專利名稱：海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及海洋小球藻多糖的ー種用途，尤其是ー種海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，惡性腫瘤一癌癥已經(jīng)成為人類死亡的第一位或第二位原因。腫瘤不論是良性還是惡性，本質(zhì)上都表現(xiàn)為細(xì)胞的異常増殖，在惡性腫瘤中表現(xiàn)為對鄰近正常組織的侵犯及經(jīng)血管、淋巴管和體腔轉(zhuǎn)移到身體其它部位，即腫瘤轉(zhuǎn)移。浸潤和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學(xué)特征，也是腫瘤患者死亡的主要原因。現(xiàn)有研究認(rèn)為腫瘤的血管生成能力是腫瘤侵襲性的標(biāo)志，與腫瘤血管新生有關(guān)的分子很多，包括血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、成纖維
細(xì)胞生長因子(FGFs)、表皮生長因子(EGF)、血小板衍生生長因子(TOGF)、轉(zhuǎn)化生長因子3 (TGF P )、白介素 8 (interleukin 8, IL8)等。如文獻(xiàn)I闡述了 Folkman提出的“腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移都依賴于新生血管”的概念k又獻(xiàn)1. Folkman J. Angiogenesis in psoriasis: tnerapeutic implications. JInvest Dermatol 1972, 59 (I) :40.),并指出可以通過抑制腫瘤血管生成抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。腫瘤的血管生成能力被認(rèn)為是腫瘤侵襲性的標(biāo)志，豐富的血管網(wǎng)不僅為腫瘤細(xì)胞提供充足的氧氣、營養(yǎng)成分和腫瘤生長因子等，而且也是腫瘤轉(zhuǎn)移的通道。文獻(xiàn)2闡述了腫瘤血管生成的分子機(jī)制(文獻(xiàn)1. Patrick A, Sylvie L,Fr ederic LL, Andreas B. Molecular mechanisms of tumor vascularization.Critical Reviews in Oncology/Hematology 2005; 54: 53 - 61.)。腫瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生大量的生長因子，包括VEGF、FGF、TGF等，這些生長因子能夠通過一系列的信號傳導(dǎo)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、増殖和形成管狀結(jié)構(gòu)，最終形成新的血管。海洋小球藻屬于單細(xì)胞綠藻，其含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)、食物纖維、核酸及葉綠素等，是維持和促進(jìn)人體健康所不可缺少的營養(yǎng)素，特別是含有令人注目的生物活性物質(zhì)糖蛋白、多糖體以及高達(dá)13%的核酸等物質(zhì)，具有增強(qiáng)人體免疫、抑制血糖上升，降低血清膽固醇含量，排除毒素，迅速修復(fù)機(jī)體的損傷等功能。其中的海洋小球藻多糖是以海洋小球藻為原料，通過酸提法、堿提法、水提法及酶提法的提取物，再經(jīng)除蛋白、こ醇分級沉淀、柱層析等一系列步驟處理后而得到組分均一的多糖。海洋小球藻多糖經(jīng)高效陰離子液相色譜對其溶液進(jìn)行分析，表明組成多糖的單糖有D-巖藻糖、D-鼠李糖、D-2-氨基葡萄糖、D-半乳糖、D-葡萄糖和幾種未知的單糖。但迄今為止，還沒有關(guān)于以海洋小球藻多糖制備抑制腫瘤血管生成藥物的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)小球藻多糖具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的増殖和遷移作用，從而發(fā)明了小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是ー種海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應(yīng)用。所述海洋小球藻多糖在制備抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的増殖和遷移藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的海洋小球藻多糖原料來源豐富，成本低，所提取的海洋小球藻多糖在患處體液中的有效作用濃度為12. 5^200 W g ml—1時，對血管內(nèi)皮細(xì)胞的増殖和遷移有明顯抑制作用，因此，海洋小球藻多糖具有抑制腫瘤血管生成作用，可開發(fā)成抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物、保健食品及食品添加劑等。



圖1為不同濃度的海洋小球藻多糖對抑制腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移的作用示意圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明海洋小球藻多糖的具體制備過程為取小球藻干燥藻粉，加入10倍量水，經(jīng)閃式提取器破碎5 min后，采用索氏提取器提取2次，毎次2h，再經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮至原體積的1/3，得到水提取液；在水提取液中加入1:1的鹽酸調(diào)溶液pH為4-5，4500r/min離心15min,再用5mol/ml的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為8. 5-9,4500r/min離心15min,除去蛋白后，再經(jīng)80%こ醇進(jìn)行分級沉淀，得小球藻多糖，經(jīng)苯酚-硫酸法測得糖的含量> 70%。實(shí)驗(yàn)
參照又獻(xiàn)(Ant1-angiogenic activities of chitooligosaccharides, Haige Wu,Liang Yaoj Xuefang Baij Yuguang Duj Bmgcheng Lm, Carbonydrate Polymers, Volume73，Issue I, 4 July 2008, Pages 105-110)，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)的培養(yǎng)條件為在完全培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)液中添加10%小牛血清、100U/ml青霉素、100 p g/ml鏈霉素；37°C，通入CO2體積含量為5%的空氣培養(yǎng)。用人結(jié)腸癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、卵巣癌或乳腺癌細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液作為誘導(dǎo)因子；人結(jié)腸癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、卵巣或乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)條件為在完全培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)液中添加10%小牛血清、100U/ml青霉素、100 |l g/ml鏈霉素；37°C，通入CO2體積含量為5%的空氣培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)例1:
參照又獻(xiàn)(Ant1-angiogenic activities of chitooligosaccharides, Haige Wu,Ziang Yaoj Xuefang Baij Yuguang Duj Bingcheng Lin, Carbohydrate Polymers, M
(1),2008 :105-110),實(shí)驗(yàn)分為陰性對照組、陽性對照組和處理組(具體加藥情況見表I)。陰性對照組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)培養(yǎng)液200 Ii I ；
陽性對照組在180 Iil人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)培養(yǎng)液中加入20 Ii I上述腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液，使其濃度為10% ；
處理組1:在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)培養(yǎng)液中加入所提取的海洋小球藻多糖，使其終濃度分別達(dá)到12.5きg ml—1、50 Ug ml'lOO pg 11^1 200 Ug ml—1，最終總體積為200 Ii I ；
處理組2 :在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)培養(yǎng)液中加入20 p I上述腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液后，再分別加入海洋小球藻多糖溶液，使其終濃度分別為12. 5pg mr\50pg ml'lOOpg mr1及200 Pg mr1，最終總體積為200 p I。陰性對照組、陽性對照組、處理組I及處理組2均在5 % CO2的37で培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，加入5mg Hir1MTT試劑20 和200 u I DMS0，用酶標(biāo)儀檢測各組的細(xì)胞增殖狀況，結(jié)果如表2。表I
權(quán)利要求
1.一種海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應(yīng)用， 其特征在于所述海洋小球藻多糖在制備抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開一種海洋小球藻多糖在制備抑制腫瘤血管生成的藥物中的應(yīng)用。海洋小球藻多糖原料來源豐富，成本低，所提取的海洋小球藻多糖在患處體液中的有效作用濃度為12.5~200g·ml-1時，對血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移有明顯抑制作用，因此，海洋小球藻多糖具有抑制腫瘤血管生成作用，可開發(fā)成抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物、保健食品及食品添加劑等。
文檔編號A61P35/04GK103006684SQ20121058071
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日
發(fā)明者譚成玉, 李偉, 孔亮, 趙小霞, 孟繁桐 申請人:大連海洋大學(xué), 譚成玉