專利名稱：LXR激動劑刺激巨噬細胞干擾素γ表達、抑制腫瘤生長的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及L)(R調控巨噬細胞干擾素伽馬(interferon Y，IFN γ )在抑制腫瘤中發(fā)揮極大作用以及建立一種機理明確的預防和治療腫瘤的新途徑。
背景技術：
肺腫瘤是當前腫瘤治療的研究熱點之一，開且是目前處于死亡率首位的腫瘤，對其防治具有顯著的理論與應用價值。IFNy作為抗病毒感染、抗腫瘤的重要細胞因子，其表達調控一直被局限在T細胞和NK細胞中，并且如何調控IFN γ表達的組織、細胞特異性與相關信號通路并不明確。L)(R是近年來開展研究的一個重要轉錄因子，雖然L)(R在膽固醇與脂質代謝中的功能有較詳細的研究，但LXR是否在腫瘤、免疫系統(tǒng)中發(fā)揮功能尚不清晰。對 L)(R功能的研究基本上集中在巨噬細胞上。巨噬細胞是體內分布廣泛的細胞，由于抗感染、 抗病毒、增強免疫等方面的要求，巨噬細胞在肺部中非常豐富，理論上，巨噬細胞是否表達 IFNy及其調控一直是該領域的空白，在實際應用中，由于巨噬細胞分布的廣泛性和數(shù)量龐大，通過刺激巨噬細胞IFNy來抑制腫瘤的增長具有明顯的可行性。

發(fā)明內容
為了解決肺腫瘤的治療，本發(fā)明涉及L)(R調控巨噬細胞IFNy表達、抑制腫瘤生長的作用以及建立一種機理明確的預防和治療腫瘤的新途徑。本發(fā)明的目的之一是闡明LXR 激動劑抑制腫瘤生長的機理，并以此為基礎研究其預防和治療腫瘤的效果。本發(fā)明的有益效果是首先L)(R激動劑能夠刺激巨噬細胞IFN γ的表達，并且通過轉錄水平的單一信號通路調節(jié)，機理明確，而且巨噬細胞分布廣泛，尤其在肺部，通過刺激肺部巨噬細胞IFNy表達來抑制腫瘤的增長，從而達到預防和治療的目的。


附圖1 :LXR對IFN γ啟動子活性的刺激作用附圖2 :Τ0901317上調小鼠體內組織IFN γ的水平附圖3 =LXR激動劑Τ0901317抑制移植肺腫瘤細胞的體內生長
具體實施例方式1.測試L)(R激動劑對肺腫瘤的預防效果Α).我們將平行采用野生型小鼠和 IFN γ敲除小鼠，給小鼠喂食LXR激動劑7-10天，之后建立小鼠肺腫瘤模型，在此期間持續(xù)給藥，每天觀察小鼠的腫瘤體積和生長情況，測試控制組和給藥組之間的差別。并且通過 IFNy敲除小鼠組判斷其預防腫瘤的效果與IFNy之間的關系。B).對不同組的小鼠進行血清中IFNy濃度檢測，觀察IFNY濃度變化與腫瘤生長狀況之間的關系。依據(jù)我們前期對野生小鼠的實驗結果觀察發(fā)現(xiàn)，在腫瘤移植1周后出現(xiàn)可測腫瘤，在腫瘤出現(xiàn)后的3-4周， 半數(shù)小鼠將陸續(xù)死亡。因此，對移植腫瘤模型鼠，在給約3-4周左右對存活的部分小鼠終止實驗，收集腫瘤、組織、血液等樣本，分析野生小鼠血清中IFNy濃度，對組織、腫瘤等進行切片、免疫組化分析，觀察腫瘤的內部結構的變化。其余的存活部分小鼠則持續(xù)給藥觀察能否延長生命、改善由腫瘤造成的各種損害。而采用致癌劑誘導的肺腫瘤出現(xiàn)并導致死亡則一方面需要更長的時間(18-M周)，另一方面則是腫瘤塊出現(xiàn)在肺部，無法目測，采用活體成像技術來檢測肺腫瘤出現(xiàn)的時間、大小等。在實驗進行到18周左右，將對部分存活小鼠終止實驗，通過對樣本的收集、分析，確定L)(R激動劑對致癌劑誘導的肺腫瘤預防效果，并比較野生小鼠與IFNy敲除小鼠之間的差異，從而確定預防效果對IFNY的依賴性。余下的存活小鼠則持續(xù)給藥，進一步地觀察更長時期的預防效果。 2.測試LXR激動劑對肺腫瘤的治療效果，分別采用早、中、晚期階段進行。腫瘤細胞在移植1周后出現(xiàn)可測腫瘤塊，2周之后腫瘤增長明顯加快，4周左右過半數(shù)小鼠死亡；而致癌物誘導的肺腫瘤則在16周左右出現(xiàn)，而出現(xiàn)死亡則在M周左右。因此，早、中、晚期將依據(jù)于模型而變動。對移植型，我們擬采用腫瘤細胞移植后1周、2周和3周開始給藥。對致癌物誘導型則在致癌物注射后的10周、15周和20周左右開始給藥。在給藥前后分別通過用卡尺測量和活體成像技術對移植型和誘導型腫瘤的出現(xiàn)、增長進行詳細的觀察、記錄。 實驗分別在4周和M周結束，結束前對部分存活小鼠進行血清中IFNy量的檢測，并與腫瘤生長相關聯(lián)，對于實驗結束前死亡的小鼠進行組織取樣、免疫組化分析等，以確定藥物功效和對IFN γ表達的刺激作用。
權利要求
1.1^1 激動劑調控巨噬細胞正^^^抑制腫瘤生長的作用特征在于L)(R激動劑能夠上調巨噬細胞IFN γ的表達，并且這種上調是在轉錄水平上發(fā)揮作用。巨噬細胞作為抗感染、腫瘤最前沿細胞，廣泛分布于體內且產生可控。以此為基礎建立了一種機理明確的預防和治療腫瘤的新途徑；
2.根據(jù)權利要求書1所述本發(fā)明所形成的預防和治療腫瘤的新途徑；
3.根據(jù)權利要求書1所述本發(fā)明所形成的預防和治療腫瘤的機理。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療腫瘤的新方法。IFNγ是抗病毒、抗腫瘤的重要細胞因子，LXR是配體激活轉錄分子。我們的研究中發(fā)現(xiàn)肝X受體(liver X receptor)激動劑刺激巨噬細胞IFNγ抑制腫瘤增長。因此，我們認為肝X受體調控巨噬細胞IFNγ表達。巨噬細胞分布廣、數(shù)量大。因此，LXR調控巨噬細胞IFNγ表達將在抑制腫瘤中發(fā)揮極大作用，從而建立一種機理明確的預防和治療腫瘤的新途徑。
文檔編號A61K45/00GK102274512SQ20111009983
公開日2011年12月14日 申請日期2011年4月21日 優(yōu)先權日2011年4月21日
發(fā)明者李小菊, 段亞君, 王琦雪, 陳元利, 韓際宏, 馬醒哲 申請人:南開大學