一種雙姜胃痛片的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種雙姜胃痛片的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明的雙姜胃痛片的制備方法，由姜黃200g、紫色姜200g、地不容200g、石菖蒲200g、苦菜子200g作為原料藥制成，采用微波萃取和大孔樹脂吸附制備而成，使得姜黃素含量有很大提高。本發(fā)明還提供了雙姜胃痛片在制備抑制小鼠骨髓瘤細(xì)胞FO細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】一種雙姜胃痛片的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種雙姜胃痛片的制備方法及其在制備抑制小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞MLTC-1細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]雙姜胃痛丸標(biāo)準(zhǔn)號WS-11105 (ZD-1105)_2002，記載于國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編內(nèi)科脾胃分冊。由姜黃200g、紫色姜200g、地不容200g、石菖蒲200g、苦菜子200g作為原料藥制成，具有理氣止痛，和胃降逆的功效。用于中焦氣滯所致胃脘痞滿脹痛，噯氣吞酸，慢性淺表性胃炎見上述證候者。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有雙姜胃痛片在提取制備方面采用微波技術(shù)和大孔樹脂吸附技術(shù)提取的報(bào)道，而中藥直接打粉提取，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種雙姜胃痛片的制備方法。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種雙姜胃痛片在制備抑制小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞MLTC-1細(xì)胞增殖 藥物中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]一種雙姜胃痛片的制備方法，由姜黃200g、紫色姜200g、地不容200g、石菖蒲200g、苦菜子200g作為原料藥制成，其特征在于，所述的制備方法由下列步驟組成:取上五味藥材，粉碎，加入5L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次5-10分鐘，合并萃取液，濃縮，加到Diaion HP-10大孔吸附樹脂柱上，70%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，將微波提取物混合加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片重0.3g。
[0008]上述的雙姜胃痛片的制備方法中，所述微波萃取功率為700W。
[0009]上述的雙姜胃痛片的制備方法中，所述微波萃取每次萃取時(shí)間為8分鐘。
[0010]上述的雙姜胃痛片在制備抑制小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞MLTC-1細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0011]現(xiàn)有技術(shù)中，雙姜胃痛丸口服，一次1.5~3g，一日3次。雙姜胃痛丸服藥量大。采用本發(fā)明方法制備成的雙姜胃痛片每片重0.3g，每次僅需1-2片，一日服用3次。在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。此結(jié)論可以通過下述試驗(yàn)證明。
[0012]試驗(yàn)一、不同方法制備的雙姜胃痛片中姜黃素含量的比較
[0013]1、儀器及試藥本發(fā)明雙姜胃痛片:按實(shí)施例1方法制備，使用1000g原料藥，經(jīng)提取制成500片，每片重0.3g。原雙姜胃痛丸，按照WS-11105 (ZD-1105)-2002標(biāo)準(zhǔn)方法制備，作為對照?？梢?紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRAMAX190); ；AE240電子分析天平；姜黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所)。[0014]2、方法
[0015]取本品，研細(xì)，取樣(原雙姜胃痛丸取3g樣品，本發(fā)明的雙姜胃痛片取0.9g)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。另取姜黃素對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.12mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液2 μ 1、對照品溶液1μ I與2μ 1，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲酸-冰醋酸(30: 3: I)為展開劑，展開，取出，晾干，照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長:Xs=425nm，XR=560nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。
[0016]3、結(jié)果
[0017]結(jié)果表明，本發(fā)明雙姜胃痛片中姜黃素的含量為3_6mg/片；而原雙姜胃痛丸中姜黃素的含量為0.35mg/g，每片姜黃素含量相當(dāng)于原丸劑每g含量的9-18倍，在服用量減少的情況下，姜黃素含量有很大提高。
[0018]上述研究表明，采用本發(fā)明制備方法制備的雙姜胃痛片，有效成分含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于WS-11105 (ZD-1105) -2002標(biāo)準(zhǔn)記載的方法制備的雙姜胃痛丸。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作更進(jìn)一步的說明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解本發(fā)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0020]實(shí)施例1
[0021]取姜黃200g、紫色姜200g、地不容200g、石菖蒲200g、苦菜子200g，將五味藥材，粉碎，加入5L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率700W，萃取2次，每次8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到Diaion HP-10大孔吸附樹脂柱上，70%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，將微波提取物混合加入淀粉，70%乙醇制顆粒,干燥,壓片 ，制成500片，每片重0.3g。
[0022]經(jīng)檢測，成品中姜黃素的含量為5.92mg/片。
[0023]實(shí)施例2
[0024]取姜黃200g、紫色姜200g、地不容200g、石菖蒲200g、苦菜子200g，將五味藥材，粉碎，加入5L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次5分鐘，合并萃取液，濃縮，加到Diaion HP-10大孔吸附樹脂柱上，70%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，將微波提取物混合加入淀粉，70%乙醇制顆粒,干燥,壓片，制成500片，每片重0.3g。
[0025]經(jīng)檢測，成品中姜黃素的含量為3.66mg/片。
[0026]實(shí)施例3
[0027]取姜黃200g、紫色姜200g、地不容200g、石菖蒲200g、苦菜子200g，將五味藥材，粉碎，加入5L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率800W，萃取2次，每次10分鐘，合并萃取液，濃縮，加到Diaion HP-10大孔吸附樹脂柱上，70%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，將微波提取物混合加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片重
0.3g0
[0028]經(jīng)檢測，成品中姜黃素的含量為4.58mg/片。
[0029]實(shí)施例4:雙姜胃痛片抑制小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞MLTC-1細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0030]1.實(shí)驗(yàn)材料
[0031]1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0032]小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞MLTC-1細(xì)胞，山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS常
規(guī)培養(yǎng)。[0033]1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0034]研究藥物:本發(fā)明雙姜胃痛片:按實(shí)施例1方法制備。
[0035]藥液儲(chǔ)液:稱取IOOmg雙姜胃痛片，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0036]1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0037]DMEM(GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387) ；Trypsin (AMRESC0 公司);EDTA (AMRESC0 公司);Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司I) !Streptomycin Sulfate(AMRESCO);無水乙醇(溜博亞杜蘭經(jīng)貿(mào)有限公司)；MTT (Biosharp 批號:0793) =PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；
[0038]1.4實(shí)驗(yàn)器材
[0039]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DMIL);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRAMAX190) ;C02培養(yǎng)箱(MLTC-1RMA型號:3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號:ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號:SLGP033RB) ; Icm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0040]2.實(shí)驗(yàn)方法
[0041 ] I) MLTC-1 細(xì)胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm 培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X IO4個(gè)/ml。
[0042]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0043]3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至70%_70%，加入雙姜胃痛片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0044]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0045]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔如入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0046]6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0047]7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示:細(xì)胞增值抑制率(%)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)、對照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0048]3.統(tǒng)計(jì)處理
[0049]采用Microsoft Excel2007軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0050]4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0051]MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對MLTC-1細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0.05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0.01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(P〈0.001)。
[0052]表1雙姜胃痛片對MLTC-1細(xì)胞增殖抑制影響研究(X土 SD)
[0053]
【權(quán)利要求】
1.一種雙姜胃痛片的制備方法，由姜黃200g、紫色姜200g、地不容200g、石菖蒲200g、苦菜子200g作為原料藥制成，其特征在于，所述的制備方法由下列步驟組成:取上五味藥材，粉碎，加入5L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次5-10分鐘，合并萃取液，濃縮，加到Diaion HP-1O大孔吸附樹脂柱上，70%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，將微波提取物混合加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成500片，每片重0.3g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙姜胃痛片的制備方法，其特征在于，所述微波萃取功率為700W。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙姜胃痛片的制備方法，其特征在于，所述微波萃取每次萃取時(shí)間為8分鐘。
4.權(quán)利要求1所述的雙姜胃痛片在制備抑制小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞MLTC-1細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用 。
【文檔編號】A61P1/04GK103893685SQ201310654022
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2013年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月6日
【發(fā)明者】孫波 申請人:濟(jì)南新起點(diǎn)醫(yī)藥科技有限公司