥用載體和有效藥物量的上面式II化合物的藥物組合物。
如前面所述，本發(fā)明的硫醚呋喃硝酮化合物被發(fā)現(xiàn)能夠抑制Aβ(1-42)β-折疊片的形成和／或降低β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的細(xì)胞因子如IL-1β在單核細(xì)胞中的釋放和／或降低細(xì)胞原子誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞的損傷。具有這樣特性的化合物能夠用于預(yù)防和／或治療神經(jīng)變性、自身免疫和炎癥性疾病。
因此，在方法的一個方面，本發(fā)明涉及治療神經(jīng)變性病人的方法，該方法包括對所述病人給藥有效量的藥用組合物，所述藥用組合物包括可藥用載體和對神經(jīng)變性疾病治療有效量的上面式I或式II化合物。
在方法的另一個方面，本發(fā)明涉及預(yù)防有發(fā)展成神經(jīng)變性疾病危險(xiǎn)性的病人神經(jīng)變性疾病發(fā)生的方法，該方法包括對所述病人給藥藥用組合物，所述藥用組合物含有可藥用載體和預(yù)防神經(jīng)變性疾病有效量的上面式I或式II化合物。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，上面方法中治療和／或預(yù)防的神經(jīng)變性疾病為早老性癡呆、帕金森氏病和HIV癡呆等。
在另一個方法方面，本發(fā)明涉及治療自身免疫疾病患者的方法，該方法包括對所述病人給藥有效量的藥用組合物，所述組合物含有可藥用載體和自身免疫疾病治療有效量的上面式I或式II化合物。
在另一個方法方面，本發(fā)明涉及預(yù)防具有發(fā)展成自身免疫疾病危險(xiǎn)性患者自身免疫疾病發(fā)生的方法，該方法包括對所述病人給藥藥用組合物，所述組合物含有可藥用載體和預(yù)防自身免疫疾病有效量的上面式I或式II化合物。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，上述方法所治療和／或預(yù)防的自身免疫疾病為全身性狼瘡和多發(fā)性硬化等。
在另一個方法方面，本發(fā)明涉及治療患者炎癥疾病的方法，該方法包括把藥用組合物給藥至所述患者，所述藥用組合物含有可藥用載體和治療炎癥疾病有效量的上面式I或式II化合物。
在另一個方法方面，本發(fā)明涉及預(yù)防具有發(fā)展成炎癥疾病危險(xiǎn)的患者炎癥疾病發(fā)生的方法，該方法包括把藥用組合物給藥至所述患者，其中的藥用組合物含有可藥用載體和預(yù)防炎癥疾病有效量的上面式I或式II化合物。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，上述方法中所治療和／或預(yù)防的炎癥疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒性休克、紅斑結(jié)節(jié)狀麻風(fēng)病、敗血癥、成人呼吸窘迫綜合癥(ARDS)、炎癥性腸疾病(IBD)和眼色素層炎等。
在另一方面，本發(fā)明涉及上面式I或式II化合物作為藥物的應(yīng)用。因此，本發(fā)明涉及上述式I或式II化合物在制備用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病、自身免疫疾病或炎癥疾病或狀況的藥物中的應(yīng)用。
在另一方法方面，本發(fā)明涉及制備式II化合物的方法， 式II中，各R8分別選自烷基、烷氧基、?；被⑷籽趸屯榱蚧?；R9選自烷基和環(huán)烷基；p是1～3的整數(shù)；所述方法包括以下步驟(a)用2-溴-5-呋喃甲醛在堿存在下處理下式苯硫酚衍生物，得到下式的硫醚羰基化合物， (b)用下式的羥基胺化合物處理硫醚羰基化合物，得到式II的化合物，其中R8、R9和p定義同上。
HO-NH-R9發(fā)明詳述在本發(fā)明的式I硫醚呋喃硝酮化合物中，取代基可以位于呋喃環(huán)的任一碳原子上。呋喃環(huán)上的位置按照常規(guī)的定義方式，即其上的氧原子為1位，氧原子相鄰的兩個碳原子分別為2和5位，另外兩個碳原子為3和4位。
在有些場合，本發(fā)明的硫醚呋喃硝酮可能具有一個或多個手性中心。一般來說，這類化合物是以外消旋體混合物的形式得到的。根據(jù)需要，這些化合物也可以制備成或分離為純的立體異構(gòu)體即單獨(dú)的對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體，或者為立體異構(gòu)體富集的混合物。所有這些式I的硫醚呋喃硝酮的立體異構(gòu)體(和富集的混合物)均處于本發(fā)明的范圍內(nèi)。純立體異構(gòu)體(或富集的混合物)可通過本領(lǐng)域熟悉的方法如采用光活起始原料或立體選擇試劑而制備。另外，上述化合物的外消旋體混合物也可以通過例如手性柱或者手性選擇試劑等而加以分離。定義當(dāng)描述本發(fā)明的硫醚呋喃硝酮、藥用組合物和方法時(shí)，下列術(shù)語具有下列意義術(shù)語“β-淀粉樣肽”指分子量約4．2KD的39-43氨基酸肽，該肽與Glenner等，生物化學(xué)與生物物理學(xué)研究通訊(Biochem．Biophys．Res．Commun．，)120885-890(1984)中所描述的蛋白質(zhì)形式是基本上同源的，包括普通β-淀粉樣肽的突變和翻譯后修飾。
術(shù)語“細(xì)胞因子”指由免疫細(xì)胞產(chǎn)生用于調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的肽蛋白質(zhì)介質(zhì)。細(xì)胞因子的例子包括白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNFα)。
“?；敝赶铝谢鶊F(tuán)烷基-C(O)-、取代烷基-C(O)-、環(huán)烷基-C(O)-和芳基-C(O)-，其中烷基、取代烷基、環(huán)烷基和芳基定義如下。
“?；被敝富鶊F(tuán)“-NRC(O)R”，其中各R分別表示氫或烷基。
“烯基”指優(yōu)選具有2-10個碳原子、更優(yōu)選2-6個碳原子的、具有至少1個烯烴不飽和位點(diǎn)、優(yōu)選1-2個烯烴不飽和位點(diǎn)的烯基。優(yōu)選的烯基包括乙烯基(-CH=CH2)、正丙烯基(-CH2CH=CH2)和異丙烯基(-C(CH3)=CH3)等。
“取代烯基”指優(yōu)選具有2-10個碳原子、更優(yōu)選2-6個碳原子的、具有至少1個烯烴不飽和位點(diǎn)、優(yōu)選1-2個烯烴不飽和位點(diǎn)的烯基，其被選自烷氧基、氨基、單或二烷基氨基、?；被被驶?、烷氧基羰基、芳氧基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、烷硫基等的1～3個取代基所取代。
“烷氧基”指“烷基-O-”基團(tuán)，烷基基團(tuán)具有1～12個碳原子，更優(yōu)選1～8個碳原子。優(yōu)選的烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基和1，2-二甲基丁氧基等。
“取代烷氧基”指被1～3個取代基取代的烷氧基，取代基選自烷氧基、氨基、單或二烷基氨基、?；被?、氨基羰基、烷氧基羰基、芳氧基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、烷硫基等。優(yōu)選的取代烷氧基基團(tuán)包括例如三氟甲氧基等。
“烷氧基羰基”指基團(tuán)“-C(O)OR”，其中R為烷基。
“烷基”指優(yōu)選具有1-約12個碳原子、更優(yōu)選1-8個碳原子、再更優(yōu)選1-6個碳原子的單價(jià)烷基。該術(shù)語的例子如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正己基、正辛基和叔辛基等。術(shù)語“低級烷基”指具有1-6個碳原子的烷基。
“取代烷基”指具有1-12個碳原子、更優(yōu)選1-8個碳原子、再更優(yōu)選1-6個碳原子的具有1-3個取代基的烷基，取代基選自烷氧基、氨基、單或二烷基氨基、?；被?、氨基羰基、烷氧基羰基、芳氧基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、烷硫基等。優(yōu)選的取代烷基基團(tuán)包括例如三氟甲基等。
“亞烷基”指優(yōu)選具有1-12個碳原子、更優(yōu)選1-6個碳原子的直鏈或支鏈二價(jià)亞烷基。該術(shù)語可以舉例如亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)和亞丙基異構(gòu)體(例如-CH2CH2CH2-和-CH(CH3)CH2-)等。
“亞烷二氧基”指優(yōu)選具有1-10個碳原子、更優(yōu)選1-6個碳原子的直鏈或支鏈“-O-亞烷基-O-”。該術(shù)語舉例如亞甲二氧基(-OCH2O-)和亞乙二氧基(-OCH2CH2O-)等。
“炔基”指優(yōu)選具有2-10個碳原子、更優(yōu)選2-6個碳原子、具有至少1個炔烴不飽和位點(diǎn)、優(yōu)選1-2個炔烴不飽和位點(diǎn)的炔基。優(yōu)選的炔基包括乙炔基(-CH≡CH2)和炔丙基(-CH2CH≡CH2)等。
“氨基羰基”指基團(tuán)“-C(O)NRR”，其中各個R獨(dú)立地為氫或烷基。
“芳烷基”指“芳基-亞烷基-”基團(tuán)，亞烷基部分優(yōu)選具有1-10個碳原子，芳基部分優(yōu)選具有6-14個碳原子。上述芳烷基例如芐基、苯乙基等。
“芳烷氧基”指“芳基-亞烷基-O-”，亞烷基部分優(yōu)選具有1-10個碳原子，芳基部分優(yōu)選具有6-14個碳原子。上述芳烷氧基例如芐氧基、苯乙氧基等。
“芳基”指具有單環(huán)(例如苯基)或多稠和環(huán)(例如萘基或蒽基)的、含6-14個碳原子的不飽和芳香碳環(huán)基。優(yōu)選的芳基包括苯基和萘基等。除非被各個取代基的定義另有限制，這樣的芳基可以被1-5個、優(yōu)選1-3個取代基取代，所述取代基選自烷基、取代烷基、亞烷基、取代亞烷基、烯基、取代烯基、亞烷基、亞烷二氧基、環(huán)烷基、芳烷基、芳烷基、芳基、烷氧基、取代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、環(huán)烷氧基、酰基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、磺基、巰基、烷硫基、烷硫羰基和-NRR，其中R分別選自氫、烷基、取代烷基和芳基。
“芳氧基”指“-O-芳基”，其中的“芳基”如上定義。
“羧基”指基團(tuán)“-C(O)OH”及其鹽。
“氰基”指基團(tuán)“-CN”。
“環(huán)烯基”指具有單環(huán)結(jié)構(gòu)、含有至少一個環(huán)內(nèi)不飽和度、含4-10個碳原子的環(huán)烯基，其可任選地被1-3個烷基取代。合適的環(huán)烯基例子包括例如環(huán)戊-3-烯基、環(huán)己-2-烯基和環(huán)辛-3-烯基等。
“環(huán)烷氧基”指-O-環(huán)烷基。這樣的環(huán)烷氧基包括例如環(huán)戊氧基和環(huán)己氧基等。
“環(huán)烷基”指具有單環(huán)或多縮合環(huán)(包括稠環(huán)和橋環(huán)系)、含3-10個碳原子的環(huán)烷基，其可任選地被1-3個烷基取代。這樣的環(huán)烷基包括例如單環(huán)結(jié)構(gòu)如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基、1-甲基環(huán)丙基、2-甲基環(huán)戊基和2-甲基環(huán)辛基等；多環(huán)結(jié)構(gòu)如金剛烷基等。
“環(huán)烷基烷基”指“環(huán)烷基-亞烷基-”基團(tuán)，優(yōu)選亞烷基部分具有1-10個碳原子，環(huán)烷基部分具有3-8個碳原子。這樣的環(huán)烷基烷基包括例如-CH2-環(huán)丙基、-CH2-環(huán)戊基、-CH2CH2-環(huán)己基等。
“鹵”或“鹵素”指氟、氯、溴和碘。
“羥基”指“-OH”。
“硝基”指“-NO2”。
“磺基”指“-SO3OH”及其鹽。
“烷硫基”指基團(tuán)“烷基-S-。優(yōu)選的烷硫基包括例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基等。
“烷硫基羰基”指基團(tuán)“烷基-S-C(O)-”。
“硫醇”指基團(tuán)-SH。
“可藥用鹽”指從本領(lǐng)域公知的多種有機(jī)和無機(jī)抗衡離子衍生得到的可藥用鹽，僅僅以舉例的方式，其包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽和四烷基銨鹽等；當(dāng)分子含有堿性官能團(tuán)時(shí)，包括無機(jī)酸鹽或有機(jī)酸鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽和草酸鹽等。術(shù)語“可藥用陽離子”指酸性官能團(tuán)的可藥用的抗衡陽離子。這樣的陽離子例如鈉離子、鉀離子、鈣離子、鎂離子、銨離子和四烷基銨離子等。一般合成步驟可以從容易獲得的起始原料應(yīng)用下面的一般方法和步驟制備得到本發(fā)明的硫醚呋喃硝酮類。必須理解其中僅僅給出典型的和優(yōu)選的方法條件(即反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物摩爾比、溶劑和壓力等)，除非另有說明，也可應(yīng)用其它方法條件。隨著所用具體反應(yīng)物或溶劑的變化，最佳反應(yīng)條件也可變化，但這樣的條件可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員以常規(guī)優(yōu)化步驟確定。
另外，為了防止某些官能團(tuán)進(jìn)行不必要的反應(yīng)，常規(guī)保護(hù)基團(tuán)是必須的，這一點(diǎn)對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。對于一個具體的官能團(tuán)，對合適保護(hù)基團(tuán)、合適的保護(hù)和脫保護(hù)條件的選擇是本領(lǐng)域熟知的。例如，各種保護(hù)基團(tuán)及其引入和除去描述在T．W．Greene和G．M．Wuts．《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》(Protecting Groups in Organic Synthesis)，第二版，Wiley，紐約，1991中。該文獻(xiàn)在此引入作為參考。
在優(yōu)選的合成方法中，應(yīng)用常規(guī)的反應(yīng)條件，把式III的硫醚呋喃羰基化合物和式IV的羥基胺偶聯(lián)，制備得到本發(fā)明的硫醚呋喃硝酮化合物 其中R1-R3如上定義；HO-NH-R4IV
其中R4如上定義。
一般通過把硫醚呋喃羰基化合物III和至少1當(dāng)量、優(yōu)選約1．1-約2當(dāng)量的羥基胺IV在惰性極性溶劑中接觸，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)；其中的惰性溶劑例如甲醇、乙醇、1，4-二氧六環(huán)、四氫呋喃、二甲亞砜和二甲基甲酰胺等。優(yōu)選地，該反應(yīng)在約0-約100℃的溫度下進(jìn)行約1-48小時(shí)。任選地可以在該反應(yīng)中應(yīng)用催化量的酸例如鹽酸、乙酸和對甲苯磺酸等。反應(yīng)完成后，通過常規(guī)方法例如沉淀、層析、過濾和蒸餾等技術(shù)回收該硫醚呋喃硝酮。
在該偶聯(lián)反應(yīng)中，應(yīng)用的式III的硫醚呋喃羰基化合物為已知化合物或者可以通過常規(guī)方法從已知化合物制備。例如，通過使鹵代呋喃羰基化合物(如5-溴-2-呋喃甲醛)與硫醇(酚)衍生物的硫醇(酚)陰離子(如4-甲氧基苯硫酚)反應(yīng)，即可制得上述化合物。一般的，該反應(yīng)如下進(jìn)行在堿存在下，在惰性溶劑中用過量的，優(yōu)選1．1～1．5倍當(dāng)量的硫醇(酚)衍生物處理鹵代呋喃羰基化合物，其中惰性溶劑如丙酮、2-丁酮，堿例如碳酸鉀。一般該反應(yīng)在溫度范圍0℃～100℃內(nèi)進(jìn)行約18～48小時(shí)。
本反應(yīng)中使用的鹵代呋喃羰基化合物為已知化合物或者可以通過常規(guī)方法和試劑從市售起始原料制備。在這些反應(yīng)中，5-溴-2-呋喃甲醛是特別優(yōu)選的。類似的，上述反應(yīng)中使用的硫醇(酚)衍生物也為市售的或者可以通過常規(guī)方法和試劑從市售起始原料制備。優(yōu)選的硫醇(酚)衍生物包括但不限于2-甲氧基苯硫酚、4-甲氧基苯硫酚、4-三氟甲氧基苯硫酚、3，5-二甲基苯硫酚、4-乙酰胺基苯硫酚、4-乙基苯硫酚和4-甲硫基苯硫酚。
上面式IV的羥基胺化合物也是已知的化合物或者可以通過常規(guī)步驟從已知化合物制備得到。典型地，應(yīng)用合適的還原劑例如活化鋅／乙酸、活化鋅／氯化銨或鋁／汞合金，將相應(yīng)的硝基化合物(即R5-NO2，其中R5如上定義)還原，可以制備得到式IV的羥基胺化合物。該反應(yīng)一般在下列條件下進(jìn)行溫度約15-約100℃，反應(yīng)時(shí)間約0．5-12小時(shí)，優(yōu)選約2-6小時(shí)，在水性反應(yīng)介質(zhì)中，例如醇／水(應(yīng)用鋅試劑時(shí))或醚／水混合物(應(yīng)用鋁汞合金時(shí))。應(yīng)用在四氫呋喃中的硼烷時(shí)，還可以把脂肪硝基混合物(以鹽的形式)還原成羥基胺。由于一些羥基胺穩(wěn)定性有限，這樣的化合物通常在和式III的芳基羰基化合物反應(yīng)前立即制備。
本發(fā)明所用的優(yōu)選羥基胺包括但不限于N-異丙基羥基胺、N-正丙基羥基胺、N-正丁基羥基胺、N-叔丁基羥基胺、N-環(huán)戊基羥基胺、N-環(huán)己基羥基胺、N-2，4，4-三甲基戊-2-基羥基胺等。藥物組合物當(dāng)用作藥物時(shí)，本發(fā)明化合物通常以藥物組合物形式給藥。這樣的組合物可以通過藥學(xué)領(lǐng)域公知的方式制備，并且這樣的藥物組合物含有至少一種活性化合物。
通常地，本發(fā)明化合物以藥學(xué)有效量給藥?；衔锏膶?shí)際給藥量通常由內(nèi)科醫(yī)師根據(jù)相關(guān)因素確定，所述因素包括治療的疾病、給藥途徑、給藥的實(shí)際化合物、年齡、體重和各個患者的反應(yīng)以及患者癥狀的嚴(yán)重程度等。
本發(fā)明的藥用組合物可以通過多種途徑給藥，包括口服、經(jīng)皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)和鼻內(nèi)。根據(jù)預(yù)定的給藥途徑，本發(fā)明的化合物優(yōu)選制備成注射用或口服組合物。
口服藥物組合物的形式有散裝液體溶液劑或混懸劑、或散劑。更具體地說，該組合物以單位劑型存在以有助于精確給藥。術(shù)語“單位劑型”指適合作為人或其它哺乳動物單位劑量的物理離散單元，各個單位含有計(jì)算出能夠產(chǎn)生期望藥理效應(yīng)的預(yù)定量的活性物質(zhì)和合適的藥用賦形劑。典型的單位劑型包括預(yù)先充填并預(yù)先測定的液體組合物安瓿或注射管，或者固體組合物的丸劑、片劑或膠囊等。在這樣的組合物中，硫醚呋喃硝酮化合物通常是較少量的成分(約0．1-約50％重量、優(yōu)選約1-約40％重量)，其它成分為各種賦形劑或載體或制劑輔料以有助于形成需要的劑型。
適合口服給藥的液體劑型可能包括含有緩沖劑的合適水基或非水載體、懸浮劑和分散劑，著色劑和矯味劑等。固體劑型可能含有例如任意的下面成分或相似特性的化合物粘合劑例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑例如淀粉或乳糖、崩解劑例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤滑劑如硬脂酸鎂；助流劑例如膠體二氧化硅；甜味劑例如蔗糖或糖精；矯味劑例如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑。
注射用組合物典型地基于注射用無菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖的生理鹽水或本領(lǐng)域已知的其它注射用載體。如前所述，這樣組合物中的硫醚呋喃硝酮通常是較少量的組份，含量通常為約0．05-10％重量，剩余物質(zhì)為注射用載體等。
上面描述的口服或注射用組合物的成分僅僅是代表性的。其它物質(zhì)以及方法技術(shù)等列于《雷明頓藥物科學(xué)》(Renmington’s PharmceuticalScience)第8部分，第17版，1985年，Mack出版公司，Easton、賓夕法尼亞。該文獻(xiàn)在此引入作為參考。
本發(fā)明的化合物還可能以緩釋劑型或從緩釋藥物給藥系統(tǒng)中給藥。代表性緩釋物質(zhì)的描述可以在《雷明頓藥物科學(xué)》(Renmington’sPharmceutical Science)的引用材料中發(fā)現(xiàn)。
下面的制劑例子顯示代表性的本發(fā)明藥物組合物。然而，本發(fā)明并不限于下面的藥物組合物。
制劑1-片劑干燥粉末形式的式I化合物和干燥明膠粘合劑以約1∶2的重量比混合。加入少量的硬脂酸鎂作為潤滑劑。該混合物在壓片機(jī)中形成240-270mg的片劑(每片含80-90mg活性化合物)。
制劑2-膠囊干燥粉末形式的式I化合物和淀粉稀釋劑以約1∶1的重量比混合。將該混合物裝入250mg膠囊(每膠囊含125mg活性化合物)。
制劑3-液劑將式I的化合物(125mg)、蔗糖(1．75g)和黃原膠(4g)混合，使其通過10目的美國篩，然后將其同預(yù)先制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉(11∶89，50mg)的水溶液混合。用水稀釋苯甲酸鈉(10mg)、矯味劑和色素，然后在攪拌下加入。再加入足夠的水得到5mL的總體積。
制劑4-片劑干粉形式的式I化合物同干燥明膠粘合劑以約1∶2的重量比混合。加入少量的硬脂酸鎂作為潤滑劑。在壓片機(jī)中將混合物壓成450-900mg的片劑(150-300mg的活性化合物)。
制劑5-注射劑將式I化合物溶解在緩沖的無菌鹽水注射用水基介質(zhì)中，得到濃度約5mg／ml的溶液?；衔飳?shí)用性已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物能夠抑制Aβ(1-42)β-折疊片的形成和／或抑制細(xì)胞因子例如IL-1β的釋放和／或保護(hù)免受IL-1β／IFNγ誘導(dǎo)的毒性。如前所述，Aβ(1-42)β-折疊片的形成同神經(jīng)變性疾病如早老性癡呆和／或免疫癥狀有關(guān)。另外，細(xì)胞因子水平升高同神經(jīng)變性、自身免疫和／或炎癥性癥狀有關(guān)。因此，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物和藥物組合物能夠用于預(yù)防和／或治療哺乳動物(包括人)的神經(jīng)變性、自身免疫和炎癥性疾病的治療劑。
式I的硫醚呋喃硝酮能夠治療和／或預(yù)防的疾病包括神經(jīng)變性疾病例如早老性癡呆、帕金森氏病和HIV癡呆等；自身免疫疾病例如全身性狼瘡和多發(fā)性硬化等；和炎癥性疾病例如炎性腸疾病(IBD)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒性休克、紅斑結(jié)節(jié)狀麻風(fēng)病、敗血癥、眼色素層炎、成人呼吸窘迫綜合癥(ARDS)等。
另外，由于發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物能夠有效地抑制細(xì)胞因子例如IL-1β、IL-6和TNFα的釋放，而神經(jīng)元損傷是由細(xì)胞因子如IL-1β引發(fā)的，這樣的化合物能夠用于治療以細(xì)胞因子(特別是IL-1β、I1-6和TNFα)過度產(chǎn)生或生成失調(diào)為特征的疾病，包括許多自身免疫和／或炎癥性疾病。
如上所述，此處描述的化合物適合用于許多藥物釋放系統(tǒng)。治療神經(jīng)變性、自身免疫和炎癥性疾病的注射劑量水平范圍約0．1mg／kg／小時(shí)-至少10mg／kg／小時(shí)，共注射約1-120小時(shí)，特別是24-96小時(shí)。也可以給藥約0．1mg／kg-10mg／kg或更多的預(yù)先裝載的大丸劑以達(dá)到足夠的穩(wěn)定狀態(tài)含量。對于體重為40-80公斤的患者，希望最大總劑量不超過約2g／天。
為了預(yù)防和／或治療長期疾病，例如神經(jīng)變性和自身免疫疾病。治療方案通常持續(xù)許多月或許多年，這樣為了病人的方便和可耐受性，口服制劑是優(yōu)選的?？诜r(shí)，1-5次／天、尤其是2-4次／天、典型地為3次／天的口服頻率是代表性的方案。應(yīng)用這些口服方案，各個劑量提供式I化合物約0．1-約20mg／kg，優(yōu)選的各個劑量提供約0．1-10mg／kg，特別是約1-5mg／kg。
當(dāng)用于預(yù)防神經(jīng)變性、自身免疫或炎癥疾病的發(fā)生時(shí)，對具有發(fā)展成這些疾病危險(xiǎn)性的患者給藥本發(fā)明化合物，一般在內(nèi)科醫(yī)師的建議和監(jiān)督下按照上面所述的劑量水平給藥。具有發(fā)展成特定疾病危險(xiǎn)性的患者通常包括那些具有這類疾病家族史的人、或者那些經(jīng)基因測試或篩選鑒定容易發(fā)生這些疾病的人。
本發(fā)明的化合物可作為單一的活性成分給藥，也可以結(jié)合其它試劑給藥，包括其它活性硝酮衍生物。
本發(fā)明的新硫醚呋喃硝酮還可以用作分析試劑，即自旋穩(wěn)定劑，用于通過電子自旋共振(ESR)光譜和相關(guān)技術(shù)來監(jiān)測不穩(wěn)定自由基。當(dāng)用作分析試劑時(shí)，本發(fā)明化合物一般和溶液中所研究的自由基接觸，以通常方式產(chǎn)生ESR光譜。具體地說，本發(fā)明化合物可以用于監(jiān)測和識別生物系統(tǒng)中的自由基。這些實(shí)驗(yàn)中可以應(yīng)用任何的ESR波譜儀例如JEOLJES-FE3XG波譜儀。典型地，在進(jìn)行ESR實(shí)驗(yàn)前，將氬氣或氮?dú)夤娜牒孕€(wěn)定劑的溶液以對該溶液去氧。優(yōu)選地，在這些ESR實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用過量的硝酮。
該自旋穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)所用的實(shí)際實(shí)驗(yàn)步驟會取決于許多因素，例如游離基產(chǎn)生方式、溶劑惰性、關(guān)于自旋穩(wěn)定的試劑和自旋加合物的壽命等。自旋穩(wěn)定方法是本領(lǐng)域熟知的，所用的實(shí)際步驟可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。進(jìn)行自旋穩(wěn)定的典型方法和器械描述在例如C．A．Evans，“自旋穩(wěn)定”，Aldrichimica Acta，(1979)，12(2)，23-29，該文獻(xiàn)在此引入作為參考。
提供下列合成和生物學(xué)例子來舉例說明本發(fā)明，它們不能認(rèn)為是以任意方式來限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例下列實(shí)施例中，下列縮寫具有下列意義。下面沒有定義的縮寫具有它們通常接受的意義。Bd=寬雙峰Bs=寬單峰d =雙峰dd=雙雙峰dec =分解dH2O =蒸餾水ELISA =酶聯(lián)免疫吸附測定EtOAc =乙酸乙酯EtOH =乙醇FBS =胎牛血清g =克h =小時(shí)Hz=赫茲IL-1β =白介素-1βIL-6 =白介素-6L =升LPS=脂多糖m =多峰min=分鐘M =摩爾／升MeOH =甲醇mg =毫克MHz=兆赫茲mL =毫升mmol =毫摩爾m．p． =熔點(diǎn)N =當(dāng)量q =四重峰quint =五重峰s =單峰t =三重峰THF=四氫呋喃ThT=硫黃素Ttlc=薄層層析TNFα =腫瘤壞死因子-αμg=微克μL=微升UV =紫外在下面的實(shí)施例中，所有溫度指攝氏度(除非另有說明)。實(shí)施例A-C描述制備硫醚呋喃硝酮所用的中間體。實(shí)施例1-18描述本發(fā)明各硫醚呋喃硝酮的合成，實(shí)施例19～23描述這些化合物的測試。
實(shí)施例AN-叔丁基羥胺的合成把鋅粉(648g)分次加入到冷卻的2-甲基-2-硝基丙烷(503g)和氯化銨(207g)的去離子水(6L)混合物中，控制加入的速率使溫度維持在18℃以下。機(jī)械攪拌該反應(yīng)混合物15小時(shí)然后過濾。用熱水(1．75L)洗滌固體。用碳酸鉀(4．6kg)飽和合并后的濾液，再用乙酸乙酯(2×1300mL)提取。用無水硫酸鈉干燥該有機(jī)溶液，過濾后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到白色晶體標(biāo)題化合物(329g，收率75．7％)。應(yīng)用該物質(zhì)不需要進(jìn)一步純化。
光譜數(shù)據(jù)如下1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=1．090(s，3CH3)。
實(shí)施例BN-異丙基羥胺的合成應(yīng)用上面實(shí)施例A中的步驟和1-甲基-1-硝基乙烷，制備該標(biāo)題化合物。應(yīng)用該羥基胺粗產(chǎn)品不需進(jìn)一步純化。
實(shí)施例CN-環(huán)己基羥胺的合成應(yīng)用上面實(shí)施例A中的步驟和1-硝基環(huán)己烷，制備標(biāo)題化合物?；蛘邚拿绹鳰ilwaukee，WI的Aldrich化學(xué)公司購買得到N-環(huán)己基羥胺鹽酸鹽，然后用堿例如碳酸鉀中和得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例1α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮的合成步驟A2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃甲醛的合成將4-甲氧基苯硫酚(15．5mL，125．75mmol)和碳酸鉀(20g)加入2-溴-5-呋喃甲醛(20．0g，114．29mmol)的丙酮(200mL)溶液。反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?9小時(shí)，然后過濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。所得的固體用己烷(300mL)和乙酸乙酯(50mL)重結(jié)晶，得到淺黃色晶體(24．50g)。
步驟Bα-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮的合成2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃甲醛(24．50g)在CHCl3(500mL)中與N-叔丁基羥胺(15．0g，168．16mmol)、分子篩(100g)和硅膠(20g)混合?；旌衔镌跉鍤夥障禄亓鬟^夜，然后過濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。殘留物用己烷(435mL)重結(jié)晶，得到淺黃色標(biāo)題化合物晶體(27．52g，收率78．8％)，熔點(diǎn)91．7℃(Rf=0．15，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2973．9(CH)、1633．8(C=N)、1593．5(苯環(huán))、1247．1(Ar-O)和1119．7(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．732(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．654(1H，s，氮羰基H)、7．270(2H，d，J=8．9Hz，苯2H)、6．812(2H，d，J=8．9Hz，苯H)、6．669(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、3．755(3H，s，CH3O)、1．529(9H，s，(CH3)3C)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=159．492、150．279、147．002、132．112、124．481、121．119、119．034、116．345、70．050、55．443和28．132。
實(shí)施例2α-〔2-(2-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由2-甲氧基苯硫酚和N-叔丁基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率7．8％，淺黃色固體，熔點(diǎn)124．8℃(Rf=0．19，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2976．0(CH)、1632．0(C=N)、1579．1(苯環(huán))、1241．8(Ar-O)和1121．3(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．810(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．713(1H，s，氮羰基H)、7．190-7．126(1H，m，J=8．9Hz，苯H)、6．855(1H，d，J=3．3Hz，呋喃H)、6．835-6．811(3H，m，苯3H)、3．880(3H，s，CH3O)、1．555(9H，s，(CH3)3C)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=155．909、151．012、144．022、128．361、127．735、124．137、121．837、121．180、116．406、70．203、56．001和28．148。
實(shí)施例3α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)己基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-甲氧基苯硫酚和N-環(huán)己基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率63．6％，白色晶體，熔點(diǎn)115．5℃(Rf=0．18，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2935(CH)、1633(C=N)、1590(苯環(huán))、1247(Ar-O)和1137(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．73(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．53(1H，s，氮羰基H)、7．29(2H，d，J=8．8Hz，苯H)、6．83(2H，d，J=8．8Hz，苯2H)、6．67(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、3．84-3．72(1H，m，N-CH3)，3．78(3H，s，MeO)、2．08-2．04(2H，m，環(huán)己基2H)、1．93-1．78(4H，m，環(huán)己基4H)、1．72-1．67(1H，m，環(huán)己基H)、1．43-1．19(3H，m，環(huán)己基3H)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=159．35、149．52、146．80、132．02、124．25、122．77、118．67、116．31、114．77、74．12、55．26、31．06、24．87。
實(shí)施例4α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-三氟甲氧基苯硫酚和N-叔丁基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率46．3％，淡黃色晶體，熔點(diǎn)118．0℃(Rf=0．39，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2980(CH)、1633(C=N)、1570(苯環(huán))、1287(Ar-O)和1159(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．82(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．72(1H，s，氮羰基H)、7．22(2H，d，J=8．9Hz，苯2H)、7．14(2H，d&q，Jd=8．9Hz，Jq=1．0Hz，苯2H)、6．87(1H，d，J=3．3Hz，呋喃H)、1．57(9H，s，叔丁基)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=151．15、148．02、143．75、133．86、129．45、121．78、121．58、120．81、120．33(q，J=257．6Hz)、116．07、70．29、28．02。
實(shí)施例5α-〔2-(3，5-二甲基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由3，5-二甲基苯硫酚和N-叔丁基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率52．1％，淡黃色晶體，熔點(diǎn)80．3℃(Rf=0．37，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2968(CH)、1598(C=N)、1575(苯環(huán))和1159(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．81(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．72(1H，s，氮羰基H)、6．83(1H，s，苯環(huán)3H)、6．87(1H，d，呋喃H和苯H重疊)、2．25(6H，s，2Me)、1．56(9H，s，叔丁基)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=150．61、145．13、138．89、128．72、125．91、121．06、120．87、116．16、70．03、27．99、21．14。
實(shí)施例6α-〔2-(4-乙酰胺基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-乙酰胺基苯硫酚和N-叔丁基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率18．2％，淡黃色晶體，熔點(diǎn)140．3℃(Rf=0．37，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2979(CH)、1673(C=N)、1639(C=N)、1592(苯環(huán))和1159(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270 MHz)δ=8．19(1H，寬s，NH)、7．76(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．71(1H，s，氮羰基H)、7．46(2H，d，J=8．7Hz，苯2H)、7．20(2H，d，J=8．7Hz，苯2H)、6．75(1H，s，呋喃H)、2．14(3H，s，CH3)、1．56(9H，s，叔丁基)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=168．72、150．29、145．13、138．89、128．72、125．91、121．06、120．87、116．16、70．03、27．99、21．14。
實(shí)施例7α-〔2-(4-乙基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-乙基苯硫酚和N-叔丁基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率63．7％，白色晶體，熔點(diǎn)123．5℃(Rf=0．32，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2965(CH)、1634(C=N)、1571(苯環(huán))、1204(C-N)和1119(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．79(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．70(1H，s，氮羰基H)、7．18(2H，d，J=8．4Hz，苯2H)、7．11(2H，d，J=8．4Hz，苯2H)、6．78(1H，s，呋喃H)、2．60(2H，q，CH2)、1．57(9H，s，叔丁基)、1．20(3H，t，CH3)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=150．47、145．51、143．32、131．23、128．89、128．72、120．93、120．26、116．11、69．96、28．29、27．96、15．37。
實(shí)施例8α-〔2-(4-甲硫基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-甲硫基苯硫酚和N-叔丁基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率26．1％，淺黃色晶體，熔點(diǎn)120．4℃(Rf=0．27，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2979(CH)、1630(C=N)、1579(苯環(huán))、1210(C-N)和1119(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．79(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．70(1H，s，氮羰基H)、7．16(4H，s，苯4H)、6．79(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、2．44(3H，s，MeS)、1．56(9H，s，叔丁基)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=150．61、145．00、137．79、130．82、129．35、127．13、120．87、120．42、116．08、70．04、27．96、15．72。
實(shí)施例9α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-異丙基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-甲氧基苯硫酚和N-異丙基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率62．0％，淺黃色晶體，熔點(diǎn)93．3℃(Rf=0．17，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2979(CH)、1636(C=N)、1577(苯環(huán))、1247(Ar-O)和1143(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．74(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．55(1H，s，氮羰基H)、7．29(2H，d，J=8．9Hz，苯2H)、6．83(2H，d，J=8．9Hz，苯2H)、6．68(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、4．14(1H，septet，J=6．6Hz，N-CH)、3．77(3H，s，MeO)、1．46(6H，d，J=6．6Hz，2Me)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=159．35、149．40、146．88、132．06、124．19、122．56、118．68、116．37、114．78、66．47、55．27、20．76。
實(shí)施例10α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)己基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-三氟甲氧基苯硫酚和N-環(huán)己基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率61．8％，白色晶體，熔點(diǎn)145．8℃(Rf=0．35，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2935(CH)、1636(C=N)、1576(苯環(huán))、1289(Ar-O)、1215(C-F)和1162(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．80(1H，d，J=3．3Hz，呋喃H)、7．59(1H，s，氮羰基H)、7．22(2H，d，J=8．7Hz，苯2H)、7．12(2H，d&q，Jd=8．7Hz＆Jq=0．7Hz，苯H)、6．86(1H，d，J=3．3Hz，呋喃H)、3．1(1H，tt，J=6．6Hz＆3．9Hz，N-CH)、2．09-2．06(2H，m，環(huán)己基H)、1．43-1．14(3H，m，環(huán)己基3H)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=150．51、147．95、143．62、133．78、129．42、122．65、121．71、121．42、120．27、116．18、74．38、31．08、28．45。
實(shí)施例11α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-正丁基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-甲氧基苯硫酚和N-正丁基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率44．7％，淺黃色晶體，熔點(diǎn)44．6℃(Rf=0．17，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2959(CH)、1637(C=N)、1591(苯環(huán))、1247(Ar-O)和1143(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270MHz)δ=7．74(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、7．49(1H，s，氮羰基H)、7．30(2H，d，J=8．9Hz，苯2H)、6．84(2H，d，J=8．9Hz，苯2H)、6．67(1H，d，J=3．5Hz，呋喃H)、3．87(2H，t，J=7．1Hz，N-CH)、3．80(3H，s，MeO)、1．98-1．87(2H，m，CH2)、1．45-1．31(2H，m，CH2)、0．95(3H，t，J=7．3Hz，CH3)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=159．44、149．16、147．21、132．26、124．76、124．04、118．50、116．52、66．49、55．30、29．56、19．62和13．50。
實(shí)施例12α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-正丙基硝酮的合成按照實(shí)施例1敘述的步驟，由4-甲氧基苯硫酚和N-正丙基羥胺得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物收率76．6％，淡黃色晶體，熔點(diǎn)63．0℃(Rf=0．17，硅膠板，流動相己烷／EtOAc，2∶1，v∶v)。
光譜數(shù)據(jù)如下IR(KBr，cm-1)2966(CH)、1630(C=N)、1591(苯環(huán))、1245(Ar-O)和1144(N-O)。
1HNMR(CDCl3，270 MHz)δ=7．74(1H，d，J=3．3Hz，呋喃H)、7．49(1H，s，氮羰基H)、7．31(2H，d，J=8．9Hz，苯2H)、6．84(2H，d，J=8．9Hz，苯2H)、6．67(1H，d，J=3．3Hz，呋喃H)、3．83(2H，t，J=7．2Hz，N-CH)、3．78(3H，s，MeO)、1．98(2H，sextet，CH2)、0．97(3H，t，J=7．2Hz，CH3)。
13CNMR(CDCl3，270MHz)δ=159．44、149．16、147．21、132．26、124．76、124．04、118．50、116．52、66．49、55．30、29．56、19．62和13．50。
采用相應(yīng)的起始原料和上述操作步驟或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的操作，得到下列化合物
實(shí)施例19電子自旋共振研究采用以下步驟，應(yīng)用ESR自旋捕捉技術(shù)，可見本發(fā)明的硫醚呋喃硝酮化合物捕捉自由基的能力。實(shí)驗(yàn)的其它詳細(xì)內(nèi)容參見，例如K．R．Maples等．，“自由基代謝物的體內(nèi)研究”，合成和生物學(xué)中的自由基(FreeRadicals in Synthesis and Biology(F．Minisci編)第423-436頁(Kluwer Academic出版社，波士頓，1989)；和J．A．Degray等．，“生物學(xué)自旋捕捉”，電子自旋共振(Electron Spin Resonance)，14246-300(1994)。在本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用了過氧化叔丁醇／亞鐵(ferrous iron)自由基產(chǎn)生系統(tǒng)。該自由基產(chǎn)生系統(tǒng)產(chǎn)生叔丁基烷氧自由基、叔丁基過氧自由基和甲基自由基。如果本發(fā)明的硫醚呋喃硝酮能夠?qū)⑷我獾倪@些基團(tuán)捕捉轉(zhuǎn)變成穩(wěn)定的基團(tuán)加合物，這樣的基團(tuán)加成物應(yīng)該能夠被ESR光譜檢測到。
把5μl的100mM硫酸亞鐵加入到490μl 100mM的硫醚呋喃硝酮的水溶液中。加入5μl 100mM叔丁基過氧化氫來引發(fā)該反應(yīng)。試劑的最終濃度為1mM亞鐵、1mM叔丁基過氧化氫和98mM的硝酮化合物的水溶液。一旦混合后，迅速將該溶液轉(zhuǎn)移到石英平底池中，然后把該石英池轉(zhuǎn)移到Bruker ESP 300 ESR光譜儀的腔室中，在5分鐘混合期間內(nèi)掃描，ESR光譜儀設(shè)置3480G中心場，200G場寬，480秒掃描時(shí)間，9．76GHz頻率，10dB強(qiáng)度，1．6×105接受增益(receive gain)，0．200G調(diào)節(jié)幅度。0．320秒時(shí)間常數(shù)和270°位相。由得到的ESR光譜顯示硫醚呋喃硝酮能夠有效地捕捉自由基；這樣的化合物可以作為ESR應(yīng)用中的分析試劑。
實(shí)施例20Aβ-折疊片形成的抑制淀粉樣β-肽(Aβ)的沉積和早老性癡呆的形成有關(guān)。參見例如G．G．Glenner等，(1984)生物化學(xué)生物物理學(xué)研究通訊(Biochem．Biophys．Res．Commun．)120885-890；和R．E．Tanzi(1989)醫(yī)學(xué)年刊(Ann．Med．，)2191-94。因此，如果化合物能夠有效地干擾Aβ(1-40)或Aβ(1-42)折疊片的形成，則其能夠用于阻止和／或逆轉(zhuǎn)這樣的淀粉樣蛋白沉積。已知，硫黃素T(ThT)迅速同β-折疊片、特別是合成Aβ(1-42)的聚合纖維結(jié)合。這種結(jié)合使最大激發(fā)波長在440nm處，最大發(fā)射波長在490nm處。在本實(shí)驗(yàn)中，某些上式I的硫醚呋喃硝酮抑制ThT關(guān)聯(lián)合成Aβ(1-42)的能力可以通過測定熒光變化來證明。
進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的CytoFluor II熒光板讀數(shù)計(jì)具有下列參數(shù)濾光器激發(fā)440nm／20發(fā)射490nm／20增益75周期-周期時(shí)間30分鐘運(yùn)行時(shí)間720分鐘(24周期)或者取決于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)培養(yǎng)皿96孔在各個孔中等份樣加入在PBS(pH6．0)中制備的95μl ThT(3μM)、2μL在PBS(pH6．0)制備的含0．05％甲基纖維素的所測試化合物(10μM)和3μL用dH2O制備的Aβ(1-42)(3μg)。當(dāng)加入Aβ(1-42)后開始熒光測定，并持續(xù)12小時(shí)。在含有和不含有所測試化合物時(shí)聚合體之間的相對熒光單位差別計(jì)算出β-折疊片形成的百分比抑制。同對照組相比，如果Aβ(1-42)β-折疊片的形成被抑制至少30％時(shí)，這樣的抑制在本測試中被認(rèn)為是顯著的。這些體內(nèi)測試結(jié)果描述如下。
實(shí)施例21保護(hù)免受Aβ(25-35)-誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞損失已知早老性癡呆患者發(fā)生神經(jīng)元細(xì)胞的進(jìn)行性損失。參見例如P．J．Whitehause等．，(1982)科學(xué)(Science)，2151237-1239。在本實(shí)驗(yàn)中，證明某些上面式I的硫醚呋喃硝酮類化合物保護(hù)免受Aβ(25-35)誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損失的能力。取出18天孕期胚胎的Sprague Dawley大鼠海馬，然后磨碎分離制備初級神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)物。將細(xì)胞(3×105)置于35mm聚D-賴氨酸包被的培養(yǎng)皿中(培養(yǎng)皿含有補(bǔ)充10％胎牛血清的Eagle’s最少必要成分)。經(jīng)3-5小時(shí)后，撤掉原始培養(yǎng)基，用1mL新鮮培養(yǎng)基替換。將培養(yǎng)物維持在37℃的含5％CO2／95％空氣增濕的培養(yǎng)箱中。觀察到神經(jīng)元單層細(xì)胞的膠細(xì)胞生長。
把30μMAβ(25-35)的dH2O(在-20℃下儲存)和100μM在1％甲基纖維素中的測試化合物加入到這些細(xì)胞(7DIV)中。同時(shí)不應(yīng)用測試化合物進(jìn)行對照實(shí)驗(yàn)。經(jīng)96小時(shí)處理(3區(qū)域／孔，n=6孔)后，通過計(jì)算活神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)目測定形態(tài)學(xué)活神經(jīng)細(xì)胞的百分比。同對照組相比，Aβ(25-35)誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損失至少抑制30％時(shí)被認(rèn)為在本測試中是顯著的。這些體外測試的結(jié)果描述如下。
實(shí)施例22減少由β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的白介素-1β釋放增加同單獨(dú)用LPS相比，上面式I的某些硫醚呋喃硝酮能夠減少由β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的白介素-1β釋放增加，在本實(shí)驗(yàn)中，就是證明這些化合物的這種能力。在T型瓶(T-flask)中，將THP-1細(xì)胞(美國典型培養(yǎng)物收集中心的人單核細(xì)胞系)在含有10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基(FBS，未經(jīng)熱消毒)中培養(yǎng)。通過離心(800rpm，5min)使細(xì)胞下沉將培養(yǎng)基每兩天更換一次，然后加入同樣的新鮮培養(yǎng)基。或者，通過補(bǔ)充新培養(yǎng)基來維持培養(yǎng)。該培養(yǎng)物維持的細(xì)胞濃度范圍是1×105和1×106細(xì)胞／mL。由于血漿可能含有未知因子，這些因子可能影響巨噬細(xì)胞／單核細(xì)胞IL-1的產(chǎn)生，將FBS降低到5％共24小時(shí)。在每個實(shí)驗(yàn)開始的兩天以前，將該FBS進(jìn)一步降低到2％。離心收集細(xì)胞，重懸于含2％FBS的培養(yǎng)基中，計(jì)算出細(xì)胞數(shù)目，然后將細(xì)胞置于24孔培養(yǎng)皿中(3×105細(xì)胞／0．6mL／孔)。然后單獨(dú)用LPS(0．5μg／ml)或者用LPS結(jié)合Aβ肽(5μM)處理。當(dāng)測定測試化合物對IL-1β釋放有效應(yīng)時(shí)，加入100μM測試化合物以及LPS和Aβ(25-35)，在進(jìn)行ELISA前將該混合物培養(yǎng)48小時(shí)。
在淀粉樣肽和測試化合物存在或不存在的情況下，應(yīng)用市售ELISA試劑盒(R&D System)對由LPS刺激的THP-1細(xì)胞分泌到培養(yǎng)基中的IL-1β進(jìn)行測定。簡單地，用鼠抗人IL-1β單克隆抗體包被的微滴培養(yǎng)皿由制造商提供。將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品移液到孔中，用固定抗體結(jié)合任意的IL-1β。洗掉未結(jié)合的蛋白，辣根過氧化酶相連的對IL-1β有特異性的多克隆抗體加入到孔中，這樣在開始時(shí)擠進(jìn)IL-1β結(jié)合物中。經(jīng)洗滌除去所有未結(jié)合的抗體-酶試劑后，將底物溶液(1∶1過氧化氫四甲基聯(lián)苯胺，v／v)加入到孔中，顏色的形成同起始步驟中IL-1β結(jié)合物的量成正比。用2N的硫酸終止顏色形成，在450nm處測定標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的光密度。基于標(biāo)準(zhǔn)曲線測定樣品中IL-1β的含量。在一式四份的孔中進(jìn)行測定。同對照組相比，如果樣品能夠?qū)Ζ?淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的白介素-1β的釋放增加的抑制至少在30％以上，則認(rèn)為在這些測試中是顯著的。這些體外測試結(jié)果描述如下。
實(shí)施例23對IL-1β誘導(dǎo)細(xì)胞毒性的降低本實(shí)驗(yàn)顯示，某些式I的硫醚呋喃硝酮能夠降低細(xì)胞因子誘導(dǎo)的大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞損傷。將Sprague-Dawley大鼠胚胎自母鼠體內(nèi)迅速摘出，置于冷的無鈣-鎂離子的Hank’s平衡鹽溶液(HBSS)中作進(jìn)一步解剖。含有神經(jīng)元和膠質(zhì)的皮層細(xì)胞培養(yǎng)物是通過把胎大鼠皮層細(xì)胞接種到皮層膠質(zhì)的融合層上而制得的?；旌系哪z質(zhì)培養(yǎng)物自出生后一日大鼠的皮層制得。為制備這種培養(yǎng)物，于無菌狀態(tài)下分離皮層并小心地去除血管和膜，在冷的無鈣-鎂離子的HBSS緩沖液中分散。分散的細(xì)胞置于24孔板(每板約1．5半球)上，在37℃和5％CO2下的含有DMEM／F12、10％熱滅活FBS和100單位／mL青霉素／100μg／mL鏈霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2．5周。
為建立神經(jīng)元的組分，分離大鼠妊娠16日胚胎的大腦皮層，在含有0．1％胰蛋白酶的HBSS中37℃溫育30分鐘。然后將組織混懸于含有DMEM／F12、10％熱滅活FBS和100單位／mL青霉素／100μg／mL鏈霉素的培養(yǎng)基鋪板培養(yǎng)基中。研磨后，將細(xì)胞以5．0×105／mL的密度接種在膠質(zhì)培養(yǎng)物上。培養(yǎng)物于37℃下的含5％CO2濕潤空氣中溫育。通過加入10μM阿糖胞苷3天抑制處于體外5天(5 DIV)的非神經(jīng)元細(xì)胞，在不含F(xiàn)BS的相同培養(yǎng)液中對8 DIV神經(jīng)元和25 DIV膠質(zhì)培養(yǎng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
在每一孔中加入1mL含有200單位／mL重組小鼠IL-1β(Genzyme)的培養(yǎng)液。每孔中立即加入1％甲基纖維素中的待測化合物(10μL、終濃度100μM)。對照孔中含有IL-1β和1％甲基纖維素。在37℃含有5％CO2的濕潤大氣中溫育培養(yǎng)物48小時(shí)。在所有實(shí)驗(yàn)中，通過用相差顯微鏡檢查培養(yǎng)物和通過測量釋放到細(xì)胞培養(yǎng)液中的胞溶膠乳酸脫氫酶(LDH)定量，評估神經(jīng)元損傷。與對照相比，在這些實(shí)驗(yàn)中，LDH釋放減少至少30％被認(rèn)為是顯著的。這些體外測試的結(jié)果描述如下。
體外測試結(jié)果上述實(shí)施例1-17中制備的化合物，至少進(jìn)行一種上面描述的體外測試，實(shí)施例18化合物未進(jìn)行測試。實(shí)施例1-17化合物各自抑制Aβ(1-42)β-折疊片形成和／或β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的白介素-1β釋放增加和／或IL-1β誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性至少30％(與對照品相比)。實(shí)施例7化合物未進(jìn)行β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的白介素-1β釋放增加或IL-1β誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)。實(shí)施例7化合物有望能夠抑制β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的白介素-1β釋放增加和／或IL-1β誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性至少30％(與對照品相比)。
從上面的描述中，可以對本發(fā)明的組合物和方法進(jìn)行各種修改和變化，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。此處包括所有在權(quán)利要求范圍內(nèi)的這些修改和變化。
權(quán)利要求
1．式I的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體和外消旋體及其可藥用鹽 其中R1選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和環(huán)烯基；各R2分別選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、烷氧基、取代烷氧基、環(huán)烷基和鹵素；R3選自氫、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基和環(huán)烷基烷基；R4選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和環(huán)烯基；n是0～2的整數(shù)。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中n是0。
3．權(quán)利要求2的化合物，其中R3是氫。
4．權(quán)利要求3的化合物，其中R1是取代苯基，如下式所示 其中各R5分別選自烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基、烷氧基、取代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、環(huán)烷氧基、?；Ⅴ；被?、氨基羰基、烷氧基羰基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、磺基、烷硫基和NR6R7，其中R6和R7分別選自氫、烷基、取代烷基或芳基；或者兩個相鄰的R5共同形成亞烷基或亞烷二氧基基團(tuán)；m是1～5的整數(shù)。
5．權(quán)利要求4的化合物，其中R5選自烷基、烷氧基、取代烷氧基、?；被⑼榱蚧?。
6．權(quán)利要求5的化合物，其中R5是甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙酰胺基或甲硫基，m是1或2。
7．權(quán)利要求3的化合物，其中R1選自2-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基、3，5-二甲基苯基、4-乙酰胺基苯基和4-甲硫基苯基。
8．權(quán)利要求4的化合物，其中R4選自烷基、取代烷基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基和環(huán)烷基烷基。
9．權(quán)利要求8的化合物，R4是烷基或環(huán)烷基。
10．權(quán)利要求9的化合物，R4選自正丙基、異丙基、叔丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和2，4，4-三甲基戊-2-基。
11．式II的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體和外消旋體及其可藥用鹽 其中R8選自烷基、烷氧基、酰基氨基、三氟甲氧基和烷硫基；R9選自烷基和環(huán)烷基；p是1～3的整數(shù)、
12．權(quán)利要求11的化合物，其中R8為甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙酰胺基或甲硫基，p為1或2。
13．權(quán)利要求12的化合物，其中R9是正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基或2，4，4-三甲基戊-2-基。
14．選自下列的化合物α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(2-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)己基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(3，5-二甲基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-乙酰胺基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-乙基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-甲硫基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-叔丁基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-異丙基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)己基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-正丁基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-正丙基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-異丙基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-正丙基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-2，4，4-三甲基戊-2-基硝酮α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-2，4，4-三甲基戊-2-基硝酮α-〔2-(4-甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)戊基硝酮，和α-〔2-(4-三氟甲氧基苯硫基)-5-呋喃基〕-N-環(huán)戊基硝酮。
15．含有可藥用載體和有效藥物量的式I化合物、其光學(xué)異構(gòu)體和外消旋體及其可藥用鹽的藥用組合物 其中R1選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和環(huán)烯基；各R2分別選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、烷氧基、取代烷氧基、環(huán)烷基和鹵素；R3選自氫、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基和環(huán)烷基烷基；R4選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和環(huán)烯基；n是0～2的整數(shù)。
16．權(quán)利要求15的藥物組合物，其中n是0。
17．權(quán)利要求16的藥物組合物，其中R3是氫。
18．權(quán)利要求17的藥物組合物，其中R1是取代苯基，如下式所示 其中各R5分別選自烷基、取代烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基、烷氧基、取代烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、環(huán)烷氧基、?；?、?；被被驶?、烷氧基羰基、羧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、磺基、烷硫基和NR6R7，其中R6和R7分別選自氫、烷基、取代烷基或芳基；或者兩個相鄰的R5共同形成亞烷基或亞烷二氧基基團(tuán)；m是1～5的整數(shù)。
19．權(quán)利要求18的藥物組合物，其中R5選自烷基、烷氧基、取代烷氧基、?；被?、烷硫基。
20．權(quán)利要求19的藥物組合物，其中R5是甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙酰胺基或甲硫基，m是1或2。
21．權(quán)利要求17的藥物組合物，其中R1選自2-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基、3，5-二甲基苯基、4-乙酰胺基苯基和4-甲硫基苯基。
22．權(quán)利要求18的藥物組合物，其中R4選自烷基、取代烷基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基和環(huán)烷基烷基。
23．權(quán)利要求22的藥物組合物，R4是烷基或環(huán)烷基。
24．權(quán)利要求23的藥物組合物，R4選自正丙基、異丙基、叔丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和2，4，4-三甲基戊-2-基。
25．權(quán)利要求15的藥物組合物，載體是口服載體。
26．權(quán)利要求15的藥物組合物，載體是注射用載體。
27．治療神經(jīng)變性病人或預(yù)防有發(fā)展成神經(jīng)變性疾病危險(xiǎn)性的病人神經(jīng)變性疾病發(fā)生的方法，包括對所述病人給藥有效量的藥用組合物，所述藥用組合物包括可藥用載體和對神經(jīng)變性疾病治療或預(yù)防有效量的權(quán)利要求1化合物。
28．權(quán)利要求27的方法，神經(jīng)變性疾病為早老性癡呆、帕金森氏病或HIV癡呆。
29．治療自身免疫疾病患者或預(yù)防具有發(fā)展成自身免疫疾病危險(xiǎn)性患者自身免疫疾病發(fā)生的方法，包括對所述病人給藥有效量的藥用組合物，所述組合物含有可藥用載體和自身免疫疾病治療或預(yù)防有效量的權(quán)利要求1化合物。
30．權(quán)利要求29的方法，自身免疫疾病為全身性狼瘡或多發(fā)性硬化。
31．治療患者炎癥疾病或預(yù)防具有發(fā)展成炎癥疾病危險(xiǎn)的患者炎癥疾病發(fā)生的方法，包括把藥用組合物給藥至所述患者，所述藥用組合物含有可藥用載體和治療或預(yù)防炎癥疾病有效量的權(quán)利要求1化合物。
32．權(quán)利要求31的方法，炎癥疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒性休克、紅斑結(jié)節(jié)狀麻風(fēng)病、敗血癥、成人呼吸窘迫綜合癥、炎癥性腸疾病和眼色素層炎。
33．制備式II化合物的方法， 式II中，各R8分別選自烷基、烷氧基、酰基氨基、三氟甲氧基和烷硫基；R9選自烷基和環(huán)烷基；p是1～3的整數(shù)；所述方法包括以下步驟(a)用2-溴-5-呋喃甲醛在堿存在下處理下式苯硫酚衍生物，得到下式的硫醚羰基化合物， (b)用下式的羥基胺化合物處理硫醚羰基化合物，得到式II的化合物，其中R8、R9和p定義同上。HO-NH-R9
34．式I的化合物、其光學(xué)異構(gòu)體和外消旋體及其可藥用鹽作為藥物的應(yīng)用 其中R1選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和環(huán)烯基；各R2分別選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、烷氧基、取代烷氧基、環(huán)烷基和鹵素；R3選自氫、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基和環(huán)烷基烷基；R4選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、芳烷基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和環(huán)烯基；n是0～2的整數(shù)。
35．權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病藥物中的應(yīng)用。
36．權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療或預(yù)防自身免疫疾病藥物中的應(yīng)用。
37．權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療或預(yù)防炎癥疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
公開了新的硫醚呋喃硝酮化合物和含有該類化合物的藥物組合物。所公開的組合物可以用作預(yù)防和/或治療哺乳動物的神經(jīng)變性疾病、自身免疫疾病和炎癥性疾病的治療劑和用作監(jiān)測自由基的分析試劑。
文檔編號A61P31/04GK1291980SQ99803302
公開日2001年4月18日 申請日期1999年1月14日 優(yōu)先權(quán)日1998年1月16日
發(fā)明者J·A·凱萊赫, K·R·梅普斯, Y－K·張 申請人:桑道藥品有限公司