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一種水生生物源交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料的制作方法

文檔序號(hào):11204730閱讀:1006來源:國知局
一種水生生物源交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料的制造方法與工藝

本發(fā)明屬于醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種水生生物源交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料。



背景技術(shù):

膠原蛋白是一種來源廣泛、低免疫原性、生物相容性好的天然可降解生物大分子,其具有優(yōu)良的止血性能,對(duì)凝血功能障礙的患者也具有良好的止血作用,且能夠促進(jìn)肉芽組織的再生和修復(fù),能促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。多年來的臨床實(shí)踐表明,傳統(tǒng)的物理、化學(xué)、機(jī)械的止血方法均存在著一定的局限性和不良反應(yīng),而諸如膠原蛋白類的天然高分子物質(zhì)醫(yī)用敷料是一種有效的外科止血方式。膠原蛋白可以適用于各種實(shí)質(zhì)性臟器、體表和骨組織、血管組織以及結(jié)締組織的止血。美國ims公司對(duì)傷口敷料類產(chǎn)品進(jìn)行市場調(diào)查,可吸收止血?jiǎng)┱紦?jù)了整個(gè)敷料類市場份額的75%,而膠原蛋白基生物醫(yī)用敷料是可吸收止血?jiǎng)┑暮艽蠼M成部分。從1983年膠原止血海綿問世以來,將膠原蛋白作為一種可降解的止血、愈創(chuàng)材料基質(zhì)的研究已成為國內(nèi)外的熱點(diǎn)。

目前,用于生物醫(yī)用材料的膠原蛋白主要來源于陸生動(dòng)物,例如豬皮、牛跟腱和鼠尾,而由于口蹄疫、瘋牛病等疾病的傳播和宗教信仰的限制,從水生生物中尋找醫(yī)用膠原蛋白作為替代來源則變得越來越重要。目前國內(nèi)廣泛應(yīng)用的止血、愈創(chuàng)醫(yī)用敷料質(zhì)量參差不齊,都有各自的不足之處,國外的醫(yī)用敷料因其高昂的價(jià)格限制了其廣泛應(yīng)用。至今仍然沒有一種理想的水生生物源膠原蛋白基止血、愈創(chuàng)醫(yī)用敷料能夠同時(shí)解決膠原蛋白的應(yīng)用瓶頸。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

本發(fā)明的目的在于提供一種水生生物源交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料,從而解決天然膠原蛋白敷料機(jī)械強(qiáng)度差、抗降解能力弱、傷口易受微生物感染的問題。

本發(fā)明首先提供一種改性膠原蛋白海綿,其制備方法如下:

1)高純度高活性醫(yī)用膠原蛋白的制備:

將魚皮用刀片刮去魚鱗、殘肉和脂肪,冷水洗凈,用切片機(jī)切成0.5–1cm2的小塊。魚皮經(jīng)超高壓處理以提高膠原蛋白的提取率,壓力為100–300mpa,處理時(shí)間為5–20min。將魚皮浸泡于0.5%–10%的tritonx-100的磷酸緩沖液中,置于振蕩器上震蕩12–48h,60–200rpm,4℃,在蒸餾水中震蕩漂洗,再將魚皮浸泡于1%–5%的sds磷酸緩沖液中,置于振蕩器上震蕩12–48h,60–200rpm,4℃,在蒸餾水中震蕩漂洗,重復(fù)上述步驟3次以脫除組織中的細(xì)胞;加入0.1mnaoh溶液浸泡除去非膠原成分及色素,蒸餾水反復(fù)洗至中性;加入110%正丁醇溶液攪拌去除脂肪,蒸餾水反復(fù)洗滌。使用組織搗碎機(jī)充分?jǐn)囁楹螅尤牒?.5%(w/w)胃蛋白酶的0.5m醋酸中進(jìn)行提取48h,離心(9,000–15,000rpm,30min,4℃),所得上清液為膠原蛋白粗提液,再經(jīng)研細(xì)的nacl鹽析,至溶液中nacl最終濃度為0.9m,靜置一夜,9,000rpm離心30min,收集沉淀溶于0.5m醋酸中,經(jīng)二次鹽析后的膠原蛋白復(fù)溶于0.5m醋酸中,溶液對(duì)0.02m的磷酸氫二鈉溶液透析至ph≥8進(jìn)行滅酶,再對(duì)蒸餾水透析除鹽,直至透析外液用硝酸銀溶液檢測無氯離子即為透析終點(diǎn);透析后的膠原蛋白溶液用0.22或0.45μm的板式膜進(jìn)行除菌,最后用活性炭進(jìn)行脫色,離心后去除活性炭獲得高純度高活性的醫(yī)用膠原蛋白,低溫真空冷凍干燥;

2)內(nèi)層多孔膠原蛋白海綿的制備:

將步驟1)制備的高純度高活性醫(yī)用膠原蛋白溶于0.1m–0.5m的醋酸溶液中,配制成質(zhì)量百分比濃度為0.5%–1%的膠原蛋白溶液,采用真空脫泡和低溫低速離心(3,000–5,000rpm,5–10min,4℃)并用的脫泡方式脫泡,再將處理的溶液零下40℃預(yù)冷凍24h–36h,零下38℃冷凍干燥24h–48h制成厚度為3mm的內(nèi)層多孔膠原蛋白海綿;

3)內(nèi)層膠原蛋白海綿交聯(lián)改性:

將步驟2)所制備的內(nèi)層多孔膠原蛋白海綿進(jìn)行改性處理,得到改性的內(nèi)層膠原蛋白海綿;

所述的改性方法,其一種方法是將內(nèi)層多孔膠原蛋白海綿置于真空干燥箱中,在常溫下抽真空,然后升溫至110℃–130℃,加熱脫水1–3d完成改性;

其再一種的改性方法,是將膠原蛋白海綿放入等離子體處理儀的反應(yīng)腔內(nèi),抽真空,待壓強(qiáng)至50–200pa時(shí),在功率為80–120w下,放電處理5–10min完成改性;

再一種改性方法,將膠原蛋白海綿浸泡于化學(xué)交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián),交聯(lián)結(jié)束后除去殘余交聯(lián)劑后,低溫真空冷凍干燥完成改性;

所述的化學(xué)交聯(lián)劑,為戊二醛、碳二亞胺鹽酸鹽/羥基琥珀酰亞胺、京尼平交聯(lián)、茶多酚、去甲二氫愈創(chuàng)木二酸或疊氮二苯基磷。

本發(fā)明所提供的改性膠原蛋白海綿用于制備醫(yī)用敷料;

本發(fā)明再一個(gè)方法提供一種水生生物源交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料,其制備方法如下:

1)外層殼聚糖膜的制備:

將脫乙酰度不小于80%的殼聚糖配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%–20%的醋酸溶液,真空脫泡后,于50℃真空干燥制成厚度為2mm的膜;

2)內(nèi)、外層點(diǎn)膠復(fù)合:

在步驟1)制備的外層殼聚糖膜的一側(cè)涂布聚丙烯酸酯類生物膠,使改性膠原蛋白海綿和外層殼聚糖膜進(jìn)行復(fù)合制成內(nèi)外復(fù)合層;

3)復(fù)合多層敷料的制備:

在內(nèi)外復(fù)合層上貼附上基布層,滅菌后制成復(fù)合多層敷料。

所述的基布層為醫(yī)用無紡布,將無紡布的一側(cè)涂布醫(yī)用壓敏熱熔膠,使復(fù)合敷料的內(nèi)外層與基布層復(fù)合。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果如下:

1.本發(fā)明制備的復(fù)合多層醫(yī)用敷料的主要原料膠原蛋白來源廣泛,由陸生動(dòng)物變?yōu)樗?,提高了魚類下腳料的綜合利用率,實(shí)現(xiàn)了水產(chǎn)品資源的高值化利用。

2.本發(fā)明中膠原蛋白的提取純化工藝成熟,可以制備出高純度高活性的具有完整三螺旋結(jié)構(gòu)的i型醫(yī)用膠原蛋白。

3.本發(fā)明中制備的內(nèi)層膠原蛋白海綿色澤潔白,具有孔隙均勻的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu),有利于組織滲出液的吸收并提高止血性能。

4.本發(fā)明中使用物理和化學(xué)交聯(lián)的方法對(duì)膠原蛋白海綿進(jìn)行改性,使其機(jī)械性能和抗酶降解能力顯著提高。

5.本發(fā)明將膠原蛋白與殼聚糖復(fù)合,實(shí)現(xiàn)了復(fù)合材料的優(yōu)勢互補(bǔ)作用。

6.本發(fā)明制備的復(fù)合多層醫(yī)用敷料兼具了內(nèi)層膠原蛋白多孔海綿的止血、促進(jìn)傷口愈合、吸收組織滲出液、促進(jìn)細(xì)胞生長的功效和外層殼聚糖膜的抵御細(xì)菌侵入、保持傷口的濕潤環(huán)境等功效以及無紡布基布層的固定和支撐作用,是一種新型的高性能的醫(yī)用敷料,相比于傳統(tǒng)醫(yī)用敷料,其具有優(yōu)良的止血效果,有利于促進(jìn)傷口愈合,解決了單一膠原蛋白敷料機(jī)械強(qiáng)度差、抗降解能力弱、傷口易受微生物感染、易引起炎癥反應(yīng)等一系列問題。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1制備的醫(yī)用膠原蛋白的sds-page圖譜。泳道1:蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品;泳道2:加β-巰基乙醇;泳道3:不加β-巰基乙醇;泳道4:sykes還原法;

圖2為實(shí)施例1制備的醫(yī)用膠原蛋白的傅里葉紅外光譜圖;

圖3為實(shí)施例1制備的醫(yī)用膠原蛋白的圓二色譜圖;

圖4為內(nèi)層膠原蛋白海綿的表觀圖(a)和掃描電鏡圖:表面(b)、橫截面(c)、縱截面(d)。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述,以下實(shí)施例只是描述性的,不是限定性的,不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

水生生物源交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料的制備方法,步驟如下:

(1)高純度高活性醫(yī)用膠原蛋白的制備:羅非魚皮用刀片刮去魚鱗、殘肉和脂肪,冷水洗凈,用切片機(jī)切成0.5–1cm2的小塊。魚皮經(jīng)超高壓處理以提高膠原蛋白的提取率,壓力為200mpa,處理時(shí)間為5min。將魚皮浸泡于2%的tritonx-100的磷酸緩沖液中,置于振蕩器上震蕩48h,100rpm,4℃,在蒸餾水中震蕩漂洗,再將魚皮浸泡于1%的sds磷酸緩沖液中,置于振蕩器上震蕩48h,100rpm,4℃,在蒸餾水中震蕩漂洗,重復(fù)上述步驟3次以脫除組織中的細(xì)胞。加入0.1mnaoh溶液(1:20,w/v)浸泡24h除去非膠原成分及色素,蒸餾水反復(fù)洗至中性。加入10倍體積10%正丁醇溶液攪拌48h,以去除脂肪,蒸餾水反復(fù)洗滌。使用組織搗碎機(jī)充分?jǐn)囁楹螅尤牒?.5%(w/w)胃蛋白酶的0.5m醋酸(1:50,w/v)提取48h,離心(10,000rpm,30min,4℃),所得上清液為膠原蛋白粗提液,再經(jīng)研細(xì)的nacl鹽析,至溶液中nacl最終濃度為0.9m,靜置一夜,9,000rpm離心30min,收集沉淀溶于0.5m醋酸中,經(jīng)二次鹽析后的膠原蛋白復(fù)溶于0.5m醋酸中,溶液對(duì)0.02m的磷酸氫二鈉溶液透析至ph≥8進(jìn)行滅酶,再對(duì)蒸餾水透析除鹽,直至透析外液用硝酸銀溶液檢測無氯離子即為透析終點(diǎn)。透析后的膠原蛋白溶液用0.22μm的板式膜進(jìn)行除菌,最后經(jīng)1%(w/v)的藥用活性炭脫色和除熱源,離心后去除活性炭獲得高純度高活性的醫(yī)用膠原蛋白,低溫真空冷凍干燥。

(2)內(nèi)層多孔膠原蛋白海綿的制備:將上述高純度高活性醫(yī)用膠原蛋白溶于0.5m的醋酸溶液中,按質(zhì)量百分比,配制成濃度為1%的膠原蛋白溶液,磁力攪拌器攪拌至完全溶解,采用真空脫泡和低溫低速離心(5,000rpm,5min,4℃)并用的脫泡方式脫泡,倒入六孔板模具中,厚度為3mm,低溫預(yù)冷凍24h,冷凍干燥48h。

(3)內(nèi)層膠原蛋白海綿交聯(lián)改性:將膠原蛋白海綿浸入磷酸鹽緩沖液(0.054mna2hpo4,0.013mnah2po4,ph7.4),加入gta使其濃度為1%,于室溫下交聯(lián)3d,用蒸餾水沖洗,后用新配制的1.2mg/mlnabh4磷酸鹽緩沖液(ph7.4)清洗60min,再用0.2m甘氨酸溶液處理24h,以處理未反應(yīng)的醛基,最后用4mnacl溶液沖洗60min,蒸餾水反復(fù)清洗。低溫預(yù)冷凍24h,冷凍干燥48h。

所述的改性方法,其一種方法是將內(nèi)層多孔膠原蛋白海綿置于真空干燥箱中,在常溫下抽真空,然后升溫至110℃–130℃,加熱脫水1–3d完成改性;

其再一種的改性方法,是將膠原蛋白海綿放入等離子體處理儀的反應(yīng)腔內(nèi),抽真空,待壓強(qiáng)至50–200pa時(shí),在功率為80–120w下,放電處理5–10min完成改性;

再一種改性方法,將膠原蛋白海綿浸泡于化學(xué)交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián),交聯(lián)結(jié)束后除去殘余交聯(lián)劑后,低溫真空冷凍干燥完成改性;

具體如下:

1、戊二醛(gta)交聯(lián):將膠原蛋白海綿浸入磷酸鹽緩沖液(0.054mna2hpo4,0.013mnah2po4,ph7.4),加入gta使其濃度為0.25%–2%,于室溫下交聯(lián)1–3d,用蒸餾水沖洗,后用新配制的1.2mg/mlnabh4磷酸鹽緩沖液(ph7.4)清洗60min,再用0.2m甘氨酸溶液處理24h,以處理未反應(yīng)的醛基,最后用4mnacl溶液沖洗60min,蒸餾水反復(fù)清洗。

2、碳二亞胺鹽酸鹽/羥基琥珀酰亞胺(edc/nhs)交聯(lián):將膠原蛋白海綿浸泡于ph為5.5的含50mm2-n-嗎啉已烷磺酸(mes)的40%乙醇中60min,再將其浸泡在含50mmmes、20–100mmedc、8–40mmnhs(nedc:nnhs=2.5:1)的40%乙醇(ph5.5)中,室溫下交聯(lián)2–24h,用0.1mna2hpo4清洗,再分別用1m、2m、4mnacl溶液清洗,最后用蒸餾水反復(fù)清洗。

3、京尼平交聯(lián):將膠原蛋白海綿浸入磷酸鹽緩沖液(0.054mna2hpo4,0.013mnah2po4,ph7.4)或30%乙醇(ph5.5)中,加入京尼平使其濃度為0.25%–2%,于室溫下交聯(lián)1–3d,用蒸餾水反復(fù)清洗。

4、茶多酚(tp)交聯(lián):將膠原蛋白海綿浸入含0.25%–2%的tp水溶液中,于室溫下交聯(lián)1–3d,用蒸餾水反復(fù)清洗。

5、去甲二氫愈創(chuàng)木二酸(ndga)交聯(lián):將膠原蛋白海綿浸入0.1m磷酸鹽緩沖液(ph7.0)30min,將ndga加入到1ml0.1mnaoh及9ml磷酸鹽緩沖液中配制成濃度為1–5mg/ml的ndga溶液,再將膠原蛋白海綿浸泡于上述ndga溶液中,交聯(lián)1–3d,用蒸餾水沖洗,后用70%乙醇浸泡,再用磷酸鹽緩沖液浸泡,最后用蒸餾水反復(fù)清洗。

6、疊氮二苯基磷(dppa)交聯(lián):將膠原蛋白海綿浸入含0.25%–2%dppa的二甲基甲酰胺(dmf)溶液中,交聯(lián)1–3d,用硼酸鹽緩沖液(0.04m硼砂、0.04m硼酸,ph8.9)清洗過夜,再用70%乙醇清洗,最后用蒸餾水反復(fù)清洗。

(4)外層殼聚糖膜的制備:將殼聚糖配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的醋酸溶液,真空脫泡,倒入六孔板模具中,厚度為2mm,于50℃真空干燥箱中烘干成膜。

(5)內(nèi)、外層點(diǎn)膠復(fù)合:在上述外層殼聚糖膜的一側(cè)涂布聚丙烯酸酯類生物膠,使內(nèi)層膠原蛋白海綿和外層殼聚糖膜進(jìn)行復(fù)合。

(6)復(fù)合多層敷料的制備:復(fù)合敷料的基布層為醫(yī)用無紡布,將無紡布的一側(cè)涂布醫(yī)用壓敏熱熔膠,使復(fù)合敷料的內(nèi)外層與基布層復(fù)合。

(7)包裝、滅菌:交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料包裝后經(jīng)co-60滅菌。

實(shí)施例2

水生生物源交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料的制備方法,步驟如下:

(1)高純度高活性醫(yī)用膠原蛋白的制備:鱈魚皮用刀片刮去魚鱗、殘肉和脂肪,冷水洗凈,用切片機(jī)切成0.5–1cm2的小塊。魚皮經(jīng)超高壓處理以提高膠原蛋白的提取率,壓力為150mpa,處理時(shí)間為10min。將魚皮浸泡于1%的tritonx-100的磷酸緩沖液中,置于振蕩器上震蕩48h,120rpm,4℃,在蒸餾水中震蕩漂洗,再將魚皮浸泡于1%的sds磷酸緩沖液中,置于振蕩器上震蕩48h,120rpm,4℃,在蒸餾水中震蕩漂洗,重復(fù)上述步驟3次以脫除組織中的細(xì)胞。加入0.1mnaoh溶液(1:20,w/v)浸泡24h除去非膠原成分及色素,蒸餾水反復(fù)洗至中性。加入10倍體積10%正丁醇溶液攪拌48h,以去除脂肪,蒸餾水反復(fù)洗滌。使用組織搗碎機(jī)充分?jǐn)囁楹?,加入?.5%(w/w)胃蛋白酶的0.5m醋酸(1:60,w/v)提取48h,離心(12,000rpm,30min,4℃),所得上清液為膠原蛋白粗提液,再經(jīng)研細(xì)的nacl鹽析,至溶液中nacl最終濃度為0.9m,靜置一夜,9,000rpm離心30min,收集沉淀溶于0.5m醋酸中,經(jīng)二次鹽析后的膠原蛋白復(fù)溶于0.5m醋酸中,溶液對(duì)0.02m的磷酸氫二鈉溶液透析至ph≥8進(jìn)行滅酶,再對(duì)蒸餾水透析除鹽,直至透析外液用硝酸銀溶液檢測無氯離子即為透析終點(diǎn)。透析后的膠原蛋白溶液用0.45μm的板式膜進(jìn)行除菌,最后經(jīng)2%(w/v)的藥用活性炭脫色和除熱源,離心后去除活性炭獲得高純度高活性的醫(yī)用膠原蛋白,低溫真空冷凍干燥。

(2)內(nèi)層多孔膠原蛋白海綿的制備:將上述高純度高活性醫(yī)用膠原蛋白溶于0.5m的醋酸溶液中,按質(zhì)量百分比,配制成濃度為0.8%的膠原蛋白溶液,磁力攪拌器攪拌至完全溶解,采用真空脫泡和低溫低速離心(5,000rpm,8min,4℃)并用的脫泡方式脫泡,倒入六孔板模具中,厚度為3mm,低溫預(yù)冷凍24h,冷凍干燥36h。

(3)內(nèi)層膠原蛋白海綿交聯(lián)改性:將膠原蛋白海綿浸泡于ph為5.5的含50mm2-n-嗎啉已烷磺酸(mes)的40%乙醇中60min,再將其浸泡在含50mmmes、100mmedc、40mmnhs的40%乙醇(ph5.5)中,室溫下交聯(lián)4h,用0.1mna2hpo4清洗,再分別用1m、2m、4mnacl溶液清洗,最后用蒸餾水反復(fù)清洗。低溫預(yù)冷凍24h,冷凍干燥36h。

(4)外層殼聚糖膜的制備:將殼聚糖配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的醋酸溶液,真空脫泡,倒入六孔板模具中,厚度為2mm,于50℃真空干燥箱中烘干成膜。

(5)內(nèi)、外層點(diǎn)膠復(fù)合:在上述外層殼聚糖膜的一側(cè)涂布聚丙烯酸酯類生物膠,使內(nèi)層膠原蛋白海綿和外層殼聚糖膜進(jìn)行復(fù)合。

(6)復(fù)合多層敷料的制備:復(fù)合敷料的基布層為醫(yī)用無紡布,將無紡布的一側(cè)涂布醫(yī)用壓敏熱熔膠,使復(fù)合敷料的內(nèi)外層與基布層復(fù)合。

(7)包裝、滅菌:交聯(lián)膠原蛋白復(fù)合多層醫(yī)用敷料包裝后經(jīng)co-60滅菌。

本發(fā)明通過控制膠原蛋白的提取純化工藝,得到了高純度高活性的醫(yī)用膠原蛋白。sds-page圖譜(圖1)顯示實(shí)施例中制備的膠原蛋白的α鏈組成為(α1)2α2,傅里葉紅外光譜圖(圖2)顯示其具有膠原蛋白的各伸縮振動(dòng)峰,圓二色譜圖(圖3)表明其在221nm處有一正吸收峰,在196nm處有一負(fù)吸收峰,可判定提取的膠原蛋白為具有完整三螺旋結(jié)構(gòu)的i型膠原蛋白。

內(nèi)層膠原蛋白海綿色澤潔白,具有孔隙均勻的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu),孔隙率≥98%,有利于組織滲出液的吸收(圖4)。

同時(shí),本發(fā)明對(duì)未改性和改性的膠原蛋白海綿的特性進(jìn)行了分析。

試驗(yàn)和測試部分:

抗張強(qiáng)度的測定:參照gb/t1040.3-2006,將膠原蛋白海綿裁成適合的大小,兩端固定在質(zhì)構(gòu)儀上,設(shè)置參數(shù)如下:速度為60mm/min;標(biāo)距為10mm;力量為300n??箯垙?qiáng)度ts=f/s×1000,其中f為樣品斷裂時(shí)承受的最大張力(n);s為樣品的橫截面積(mm2)。

液體吸收性的測定:參照yy/t0471.1-2004,將已知質(zhì)量(wd)的膠原蛋白海綿樣品浸潤在預(yù)熱至37℃的試驗(yàn)液中,并在37℃水浴中孵育5h,用鈍頭鑷子夾持樣品一端,懸垂30s后稱重(ww),液體吸收量=(ww-wd)/wd。其中,試驗(yàn)液為由氯化鈉和氯化鈣的溶液組成,該溶液含142mmna+和2.5mmca2+。根據(jù)en13726-1,該溶液的離子含量相當(dāng)于人體血清或創(chuàng)面滲出液。

酶降解性的測定:將膠原蛋白海綿裁成適當(dāng)大小,精確稱重,浸潤在1ml含50mmcacl2的tris-hcl溶液(0.1m,ph7.4)中,在37℃水浴1h,然后添加200u細(xì)菌膠原酶,溶解于1ml的0.1mtris-hcl溶液中,37℃孵育24h。通過添加0.2ml的0.25medta溶液并在冰中迅速冷卻來結(jié)束酶的消化。隨后,混合物在5000rpm、4℃下離心15min,上清液用于測定羥脯氨酸含量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

對(duì)膠原蛋白海綿進(jìn)行改性處理,機(jī)械強(qiáng)度、液體吸收性和抗酶降解能力均顯著提高,具體數(shù)據(jù)如表1所示。

表1改性對(duì)膠原蛋白海綿機(jī)械性能、液體吸收性和抗酶降解能力的影響

采用本發(fā)明制備的醫(yī)用級(jí)魚皮膠原蛋白,可充分有效的去除魚皮的非膠原成分,獲得高活性高純度的膠原蛋白,提高了魚類下腳料的綜合利用率,實(shí)現(xiàn)了水產(chǎn)品資源的高值化利用,并且溶血率為1%–3%,具有良好的生物相容性。

同時(shí),制備的復(fù)合多層醫(yī)用敷料兼具了內(nèi)層膠原蛋白多孔海綿的止血、促進(jìn)傷口愈合、吸收組織滲出液、促進(jìn)細(xì)胞生長的功效和外層殼聚糖膜的抵御細(xì)菌侵入、保持傷口的濕潤環(huán)境等功效以及無紡布基布層的固定和支撐作用,是一種新型的高性能的醫(yī)用敷料,解決了單一膠原蛋白敷料機(jī)械強(qiáng)度差、抗降解能力弱、傷口易受微生物感染、易引起炎癥反應(yīng)等一系列問題。

上述實(shí)施例僅是為了更清楚地說明而作的舉例,并非是對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說,在不脫離本發(fā)明原理的情況下還可以在上述基礎(chǔ)上做出變化或替換,仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之內(nèi)。

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