專利名稱：鼠單抗介導(dǎo)的藥用放射性核素i-131的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥品制造領(lǐng)域，尤其涉及一種用生物技術(shù)生產(chǎn)的一種抗肝癌藥物。
目前，原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌是我國及太平洋沿岸地區(qū)發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，由于該病病變迅速，若不經(jīng)治療，大部分患者都會在確診后3—4個月內(nèi)死亡，故被稱之為癌中之王。盡管幾十年來，人們對腫瘤的認(rèn)識已有不少重要的突破，可是采用手術(shù)、放射治療、化學(xué)藥物等為核心的現(xiàn)代治療手段，至今只能挽救少數(shù)惡性腫瘤患者的生命，腫瘤的治療學(xué)進(jìn)展得如此艱難，其原因是多方面的，不少腫瘤由于其部位過于險惡或者由于其已擴(kuò)散到致命的部位，在發(fā)現(xiàn)時已失去了任何手術(shù)的可能；放射性治療對某些局限性的腫瘤病灶非常有效，但并非對所有的惡性腫瘤均敏感，此外，一旦轉(zhuǎn)移，放射性治療也失去了作用，另外，采用化學(xué)性藥物和放射性治療在殺死惡性腫瘤細(xì)胞的同時，也不可避免地殺傷了正常細(xì)胞，對人體產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。本世紀(jì)初德國人Paul Ehrllch提出了“魔彈(magic bullet)”，即所謂腫瘤的“生物導(dǎo)彈”或“導(dǎo)向治療”來治療腫瘤，但都由于沒有理想的設(shè)想的生物載體，長時間以來，導(dǎo)向藥物的研究一直進(jìn)展得十分緩慢。七十年代George kohler和Caesar Milslcin創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)，單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展，激勵了人們的再去探索導(dǎo)向治療的可行性，重新去探索所消腫瘤“生物導(dǎo)彈”或?qū)蛑委煹姆椒ā?br> 本發(fā)明的目的在于提供一種以小鼠原單克隆抗體介導(dǎo)的放射性核素。
本發(fā)明的技術(shù)方案是選用特定的小鼠原單克隆抗體，標(biāo)記上放射性核素I-131。只能同特定抗原決定族結(jié)合的其分子結(jié)構(gòu)，特別是可變區(qū)結(jié)構(gòu)完全同一的抗體即單克隆抗體(Monoclonal antibody)，是一種具有分子量低、選擇性高、親和力強(qiáng)、廓部清塊，可大量反復(fù)使用的理想載體，根據(jù)其編碼基因的種族的特征，據(jù)其功能，據(jù)其制備方法，單克隆抗體又可分為許多種，如小鼠原單克隆克體、大鼠原單克隆抗體、大小鼠原雜交單克體抗體，人原單克隆抗體，單一和多功能單克隆抗體，人化單克隆抗體和基因工程單克隆抗體等，本發(fā)明技術(shù)所選用的單克隆抗體為針對肝癌細(xì)胞表面的蛋白的小鼠原單克隆抗體(Mouse Monoclonalantibody)，它是以人肝癌細(xì)胞為免疫原，免疫小鼠后通過雜交瘤技術(shù)篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞所分泌的單克隆抗體，其可變區(qū)可以同肝癌細(xì)胞表面抗原為有關(guān)決定簇結(jié)合。
本發(fā)明中采用的放射性核素為I-131，由于其半衰期為8.04天，可以從反應(yīng)堆中制備，其主要帶電粒子為β-，此外還帶有γ射線，采用(Idogen)或氯胺T法以及其它方法，可將放射性核素I-131標(biāo)記于小鼠原單克隆抗體，使之成為小鼠原的單克隆抗體介導(dǎo)的抗人原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的放射性核素I-131藥物。同時將標(biāo)記有I—131的針對肝癌細(xì)胞表面蛋白的單克隆抗體經(jīng)血管輸入，其中以經(jīng)動脈輸入更為理想。動脈注射不但通道相對簡單，可以排除一些復(fù)雜的因素對藥效的干擾，而匯聚在肝血管竇中的藥物較為集中，通過放射性核素I-131的長時間的微照射，使病灶中的細(xì)胞逐漸死亡，它可使巨塊肝癌的體積因癌細(xì)胞大量死亡而縮小，從而為原本無法手術(shù)的病人提供了再次手術(shù)的機(jī)會，而且它還可以追蹤和消滅手術(shù)時肉眼無法發(fā)現(xiàn)的彌散分布的微病灶，從而延長患者的生命，延緩腫瘤的復(fù)發(fā)。
本發(fā)明具有使用效果好的優(yōu)點。申請人采用標(biāo)記有I-131的針對肝癌細(xì)胞表面蛋白的單克隆抗體對42例患有晚期肝癌的志愿者采用動脈給藥的途徑進(jìn)行了藥效及毒性觀察。其結(jié)果如下所選擇的病例均為經(jīng)上海某二市級醫(yī)院判明已失去手術(shù)切除指證的或臨床判明連剖腹探查指證也沒有的晚期肝癌患者。其中，經(jīng)肝動脈導(dǎo)管合并結(jié)扎給藥者30例，經(jīng)股動脈導(dǎo)管給藥者12例，所有病例在用單克隆抗體治療期間均未同時采用其它療法。
臨床的觀察腫塊大小以CT的計算值觀察腫塊大小的變化，結(jié)果表明經(jīng)本發(fā)明產(chǎn)品動脈給藥治療后，73.8％患者的腫瘤得以縮小，42.86％患者的腫瘤縮小50％以上；其中經(jīng)肝動脈給藥組的腫瘤縮小率為70％，體積縮小最顯著者可達(dá)79.28％。經(jīng)股動脈給藥組的腫瘤縮小率為83.33％，體積縮小最顯著可達(dá)78％以上。
二步切除率在第一次手術(shù)中腫瘤未能切除，由于導(dǎo)向放射治療，體積得以縮小，終于再次切除者(即所謂二步切除)為16例，占有剖腹指診的受試患者總數(shù)的53.33％(即所謂二步切除率)，二步切除后的瘤塊經(jīng)病檢發(fā)現(xiàn)絕大部分組織均呈壞死狀態(tài)。
化驗結(jié)果經(jīng)本發(fā)明產(chǎn)品治療后血清甲胎蛋白降低者為16例，占甲胎蛋白陽性患者的57.14％，其中.甲胎蛋白降低95％以上者為8例，占甲胎蛋白陽性患者的28.57％，6例甲胎蛋完全恢復(fù)正常。
γ-GT測定值降低者為18例，占受試患者總數(shù)的56.25％。
生存期迄今為止，生存最長者為36月，平均生存期已達(dá)15月以上。半年生存率為76.31％，一年生存率為44.21％；據(jù)文獻(xiàn)[8]此類患者的平均生存期及一年生存率分別只有3個月和15.1％。其中.經(jīng)二步切除的患者，半年生存率至少是93.75％，一年生存率至少是75％。
其中一例術(shù)后肝臟右后下葉廣泛復(fù)發(fā)合并雙肺轉(zhuǎn)移的患者，經(jīng)單克隆抗體治療后帶瘤生存了19個月，在相當(dāng)長的一段時間內(nèi)，肺部轉(zhuǎn)移灶增長極為緩慢。另一例腫瘤直徑為20厘米的巨塊型肝癌，經(jīng)單克隆抗體治療后腫塊的體積縮小到原來的十分之一、二步手術(shù)成功切除后已健康生存三年，迄今無復(fù)發(fā)跡象。
抗抗體血清出現(xiàn)抗小鼠抗體者為17例，占36例受檢者的47.2％。
抗抗體(HAMA)的形成組別 例數(shù) HAMA陽性第一次注射 第二次注射A 100/10 0B 5 4/5 1/1C 9 1/9 3/6D 8 1/8 0/3Total 326/32 4/10A組化療或放療B組靜脈注射本發(fā)明產(chǎn)品；C組經(jīng)肝動脈注射本發(fā)明產(chǎn)品；D組經(jīng)股動脈注射本發(fā)明產(chǎn)品。從所獲得的初步臨床資料看來，單克隆抗體介導(dǎo)的人體肝癌放射性導(dǎo)向治療不但可行，而且會成為晚期肝癌患者最有希望的緩解手段之一。
藥代動力學(xué)方面的初步研究表明，本發(fā)明進(jìn)入體同內(nèi)后，早期為血池分布，以心、肝、脾分布最多，然后漸向癌組織積聚，隨時間的延長，血池內(nèi)漸被廓清，游離碘主要從尿中排出，血池中本發(fā)明產(chǎn)品主要存在在血漿中，占97.3％，且呈蛋白結(jié)合狀態(tài)，RBC占0.8％，WBC占1.9％。血漿清除時間，T1/2(血清清除曲線100％下降到50％所需的時間)為14.44小時，T1/2(血清清除曲線由50％下降到25％所需的時間)為68.24小時。如以注入時血清碘與抗體的結(jié)合率為100％，則24小時為97％，48小時為94％，96小時為68％，8天時仍保持50％以上的結(jié)合率。
人體放射免疫顯象方面的研究表明經(jīng)股動脈注入本發(fā)明產(chǎn)品后，顯象率為77.7％，48小時時起在癌區(qū)積聚，96小時時最為清晰，T/NT為4.38。全身顯象未見骨髓濃聚。
血清出現(xiàn)抗小鼠抗體(HAMA)者為17例，占36例受檢查者的47.2％。初次注射后的抗小鼠抗體緩升緩降，7-14天出現(xiàn)，14-21天達(dá)峰值第二次注射后的HAMA，驟升驟降，3天出現(xiàn)并迅速達(dá)峰值，第7天即可降到注射前水平。經(jīng)脈注射者所產(chǎn)生的HAMA明顯低于經(jīng)靜脈注射者。
對42例使用者的觀察表明如按我們設(shè)計的劑量及注射計劃，除一過性發(fā)熱，寒戰(zhàn)，白細(xì)胞及血小板一過性下降外，目前還未發(fā)現(xiàn)有其它嚴(yán)重的副作用及任何臟器功能損傷可見。
晚期肝癌的一年生存率資料方法 一年生存率(6％)本發(fā)明產(chǎn)品＋二步切除 75.00結(jié)扎＋導(dǎo)管給藥 51.80本發(fā)明產(chǎn)品(總平均) 44.21冷凍 38.7激光 33.30導(dǎo)管給藥 22.30外照射 14.70
中草藥5.80中草藥＋化療 3.80化療 2.10放棄治療 1.20某市級醫(yī)院27年統(tǒng)計，總平均26.00其中不能手術(shù)組15.10晚期肝癌的二步切除率資料方法二步切除率TAE 5-6％肝動脈結(jié)扎＋插管 10.9％碘油 25.0％鐵蛋白導(dǎo)向治療43.3％本發(fā)明產(chǎn)品53.3％綜上所述，可以看出本發(fā)明產(chǎn)品的使用，可以為原本無法手術(shù)治療的病人提供再次手術(shù)的機(jī)會，從而延長患者的生命，對手術(shù)時間時肉眼無法發(fā)現(xiàn)的彌散分布的微病灶起到殺傷治療的作用。
權(quán)利要求
1.一種抗肝癌小鼠原單克隆抗體介導(dǎo)的藥用放射性核素，包括抗人原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的小鼠原單克隆抗體，該單克隆抗體是以人的肝癌細(xì)胞為免疫原，免疫小鼠后，通過雜交瘤技術(shù)篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞所分泌的單克隆抗體，其可變區(qū)可以同肝癌細(xì)胞表面抗原的有關(guān)決定簇結(jié)合，放射性核素系從核反應(yīng)堆制備，其特征在于上述單克隆抗體上標(biāo)記放射性核素I-131。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥品制造業(yè)，尤其是一種抗人原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌的藥品，其主要是技術(shù)采用小鼠原單克隆抗體為導(dǎo)向，利用放射性核素I-131的γ-射線輻射性能，采用Iodogen法或氯胺T法將I-131標(biāo)記到小鼠原單克隆抗體上。本發(fā)明由于采鼠用了小鼠原克隆抗體為載體，使本發(fā)明產(chǎn)品進(jìn)入人體后能準(zhǔn)確地到達(dá)靶器官，同時標(biāo)記于該載體上的放射性核素I-131能集于肝癌病灶，通過這些放射性核素γ-射線的照射起到殺死病灶細(xì)胞的作用。本發(fā)明具有選擇性殺死癌細(xì)胞，但副作用又很小的優(yōu)點。
文檔編號A61K51/10GK1134843SQ9511162
公開日1996年11月6日 申請日期1995年5月4日 優(yōu)先權(quán)日1995年5月4日
發(fā)明者謝弘, 姚鑫, 湯釗猷, 曾昭沖, 吳孟超, 施樂華, 王根鳳, 王放 申請人:中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所