番茄紅素在制備防治老年癡呆藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種防治老年癡呆的藥物，該藥物是番茄紅素(Lycopene)。本發(fā)明揭示，番茄紅素(Lycopene)能減少老年性癡呆大鼠大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)骨架蛋白tau的異常過(guò)度磷酸化并改善動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶障礙，能用于老年性癡呆的預(yù)防和治療。
【專利說(shuō)明】番茄紅素在制備防治老年癡呆藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及防治老年癡呆的藥物。

【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茨海默病（Alzheimer Disease,AD)是一種典型的神經(jīng)退行性疾病，是最常見(jiàn) 的癡呆形式，其主要臨床癥狀為近記憶力損害，認(rèn)知能力下降和思維障礙，且進(jìn)行性加重， 最后因生活不能自理而死亡，病程一般8?10年。隨著社會(huì)老齡化進(jìn)程的加快，AD的患病 人數(shù)急劇上升，已成為威脅老齡特別是高齡人群身心健康的頭號(hào)疾病，并給社會(huì)和家庭帶 來(lái)了嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。
[0003] AD病人大腦的主要病理改變是大量神經(jīng)纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles, NFTs)和老年斑（senile plaque, SP)的形成，其分子標(biāo)志物分別是異常磷酸化的tau蛋白 和β_淀粉樣蛋白（Αβ)。國(guó)外學(xué)者已采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，在小鼠成功地復(fù)制出β-淀粉樣蛋 白沉積形成的老年斑樣病變，從而使得未來(lái)AD治療將減少Α β沉積作為藥物干預(yù)的靶標(biāo)成 為可能。NFTs的數(shù)量與AD臨床癡呆程度正相關(guān)。因此，干預(yù)NFTs對(duì)AD的防治尤為重要。 自從發(fā)現(xiàn)NFTs的主要成分是異常高度磷酸化的tau蛋白聚集形成的雙螺旋絲以來(lái)，國(guó)內(nèi)外 學(xué)者普遍認(rèn)為，骨架蛋白tau的異常高度磷酸化是NFTs形成的關(guān)鍵步驟。高度磷酸化tau 蛋白的聚集不僅以神經(jīng)纏結(jié)的形式存在，它也是神經(jīng)氈纖絲和老年斑中的營(yíng)養(yǎng)不良突起的 主要成分。
[0004] 目前尚沒(méi)有針對(duì)老年性癡呆病理特征的特效治療藥物和方法，常用的減緩老年癡 呆發(fā)作藥物有：（1)改善膽堿神經(jīng)傳遞藥物：老年癡呆的一個(gè)主要原因是膽堿不足導(dǎo)致記 憶衰退。因此乙酰膽堿酯酶（AchE)抑制劑通過(guò)增強(qiáng)膽堿能作用在老年癡呆治療方面發(fā)揮 了重要作用；（2)改善腦血液循環(huán)和腦細(xì)胞代謝的藥物：此類藥物可以擴(kuò)張腦血管以改善 老年癡呆患者的糖、蛋白、核酸、脂質(zhì)等代謝障礙；（3)鈣拮抗劑：此類藥物易于通過(guò)血腦屏 障，選擇性擴(kuò)張腦血管，從而改善記憶和認(rèn)知功能；(4)激素類藥物：主要緩解女性患者的 癥狀。然而，這些藥物僅對(duì)中晚期老年性癡呆患者的癡呆癥狀有所輕度改善或延緩癡呆進(jìn) 展。因此研發(fā)新的針對(duì)老年性癡呆病理學(xué)特征的藥物，成為全球的期待。
[0005] 番茄紅素是一種類胡蘿卜素?zé)N，屬于天然的紅色色素，大量存在于紅色的水果和 蔬菜中，如西紅柿，木瓜，粉紅葡萄柚，番石榴和西瓜。番茄紅素天然且有益健康，有"植物黃 金"之稱，是很好地抗氧化劑。除清除自由基作用外，番茄紅素還能夠抑制基因的誘變，并可 以通過(guò)影響細(xì)胞間縫隙連接調(diào)節(jié)生長(zhǎng)代謝。并且先前的一些在體和離體實(shí)驗(yàn)均表明，
[0006] 番茄紅素對(duì)慢性疾病如心血管疾病，動(dòng)脈粥樣硬化，癌癥（特別是前列腺癌）和神 經(jīng)退行性疾病具有保護(hù)作用。目前美國(guó)、法國(guó)、日本、澳大利亞均已相繼出品相關(guān)的藥物或 保健品。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的任務(wù)是提供一種用于預(yù)防和治療老年性癡呆藥物。
[0008] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的具體方案是：
[0009] 本發(fā)明提供的用于預(yù)防和/或治療老年性癡呆藥物的藥物是番茄紅素 (Lycopene)。本發(fā)明揭示，番爺紅素（Lycopene)能減少老年性癡呆大鼠大腦皮質(zhì)和海馬區(qū) 骨架蛋白tau的異常過(guò)度磷酸化并改善動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶障礙。番茄紅素（Lycopene)能用于 老年性癡呆的預(yù)防和/或治療。
[0010] 實(shí)驗(yàn)資料：
[0011] 本發(fā)明通過(guò)給大鼠灌服番茄紅素（Lycopene)，發(fā)現(xiàn)其可以改善AD樣動(dòng)物模型的 tau蛋白過(guò)度磷酸化與學(xué)習(xí)、記憶障礙。
[0012] 具體操作步驟如下：
[0013] 1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象
[0014] 雄性Wistar大鼠（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），SPF級(jí)，體 重250?300克，45只，常規(guī)環(huán)境飼養(yǎng)。隨機(jī)分為三組：①正常組（con);②造模組（hey); ③治療組（hcy+lyco);
[0015] 2.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭苽?br> [0016] ①正常組：尾靜脈注射生理鹽水，lml/kg。
[0017] ②造模組：通過(guò)尾靜脈注射給予同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，每天一次， 持續(xù)14天，劑量為400 μ g/kg，構(gòu)建早老性癡呆動(dòng)物模型。
[0018] ③治療組：通過(guò)尾靜脈注射同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，劑量為400 μ g/ kg，每天1次，持續(xù)14天；然后大鼠灌胃給予番爺紅素（Lycopene)，每天一次，持續(xù)14天， 劑量為40mg/kg。
[0019] 3.研究方法
[0020] 大鼠學(xué)習(xí)記憶的能力：Morris水迷宮訓(xùn)練及測(cè)試；離體腦片LTP技術(shù)；高爾基染 色海馬磷酸化tau陽(yáng)性細(xì)胞的顯示：免疫印跡
[0021] 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0022] *Ρ〈0· 05,與正常組比較
[0023] **Ρ〈0. 01，與正常組比較
[0024] *#Ρ〈0. 001，與正常組比較
[0025] #Ρ〈0· 05，與造模組比較
[0026] ##Ρ〈0. 01，與造模組比較
[0027] ###Ρ〈0· 001，與造模組比較
[0028] (DMorris水迷宮訓(xùn)練及測(cè)試結(jié)果：造模組與正常組相比出現(xiàn)明顯學(xué)習(xí)記憶障礙 (圖1)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明水迷宮測(cè)試的潛伏期明顯延長(zhǎng)，學(xué)習(xí)的時(shí)間延長(zhǎng)，見(jiàn)圖1。造模組在目 標(biāo)象限停留時(shí)間和距離以及穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯減少，見(jiàn)圖2,說(shuō)明記憶能力的減退。治療 組與造模組相比潛伏期時(shí)間變短，目標(biāo)象限停留次數(shù)和穿越平臺(tái)次數(shù)增加，其學(xué)習(xí)和記憶 能力都得到了良好的改善。
[0029] (2)腦片LTP結(jié)果（見(jiàn)圖3):造模組與治療組的興奮性突觸后電位（fEPSP)的斜 率分別增加了約1. 2倍和1. 6倍，說(shuō)明Hey破壞了突觸的功能，而同時(shí)補(bǔ)充番茄紅素能夠使 EPSP的斜率得到有效的恢復(fù)，從而改善學(xué)習(xí)記憶能力。
[0030] (3)高爾基染色結(jié)果（見(jiàn)圖4) :Hcy處理組的大鼠腦片中，CA1區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘密 度和成熟的蘑菇型樹(shù)突棘均出現(xiàn)了明顯的減少，而同時(shí)補(bǔ)充番茄紅素能夠有效的挽救這種 改變。
[0031] (4) Tau磷酸化免疫印跡結(jié)果（見(jiàn)圖5)
[0032] 與正常組相比較，造模組大鼠的大腦海馬內(nèi)tau蛋白在絲氨酸198/199/202,蘇氨 酸205,絲氨酸212,絲氨酸214,絲氨酸262,絲氨酸396,絲氨酸404位點(diǎn)，磷酸化水平明顯 增高，番爺紅素（Lycopene)治療后，tau磷酸化水平明顯下降。
[0033] 5.結(jié)論及用法建議：
[0034] 以上結(jié)果顯示給予同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)尾靜脈注射的老鼠水迷宮 訓(xùn)練及檢測(cè)過(guò)程中平臺(tái)的潛伏期增加，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少說(shuō)明大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力 損傷，檢測(cè)早老性癡呆相關(guān)指標(biāo)tau蛋白磷酸化，tau蛋白的磷酸化水平顯著上升，說(shuō)明大 鼠早老性癡呆造模成功。
[0035] 跟造模組相比較，在給與了番茄紅素（Lycopene)處理后，檢測(cè)老鼠水迷宮行為 學(xué)，其學(xué)習(xí)和記憶能力得到了有效的改善；同時(shí)，早老性癡呆相關(guān)指標(biāo)tau蛋白磷酸化明顯 降低以及記憶相關(guān)的突觸功能明顯改善，說(shuō)明番茄紅素（Lycopene)能緩減老年性癡呆大 鼠大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)骨架蛋白tau的異常過(guò)度磷酸化并改善動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶障礙。番茄紅 素（Lycopene)能用于老年性癡呆的預(yù)防和治療。番茄紅素作為一種天然且含量豐富的物 質(zhì)，
[0036] 是安全也無(wú)不良作用的。
[0037] 參考徐舒云教授主編的《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，》在其附錄中有一個(gè)表，列出了人和動(dòng) 物按體表面積折算的等效劑量比值。我們可以算出大鼠劑量與人的比值：
[0038] 大鼠體型系數(shù)：0· 09標(biāo)準(zhǔn)體重：200g = 0· 2kg
[0039] 大鼠的折算系數(shù)=(體型系數(shù)大鼠*W大鼠2/3 V (體型系數(shù)人*W人2/3)
[0040] =(0· 09*0. 22/3)/0· 1*702/3)*70Χ/0·4
[0041] =0.018
[0042] 我們理想的認(rèn)為，對(duì)任何藥物，大鼠和人的敏感程度是完全一樣的，經(jīng)換算后人的 臨床劑量約為〇· 72mg/d。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0043] 圖1為水迷宮測(cè)試大鼠鼠游泳學(xué)習(xí)軌跡圖和潛伏期統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖中：*P〈0. 01， 與正常組比較；***P〈〇. 01，與造模組比較。正常組：尾靜脈注射生理鹽水，lml/kg。造 模組：通過(guò)尾靜脈注射給予同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，每天一次，持續(xù)14天， 劑量為400 μ g/kg，構(gòu)建早老性癡呆動(dòng)物模型。治療組：通過(guò)尾靜脈注射同型半胱氨酸 (Homocysteine, Hey)，劑量為400 μ g/kg，每天1次，持續(xù)14天；然后大鼠灌胃給予番爺紅 素（Lycopene),每天一次，持續(xù)14天，劑量為40mg/kg。
[0044] 雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為三組①正常組：尾靜脈注射生理鹽水，lml/kg。②造 模組：通過(guò)尾靜脈注射給予同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，每天一次，持續(xù)14天， 劑量為400 μ g/kg，構(gòu)建早老性癡呆動(dòng)物模型。③治療組：通過(guò)尾靜脈注射同型半胱氨酸 (Homocysteine, Hcy)，劑量為400μ g/kg，每天1次，持續(xù)14天；然后大鼠灌胃給予番爺紅 素（Lycopene),每天一次，持續(xù)14天，劑量為40mg/kg。
[0045] 實(shí)驗(yàn)所采用Morris水迷宮測(cè)試系統(tǒng)包括圓形水池直徑120cm，高60cm ;圓柱形有 機(jī)玻璃平臺(tái)直徑l〇cm，高40cm。水池中水面高約45cm，室溫及水溫均保持在26± 2°C，平臺(tái) 放置于某一象限的中心位置，并沒(méi)于水面下約2cm。訓(xùn)練時(shí)將大鼠從任一象限1/2弧度處頭 面向池壁輕放于水中，檢測(cè)其潛伏期（即大鼠從入水點(diǎn)起到找到平臺(tái)所用的時(shí)間）、游泳路 徑作為衡量大鼠學(xué)習(xí)記憶和測(cè)試成績(jī)的指標(biāo)。每只大鼠每天在3個(gè)象限訓(xùn)練1次，每次游 泳時(shí)限為60s，即在60s內(nèi)未找到平臺(tái)者系統(tǒng)自動(dòng)停止記錄，潛伏期記60s，由測(cè)試者引導(dǎo) 其上臺(tái)，適應(yīng)30s后進(jìn)行下一次訓(xùn)練。首先進(jìn)行為期6天的訓(xùn)練，然后讓大鼠休息1天，第 8天，撤去平臺(tái)進(jìn)行測(cè)試，記錄大鼠找到平臺(tái)的潛伏期，目標(biāo)象限停留時(shí)間及目 [0046] 標(biāo)平臺(tái)穿越次數(shù)。
[0047] 結(jié)果顯示跟正常組相比造模組大鼠游泳軌跡混亂，找到平臺(tái)所需潛伏期時(shí)間最 長(zhǎng)，說(shuō)明大鼠學(xué)習(xí)能力受到損傷，在給予番茄紅素（Lycopene)后，治療組大鼠跟造模組相 比軌跡重新恢復(fù)簡(jiǎn)單，潛伏期變短，學(xué)習(xí)能力得到明顯改善。
[0048] 圖2為水迷宮測(cè)試?yán)鲜蟠┰狡脚_(tái)次數(shù)及時(shí)間和距離統(tǒng)計(jì)結(jié)果。圖中：*p〈0. 05， **p〈0. 01，與正常組比較；#p〈0. 05與造模組比較。正常組：尾靜脈注射生理鹽水，lml/ kg。造模組：通過(guò)尾靜脈注射給予同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，每天一次，持續(xù)14 天，劑量為400 μ g/kg，構(gòu)建早老性癡呆動(dòng)物模型。治療組：通過(guò)尾靜脈注射同型半胱氨酸 (Homocysteine, Hey)，劑量為400 μ g/kg，每天1次，持續(xù)14天；然后大鼠灌胃給予番爺紅 素（Lycopene)，每天一次，持續(xù)14天，劑量為40mg/kg。
[0049] Morris水迷宮測(cè)試系統(tǒng)經(jīng)過(guò)6天訓(xùn)練，大鼠學(xué)會(huì)如何尋找平臺(tái)后。休息一天，去平 臺(tái)，計(jì)算3分鐘內(nèi)大鼠在目標(biāo)象限的停留時(shí)間并分析其在平臺(tái)所在位置的穿越次數(shù)，以評(píng) 價(jià)其記憶能力。
[0050] 結(jié)果表明造模組大鼠穿越平臺(tái)的時(shí)間和距離最短，次數(shù)最少，說(shuō)明造模組老鼠的 記憶能力受到損害，不記得平臺(tái)的位置；治療組大鼠跟造模組相比穿越平臺(tái)的時(shí)間和距離 恢復(fù)到正常一致，穿越平臺(tái)次數(shù)也相應(yīng)增加，其記憶能力在給予番茄紅素（Lycopene)后得 到明顯恢復(fù)。
[0051] 圖3為腦片LTP結(jié)果。圖中：#P〈0. 01，與造模組比較。造模組：通過(guò)尾靜脈注射 給予同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，每天一次，持續(xù)14天，劑量為400 μ g/kg，建立早 老性癡呆動(dòng)物模型。治療組：通過(guò)尾靜脈注射同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，劑量為 400 μ g/kg，每天1次，持續(xù)14天；然后大鼠灌胃給予番爺紅素（Lycopene)，每天一次，持續(xù) 14天,劑量為40mg/kg。
[0052] 大鼠斷頭后，立即將腦組織取出，并浸入連續(xù)通入95% 02和5% C02的冰冷的人 工腦脊液（ACSF ;125mM NaCl, 2. OmM KC1, 1. 2mM MgS04, 2. 5mM CaC12, 1. 2mM KH2P04, llmM glucose and26mM NaHC03)。用振動(dòng)切片機(jī)進(jìn)行旁矢狀面切片。切好的腦片應(yīng)在通 氧的ACSF(34±1°C )中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)至少1小時(shí)。隨后，將腦片轉(zhuǎn)移至不斷循環(huán)灌注 ACSF(1. 0-1. 3ml/min)的浸沒(méi)式記錄腔（溫度保持在34土 1°C )。用平面多電極記錄設(shè)置 (MED64系統(tǒng)，Alpha Med Sciences)記錄局部的興奮性突觸后電位（fEPSP)。
[0053] 結(jié)果顯示fEPSP的斜率分別增加了約1. 2倍和1. 6倍，說(shuō)明Hey破壞了突觸的功 能，并且同時(shí)補(bǔ)充番茄紅素后，EPSP的斜率得到了有效的恢復(fù)。這些數(shù)據(jù)表明，番茄紅素能 有
[0054] 效地逆轉(zhuǎn)Hey誘導(dǎo)的突觸傳遞缺陷。
[0055] 圖4為高爾基染色結(jié)果。圖中：*P〈0. 05，#P〈0. 01，與正常組比較；#P〈0. 05,與治 療組比較。正常組：尾靜脈注射生理鹽水，lml/kg。造模組：通過(guò)尾靜脈注射給予同型半胱 氨酸（Homocysteine, Hey)，每天一次，持續(xù)14天，劑量為400 μ g/kg，構(gòu)建早老性癡呆動(dòng)物 模型。治療組：通過(guò)尾靜脈注射同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，劑量為400 μ g/kg，每 天1次，持續(xù)14天；然后大鼠灌胃給予番茄紅素（Lycopene)，每天一次，持續(xù)14天，劑量為 40mg/kg〇
[0056] 為了進(jìn)一步驗(yàn)證番茄紅素對(duì)突觸功能的改善作用，我們還進(jìn)行了重要的突觸后成 分-樹(shù)突棘的形態(tài)觀察與分析。動(dòng)物行為學(xué)檢測(cè)完畢后，用6%水合氯醛（0.6ml/kg)將大 鼠麻醉，先經(jīng)心臟快速灌注500ml含0. 5%的亞硝酸鈉的生理鹽水進(jìn)行循環(huán)沖洗，然后用 500ml4%的甲醛生理鹽水溶液灌注，待大鼠肢體抽搐后改為慢滴，經(jīng)充分固定后，等待兩個(gè) 小時(shí)，然后在避光條件下用500ml Golgi媒染液（5%水合氯醛，5%的重鉻酸鉀，4%甲醛） 行灌注染色，灌注完成后，靜置2個(gè)小時(shí)。將腦組織取出，切成厚5-10_的腦片，室溫避光條 件下置于媒染液中繼續(xù)染色3天，注意每天更換新染液，保證染色完全。染色完成后，先用 1 %的硝酸銀溶液漂洗，然后再將腦片置于1 %的硝酸銀溶液中進(jìn)行鍍銀還原3天，注意全 程避光，且每天更換新溶液，使鍍銀充分。上述各項(xiàng)完成后，振蕩切片機(jī)切片，厚度約35um， 將切好的腦片置于2%重鉻酸鉀溶液中漂洗，約0. 5h后，將腦片置于雙蒸水中貼片，然后常 規(guī)脫水，透明，封片后觀察。
[0057] 運(yùn)用高爾基染色方法，我們發(fā)現(xiàn)，Hey處理組的大鼠腦片中，CA1區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘 密度和成熟的蘑菇型樹(shù)突棘均出現(xiàn)了減少，而補(bǔ)充番茄紅素能夠恢復(fù)這種改變。以上數(shù)據(jù) 均表明，番茄紅素可能降低了 Hey引起的突觸損傷，從而減輕甚至挽救了記憶損害。
[0058] 圖5為大鼠海馬內(nèi)tau蛋白磷酸化位點(diǎn)磷酸化水平免疫印跡結(jié)果。圖中： *卩〈0.05，*撲〈0.01，#撲〈0.001，與正常組比較 ；#?〈0.05，###?〈0.001，與治療組比較。正 常組：尾靜脈注射生理鹽水，lml/kg。造模組：通過(guò)尾靜脈注射同型胱氨酸（Homocysteine, Hey)，每天一次，持續(xù)14天，劑量為400 μ g/kg，構(gòu)建早老性癡呆動(dòng)物模型。治療組：通過(guò)尾 靜脈注射同型半胱氨酸（Homocysteine，Hey)，劑量為400 μ g/kg，每天1次，持續(xù)14天；然 后大鼠灌胃給予番爺紅素（Lycopene),每天一次，持續(xù)14天，劑量為40mg/kg。
[0059] 6%水合氯醒麻醉（0.61111/1^)處死大鼠,迅速取出大腦腦組織置于0-4°(：0.05皿 Tris緩沖鹽溶液（TB，pH7.0)內(nèi)，快速分離雙側(cè)海馬，制成10 %的蛋白勻漿，12000g離心15 分鐘，取上清，測(cè)定蛋白含量后備用。
[0060] 分別檢測(cè)tau蛋白不同位點(diǎn)的磷酸化水平，包括Ser214的（PS214)， Thr231(PT231),
[0061] Ser262(PS262)和Ser396(PS396)檢測(cè)非磷酸化位點(diǎn)taul的水平以及總tau5的 水平變化。β-actin為內(nèi)參條帶，證明蛋白上樣量的一致性。通過(guò)與總tau5比較，造模組 非磷酸化位點(diǎn)taul磷酸化水平明顯減少，磷酸化位點(diǎn)PS396, PS404, PS212, PS205磷酸化 水平明顯增加，tau發(fā)生過(guò)度磷酸化；治療組給予番茄紅素（Lycopene)后，tau的過(guò)度磷酸 化得到降低，恢復(fù)到和正常組相近水平。

【具體實(shí)施方式】
[0062] 實(shí)施例1
[0063] 通過(guò)給大鼠灌服番爺紅素（Lycopene)，發(fā)現(xiàn)其可以改善AD樣動(dòng)物模型的tau蛋白 過(guò)度磷酸化與學(xué)習(xí)、記憶障礙。
[0064] 1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象：雄性Wistar大鼠（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提 供），SPF級(jí)，體重250?300克，45只，常規(guī)環(huán)境飼養(yǎng)。隨機(jī)分為三組：①正常組（con);② 造模組（hey);③治療組（hcy+lyco);
[0065] 2.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭苽浼皩?shí)驗(yàn)給藥：
[0066] ①正常組：尾靜脈注射生理鹽水，lml/kg。②造模組：通過(guò)尾靜脈注射給予同型半 胱氨酸（Homocysteine, Hey)，每天一次，持續(xù)14天，劑量為400 μ g/kg，構(gòu)建早老性癡呆動(dòng) 物模型。③治療組：通過(guò)尾靜脈注射同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)，劑量為400 μ g/ kg，每天1次，持續(xù)14天；然后大鼠灌胃給予番爺紅素（Lycopene)，每天一次，持續(xù)14天， 劑量為40mg/kg。
[0067] 3.研究方法：
[0068] 大鼠學(xué)習(xí)記憶的能力：Morris水迷宮訓(xùn)練及測(cè)試；離體腦片LTP技術(shù)；高爾基染 色海馬磷酸化tau陽(yáng)性細(xì)胞的顯示：免疫印跡。
[0069] 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：參見(jiàn)附圖，附圖中符號(hào)標(biāo)識(shí)表示：*P〈0. 05,與正常組比較； **P〈0. 01，與正常組比較；*#P〈0. 001，與正常組比較；#P〈0. 05,與造模組比較；##P〈0. 01， 與造模組比較；###P〈〇. 001，與造模組比較。
[0070] (DMorris水迷宮訓(xùn)練及測(cè)試結(jié)果：造模組與正常組相比出現(xiàn)明顯學(xué)習(xí)記憶障礙 (圖1)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明水迷宮測(cè)試的潛伏期明顯延長(zhǎng)，學(xué)習(xí)的時(shí)間延長(zhǎng)，見(jiàn)圖1。造模組在目 標(biāo)象限停留時(shí)間和距離以及穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯減少，見(jiàn)圖2,說(shuō)明記憶能力的減退。治療 組與造模組相比潛伏期時(shí)間變短，目標(biāo)象限停留次數(shù)和穿越平臺(tái)次數(shù)增加，其學(xué)習(xí)和記憶 能力都得到了良好的改善。
[0071] (2)腦片LTP結(jié)果（見(jiàn)圖3):造模組與治療組的興奮性突觸后電位（fEPSP)的斜 率
[0072] 分別增加了約1. 2倍和1. 6倍，說(shuō)明Hey破壞了突觸的功能，而同時(shí)補(bǔ)充番茄紅素 能夠使EPSP的斜率得到有效的恢復(fù)，從而改善學(xué)習(xí)記憶能力。
[0073] (3)高爾基染色結(jié)果（見(jiàn)圖4) :Hcy處理組的大鼠腦片中，CA1區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘密 度和成熟的蘑菇型樹(shù)突棘均出現(xiàn)了明顯的減少，而同時(shí)補(bǔ)充番茄紅素能夠有效的挽救這種 改變。
[0074] (4)Tau磷酸化免疫印跡結(jié)果（見(jiàn)圖5):與正常組相比較，造模組大鼠的大腦海馬 內(nèi)tau蛋白在絲氨酸198/199/202,蘇氨酸205,絲氨酸212,絲氨酸214,絲氨酸262,絲氨 酸396,絲氨酸404位點(diǎn)，磷酸化水平明顯增高，番爺紅素（Lycopene)治療后，tau磷酸化 水平明顯下降。
[0075] 5.結(jié)論：以上結(jié)果顯示給予同型半胱氨酸（Homocysteine, Hey)尾靜脈注射的老 鼠水迷宮訓(xùn)練及檢測(cè)過(guò)程中平臺(tái)的潛伏期增加，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少說(shuō)明大鼠的學(xué)習(xí)和 記憶能力損傷，檢測(cè)早老性癡呆相關(guān)指標(biāo)tau蛋白磷酸化，tau蛋白的磷酸化水平顯著上 升，說(shuō)明大鼠早老性癡呆造模成功。
[0076] 跟造模組相比較，在給與了番茄紅素（Lycopene)處理后，檢測(cè)老鼠水迷宮行為 學(xué)，其學(xué)習(xí)和記憶能力得到了有效的改善；同時(shí)，早老性癡呆相關(guān)指標(biāo)tau蛋白磷酸化明顯 降低以及記憶相關(guān)的突觸功能明顯改善，說(shuō)明番茄紅素（Lycopene)能緩減老年性癡呆大 鼠大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)骨架蛋白tau的異常過(guò)度磷酸化并改善動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶障礙。番茄紅 素（Lycopene)能用于老年性癡呆的預(yù)防和治療。
【權(quán)利要求】
1. 番爺紅素（Lycopene)在制備用于預(yù)防和/或治療老年性癡呆藥物中的應(yīng)用。
2. -種用于預(yù)防和/或治療老年性癡呆藥物，其特征在于含有活性成分番茄紅素 (Lycopene)〇
3. -種用于預(yù)防和/或治療老年性癡呆的藥物制劑，其特征在于，它由作為活性成分 的番茄紅素（Lycopene)和藥學(xué)上可接受的載體和/或添加劑組成。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK104083345SQ201410263970
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年6月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月13日
【發(fā)明者】朱鈴強(qiáng), 高鑫雅, 劉丹, 王志昊, 馬禹佳, 毛璐 申請(qǐng)人:華中科技大學(xué)