本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種腫瘤壞死因子舌下給藥制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：腫瘤壞死因子α(TumorNecrosisFactorα簡(jiǎn)稱TNFα)是由激活的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種多功能細(xì)胞因子。人的有活性的TNFα由3個(gè)分子量為17KDa的非糖蛋白單體構(gòu)成單體呈片層折疊結(jié)構(gòu)，它們之間通過(guò)一個(gè)Cys69-Cys101間的二硫鍵非共價(jià)組成體。不同種屬哺乳動(dòng)物來(lái)源的TNFα在一級(jí)結(jié)構(gòu)上具有極高的同源性，在生物學(xué)活性上也無(wú)明顯的種屬特異性。純化的TNFα等電點(diǎn)在5.3左右；pH6-8時(shí)穩(wěn)定；對(duì)酸敏感：對(duì)蛋白水解酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶等)敏感；50％的飽和硫酸銨可使其沉淀。在反復(fù)凍融和無(wú)保護(hù)劑時(shí)，室溫下失活。TNFα基因?yàn)閱慰截惢颉Ｈ说幕虼笮?.67kb，定位于人第6號(hào)染色體。基因組由4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子組成；編碼一個(gè)由233個(gè)氨基酸組成的前體蛋白、其前76個(gè)氨基酸為信號(hào)肽、使TNFα前體能跨膜存在于細(xì)胞膜上，通過(guò)降解后，分出含157個(gè)氨基酸的成熟蛋白、糖基化。人TNFα基因第1外顯子編碼81％的信號(hào)肽，第4外顯子編碼89％成熟型TNFα氨基酸序列。用TNFα對(duì)腫瘤作臨床的免疫治療是幾十年來(lái)發(fā)展較快的新型抗瘤療法、對(duì)臨床手術(shù)、放療、化療等常規(guī)手段是有效補(bǔ)充。這在美國(guó)、日本和德國(guó)都取得了較好的進(jìn)展。美國(guó)的Genentech公司在臨床試驗(yàn)中用TNFα治療乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌等方面居于領(lǐng)先地位；Cetus公司把TNFα和IL-2聯(lián)用開(kāi)創(chuàng)了復(fù)合生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑法。日本的重組產(chǎn)品已進(jìn)入臨床試驗(yàn)，對(duì)胸、腹水晚期轉(zhuǎn)移癌、大腸癌、膽囊癌等取得了好的進(jìn)展。德國(guó)BASF公司年產(chǎn)可達(dá)500g，德國(guó)用TNFα在胃腸道腫瘤、肝癌、卵巢腫瘤、乳腺癌等方面取得了成功，尤其在控制癌性胸腹水方面的療效居世界前列。我國(guó)衛(wèi)生部1998年初已批準(zhǔn)上海、西安的5家單位開(kāi)始臨床試驗(yàn)。臨床上給藥途徑早年多為靜脈、肌肉和皮下注射，近年來(lái)為了減輕TNFα的毒性，常采用局部注射或局部灌注方法，治療中、晚期腫瘤。給藥量從10μg/m2到400μg/m2。較多的治療方案是2周為1療程，每個(gè)療程中連續(xù)5天給藥，每天給50μg/m2。給藥量主要取決于藥效，通常80萬(wàn)單位/m2有效。雖然1975年已分離、純化了TNFα，并闡明了結(jié)構(gòu)，1985年已經(jīng)用大腸桿菌基因工程達(dá)到了TNFα的重組產(chǎn)品；但是至今TNFα還停留在臨床階段，世界各國(guó)的醫(yī)藥行政部門(mén)都未批準(zhǔn)TNFα作為商品藥在市場(chǎng)上出售。這主要由于從最初的臨川試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，TNFα有嚴(yán)重的全身毒性作用，對(duì)人的毒性作用要比小鼠高20倍。這種毒性作用主要表現(xiàn)在：發(fā)熱(35-100％)，寒顫(70-100％)，惡心頭痛(20-70％)。乏力(20-77％)、食欲下降(24-46％)；還發(fā)生腹瀉、血小板降低、白細(xì)胞減少、GTP上升、體液潴留、肌痛，甚至內(nèi)毒素性休克。這就大大限制了TNFα的臨床應(yīng)用劑量，嚴(yán)重影響其治療腫瘤的效果。至今能選擇性地、又直接殺傷腫瘤的藥物很少，癌癥的死亡率仍高于其他各種疾病。TNFα被發(fā)現(xiàn)后大家對(duì)其抱有極大的希望。但全身毒性的嚴(yán)重性，限制了它的應(yīng)用。十幾年來(lái)各國(guó)學(xué)者正在千方百計(jì)降低TNFα的毒性，主要從兩方面取得了一些進(jìn)展：第一方面是改變給藥途徑，1990年前后，美國(guó)曾經(jīng)試驗(yàn)用基因治療，即把TNFα直接注入腫瘤組織。第二方面是用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)TNFα的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，改造的目的是降低毒性和提高抗腫瘤。十幾年來(lái)已突變成功了數(shù)十種TNFα，其中有些毒性有明顯得下降，而抗腫瘤活性有顯著提高。雖然如此，各國(guó)仍然還在作臨床試驗(yàn)。針對(duì)目前存在的上述問(wèn)題，CN00109459.9公開(kāi)了一種人腫瘤壞死因子α口服劑，含有表達(dá)人腫瘤壞死因子α(hTNFα)的念珠藻，降低了毒性，并可直接作用于消化道。本申請(qǐng)人研發(fā)的注射用改構(gòu)重組人腫瘤壞死因子(商品名：天恩福)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)批準(zhǔn)的國(guó)家生物制品I類新藥，是在腫瘤壞死因子原液中加入人血白蛋白和甘露醇經(jīng)凍干得到的白色疏松粉末，主要用于治療惡性淋巴瘤、肺癌、惡性黑色素瘤、惡性胸腹水，具有廣闊的應(yīng)用前景。然而，在長(zhǎng)期的使用中發(fā)現(xiàn)其毒副反應(yīng)大，穩(wěn)定性不好。有鑒于此特提出本發(fā)明。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種腫瘤壞死因子舌下給藥制劑及其制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種腫瘤壞死因子舌下給藥制劑，其中，所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑包括如下組分：優(yōu)選，所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑包括如下組分：更優(yōu)選，所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑包括如下組分：進(jìn)一步的，所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑為凍干粉末。本發(fā)明的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑用藥方便，臨用前加入生理鹽水復(fù)溶，滴入舌下即可，病人帶藥回家就能用(原靜脈給藥，必須去醫(yī)院靜脈滴注)，毒副作用小，采用滴入舌下給藥，避免了靜脈給藥的毒副反應(yīng)大等缺點(diǎn)。本發(fā)明還提供所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑的制備方法，其中，所述的制備方法為：先將甘露醇、軟磷脂、明膠和甘氨酸配成溶液，混勻，再加入人血白蛋白，混勻，然后再加入腫瘤壞死因子原液，混合均勻，凍干，即得所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑。進(jìn)一步的，加入腫瘤壞死因子原液時(shí)，控制溫度在2～8℃。進(jìn)一步的，在凍干前，將溶液的pH值調(diào)節(jié)至中性。進(jìn)一步的，pH值調(diào)節(jié)用磷酸緩沖液。本發(fā)明中，所述的腫瘤壞死因子原液可參照現(xiàn)有技術(shù)的方法制備得到，如CN03129262.3所公開(kāi)的一種重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子的生產(chǎn)方法，也可采用如下方法得到：腫瘤壞死因子工程菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵，離心得到菌體，勻漿破菌，硫酸銨沉淀，得到目的蛋白，再經(jīng)過(guò)初步精制純化，得到的蛋白質(zhì)液體即為腫瘤壞死因子原液。所述的凍干分為預(yù)凍、一次干燥和二次干燥三個(gè)階段：預(yù)凍：制品進(jìn)箱前，隔板先降溫至0～10℃，然后將制品放入冷凍干燥箱中，用10～60min將隔板溫度降至-45±2℃，制品溫度達(dá)-40℃±2℃，繼續(xù)保溫2～4h；一次干燥：將隔板溫度升溫至5℃±2℃，保溫待制品冰晶完全消失后，繼續(xù)保溫10～14h；對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，真空度達(dá)350±5mbar；二次干燥：將隔板溫度升溫至30℃±2℃，制品溫度達(dá)25℃±2℃，保溫6～10h。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：(1)與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明增加軟磷脂、明膠和甘氨酸后，產(chǎn)品穩(wěn)定性增加，并添加了有助于吸收的甘氨酸，有利藥物快速進(jìn)入血液，發(fā)揮作用；(2)較現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑不僅療效增加，而且無(wú)不良反應(yīng)發(fā)生；(3)本發(fā)明方法工藝簡(jiǎn)單，適于工業(yè)化大生產(chǎn)。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1處方：制備方法：腫瘤壞死因子工程菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵，離心得到菌體，勻漿破菌，硫酸銨沉淀，離心得到目的蛋白，再經(jīng)過(guò)初步、精制純化，得到的高純度蛋白質(zhì)液體即為腫瘤壞死因子原液。先將甘露醇、軟磷脂、明膠和甘氨酸配成溶液，混勻，再加入人血白蛋白，混勻，然后在溫度2℃下加入腫瘤壞死因子原液，混合均勻，用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值至中性，凍干，即得所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑。所述的凍干分為預(yù)凍、一次干燥和二次干燥三個(gè)階段：預(yù)凍：制品進(jìn)箱前，隔板先降溫至0℃，然后將制品放入冷凍干燥箱中，用10min將隔板溫度降至-45±2℃，制品溫度達(dá)-40℃±2℃，繼續(xù)保溫2h；一次干燥：將隔板溫度升溫至5℃±2℃，保溫待制品冰晶完全消失后，繼續(xù)保溫10h；對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，真空度達(dá)350±5mbar；二次干燥：將隔板溫度升溫至30℃±2℃，制品溫度達(dá)25℃±2℃，保溫6h。實(shí)施例2處方：制備方法：腫瘤壞死因子工程菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵，離心得到菌體，勻漿破菌，硫酸銨沉淀，離心得到目的蛋白，再經(jīng)過(guò)初步、精制純化，得到的高純度蛋白質(zhì)液體即為腫瘤壞死因子原液。先將甘露醇、軟磷脂、明膠和甘氨酸配成溶液，混勻，再加入人血白蛋白，混勻，然后在溫度8℃下加入腫瘤壞死因子原液，混合均勻，用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值至中性，凍干，即得所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑。所述的凍干分為預(yù)凍、一次干燥和二次干燥三個(gè)階段：預(yù)凍：制品進(jìn)箱前，隔板先降溫至10℃，然后將制品放入冷凍干燥箱中，用60min將隔板溫度降至-45±2℃，制品溫度達(dá)-40℃±2℃，繼續(xù)保溫4h；一次干燥：將隔板溫度升溫至5℃±2℃，保溫待制品冰晶完全消失后，繼續(xù)保溫14h；對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，真空度達(dá)350±5mbar；二次干燥：將隔板溫度升溫至30℃±2℃，制品溫度達(dá)25℃±2℃，保溫10h。實(shí)施例3處方：制備方法：腫瘤壞死因子工程菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵，離心得到菌體，勻漿破菌，硫酸銨沉淀，離心得到目的蛋白，再經(jīng)過(guò)初步、精制純化，得到的高純度蛋白質(zhì)液體即為腫瘤壞死因子原液。先將甘露醇、軟磷脂、明膠和甘氨酸配成溶液，混勻，再加入人血白蛋白，混勻，然后在溫度4℃下加入腫瘤壞死因子原液，混合均勻，用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值至中性，凍干，即得所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑。所述的凍干分為預(yù)凍、一次干燥和二次干燥三個(gè)階段：預(yù)凍：制品進(jìn)箱前，隔板先降溫至5℃，然后將制品放入冷凍干燥箱中，用30min將隔板溫度降至-45±2℃，制品溫度達(dá)-40℃±2℃，繼續(xù)保溫3h；一次干燥：將隔板溫度升溫至5℃±2℃，保溫待制品冰晶完全消失后，繼續(xù)保溫12h；對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，真空度達(dá)350±5mbar；二次干燥：將隔板溫度升溫至30℃±2℃，制品溫度達(dá)25℃±2℃，保溫8h。實(shí)施例4處方：制備方法：腫瘤壞死因子工程菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵，離心得到菌體，勻漿破菌，硫酸銨沉淀，離心得到目的蛋白，再經(jīng)過(guò)初步、精制純化，得到的高純度蛋白質(zhì)液體即為腫瘤壞死因子原液。先將甘露醇、軟磷脂、明膠和甘氨酸配成溶液，混勻，再加入人血白蛋白，混勻，然后在溫度6℃下加入腫瘤壞死因子原液，混合均勻，用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值至中性，凍干，即得所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑。所述的凍干分為預(yù)凍、一次干燥和二次干燥三個(gè)階段：預(yù)凍：制品進(jìn)箱前，隔板先降溫至3℃，然后將制品放入冷凍干燥箱中，用35min將隔板溫度降至-45±2℃，制品溫度達(dá)-40℃±2℃，繼續(xù)保溫2.5h；一次干燥：將隔板溫度升溫至5℃±2℃，保溫待制品冰晶完全消失后，繼續(xù)保溫11h；對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，真空度達(dá)350±5mbar；二次干燥：將隔板溫度升溫至30℃±2℃，制品溫度達(dá)25℃±2℃，保溫7h。實(shí)施例5處方：制備方法：腫瘤壞死因子工程菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵，離心得到菌體，勻漿破菌，硫酸銨沉淀，離心得到目的蛋白，再經(jīng)過(guò)初步、精制純化，得到的高純度蛋白質(zhì)液體即為腫瘤壞死因子原液。先將甘露醇、軟磷脂、明膠和甘氨酸配成溶液，混勻，再加入人血白蛋白，混勻，然后在溫度6℃下加入腫瘤壞死因子原液，混合均勻，用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值至中性，凍干，即得所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑。所述的凍干分為預(yù)凍、一次干燥和二次干燥三個(gè)階段：預(yù)凍：制品進(jìn)箱前，隔板先降溫至8℃，然后將制品放入冷凍干燥箱中，用45min將隔板溫度降至-45±2℃，制品溫度達(dá)-40℃±2℃，繼續(xù)保溫3.5h；一次干燥：將隔板溫度升溫至5℃±2℃，保溫待制品冰晶完全消失后，繼續(xù)保溫13h；對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，真空度達(dá)350±5mbar；二次干燥：將隔板溫度升溫至30℃±2℃，制品溫度達(dá)25℃±2℃，保溫8h。實(shí)施例6處方：腫瘤壞死因子工程菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵，離心得到菌體，勻漿破菌，硫酸銨沉淀，離心得到目的蛋白，再經(jīng)過(guò)初步、精制純化，得到的高純度蛋白質(zhì)液體即為腫瘤壞死因子原液。先將甘露醇、軟磷脂、明膠和甘氨酸配成溶液，混勻，再加入人血白蛋白，混勻，然后在溫度6℃下加入腫瘤壞死因子原液，混合均勻，用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH值至中性，凍干，即得所述的腫瘤壞死因子舌下給藥制劑。所述的凍干分為預(yù)凍、一次干燥和二次干燥三個(gè)階段：預(yù)凍：制品進(jìn)箱前，隔板先降溫至7℃，然后將制品放入冷凍干燥箱中，用18min將隔板溫度降至-45±2℃，制品溫度達(dá)-40℃±2℃，繼續(xù)保溫2.8h；一次干燥：將隔板溫度升溫至5℃±2℃，保溫待制品冰晶完全消失后，繼續(xù)保溫12h；對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，真空度達(dá)350±5mbar；二次干燥：將隔板溫度升溫至30℃±2℃，制品溫度達(dá)25℃±2℃，保溫9h。對(duì)比例1、注射用改構(gòu)重組人腫瘤壞死因子處方：制備方法：同實(shí)施例1，所不同的是處方中不含有軟磷脂、明膠和甘氨酸。試驗(yàn)例1、穩(wěn)定性試驗(yàn)取96孔板，加入細(xì)胞數(shù)量為2.5～3×105個(gè)/ml，細(xì)胞板加入樣品和標(biāo)準(zhǔn)品后做四倍稀釋，做復(fù)孔，培養(yǎng)20～24小時(shí)后在測(cè)量波長(zhǎng)570nm，參照波長(zhǎng)630nm，測(cè)量每孔的OD值。以第幾孔為橫坐標(biāo)，孔內(nèi)細(xì)胞量相對(duì)應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)。根據(jù)細(xì)胞死亡率，用MTT染色，死亡越多，顏色越淡，采用直線回歸計(jì)算法進(jìn)行處理。分別計(jì)算各試驗(yàn)樣品的半效稀釋倍數(shù)(即從樣品溶液至相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品50％最大效應(yīng)點(diǎn)的稀釋倍數(shù))，并按下式計(jì)算試驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)過(guò)MTT法活性測(cè)定，結(jié)果如下：實(shí)驗(yàn)方法，各加1毫升生理鹽水，室溫放置1小時(shí)。MTT法測(cè)定各自活性(原活性85萬(wàn)單位)。1、對(duì)比例1的產(chǎn)品活性52萬(wàn)單位；2、增加軟磷脂、明膠和甘氨酸后的實(shí)施例1的產(chǎn)品的活性80萬(wàn)單位。從上述試驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明產(chǎn)品在室溫下活性穩(wěn)定性明顯優(yōu)于對(duì)比例1的產(chǎn)品的活性穩(wěn)定性，是對(duì)比例1的產(chǎn)品活性的1.54(80/52)倍。同時(shí)，按照上述方法，將實(shí)施例1的產(chǎn)品和對(duì)比例1的產(chǎn)品各加1毫升生理鹽水，在口腔溫度37℃下放置1小時(shí)。MTT法測(cè)定各自活性(原活性85萬(wàn)單位)。1、對(duì)比例1的產(chǎn)品活性46萬(wàn)單位；2、增加軟磷脂、明膠和甘氨酸后的實(shí)施例1的產(chǎn)品的活性76萬(wàn)單位。從上述試驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明產(chǎn)品在口腔溫度37℃下活性穩(wěn)定性明顯優(yōu)于對(duì)比例1的產(chǎn)品的活性穩(wěn)定性，是對(duì)比例1的產(chǎn)品活性的1.65(76/46)倍。試驗(yàn)例2、臨床試驗(yàn)一、資料與方法1、病例選擇入選標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)證實(shí)的中晚期肺癌、頭頸部腫瘤、胃癌、結(jié)腸癌、泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤患者；年齡35～70歲，心、肝、腎等臟器功能基本正常；白細(xì)胞≥4.0×109·L-1，血小板≥100×109·L-1，血紅蛋白≥90g·L-1；KPS≥30分，預(yù)計(jì)生存期＞3個(gè)月；至少有1個(gè)可評(píng)價(jià)病灶，近1月內(nèi)未進(jìn)行其他抗腫瘤治療；上述患者均簽署書(shū)面知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：可進(jìn)行并愿意接受手術(shù)治療的早期惡性腫瘤患者；有明顯心、肝、腎功能障礙及血液系統(tǒng)疾病患者；對(duì)肽類藥物或其他生物制品有過(guò)敏史、或有過(guò)敏性疾病患者及過(guò)敏體質(zhì)者；孕婦、哺乳期婦女。剔除標(biāo)準(zhǔn)：用藥劑量、化療方案、治療療程不符合本研究要求者；因各種原因未完成給藥計(jì)劃者(因不良反應(yīng)停藥者不納入療效分析，但納入不良反應(yīng)統(tǒng)計(jì))；試驗(yàn)期間加用其他藥物影響本試驗(yàn)療效觀察者。共入組120例，其中試驗(yàn)組60例，對(duì)照組60例；因各種原因出組7例，其中試驗(yàn)組1例，對(duì)照組6例，全組可評(píng)價(jià)療效及不良反應(yīng)者均為113例。試驗(yàn)組59例患者中，男53例，女6例；中位年齡(56.58±9.68)歲。既往治療20例。KPS評(píng)分平均為77.86±7.69。59例中肺癌28例，消化道腫瘤18例，泌尿道腫瘤7例，頭頸部腫瘤6例。臨床分期：II期3例，III期20例，IV期36例；對(duì)照組54例患者中，男37例，女17例，中位年齡(55.91±15.72)歲。既往治療16例。KPS評(píng)分平均為77.36±9.21。肺癌32例，消化道腫瘤22例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，2組患者在性別、年齡、既往治療、KPS評(píng)分、病種及臨床分期方面均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2、給藥方法試驗(yàn)組：實(shí)施例1的舌下給藥制劑加聯(lián)合化療。用量為400萬(wàn)IU·m-2，d1～d7，d1～d17，舌下給藥，21d為1個(gè)周期，連用2個(gè)周期。聯(lián)合化療方案：肺癌GP方案(Gem1200mg/m2iv,d1,d8DDP80－100mg/m2ivd2)；胃癌奧沙利鉑+卡培他濱(奧沙利鉑130mg·m-2，iv，d1；卡培他濱1000mg·m-2，bid，po，d1-14)；腸癌XELOX方案(奧沙利鉑130mg·m-2，iv，d1；卡培他濱1000mg·m-2，bid，po，d1-14)；頭頸部腫瘤PF方案(順鉑100mg·m-2，iv，d1；5-Fu1000mg·m-2，iv，d1-4)；泌尿道腫瘤方案同結(jié)腸癌。對(duì)照組：對(duì)比例1的注射用改構(gòu)重組人腫瘤壞死因子肌注加聯(lián)合化療。用量為400萬(wàn)IU·m-2，d1～7，d1～17，im，21d為1個(gè)周期，連用2個(gè)周期。聯(lián)合化療方案同試驗(yàn)組。3、觀察指標(biāo)臨床指標(biāo)：每天記錄癥狀、體征；每日測(cè)體溫、血壓1次，如高熱加測(cè)體溫并記錄最高值；每日觀察并記錄乏力、流涕、畏寒等感冒樣癥狀程度及骨、肌肉疼痛程度；詳細(xì)記錄TNFα給藥后的局部不良反應(yīng)，如注射部位的疼痛程度、紅腫硬節(jié)范圍，有無(wú)皮疹及出血點(diǎn)，有無(wú)痔瘡或潰瘍等并記錄其他不良反應(yīng)如過(guò)敏反應(yīng)等。同時(shí)判斷與藥物的相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)：治療前及治療開(kāi)始后每周查血常規(guī)；每周期治療前后查肝、腎功能、尿常規(guī)、心電圖、肝臟B超及胸部X光片；除可直接測(cè)量的腫瘤病灶外，對(duì)評(píng)價(jià)病灶均需治療前和治療結(jié)束后4周各行CT檢測(cè)1次。4、療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)可測(cè)量病灶評(píng)價(jià)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：CR可測(cè)量病灶完全消失，至少維持4周以上；PR腫塊縮小50％以上，時(shí)間不少于4周；MR腫瘤病灶的兩徑乘積縮小≥25％，但＜50％，無(wú)新病灶出現(xiàn)；SD腫瘤病灶的兩徑乘積縮?。?5％，或增加＜25％，無(wú)新病灶出現(xiàn)；PD腫瘤病灶兩徑乘積增大≥25％，或新病灶出現(xiàn)；有效率為CR+PR病例占全部病例的百分?jǐn)?shù)。骨肌肉疼痛程度及注射局部疼痛判定標(biāo)準(zhǔn)參照疼痛主訴分級(jí)法(VerbalRatingScale,VRS)判定。0級(jí):無(wú)疼痛；Ⅰ級(jí):輕度疼痛,有疼痛感,可忍受,能正常生活,睡眠末受干擾；Ⅱ級(jí):中度疼痛,疼痛明顯,不能忍受,要求用止痛藥,睡眠受干擾；Ⅲ級(jí):重度疼痛,疼痛劇烈,可伴有植物神經(jīng)功能紊亂表現(xiàn),或被動(dòng)體位,睡眠受?chē)?yán)重干擾,須用止痛治療。注射部位紅腫硬結(jié)標(biāo)準(zhǔn):以紅腫結(jié)節(jié)的最大徑線的長(zhǎng)度(單位為cm)表示。0度:無(wú)紅腫硬結(jié)；Ⅰ度:紅腫硬結(jié)最大徑≤1cm；Ⅱ度:紅腫硬節(jié)最大徑1.1～2.0cm；Ⅲ度:紅腫硬結(jié)最大徑＞2.0cm。乏力及感冒樣癥狀按無(wú)、輕度、中度及重度,Ⅳ度判定。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法一般資料比較用ⅹ2檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)和等級(jí)秩和檢驗(yàn)；臨床療效比較用ⅹ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)；不良反應(yīng)發(fā)生率用ⅹ2檢驗(yàn)和F檢驗(yàn)。二、結(jié)果1、療效分析試驗(yàn)組有效率為44.0％(26/59)；對(duì)照組有效率為40.7％(22/54),如表1所示,試驗(yàn)組有效率高于對(duì)照組。表1、近期療效比較分組例數(shù)CRPRMRSDPDCR+PRRR/％試驗(yàn)組5981771882542.4對(duì)照組5481452162240.72、藥物不良反應(yīng)與TNFα有關(guān)的不良反應(yīng)主要為輕度注射部位疼痛、紅腫硬結(jié)、發(fā)熱及感冒樣癥狀,試驗(yàn)組為舌下給藥，經(jīng)試驗(yàn)表明無(wú)不良反應(yīng)發(fā)生，而對(duì)照組不良反應(yīng)總發(fā)生率為72.22％(39/54),見(jiàn)表2。表2、與TNFα相關(guān)的不良反應(yīng)不良反應(yīng)第1周期(n＝54)(％)第2周期(n＝54)(％)注射部位疼痛36(66.67)39(72.22)紅腫硬結(jié)12(22.22)24(44.44)發(fā)熱21(38.89)15(27.78)感冒樣癥狀2(3.70)3(5.56)從上述試驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的舌下給藥制劑與注射用改構(gòu)重組人腫瘤壞死因子肌注給藥制劑相比，有效率雖然提高不多，但本發(fā)明的舌下給藥制劑無(wú)不良反應(yīng)發(fā)生，且用藥方便、安全。對(duì)本發(fā)明其它實(shí)施例所制備的舌下給藥制劑也進(jìn)行了上述試驗(yàn)，其獲得的結(jié)果相似。以上所述僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例揭露如上，然而并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉本發(fā)明的技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)，當(dāng)可利用上述提示的技術(shù)內(nèi)容作出些許變動(dòng)或修飾為等同變化的等效實(shí)施例，但凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明方案的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3