一種有機金屬釕綴合蛋白及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種有機金屬釕綴合蛋白及其制備方法與應(yīng)用，該方法包括：在pH值為7-8且濃度為10-100mM的緩沖溶液中，將有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白進(jìn)行接觸，所述有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白的摩爾比為1-20：1，所述血清蛋白為氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示的血清白蛋白或氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的轉(zhuǎn)鐵蛋白。通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明獲得了靶向性強和抗腫瘤活性較高的有機金屬釕綴合蛋白，而且還為更進(jìn)一步理解有機金屬釕抗腫瘤藥物的轉(zhuǎn)運機制和分子作用機理、以及以血清蛋白為載體制備納米控釋型金屬抗腫瘤藥物提供了實驗和理論依據(jù)。
【專利說明】一種有機金屬釕綴合蛋白及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種有機金屬釕綴合蛋白及其制備方法與應(yīng)用，具體地，涉及一種由血清白蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白與有機金屬釕抗腫瘤藥物構(gòu)成的有機金屬釕綴合蛋白的制備方法以及由該方法制得的有機金屬釕綴合蛋白，以及所述有機金屬釕綴合蛋白在制備抗腫瘤藥物中的用途。

【背景技術(shù)】
[0002]順鉬及其它鉬類抗腫瘤藥物的成功應(yīng)用刺激了無機藥物化學(xué)的發(fā)展，因此人們把目光投向了其它過渡金屬化合物的藥物活性研究，其中釕基抗腫瘤藥物活性的研究最受矚目，有機金屬釕化合物[(n6_arene)Ru(en)Cl]PF6 (arene=苯的同系物；en=乙二胺)已被體內(nèi)體外實驗證實是一種有效的抗腫瘤候選藥物。
[0003]但是，目前的有機金屬釕化合物在體內(nèi)的靶向性和抗腫瘤活性仍然較低，還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床應(yīng)用的要求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種靶向性強和抗腫瘤活性高的由有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白形成的有機金屬釕綴合蛋白及其制備方法與應(yīng)用。
[0005]為了實現(xiàn)上述目的，一方面，本發(fā)明提供了一種有機金屬釕綴合蛋白的制備方法，該方法包括:在PH值為7-8且濃度為1-1OOmM的緩沖溶液中，將有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白進(jìn)行接觸，所述有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白的摩爾比為1-20:1，所述血清蛋白為氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的血清白蛋白或氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的轉(zhuǎn)鐵蛋白。
[0006]另一方面，本發(fā)明提供了由上述方法制得的有機金屬釕綴合蛋白。
[0007]再一方面，本發(fā)明還提供了上述方法制得的有機金屬釕綴合蛋白在制備抗腫瘤藥物中的用途。
[0008]通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明獲得了靶向性強和抗腫瘤活性較高的有機金屬釕綴合蛋白，而且還為更進(jìn)一步理解有機金屬釕抗腫瘤藥物的轉(zhuǎn)運機制和分子作用機理、以及以血清蛋白為載體制備納米控釋型金屬抗腫瘤藥物提供了實驗和理論依據(jù)。
[0009]特別地，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用本申請中氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的血清白蛋白或氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的轉(zhuǎn)鐵蛋白制得的有機金屬釕綴合蛋白的抗腫瘤活性明顯高于采用其他血清蛋白(如血紅蛋白)制得的有機金屬釕綴合蛋白的抗腫瘤活性。此外，本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，在相同的條件下，除有機金屬釕化合物以外的金屬抗腫瘤化合物(如順鉬)與血清蛋白接觸后并不能獲得靶向性強和抗腫瘤活性高的金屬藥物綴合蛋白。
[0010]本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的【具體實施方式】部分予以詳細(xì)說明。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]附圖是用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的【具體實施方式】一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中:
[0012]圖1為在激光共聚焦顯微鏡下觀察到的按照實施例1的方法制得的TMR-有機金屬釕綴合蛋白被MCF-7細(xì)胞攝取的結(jié)果圖，上圖為TMR-Tf (Tf=轉(zhuǎn)鐵蛋白)孵育后細(xì)胞中熒光標(biāo)記的蛋白攝取情況圖，下圖為經(jīng)按照實施例1的方法制得的TMR-Tf-6孵育后細(xì)胞中熒光標(biāo)記的有機金屬釘綴合蛋白的攝取情況圖；
[0013]圖2為實施例1制得的有機金屬釕綴合蛋白Tf-3和Tf-6以及對比例4制得的順鉬綴合蛋白(Tf-順鉬)的抑制活性曲線圖；
[0014]圖3為實施例2制得的有機金屬釕綴合蛋白HA-3和HA_5以及對比例4制得的順鉬綴合蛋白(HA-順鉬)(HA=血清白蛋白)的抑制活性曲線圖。

【具體實施方式】
[0015]以下對本發(fā)明的【具體實施方式】進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的【具體實施方式】僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0016]本發(fā)明提供的有機金屬釕綴合蛋白的制備方法包括:在pH值為7-8 (優(yōu)選為
7.2-7.5)且濃度為1-1OOmM (優(yōu)選為20_50mM)的緩沖溶液中，將有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白進(jìn)行接觸，所述有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白的摩爾比為1-20:1 (優(yōu)選為5-10:1)，所述血清蛋白為氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的血清白蛋白或氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的轉(zhuǎn)鐵蛋白。
[0017]本發(fā)明中，對所述接觸的條件沒有特別的限定，例如，所述接觸的條件可以包括接觸的溫度為30-40°C (優(yōu)選為35-37°C)，接觸的時間為24-72h (優(yōu)選為45_50h)。
[0018]本發(fā)明中，采用各個參數(shù)值中的至少一個偏離上述范圍的方案制得的有機金屬釕綴合蛋白比本發(fā)明方法制得的靶向性和抗腫瘤活性低得多，很難滿足臨床應(yīng)用的要求。而控制各參數(shù)值中的至少一個在上述優(yōu)選范圍內(nèi)時能進(jìn)一步提高有機金屬釕綴合蛋白的靶向性和/或抗腫瘤活性。
[0019]在本發(fā)明中，在未作相反說明的情況下，術(shù)語“轉(zhuǎn)鐵蛋白”可以指含鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白，也可以指不含鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白，但是，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，使用含鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白能夠獲得靶向性和/或抗腫瘤活性進(jìn)一步增強的有機金屬釕綴合蛋白。因此，本發(fā)明中的轉(zhuǎn)鐵蛋白優(yōu)選為含鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白。
[0020]本發(fā)明中，在未作相反說明的情況下，緩沖溶液的濃度指的是緩沖溶液中各個緩沖組分的總濃度。所述緩沖溶液可以為各種不會使血清蛋白變性的緩沖溶液，優(yōu)選地，所述緩沖溶液為三乙胺乙酸酯緩沖溶液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液和磷酸鹽緩沖溶液中的一種。本發(fā)明中的緩沖溶液可以通過商購獲得，也可以自行配制，配制的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，在此不再贅述。
[0021] 本發(fā)明中，所述有機金屬釕抗腫瘤藥物可以為本領(lǐng)域常用的具有抗腫瘤活性的有機金屬釕化合物，優(yōu)選情況下，所述有機金屬釕抗腫瘤藥物為式(I)所示的物質(zhì)(可以參見文獻(xiàn) “Morris, R.E.; Aird, R.E.;Murdoch, P.D.; Chen, H.Μ.; Cummings, J.; Hughes, N.D.; Parsons, S.; Parkin, A.;Boyd, G.; Jodrellj D.1.; Sadler, P.J.J.Med.Chem.2001，44，3616”和 “Wang, F.Y.; Habtemariam, A.; van der Geer, E.P.L.; Fernandez, R.; Melchart, M.;Deeth, R.J.; Aird, R.; Guichard, S.; Fabbiani, F.P.A.; Lozano-Casal, P.; Oswald, 1.D.H.;Jodrell,D.1.;Parsons, S.; Sadler, P.J.Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.2005，102，18269” 合成得到)。
[0022]式(I)中，A優(yōu)選為通式(2) - (8)所示結(jié)構(gòu)中的一種，其中，釕與A所示結(jié)構(gòu)中的苯環(huán)通過有機金屬(C-M)鍵配位，同時，釕與-NH2中的N通過配位鍵螯合。使用具有以下結(jié)構(gòu)式的有機金屬釕化合物作為有機金屬釕抗腫瘤藥物可以獲得具有更高抗腫瘤活性的有機金屬釘綴合蛋白。
[0023]

【權(quán)利要求】
1.一種有機金屬釕綴合蛋白的制備方法，其特征在于，該方法包括:在PH值為7-8且濃度為1-1OOmM的緩沖溶液中，將有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白進(jìn)行接觸，所述有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白的摩爾比為1-20:1，所述血清蛋白為氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示的血清白蛋白或氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的轉(zhuǎn)鐵蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述接觸的條件包括接觸的溫度為30-40°C，接觸的時間為24-72h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述有機金屬釕抗腫瘤藥物與血清蛋白的摩爾比為5-10:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述緩沖溶液的pH值為7.2-7.5，濃度為20_50mM。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的方法，其中，所述緩沖溶液為三乙胺乙酸酯緩沖溶液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液和磷酸鹽緩沖溶液中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述有機金屬釕抗腫瘤藥物為下式(I)所示的物質(zhì)，
式(I)中，A為通式(2) - (8)所示結(jié)構(gòu)中的一種，
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白為含鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述方法還包括將接觸后的產(chǎn)物通過超濾膜，所述超濾膜的截留分子量為lOkDa。
9.由權(quán)利要求1-8中任意一項所述的方法制得的有機金屬釕綴合蛋白。
10.權(quán)利要求9所述的有機金屬釕綴合蛋白在制備抗腫瘤藥物中的用途。
【文檔編號】A61K47/48GK104072607SQ201310109645
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2013年3月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月29日
【發(fā)明者】汪福意, 郭偉, 羅群, 李鮮嬋 申請人:中國科學(xué)院化學(xué)研究所