專利名稱：惡性腫瘤磁熱療用納米靶向藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種惡性腫瘤磁熱療用納米靶向藥物及其制備方法與應(yīng)用，即一種高產(chǎn)熱比功率的惡性腫瘤磁熱療用的納米磁粉-抗體/配體靶向藥物及納米磁粉磁性靶向藥物。
背景技術(shù)：
2000年全球新發(fā)惡性腫瘤病例約1000萬，死亡620萬，現(xiàn)患病例2200萬。預(yù)計(jì)2020年惡性腫瘤新發(fā)病例將達(dá)到1500萬，死亡1000萬，現(xiàn)患病例3000萬。惡性腫瘤正在成為新世紀(jì)人類第一殺手，對(duì)全球社會(huì)經(jīng)濟(jì)將會(huì)造成巨大損失，開展惡性腫瘤新型藥物和治療新方法的研究具有十分重大的意義。
傳統(tǒng)的惡性腫瘤治療方法主要是手術(shù)、放療和化療。通常只有10％-20％的惡性腫瘤病人有機(jī)會(huì)手術(shù)，并且手術(shù)易給病人帶來較大的痛苦，術(shù)后容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移；而放療和化療靶向不明確，在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也破壞正常細(xì)胞，毒副作用較大。近些年，由于具有高效、低毒、副作用小等特點(diǎn)的靶向藥物的出現(xiàn)，抗體和配體偶聯(lián)放射核素、毒素、化療藥物、前體藥物等效應(yīng)分子的靶向藥物已成為廣泛研究與應(yīng)用的抗腫瘤的新藥物和惡性腫瘤治療的新手段，抗體和配體等靶向藥物的研究與應(yīng)用為惡性腫瘤的治療和預(yù)防提供了新的機(jī)遇和效果。但是，上述靶向藥物中抗體或配體等偶聯(lián)的放射核素、毒素、化學(xué)藥物、前體藥物等效應(yīng)分子仍然具有較強(qiáng)的毒副作用和在臨床應(yīng)用上有明顯地局限性等缺陷，惡性腫瘤治療用靶向藥物需要無毒副作用的新型效應(yīng)分子。
惡性腫瘤磁熱療是一種利用如下四種物理和生物等效應(yīng)，即(1)磁熱種子(即磁性顆粒或材料，如納米磁粉)可以感應(yīng)體外交變磁場產(chǎn)生磁熱效應(yīng)；(2)惡性腫瘤的血流量只有正常組織的10％～15％，加熱腫瘤后腫瘤周圍正常組織血流加速、散熱快、溫升小，而腫瘤內(nèi)散熱困難、溫度可高于周圍正常組織5℃～10℃；(3)正常細(xì)胞48℃以上死亡，惡性腫瘤細(xì)胞大于42℃死亡，腫瘤細(xì)胞耐熱性差；(4)較低頻率的交變磁場在人體組織中穿透性好、不衰減、不損傷正常組織、可以安全有效地到達(dá)深部和大體積的腫瘤內(nèi)部；使導(dǎo)入腫瘤病灶的磁熱種子在磁熱療治療儀的交變磁場作用下產(chǎn)生磁滯生熱效應(yīng)、加熱惡性腫瘤至42℃～48℃，而正常組織基本不升溫，實(shí)現(xiàn)精確定位和無毒副作用的選擇性殺滅惡性腫瘤的熱療新方法。近幾年，大量的動(dòng)物試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)研究成果證明，應(yīng)用磁熱療治療惡性腫瘤不僅可以有效殺滅腫瘤，使腫瘤完全消退，并且沒有毒副作用。磁熱療是一種具有廣闊應(yīng)用前景的腫瘤治療新方法，它的出現(xiàn)為惡性腫瘤的安全治愈提供了希望。大量的研究結(jié)果證明，磁熱療中的磁熱種子是一種無毒副作用的靶向藥物物理效應(yīng)分子。但迄今為止，磁熱療中磁熱種子仍需通過埋植、局部注射等方式導(dǎo)入腫瘤病灶，尚未見將抗體或配體與磁熱種子(即納米磁粉)偶聯(lián)制成磁熱療用主動(dòng)靶向藥物和利用磁熱種子的磁性性能制成磁熱療用磁性靶向藥物并利用藥物的主動(dòng)、磁性靶向功能使藥物靶向?qū)肽[瘤病灶、用于惡性腫瘤磁熱療治療的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足之處提供一種納米靶向藥物，即一種高發(fā)熱能力的惡性腫瘤磁熱療用納米磁粉-抗體靶向藥物、納米磁粉-配體靶向藥物以及納米磁粉磁性靶向藥物，也就是具有高產(chǎn)熱比功率或能量吸收率(SAR，specific absorption rate)的惡性腫瘤磁熱療用的抗體介導(dǎo)、受體介導(dǎo)的納米磁粉靶向藥物和磁性導(dǎo)向的納米磁粉磁性靶向藥物。
本發(fā)明提供的納米磁粉納米靶向藥物(包括納米磁粉-抗體納米靶向藥物和納米磁粉-配體靶向藥物)是指將導(dǎo)向分子(如抗體或配體)與納米磁粉(即磁熱種子)偶聯(lián)制成的主動(dòng)靶向藥物，納米磁粉納米靶向藥物也是指納米磁粉經(jīng)過表面改性修飾或包被包裹被制成的磁熱療用磁性靶向藥物，并且所用納米磁粉SAR為10～7000W/gFe，特別是500～7000W/gFe。
本發(fā)明是采取以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供一種惡性腫瘤磁熱療用納米靶向藥物，其中包括質(zhì)量配比為1∶0.0001～0.20的效應(yīng)分子和導(dǎo)向分子，所述的效應(yīng)分子為納米磁粉，該磁粉粒徑不超過1000nm，熱吸收比率SAR為10～7000W/gFe，所述的導(dǎo)向分子包括抗體和配體，該靶向藥物的粒徑為2～1000nm。
上述惡性腫瘤磁熱療用納米靶向藥物，其以所述的納米磁粉與抗體或配體通過溶液混合偶聯(lián)制成的偶聯(lián)物構(gòu)成，其中的納米磁粉是經(jīng)過表面改性修飾或包被包裹制成的磁性顆粒，也可以是未處理的裸納米磁粉，偶聯(lián)物中納米磁粉與抗體或配體的質(zhì)量配比為1∶0.0001～0.20，偶聯(lián)物的納米磁粉表面至少偶聯(lián)1個(gè)抗體或配體、也可偶聯(lián)多個(gè)抗體或配體；偶聯(lián)物顆粒的粒徑為2～1000nm，其保留有偶聯(lián)抗體或配體的生物活性，具有抗體介導(dǎo)或受體介導(dǎo)主動(dòng)靶向功能、磁性靶向功能和納米顆粒被動(dòng)靶向功能。
本發(fā)明的惡性腫瘤磁熱療用納米磁粉磁性靶向藥物主要是由納米磁粉經(jīng)過表面改性、修飾或包被、包裹或未經(jīng)處理的裸納米磁粉制成的磁性顆粒構(gòu)成。經(jīng)過表面改性修、飾或包被、包裹的磁性顆粒中納米磁粉與表面改性修飾物的質(zhì)量配比為1∶0.0001～0.20，納米磁粉與表面包被、包裹物的質(zhì)量配比為1∶0.01～5.0，改性、修飾或包被、包裹磁性顆粒的粒徑為2～1000nm，其具有磁性靶向功能和納米顆粒被動(dòng)靶向功能。
本發(fā)明的靶向藥物粒徑優(yōu)選2-400nm。當(dāng)藥物粒徑小于100nm時(shí)，納米靶向藥物具有良好的體內(nèi)血液長循環(huán)穩(wěn)定性能并可有效利用腫瘤的EPR效應(yīng)(enhancing permeability andretention effects)，通常靶向藥物粒徑以小于100nm為宜。
上述偶聯(lián)物或磁性顆粒與溶液混合制成納米靶向藥物，該溶液包括復(fù)合溶媒和/或水(優(yōu)選去離子水)。所述的納米靶向藥物以注射劑為主，在注射液中可以使藥物保持良好的分散性和穩(wěn)定性、具有良好的穿透性和與惡性腫瘤細(xì)胞抗原或受體良好的特異性和親和性。其在體內(nèi)外應(yīng)用均具有良好的靶向作用，且與正常細(xì)胞無交叉反應(yīng)。
本發(fā)明的納米靶向藥物通過動(dòng)靜脈注射、腹腔注射或直接(包括微創(chuàng)、介入、注射等)導(dǎo)入等途徑給藥，其可高倍濃聚定位在與抗體或配體具有較高特異性和親和性的惡性腫瘤病灶部位，還可高倍濃聚定位在內(nèi)或外置放磁鐵的惡性腫瘤病灶部位，表現(xiàn)出主動(dòng)靶向功能和磁性靶向功能；在磁熱療治療儀交變磁場的作用下，高倍濃聚定位腫瘤病灶部位的藥物中的納米磁粉由于磁熱效應(yīng)使腫瘤加熱至42～48℃、以及48℃以上，對(duì)腫瘤實(shí)施靶向溫?zé)岷透邿岽艧岑熤委熀皖A(yù)防，可以有效地殺滅癌細(xì)胞，治愈惡性腫瘤。為了便于儲(chǔ)存，本發(fā)明的納米靶向藥物也可制成固體或粉末狀藥物粉體的形式。
由于靶向藥物粒徑小于100nm時(shí)，納米靶向藥物具有良好的體內(nèi)血液長循環(huán)穩(wěn)定性能并可有效利用腫瘤的EPR效應(yīng)，本發(fā)明所用的納米磁粉的顆粒粒徑優(yōu)選為1～400nm，更優(yōu)選以小于100nm為宜。納米磁粉包括鐵磁性、亞鐵磁性和超順磁性納米磁粉，如Fe2O3、Fe3O4、Fe等鐵磁性、亞鐵磁性納米磁粉，及粒徑小于臨界尺寸的Fe2O3、Fe3O4、Fe等超順磁性納米磁粉。
上述的納米磁粉優(yōu)選經(jīng)過表面改性、修飾或包被、包裹，尤其是指納米磁粉表面經(jīng)過表面活性劑/表面改性劑改性、修飾或被有機(jī)物質(zhì)/無機(jī)物質(zhì)包被、包裹，納米磁粉表面可以經(jīng)過1次或多次表面活性劑、表面改性劑改性、修飾或有機(jī)物質(zhì)包被、包裹，目的是使納米磁粉具有功能化的表面，如陰離子化表面、陽離子化表面、非離子化表面，或氨基化表面、巰基化表面、羥基化表面、羧基化表面、或表面性能相親的聚合物表面、生物大分子表面、無機(jī)物質(zhì)表面，也即能與抗體、配體通過小分子、大分子或直接結(jié)合，利用靜電力、疏水作用、共價(jià)健、范德華力、近程排斥力以及吸附等作用形成偶聯(lián)的功能化表面，其中的表面活性劑和表面改性包括十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、油酸鈉、正癸酸、聚乙二醇(PEG)、葡聚糖、多聚谷氨酸、羧甲基葡聚糖或氨基葡聚糖、右旋糖酐、鐵銨(DF)、乙二胺、二乙三胺五乙酸(DTPA)、肼基煙酸胺(HYNIC)、核苷酸、多肽，偶聯(lián)劑包括3-氨基丙基-三甲基氧基硅烷、氨丙基三甲基硅烷、γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷等中的任一或組合，也可以選用其它納米磁粉表面改性修飾劑，納米磁粉與表面活性劑或表面改性劑的質(zhì)量配比為1∶0.0001～0.20；有機(jī)物質(zhì)包括脂質(zhì)體、聚乳酸、聚已內(nèi)酯、殼聚糖或蛋白質(zhì)等中的任一或組合，無機(jī)物質(zhì)為二氧化硅、氧化鋁或金等中的任一或組合，或有機(jī)物質(zhì)和無機(jī)物質(zhì)組合，納米磁粉與有機(jī)/無極物質(zhì)的質(zhì)量比為1∶0.01～5.0；也可以選用其它有機(jī)物質(zhì)或無機(jī)物質(zhì)，以及有機(jī)物質(zhì)和無機(jī)物質(zhì)任一或組合。
所述的抗體為針對(duì)腫瘤特異性抗原及腫瘤相關(guān)抗原、獨(dú)特型決定簇、某些細(xì)胞因子的受體、激素及一些瘤基因的產(chǎn)物為相關(guān)靶分子的各種抗體，包括異源多克隆抗體、免疫血與細(xì)胞工程相結(jié)合產(chǎn)生的鼠源單克隆抗體(McAb)和/或免疫學(xué)與細(xì)胞工程相結(jié)合產(chǎn)生的人源單克隆抗體(McAb)，如單鏈抗體(ScFv)、多價(jià)微型抗體、單區(qū)抗體、人源化抗體和人源抗體等，其中分子量較小、特異性和親和力較高的抗體Fab片段或基因工程抗體等抗體在免疫原性、穿透性以及各種水解酶的抵抗力方面都優(yōu)于常規(guī)的單抗，其比常規(guī)的單抗更易穿透到達(dá)腫瘤部位。抗體選自抗CEA(carcinoembryonic antigen)、AFP(alpha-fetoprotein)、CA19-9(carbohydrate antigen 19-9)、CA125(cancer antigen 125)、PSA(prostate soecificantigen)、hCG(hunan chorionic gonadotropin)、Trigen、TheraCIMh-R3、Smart ID10、Vitaxin、4B5、SS1(dsFv)PE38、ABX-EGF、BrevaRex、CA15-3、PAP、CA50、SCC、β2M(β2-microglobulin)、Rituxan、anti-VEGF、epratuzmab、NSE(neuro-specific enolase)、HER2和TPA(tissue polypeptide antigen)抗體以及抗人肝癌單克隆抗體HAb18(humanizedantibody 18)中任一或其組合，也可以選用其它抗體。
所述的配體包括葉酸配體、轉(zhuǎn)鐵蛋白、糖類配體、多肽(如抗體片段)、核酸、激素以及其它內(nèi)源分子等，其中葉酸配體包括葉酸、亞葉酸、二氫葉酸、四氫葉酸、四氫蝶呤、蝶呤酰多谷酸、2-去氨基-羥基葉酸、1-去氨基-羥基葉酸、1去氮葉酸、3-去氮葉酸、8-去氮葉酸、5-甲基四氫葉酸(5-CH3H4folate)、5-甲酰基四氫葉酸(5-CHOH4folate)、抗葉酸劑氨甲喋呤(methotrexate，MTX)和5，10-亞甲基四氫葉酸(5，10-CHH folate，DDATHF)等中的一種中任一或其組合、也可以選用其它配體。
所述的抗體與納米磁粉偶連是指抗體直接交聯(lián)法，藥物通過小分子與抗體連接的戊二醛法、順烏頭酸酐法、活性酯法、N-琥珀酰胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸法(SPDP法)、琥珀酸酐、馬來酸酐、戊二酐、肼、寡肽、腙衍生物法和肽健連接法等，大分子如葡聚糖、聚谷氨酸、羧甲基葡聚糖、氨基葡聚糖和聚合多肽載體等作載體的間接結(jié)合交聯(lián)法。
所述配體與納米磁粉偶聯(lián)是指配體通過小分子、大分子或直接結(jié)合形成的吸附型偶聯(lián)和共價(jià)偶聯(lián)，如抗生物素蛋白-生物素反應(yīng)偶聯(lián)、以酰氨健偶聯(lián)的配體-納米顆粒偶聯(lián)、以硫醚健偶聯(lián)的配體-納米顆粒偶聯(lián)，以Schiff健偶聯(lián)的配體-納米顆粒偶聯(lián)。
所述的葉酸偶聯(lián)通常需要配基鐵銨(DF)、二乙三胺五乙酸(DTPA)和肼基煙酸胺(HYNIC)，這些配基本身帶有氨基或羧基；偶聯(lián)是利用配基中的氨基跟葉酸中的羧基反應(yīng)，配基起雙功能螯合劑作用，把葉酸和其它連接起來；配基中沒有氨基的，葉酸分子中需要連接乙二胺或聯(lián)胺手臂。
所述的通過溶液混合偶聯(lián)為在水或有機(jī)和無機(jī)物(如乙醇、醋酸、甲苯、磷酸、二亞甲砜)及其混合溶液中偶聯(lián)。
所述的靶向藥物在注射劑中為納米顆粒狀態(tài)是為了使靶向藥物具有良好的穿透性，并且具有與相關(guān)腫瘤細(xì)胞良好的特異性和親和性。該靶向藥物通過注射使其主動(dòng)靶向及高倍濃聚定位在惡性腫瘤病灶周圍，在該病灶的濃度是正常組織血液中藥物濃度的1～1000倍，其在磁熱療治療儀的交變磁場作用下納米磁粉SAR為10-7000W/gFe，其中納米磁粉SAR以501～7000W/gFe為宜。
本發(fā)明所述的納米磁粉靶向藥物注射劑，包括靶向藥物偶聯(lián)后制成的注射劑和臨用前用靶向藥物干燥固體粉體配制的注射劑。
所述的復(fù)合溶媒或水(優(yōu)選去離子水)的靶向藥物注射劑為靶向藥物分散在生理鹽水、磷酸鹽緩沖液(PBS)、聚乙二醇、核苷酸等有無機(jī)、有機(jī)、生物、非生物物質(zhì)的復(fù)合溶媒中的制劑或藥物在水、去離子水中的制劑，靶向藥物與復(fù)合溶媒或水的重量比為1∶0.5～100，溶媒中溶質(zhì)與水重量比不超過1∶5。
本發(fā)明人提出了把納米磁粉作為一種抗體靶向藥物的無毒副作用物理效應(yīng)分子的新概念，同時(shí)提出了以納米磁粉為效應(yīng)分子、以抗體或配體為靶向?qū)蚍肿优悸?lián)制備納米磁粉-抗體或配體納米靶向藥物，用于惡性腫瘤靶向磁熱療的新策略，即一種將納米磁粉與抗體偶聯(lián)制成惡性腫瘤磁熱療用靶向藥物、用于通過靜動(dòng)脈或腹腔注射使靶向藥物主動(dòng)靶向濃聚定位在腫瘤病灶，并且在體外磁熱療治療儀交變磁場的作用下，濃聚病灶的的納米磁粉產(chǎn)生磁滯生熱效應(yīng)使腫瘤加熱至42～48℃以及48℃以上，而正常組織基本不升溫，選擇性殺滅惡性腫瘤，實(shí)現(xiàn)惡性腫瘤高效殺滅、安全無毒副作用的靶向磁熱療治療和預(yù)防的新策略。同時(shí)，開發(fā)了SAR可達(dá)7000W/gFe的納米磁粉制備技術(shù)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，應(yīng)用本發(fā)明納米靶向藥物靶向磁熱療可以完全治愈惡性腫瘤，且無毒副作用。
本發(fā)明的靶向藥物是由抗體與不同粒徑的納米磁粉偶聯(lián)構(gòu)成的納米顆粒藥物，由于藥物實(shí)現(xiàn)了納米化，其在體內(nèi)具有良好的穿透性、生物相容性、在血液中具有長循環(huán)穩(wěn)定性，使它不僅具有抗體導(dǎo)向的主動(dòng)靶向功能，而且具有載磁藥物的磁性靶向功能和利用腫瘤的EPR效應(yīng)的納米藥物顆粒的被動(dòng)靶向功能，是一種具有主動(dòng)靶向功能和多種其它靶向功能的復(fù)合靶向藥物。
本發(fā)明的靶向藥物中的抗體Fab片段、基因工程抗體，由于其分子量較小，比常規(guī)的單抗更易穿透到達(dá)腫瘤部位。采用分子量較小、特異性和親和力較高的抗體構(gòu)成的磁熱療用納米磁粉-抗體靶向藥物具有更好的穿透功能和靶向功能。
本發(fā)明的靶向藥物以納米磁粉為磁熱療用磁熱種子、抗體和配體為導(dǎo)向分子，其中的納米磁粉可以通過動(dòng)靜脈或腹腔注射或?qū)氲冉o藥途徑，在抗體和配體的導(dǎo)向等靶向功能和磁性靶向功能作用下，實(shí)現(xiàn)藥物主動(dòng)靶向和磁性靶向濃聚定位在腫瘤的病灶部位，在磁熱療治療儀交變磁場的作用下，患者病灶的納米磁粉可產(chǎn)生顯著的磁滯生熱效應(yīng)，使腫瘤病灶迅速升溫至42～95℃，對(duì)腫瘤進(jìn)行42～48℃的磁熱療治療，也可以進(jìn)行高于48℃的磁熱療治療。
本發(fā)明的磁熱療用靶向藥物的應(yīng)用通?？梢酝ㄟ^1次1小時(shí)以及1小時(shí)以上的磁熱療有效殺滅與抗體具有較高特異性和親和性的惡性腫瘤，甚至使腫瘤完全消退；也可以通過多次1小時(shí)以及1小時(shí)以上的磁熱療有效殺滅與抗體具有較高特異性和親和性的惡性腫瘤，甚至使腫瘤完全消退，通常治療用藥物劑量小于100mg。
本發(fā)明的靶向藥物不僅可以用于與抗體具有較高特異性和親和性的惡性腫瘤的靶向磁熱療治療，而且可以用于與抗體具有較高特異性和親和性的惡性腫瘤靶向磁熱療預(yù)防，即可以用于已經(jīng)檢測到的和未檢測到的惡性腫瘤的主動(dòng)靶向磁熱療治療，僅有極小的惡性腫瘤且影象設(shè)備無法檢測到的早期惡性腫瘤的主動(dòng)靶向磁熱療治療，僅有幾個(gè)細(xì)胞時(shí)的早期惡性腫瘤的主動(dòng)靶向磁熱療治療，轉(zhuǎn)移惡性腫瘤細(xì)胞和癌栓的主動(dòng)靶向磁熱療殺滅治療，以及正常人定期和不定期地進(jìn)行惡性腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向磁熱療殺滅的預(yù)防性治療。
本發(fā)明還提供了納米磁粉靶向藥物的制備方法，包括將質(zhì)量配比為1∶0.0001～0.20的磁粉和導(dǎo)向分子在包括水或有機(jī)物質(zhì)乙醇、醋酸、甲苯、二亞甲砜或無機(jī)物質(zhì)磷酸或其混合溶液的溶液中偶聯(lián)得到；優(yōu)選先將所述的磁粉用上述表面活性劑和/或表面改性劑以1∶0.0001～0.20重量比例處理，再與導(dǎo)向分子在上述溶液中混合偶聯(lián)。
本發(fā)明還提供了上述納米磁粉靶向藥物在制備治療和預(yù)防腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的納米靶向藥物具有如下特點(diǎn)(1)納米磁粉-抗體和配體主動(dòng)靶向藥物是以納米磁粉為效應(yīng)分子的抗體介導(dǎo)或受體介導(dǎo)主動(dòng)靶向磁熱療納米藥物，具有主動(dòng)靶向功能、磁性藥物的磁性靶向功能和納米載體藥物的被動(dòng)靶向功能，其中所述的抗體或配體為本發(fā)明的導(dǎo)向分子；(2)納米磁粉磁性靶向藥物是以具有良好的體內(nèi)生物相容性的納米磁粉為效應(yīng)分子的磁性導(dǎo)向的磁性靶向磁熱療納米藥物；(3)靶向藥物中不僅選用SAR為10～500W/gFe的納米磁粉，而且選用的磁粉SAR可以高達(dá)500～7000W/gFe，盡管SAR為10～500W/gFe和500～7000W/gFe的納米磁粉制成的靶向藥物都可以用于腫瘤磁熱療納米靶向藥物，但若用于需要12W熱能加熱的5×6×7cm腦瘤磁熱療治療，則理論上腫瘤病灶分別需要10、500和7000W/gFe的磁粉1.2、0.024、0.0017g，考慮鐵和氧化鐵的密度分別約為7.9和5.25g/cm3，腦瘤磁熱療理論上需要的磁粉體積以鐵和氧化鐵計(jì)分別約為150、3、0.22μl和230、4.6、0.32μl，500～7000W/gFe的納米磁粉制成的納米靶向藥物用于治療時(shí)需要的納米磁粉或納米靶向藥物更少，具有更高的臨床實(shí)用性能和經(jīng)濟(jì)價(jià)值；(4)藥物中的納米磁粉對(duì)人體或者動(dòng)物體無毒副作用，可在人或者動(dòng)物體內(nèi)降解，用于惡性腫瘤靶向磁熱療治療和預(yù)防安全無毒副作用；(5)納米尺寸的納米磁粉-抗體、配體靶向藥物以及納米磁粉磁性靶向藥物具有良好的穿透性，可以通過動(dòng)靜脈注射、腹腔注射、或直接(包括微創(chuàng)、介入、注射等)導(dǎo)入等給藥途徑使藥物主動(dòng)靶向或磁性靶向濃聚定位在惡性腫瘤病灶；(6)將本發(fā)明惡性腫瘤磁熱療用納米靶向藥物應(yīng)用于惡性腫瘤主動(dòng)靶向或磁性靶向磁熱療治療和預(yù)防，可以完全殺滅惡性腫瘤和癌細(xì)胞，為惡性腫瘤的治療和預(yù)防提供一種靶向磁熱療完全治愈、安全無毒副作用的新手段。
具體實(shí)施例方式
為了更清晰說明發(fā)明目的和技術(shù)方案，借助下述實(shí)施例進(jìn)一步詳述。
實(shí)施例1將粒徑分布范圍為1～5nm、10～20nm和20～40nm、50～100nm、350～390nm或950nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與油酸鈉質(zhì)量配比分別為1∶0.0001、1∶0.05、1∶0.20的油酸鈉水溶液中，超聲混合10min，置入85℃水浴中600r/min攪拌8小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得油酸鈉改性的納米磁粉。
實(shí)施例2將粒徑分布范圍為5～10nm、50～100nm、200～300nm或950nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與正癸酸質(zhì)量配比分別為1∶0.0001、1∶0.01、1∶0.20的正癸酸水溶液中，超聲混合10min，置入70℃水浴中1000r/min攪拌6小時(shí)，經(jīng)過離心除上清，用去離子水充分洗滌，制得正癸酸改性的納米磁粉。
實(shí)施例3將粒徑分布范圍為30～50nm、40～80nm、50～100nm或250～350nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與十二烷基硫酸鈉質(zhì)量配比分別為1∶0.0001、1∶0.01、1∶0.20的十二烷基硫酸鈉水溶液中，超聲混合10min，置入80℃水浴中800r/min攪拌1小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得十二烷基硫酸鈉改性的納米磁粉。
實(shí)施例4將粒徑分布范圍為1～5nm、10～20nm、20～40nm、40～80nm或150～200nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與十二烷基苯磺酸鈉質(zhì)量配比分別為1∶0.0001、1∶0.01、1∶0.20的十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，超聲混合10min，置入85℃水浴中500r/min攪拌1小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得十二烷基苯磺酸鈉改性的納米磁粉。
實(shí)施例5將上述實(shí)施例1、2、3中改性納米磁粉分別加入納米磁粉與十二烷基苯磺酸鈉質(zhì)量配比分別為1∶0.01、1∶0.10、1∶0.20的十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，超聲混合10min，置入85℃水浴中1000r/min攪拌1小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得油酸與十二烷基苯磺酸鈉、正癸酸與十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉與十二烷基苯磺酸鈉層雙分子層改性的納米磁粉。
實(shí)施例6將粒徑分布范圍為1～5nm、10～20nm、20～40nm、40～80nm、350～390nm或950nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與右旋糖酐(WM10000)質(zhì)量配比分別為1∶0.01、1∶0.50、1∶1.00、1∶2.00、1∶5.0的右旋糖酐水溶液中，超聲混合10min，置入70℃水浴中1000r/min攪拌1小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得右旋糖酐包被的納米磁粉。
實(shí)施例7將粒徑分布范圍為1～5nm、10～20nm、20～40nm、40～80nm或350～390nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與葡聚糖40000或20000質(zhì)量配比分別為1∶0.01、1∶0.50、1∶1.00、1∶2.00、1∶5.0的葡聚糖水溶液中，超聲混合10min，置入70℃水浴中1000r/min攪拌1小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得葡聚糖包被的納米磁粉。
實(shí)施例8將粒徑分布范圍為1～5nm、10～20nm、20～40nm、40～80nm、350～390nm或950nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與人血清白蛋白質(zhì)量配比分別為1∶0.05、1∶0.20、1∶1.00的人白蛋白水溶液中，超聲混合10min，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得人血清白蛋白包被的納米磁粉。
實(shí)施例9將粒徑分布范圍為1～5nm、10～20nm、20～40nm、40～80nm、350～390nm或950nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與殼聚糖質(zhì)量配比分別為1∶0.05、1∶0.20、1∶1.00的殼聚糖水溶液中，超聲混合10min，置入70℃水浴中800r/min攪拌1小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得殼聚糖包被的納米磁粉。
實(shí)施例10將粒徑分布范圍為1～5nm、10～20nm、20～40nm、40～80nm或350～390nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉分別加入納米磁粉與聚乙二醇2000、4000、6000、20000質(zhì)量配比為1∶0.05、1∶0.20、1∶0.50、1∶1.00的聚乙二醇水溶液中，超聲混合10min，置入80℃水浴中500r/min攪拌10小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制得聚乙二醇修飾的納米磁粉。
實(shí)施例11配制摩爾比2∶1的大豆卵磷脂、膽固醇的乙醇溶液，用注射器將乙醇溶液快速注入到含有1～5nm、10～20nm、20～40nm、40～80nm或350～390nm的Fe2O3或Fe3O4或Fe納米磁粉的磷酸鹽緩沖溶液中，分別在300、400、600rpm和40℃下攪拌30分鐘除去乙醇，離心除去未被包裹的磁粉和未包裹磁粉的脂質(zhì)體，制得脂質(zhì)體包裹的納米磁粉。若選用粒徑小于40nm的納米磁粉，則可制得平均粒徑小于50nm的脂質(zhì)體包裹納米磁粉。
實(shí)施例12將20～40nm的納米磁加入400ml乙醇/水比例為1∶1的溶液中，強(qiáng)力超聲分散10分鐘，再加入體積比例為2％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷(CH2C(CH3)C(O)OC3H6Si(OCH3)3，硅偶聯(lián)劑KH-570)，保持系統(tǒng)封閉，以避免溶劑揮發(fā)，在50℃下強(qiáng)烈攪拌5小時(shí)，冷卻后磁分離，乙醇洗滌，去離子水洗滌，然后按納米SiO2納米磁粉的質(zhì)量配比分別為5.0、1.0、0.5、0.1∶1加入納米SiO2，強(qiáng)力超聲分散混合10分鐘，磁分離、去無水乙醇洗滌3次，除上清，加入1％PBS，制成包裹不同厚度SiO2的納米磁粉。
實(shí)施例13取0.6％HAuCl4水溶液2.5ml，加入雙蒸水120ml，以0.2mol/lK2CO3調(diào)節(jié)pH至7.2，按金與磁粉質(zhì)量配比為5、3、0.01∶1加入納米磁粉，再加入白磷乙醚溶液1ml(1份白磷飽和乙醚溶液加4份乙醚)，室溫振蕩15分鐘，溶液呈紅褐色，加熱至葡萄酒紅色，制得包裹不同厚度納米金的納米磁粉。
實(shí)施例14將上述實(shí)施例11制得的脂質(zhì)體包裹的納米磁粉與相同體積的質(zhì)量為2％PEG5000的PBS溶液溶液混合，在10℃下靜置60min，再加入相同體積的PBS溶液，在10℃下800r/min攪拌1小時(shí)，經(jīng)過離心分離、除上清，用去離子水充分洗滌，制成PEG修飾的體內(nèi)長循環(huán)穩(wěn)定的脂質(zhì)體包裹的納米磁粉。
實(shí)施例15將上述實(shí)施例6中含鐵量為20mg右旋糖酐包被的納米磁粉水溶液與500mgNaIO4混合，室溫下避光氧化60分鐘，再與1000ml 20mM硼酸鈉(pH8.5)透析20小時(shí)，取其1/10與1.0mg單抗HAb18的0.5ml20mMNaIO4緩沖液混合，室溫下作用4小時(shí)，再用50μl 0.25MNaBH44℃下還原30分鐘，此時(shí)納米磁粉表面的右旋糖酐糖基轉(zhuǎn)變?yōu)槿┗c單抗分子的氨基團(tuán)產(chǎn)生共價(jià)結(jié)合，然后經(jīng)磁分離，去離子水洗滌，除上清，加入1％PBS，制成納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18納米靶向藥物。
實(shí)施例16將上述實(shí)施例7中含鐵量為20mg葡聚糖包被的納米磁粉水溶液與500mgNaIO4混合，室溫下避光氧化60分鐘，再與1000ml20mM硼酸鈉(pH8.5)透析20小時(shí)；取其1/10與0.25mg單抗HAb18片段HAb18F(ab’)2的0.5ml20mMNaIO4緩沖液混合，室溫下作用4小時(shí)，再用50μl0.25MNaBH44℃下還原30分鐘，然后經(jīng)磁分離，1％PBS洗滌，制成納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18片段HAb18F(ab’)2納米靶向藥物實(shí)施例17將納米磁加入400ml乙醇/水比例為1∶1的溶液中，強(qiáng)力超聲分散10分鐘，再加入體積比例為2％的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷(CH2C(CH3)C(O)OC3H6Si(OCH3)3，硅偶聯(lián)劑KH-570)，保持系統(tǒng)封閉，以避免溶劑揮發(fā)，在50℃下強(qiáng)烈攪拌5小時(shí)，冷卻后磁分離，乙醇洗滌，去離子水洗滌，然后按磁粉∶抗體的質(zhì)量配比分別為20∶0.01、1、5、10加入ABX-EGF抗體，強(qiáng)力超聲分散混合10分鐘，磁分離、去離子水洗滌3次，除上清，加入1％PBS，制成納米磁粉-ABX-EGF抗體納米靶向藥物。
實(shí)施例18將3mg抗CEA抗體經(jīng)過PBS透析過夜，體積調(diào)整為2ml，加入無水乙醇配制的20mmol/l異型雙功能交聯(lián)劑N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)10μl，在室溫下緩慢攪拌60分鐘，經(jīng)過sephadex G25層析柱，用PBS洗脫，收集第一峰，濃縮成2ml，過濾除菌，制得純化抗CEA抗體-PDP；再取經(jīng)60Co輻射滅菌處理的上述實(shí)施例8人血清白蛋白包被的含鐵量為30mg納米磁粉均勻分散到3ml中，加入10～20μlSPDP，攪拌60分鐘，離心除去剩余SPDP，制得包被磁粉的PDP；將其超聲分散再3ml、濃度為0.05mmol/l、pH4.5的醋酸緩沖溶液中，加入二硫蘇糖醇(DTT)至濃度為50mmol/l，室溫下攪拌30分鐘，以還原人血清白蛋白-PDP，離心除去剩余DTT，用PBS洗滌沉淀，得人血清白蛋白-PDP-SH巰基；將其懸浮于2mlPBS中，立即與抗CEA抗體-PDP混合，室溫下攪拌24小時(shí)或強(qiáng)力超聲10分鐘，離心，用1％生理鹽水洗滌沉淀，制成納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物。
實(shí)施例19將上述實(shí)施例9含鐵10mg的殼聚糖包被的納米磁粉水溶液逐滴加入溶解有表面活性劑丁二酸二乙辛酯磺酸鈉的甲苯溶液中，機(jī)械攪拌乳化。滴入25％戊二醛溶液，在2000r/min機(jī)械攪拌下反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)后用乙醇、丙酮、蒸餾水反復(fù)洗滌去表面活性劑和有機(jī)溶劑，用磁分離架分離出磁成分，洗滌，分散在4℃蒸餾水中，制成表面含有豐富的醛基的殼聚糖包被納米磁粉。將此納米磁粉分散在5％的戊二醛溶液中，室溫振蕩2小時(shí)。用PBS緩沖液洗滌，按磁粉∶抗體的質(zhì)量配比分別為200.01、0.1、1.0、10加入抗HER2抗體，4℃反應(yīng)12小時(shí)，用PBS和0.2％的NaN3的1％PBS緩沖液各洗滌3次，分散在2mlPBS中，制成納米磁粉-抗HER2抗體納米靶向藥物。
實(shí)施例20將粒徑分布范圍為1～5nm、10～20nm、20～40nm、50～100nm或950nm的納米磁粉(其SAR為501～7000W/gFe)在去離子水中強(qiáng)力超聲分散10分鐘，然后按抗體與納米磁粉質(zhì)量比為0.001、0.1、1、2∶10加入Rituxan抗體，迅速攪拌混合，強(qiáng)力超聲分散混合10分鐘，加入濃度為1％的BPS，離心、用1％PBS洗滌3次，制成納米磁粉-Rituxan抗體靶向藥物。
實(shí)施例21將上述實(shí)施例1～5制成的表面活性劑改性的納米磁粉在去離子水強(qiáng)力超聲分散10分鐘，然后按抗體與納米磁粉的質(zhì)量配比分別為0.001、0.1、1、2.∶10加入抗CEA抗體，迅速攪拌混合，強(qiáng)力超聲分散10分鐘，加入濃度1％的BPS，離心，1％PBS洗滌3次，制成納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物。
實(shí)施例22取經(jīng)60Co輻射滅菌處理的上述實(shí)施例8人血清白蛋白包被的含鐵量為30mg納米磁粉均勻分散到3ml中，加入10～20μlSPDP，攪拌60分鐘，離心除去剩余SPDP，制得包被磁粉的PDP；將0.1、1.0、5.0、10mg轉(zhuǎn)鐵蛋白溶于磷酸緩沖溶液中，配制成質(zhì)量比0.1～50％的溶液，在-20～30℃和800～1200r/min攪拌下把SPDP偶聯(lián)納米磁性快速加入其中，強(qiáng)力超聲分散混合，磁分離、加入1％生理鹽水洗滌3次，制成納米磁粉-轉(zhuǎn)鐵蛋白納米靶向藥物。
實(shí)施例23在-20～30℃和800～1200r/min攪拌下將上述實(shí)施例10聚乙二醇修飾的納米磁粉快速加入0.1、1.0、5.0、10mg轉(zhuǎn)鐵蛋白溶于磷酸緩沖溶液中配制成的質(zhì)量比0.1～50％的溶液，強(qiáng)力超聲分散混合，磁分離、去1％PBS洗滌3次，制成納米磁粉-轉(zhuǎn)鐵蛋白納米靶向藥物。
實(shí)施例24將13.2mg2-去氨基-羥基葉酸FA溶于1ml二甲亞砜DMSO，攪拌下加入一定量的二環(huán)己碳二亞胺DCC和N-羥基琥珀酸亞胺NHS，加入100mg聚乙二醇二氨PEG-NH2，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，加入5ml去離子水，過濾除去不溶物，上清冷凍干燥，乙醚洗滌干燥物，制得到黃色固體FA-PEG-NH2。取上述實(shí)施例9含10或100mg殼聚糖包被的納米磁粉溶入1ml去離子水中，超聲分散混合10分鐘，加入0.1mg FA-PEG-NH2，通過氨基與顆粒偶聯(lián)，常溫下共育3小時(shí)，磁分離洗滌，除上清，加生理鹽水，制成納米磁粉-葉酸納米靶向藥物。
實(shí)施例25將13.2mg5-甲基四氫葉酸FA溶于1ml二甲亞砜DMSO，攪拌下加入一定量的二環(huán)己碳二亞胺DCC和N-羥基琥珀酸亞胺NHS，加入100mg聚乙二醇二氨PEG-NH2，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，加入5ml去離子水，過濾除去不溶物，上清冷凍干燥，乙醚洗滌干燥物，制得到黃色固體FA-PEG-NH2。取上述實(shí)施例7含10或100mg葡聚糖包被的納米磁粉溶入1ml去離子水中，超聲分散混合10分鐘，加入0.1mg FA-PEG-NH2，通過氨基與顆粒偶聯(lián)，常溫下共育3小時(shí)，磁分離洗滌，除上清和未包偶聯(lián)葉酸的納米磁粉，加入1％PBS，制成納米磁粉-葉酸靶向藥物。
實(shí)施例26在攪拌下將適量的二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酸亞胺NHS加入溶于1ml二甲亞砜(其中加入0.025ml的三乙胺)的50mg葉酸中，室溫反應(yīng)過夜，過濾除去反應(yīng)中副產(chǎn)物二環(huán)己基脲，減壓濃縮至干，得黃色固體粉末葉酸活性酯。將上述實(shí)施例8含100、200或500mg鐵的人血清白蛋白包被的納米磁粉的膠體水劑調(diào)pH為9，加入適量的葉酸活性酯的二甲砜溶液，室溫?cái)嚢琛４欧蛛x收集，1％生理鹽水洗滌，制成納米磁粉-葉酸靶向藥物。
實(shí)施例27
按照Mathias法(參見1998.Nuclear Medicine and Biology，25585～587)合成二乙三胺五乙酸-葉酸(即DTPA-Folate)，將10mgDTPA-Folate溶于1.5ml水中，加入100mg粒徑分布范圍為1～5nm、5～10nm 10～20nm、20～40nm、或50～100nm的納米磁粉，強(qiáng)力超聲分散10分鐘，室溫下400r/min攪拌1小時(shí)，磁分離、1％PBS洗滌3次，加入1％PBS，制成納米磁粉-葉酸靶向藥物。
實(shí)施例28取皮下接種結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，兩組每只裸鼠都靜脈注射上述實(shí)施例7制成的含鐵量40mg、粒徑約為300～400nm的葡聚糖包被的納米磁粉去離子水溶液0.2ml，但一組在體外腫瘤部位施加0.6T的磁場30分鐘，應(yīng)用亞鐵離子的菲啶測定法測得體外腫瘤部位施加磁場的腫瘤部位的磁粉含量比不加磁場的高約7倍。
實(shí)施例29取皮下接種結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，兩組每只裸鼠都靜脈注射上述實(shí)施例10制成的含鐵量40mg、粒徑約為3～20nm的聚乙二醇修飾的體內(nèi)長循環(huán)穩(wěn)定的納米磁粉去離子水溶液0.2ml，但一組在體外腫瘤部位施加0.8T的磁場30分鐘，應(yīng)用亞鐵離子的菲啶測定法測得體外腫瘤部位施加磁場的50％以上的納米磁粉聚集在腫瘤部位。
實(shí)施例30取皮下接種結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，兩組每只裸鼠都靜脈注射上述實(shí)施例14制成的含鐵量40mg、粒徑約為50～100nm的PEG修飾的體內(nèi)長循環(huán)穩(wěn)定的脂質(zhì)體包裹的納米磁粉去離子水溶液0.2ml，但一組在體外施加0.6T的磁場30分鐘，應(yīng)用亞鐵離子的菲啶測定法測得體外腫瘤部位施加磁場的腫瘤部位的磁粉含量比不加磁場的高約9倍。
實(shí)施例31取皮下接種肝癌細(xì)胞HHCC裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，兩組每只裸鼠都靜脈注射上述實(shí)施例15制成的含鐵量30mg、粒徑約為20～40nm的納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18納米靶向藥物1％PBS水溶液0.2ml，但一組在體外施加0.3T的磁場60分鐘，應(yīng)用亞鐵離子的菲啶測定法測得體外腫瘤部位施加磁場的腫瘤部位的磁粉含量比不加磁場的高約138倍。
實(shí)施例32取皮下接種肉瘤S-180昆明種小鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，兩組每只小鼠都靜脈注射上述實(shí)施例23制成的含鐵量40mg、粒徑約為10～30nm的納米磁粉-轉(zhuǎn)鐵蛋白納米靶向藥物1％PBS水溶液0.2ml，在體外施加0.3T的磁場30分鐘，應(yīng)用亞鐵離子的菲啶測定法測得體外腫瘤部位施加磁場的腫瘤部位的磁粉含量比不加磁場的高約43倍。
實(shí)施例33取皮下接種肝癌細(xì)胞BEL7404裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，兩組每只裸鼠都靜脈注射上述實(shí)施例26制成的含鐵量40mg、粒徑約為5～30nm的納米磁粉-葉酸納米靶向藥物生理鹽水溶液0.2ml，但一組在體外施加0.3T的磁場30分鐘，應(yīng)用亞鐵離子的菲啶測定法測得體外腫瘤部位施加磁場的腫瘤部位的磁粉含量比不加磁場的高約31倍。
實(shí)施例34應(yīng)用Zetasizer3000激光粒度分析儀和JEM-2010 UHR高分辨率透射電鏡觀測上述實(shí)施例改性修飾或包被包裹納米磁粉顆粒、納米磁粉-抗體或配體偶聯(lián)物的顆粒粒徑和表面變化，發(fā)現(xiàn)(1)上述實(shí)施例1、2、3和4通常形成小于1nm的表面活性劑層，而實(shí)施例5則形成接約1nm的表面活性劑層；(2)上述實(shí)施例6、7、8、9、10和14可以形成約10-20nm的有機(jī)物質(zhì)層，而實(shí)施例11則形成約8-10nm的脂質(zhì)體層，實(shí)施例12、13形成約5-50nm的無機(jī)物質(zhì)層；(3)上述實(shí)施例15、16、17、18、19、20和21的納米磁粉-抗體偶聯(lián)物粒徑可以達(dá)到僅比偶聯(lián)前納米磁粉改性修飾物、包被包裹物和裸的納米磁粉增加約6～20nm；(4)上述實(shí)施例22和23、的納米磁粉-轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)物粒徑可以達(dá)到僅比偶聯(lián)前納米磁粉改性修飾物、包被包裹物和裸的納米磁粉增加約8～20nm；(5)上述實(shí)施例24、25、26和27的納米磁粉-葉酸偶聯(lián)物粒徑可以達(dá)到僅比偶聯(lián)前納米磁粉改性修飾物、包被包裹物和裸的納米磁粉增加約5～10nm。選用1～40nm的納米磁粉制備的上述納米磁粉-抗體納米靶向藥物、納米磁粉-配體納米靶向藥物穩(wěn)定分散性或納米磁粉磁性納米靶向藥物具有良好的分散性和長達(dá)數(shù)月至4年以上的分散穩(wěn)定性。
實(shí)施例35經(jīng)JEM-2010 UHR高分辨率透射電鏡分析表明，上述實(shí)施例中由顆粒粒徑約10nm的超順磁性納米磁粉與抗CEA抗體、抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab’)2和抗HER2抗體等的納米靶向藥物(偶聯(lián)物)的顆粒粒徑約為20nm，藥物中納米磁粉與可以抗體形成良好的偶聯(lián)，藥物中納米磁粉表面至少偶聯(lián)1個(gè)抗體。
實(shí)施例36將上述實(shí)施例中的制備靶向藥物和納米磁粉改性修飾物、包被包裹物經(jīng)濃度經(jīng)冷凍干燥可以制成固體凍干粉，以便長期儲(chǔ)存和方便使用。實(shí)際使用時(shí)，僅需將上述靶向藥物凍干粉分別用去離子水或1％的PBS水溶液或1％生理鹽水溶液或核苷酸水溶液(其中注射劑溶媒中去離子水與核苷酸的重量比例為1∶0.20)配制成靶向藥物與去離子水、PBS水溶液、生理鹽水溶液、核苷酸水溶液的質(zhì)量比例為1∶≤0.5的靶向藥物注射劑，即可使用。同樣，僅需將上述納米磁粉改性修飾物、包被包裹物凍干粉加入適量的水溶液即可用于進(jìn)一步加工使用。通常，上述實(shí)施例中制備的靶向藥物也可以直接制成靶向藥物與去離子水、PBS水溶液、生理鹽水溶液或核苷酸水溶液的質(zhì)量比例為1∶≤0.5的靶向藥物注射劑使用。
實(shí)施例37(1)ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)實(shí)驗(yàn)測得顆粒粒徑為20～70nm的納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物的免疫活性為63％。(2)體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，顆粒粒徑為20～70nm的納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物注射液經(jīng)37℃孵育24小時(shí)，無論在生理鹽水中還是人血清白蛋白中，納米磁粉脫落都小于5％，證明該納米靶向藥物在體外穩(wěn)定。
實(shí)施例38(1)ELISA實(shí)驗(yàn)測得顆粒粒徑為40～80nm的納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物的免疫活性為57％。(2)體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，顆粒粒徑為40～80nm的納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物注射液經(jīng)37℃孵育24小時(shí)，無論在生理鹽水中還是人血清白蛋白中，納米磁粉脫落都小于5％，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物在體外穩(wěn)定。
實(shí)施例39(1)將顆粒粒徑為40～80nm的鐵磁性納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物與結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T混合，在超聲功率為1～25W時(shí)經(jīng)Zetasizer2000激光粒度分析儀檢測，納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物與癌細(xì)胞以及納米磁粉顆粒與抗體結(jié)合不脫落。(2)將顆粒粒徑為40～80nm的亞鐵磁性納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物與結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T、血細(xì)胞、正常肝細(xì)胞混合在一起，經(jīng)磁分離后，僅結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T在磁場下滯留，血細(xì)胞和正常肝細(xì)胞與結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T完全分離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納米磁粉與抗CEA抗體具有較強(qiáng)的偶聯(lián)結(jié)合力和穩(wěn)定性，納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物與結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T具有良好的靶向性和較強(qiáng)的親和力，與血液和肝臟等具有良好的生物相容性。
實(shí)施例40(1)將顆粒粒徑為20～70nm的鐵磁性納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物與人肝癌細(xì)胞HHCC混合，在超聲功率1～25W時(shí)經(jīng)Zetasizer2000激光粒度分析儀檢測，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物與癌細(xì)胞和納米磁粉顆粒與抗體結(jié)合不脫落。(2)將顆粒粒徑為20～70nm的納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物與人肝癌細(xì)胞HCC、血細(xì)胞、正常肝細(xì)胞混合在一起，經(jīng)磁分離后，僅有人肝癌細(xì)胞HCC在磁場下滯留，血細(xì)胞和正常肝細(xì)胞與肝癌細(xì)胞HHCC完全分離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納米磁粉與抗人肝癌單克隆抗體HAb18具有較強(qiáng)的偶聯(lián)結(jié)合力和穩(wěn)定性，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物與肝癌細(xì)胞HHCC具有良好的靶向性和較強(qiáng)的親和力，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物與血液和肝臟等具有良好的生物相容性。
實(shí)施例41為皮下荷結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T腫瘤的裸鼠尾靜脈注射顆粒粒徑為20～50nm的超順磁性納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物30mg后30分鐘后處死，取腫瘤和心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官進(jìn)行掃描電鏡研究。電鏡和能譜分析結(jié)果表明，注射納米靶向藥物的裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中Fe元素(Fe元素是納米磁粉的主要元素，約占納米磁粉質(zhì)量的70％。)占組織中Fe、Ca、Si、Al、Mg、K、Na、P、O、C等10種主要元素的重量比例分別從對(duì)照組(未注射靶向藥物的)裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中的0.08％和0％提高到23.11％和0.83％，并且也高于注射靶向藥物的裸鼠非腫瘤血管血液中的0.14％、正常肝臟組織中的0.14％和其它器官中的0.14％以下。納米靶向藥物在裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中比對(duì)照組(未注射納米靶向藥物的)裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中以及注射納米靶向藥物的裸鼠非腫瘤血管血液中和正常肝組織中分別增高至少289倍(由于對(duì)照組腫瘤中測不到Fe，無法計(jì)算)以及165倍和165倍，即納米靶向藥物在腫瘤中的含藥量至少高于其它部位165倍，納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物在體內(nèi)具有顯著的靶向性能，能使靶向藥物靶向濃聚定位在腫瘤病灶，而在其他部位不聚集。
實(shí)施例42為皮下荷肝癌細(xì)胞HHCC腫瘤的裸鼠尾靜脈注射顆粒粒徑為20～50nm的超順磁性納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物30mg后30分鐘后處死，取腫瘤和心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官進(jìn)行掃描電鏡研究。電鏡和能譜分析結(jié)果表明，注射納米靶向藥物的裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中Fe元素(Fe元素是納米磁粉的主要元素，約占納米磁粉質(zhì)量的70％。)占組織中Fe、Ca、Si、Al、Mg、K、Na、P、O、C等10種主要元素的重量比例分別從對(duì)照組(未注射納米靶向藥物的)裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中的0.08％和0％提高到24.38％和0.76％，并且也高于注射納米靶向藥物的裸鼠非腫瘤血管血液中的0.14％、正常肝臟組織中的0.14％和其它器官中的0.14％以下。納米靶向藥物在裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中比對(duì)照組(未注射靶向藥物的)裸鼠腫瘤毛細(xì)血管血液中和腫瘤組織中以及注射靶納米向藥物的裸鼠非腫瘤血管血液中和正常肝組織中分別增高至少304倍(由于對(duì)照組腫瘤中測不到Fe，無法計(jì)算)以及174倍和174倍，即納米靶向藥物在腫瘤中的含藥量至少高于其它部位174倍，納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物在體內(nèi)具有顯著的靶向性能，能使納米靶向藥物靶向濃聚定位在腫瘤病灶，而在其他部位不聚集。
實(shí)施例43
取皮下接種人胃癌細(xì)胞N87裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射去離子水0.3ml，第二組每只裸鼠腹腔注射含有30mg、30～50nm超順磁性氧化鐵納米磁粉(其SAR為1000W/gFe)-抗HER2抗體納米靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療1小時(shí)2次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.36±0.53g，第二組瘤重0.97±0.29g，治療組的抑瘤率為59％，P值小于0.01。
實(shí)施例44取皮下接種肝癌細(xì)胞HHCC裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射去離子水0.3ml，第二組每只裸鼠腹腔注射含有30mg、20～40nm超順磁性氧化鐵(其SAR為2000W/gFe)-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療65分鐘2次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.97±0.65g，第二組瘤重1.02±0.31g，治療組的抑瘤率為66％，P值小于0.01。
實(shí)施例45取皮下接種人肺癌A549裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射去離子水0.3ml，第二組每只裸鼠腹腔注射含有30mg、50～100nm超順磁性氧化鐵納米磁粉(其SAR為200W/gFe)-抗CEA抗體納米靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療65分鐘2次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重1.97±0.53g，第二組瘤重0.79±0.37g，治療組的抑瘤率為60％，P值小于0.01。
實(shí)施例46取皮下接種結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射去離子水0.3ml，第二組每只裸鼠尾靜脈注射含鐵量50mg、40～80nm納米磁粉(其SAR為300W/gFe)-抗CEA抗體納米靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療1小時(shí)1次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.97±0.65g，第二組瘤重0.12±0.31g，治療組的抑瘤率為96％，P值小于0.01，并且其中2只裸鼠腫瘤完全消退，3只裸鼠腫瘤殘余組織病理圖片分析發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞全部凝固性壞死，2只裸鼠腫瘤殘余組織病理圖片分析發(fā)現(xiàn)僅有少量未壞死腫瘤細(xì)胞。同時(shí)在治療后十天對(duì)第二組裸鼠進(jìn)行體重和不良反應(yīng)觀測，以及裸鼠處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做病理檢查，未見明顯異常。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物進(jìn)行磁熱療可以實(shí)現(xiàn)靶向、高效、安全、無毒副作用殺滅腫瘤，甚至使腫瘤完全消退。
實(shí)施例47取皮下接種肝癌細(xì)胞HHCC裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射去離子水0.3ml，第二組每只裸鼠尾靜脈注射含鐵量50mg、40～80nm納米磁粉(其SAR為300W/gFe)-抗人肝癌單克隆抗體HAb18片段HAb18F(ab’)2納米靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療1小時(shí)1次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.97±0.65g，第二組瘤重0.12±0.31g，治療組的抑瘤率為96％，P值小于0.01，并且其中2只裸鼠腫瘤完全消退，2只裸鼠腫瘤殘余組織病理圖片分析發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞全部凝固性壞死，3只裸鼠腫瘤殘余組織病理圖片分析發(fā)現(xiàn)僅有少量未壞死腫瘤細(xì)胞。同時(shí)，在治療后十天對(duì)第二組裸鼠進(jìn)行體重和不良反應(yīng)觀測，未見明顯異常，裸鼠處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做病理檢查，未見明顯異常。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用納米磁粉-抗人肝癌單克隆抗體HAb18納米靶向藥物進(jìn)行磁熱療可以實(shí)現(xiàn)靶向、高效、安全、無毒副作用殺滅腫瘤，甚至使腫瘤完全消退。
實(shí)施例48取皮下接種肉瘤S-180昆明種小鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只小鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.3ml，第二組每只小鼠靜脈注射上述實(shí)施例22制成的含鐵量60mg、20～50nm的納米磁粉(其SAR為510W/gFe)-轉(zhuǎn)鐵蛋白納米靶向藥物1％PBS水溶液0.3ml，在體外施加0.3T的磁場30分鐘后，將第二組小鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療1小時(shí)2次，治療10天后處死上述小鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.13±0.46g，第二組瘤重0.64±0.42g，治療組的抑瘤率為70％，P值小于0.01。
實(shí)施例49取皮下接種結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.5ml，第二組每只裸鼠都靜脈注射上述實(shí)施例7制成的含鐵量100mg、20～30nm的葡聚糖包被的納米磁粉(其SAR為110W/gFe)去離子水溶液0.5ml，在體外腫瘤部位施加0.6T的磁場30分鐘后，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療2小時(shí)1次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重1.86±0.39g，第二組瘤重0.65±0.41g，治療組的抑瘤率為65％，P值小于0.01。
實(shí)施例50
取皮下接種結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.3ml，第二組每只裸鼠都靜脈注射上述實(shí)施例14制成的含鐵量60mg、10～20nm的聚乙二醇修飾的體內(nèi)長循環(huán)穩(wěn)定的納米磁粉(其SAR為210W/gFe)去離子水溶液0.3ml，2在體外腫瘤部位施加0.8T的磁場30分鐘后，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療1小時(shí)1次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.23±0.61g，第二組瘤重0.61±0.36g，治療組的抑瘤率為73％，P值小于0.01。
實(shí)施例51取皮下接種結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.2ml，第二組每只裸鼠靜脈注射上述實(shí)施例18制成的含鐵量20mg、20～40nm的制成納米磁粉(其SAR為7000W/gFe)-抗CEA抗體納米靶向藥物生理鹽水溶液0.2ml，在體外施加0.3T的磁場60分鐘后，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下45～48℃治療1小時(shí)1次，治療后月1個(gè)月內(nèi)腫瘤完全消退，12個(gè)月內(nèi)未見腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，并且治療后裸鼠體重和壽命與未種腫瘤的對(duì)照組裸鼠基本相同。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用本發(fā)明納米靶向藥物磁熱療治療可以完全殺滅和治愈惡性腫瘤，并且未見毒副作用。
實(shí)施例52取皮下接種肉瘤S-180昆明種小鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.3ml，第二組每只小鼠腹腔注射含有實(shí)施例22制成的60mg、30～50nm超順磁性氧化鐵(其SAR為5000W/gFe)-轉(zhuǎn)鐵蛋白納米靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組小鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下95℃治療1分鐘1次，10天后處死上述裸鼠，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.09±0.46g，第二組瘤重0.44±0.31g，治療組的抑瘤率為79％，P值小于0.01。
實(shí)施例53取皮下接種肝癌細(xì)胞BEL7404裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.3ml，第二組每只裸鼠腹腔注射含有80mg、30～50nm上述實(shí)施例25制成的超順磁性氧化鐵(其SAR為1500W/gFe)-葉酸納米靶向藥物的注射劑0.3ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療1小時(shí)1次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重2.03±0.57g，第二組瘤重0.54±0.36g，治療組的抑瘤率為73％，P值小于0.01。
實(shí)施例54
取皮下接種肝癌細(xì)胞BEL7404裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.2ml，第二組每只裸鼠腹腔注射含有50mg、20～40nm上述實(shí)施例26制成的超順磁性氧化鐵(其SAR為6000W/gFe)-葉酸納米靶向藥物的注射劑0.2ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場42～43℃治療1小時(shí)1次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明第一組瘤重2.13±0.65g，第二組瘤重0.66±0.32g，治療組的抑瘤率為69％，P值小于0.01。
實(shí)施例55取皮下接種胃癌細(xì)胞SGC-7901裸鼠16只，雌雄各半，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.2ml，第二組每只裸鼠腹腔注射含有30mg、20～40nm上述實(shí)施例27制成的納米鐵磁粉(其SAR為500W/gFe)-葉酸的納米靶向藥物的注射劑0.2ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療1小時(shí)1次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一組瘤重1.76±0.39g，第二組瘤重0.58±0.41g，治療組的抑瘤率為67％，P值小于0.01。
實(shí)施例56取皮下接種結(jié)腸癌細(xì)胞LS174T雌性裸鼠16只，在腫瘤約5～10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成2組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位注射生理鹽水0.2ml，第二組每只裸鼠靜脈注射含鐵量30mg、20～40nm上述實(shí)施例18制成的納米氧化鐵磁粉(其SAR為7000W/gFe)-抗CEA抗體納米靶向藥物生理鹽水溶液0.2ml，將第二組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～45℃治療1小時(shí)3次，治療后月1個(gè)月內(nèi)腫瘤完全消退，12個(gè)月內(nèi)未見腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，并且治療后裸鼠體重和壽命與未種腫瘤的對(duì)照組裸鼠基本相同。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用本發(fā)明納米靶向藥物磁熱療治療可以完全殺滅和治愈惡性腫瘤，并且未見毒副作用。
實(shí)施例57取皮下接種肝癌細(xì)胞BEL7404裸鼠24只，雌雄各半，在腫瘤約10mm時(shí)測定并計(jì)算腫瘤體積后，按腫瘤體積隨機(jī)分成3組，第一組為對(duì)照組，每只裸鼠腫瘤部位經(jīng)3次注射生理鹽水1.0ml，第二組每只裸鼠經(jīng)3次注射導(dǎo)入含鐵量100mg、400nm上述實(shí)施例24制成的磁性氧化鐵(磁粉粒徑約350-400nm)(其SAR為30W/gFe)-葉酸納米靶向藥物生理鹽水溶液1.0ml，第三組每只裸鼠經(jīng)3次注射導(dǎo)入含鐵量200mg、1000nm上述實(shí)施例22制成的磁性氧化鐵(磁粉粒徑約950-1000nm)(其SAR為10W/gFe)-葉酸納米靶向藥物生理鹽水溶液1.0ml，將第二、三組裸鼠置入磁熱療治療儀交變磁場下42～43℃治療1小時(shí)2次，治療10天后處死上述裸鼠、分離腫瘤，稱取腫瘤重量。結(jié)果表明，第一、二、三組瘤重分別為2.76±0.69g、0.24±0.16g、0.48±0.33g，第二和三治療組的抑瘤率分別為91％和83％，P值均小于0.01。
實(shí)施例58取小白鼠和豚鼠各10只，雌雄各半，在小白鼠和豚鼠腹腔分別注射0.5ml含0.1g和1.5ml含1.0g上述實(shí)施例18的納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物，觀察7天和30天后未見不良反應(yīng)和體重下降，處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官切片做病理檢查，未見明顯異常。觀察30天后處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做磁熱療治療試驗(yàn)，未見發(fā)熱出現(xiàn)。通常腫瘤磁熱療治療僅需要5～100mg納米磁粉-抗CEA抗體納米靶向藥物，從上述初步毒副實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的納米磁粉靶向藥物具有生物降解性和無毒副作用。
實(shí)施例59取小白鼠和豚鼠各10只，雌雄各半，在小白鼠和豚鼠腹腔分別注射0.5ml含0.3g和1.5ml含1.0g上述實(shí)施例2的正癸酸改性的納米磁粉，觀察7天和30天后未見不良反應(yīng)和體重下降，處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官切片做病理檢查，未見明顯異常。觀察30天后處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做磁熱療治療試驗(yàn)，未見發(fā)熱出現(xiàn)。通常腫瘤磁熱療治療僅需要5～100mg正癸酸改性的納米磁粉，從上述初步毒副實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的正癸酸改性的納米磁粉具有生物降解性和無毒副作用。
實(shí)施例60取小白鼠和豚鼠各10只，雌雄各半，在小白鼠和豚鼠腹腔分別注射0.5ml含0.3g和1.5ml含1.0g上述實(shí)施例14的PEG修飾的體內(nèi)長循環(huán)穩(wěn)定的脂質(zhì)體包裹的納米磁粉，觀察7天和30天后未見不良反應(yīng)和體重下降，處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官切片做病理檢查，未見明顯異常。觀察30天后處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做磁熱療治療試驗(yàn)，未見發(fā)熱出現(xiàn)。通常腫瘤磁熱療治療僅需要5～100mg PEG修飾的體內(nèi)長循環(huán)穩(wěn)定的脂質(zhì)體包裹的納米磁粉，從上述初步毒副實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的PEG修飾的體內(nèi)長循環(huán)穩(wěn)定的脂質(zhì)體包裹的納米磁粉具有生物降解性和無毒副作用。
實(shí)施例61取小白鼠和豚鼠各10只，雌雄各半，在小白鼠和豚鼠腹腔分別注射0.5ml含0.3g和1.5ml含1.0g上述實(shí)施例16的納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18納米靶向藥物，觀察7天和30天后未見不良反應(yīng)和體重下降，處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官切片做病理檢查，未見明顯異常。觀察30天后處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做磁熱療治療試驗(yàn)，未見發(fā)熱出現(xiàn)。通常腫瘤磁熱療治療僅需要5～100mg納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18納米靶向藥物，從上述初步毒副實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的納米磁粉-抗人肝癌單抗HAb18納米靶向藥物具有生物降解性和無毒副作用。
實(shí)施例62取小白鼠和豚鼠各10只，雌雄各半，在小白鼠和豚鼠腹腔分別注射0.5ml含0.3g和1.5ml含1.0g上述實(shí)施例22的納米磁粉-轉(zhuǎn)鐵蛋白納米靶向藥物，觀察7天和30天后未見不良反應(yīng)和體重下降，處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官切片做病理檢查，未見明顯異常。觀察30天后處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做磁熱療治療試驗(yàn)，未見發(fā)熱出現(xiàn)。通常腫瘤磁熱療治療僅需要5～100mg納米磁粉-轉(zhuǎn)鐵蛋白納米靶向藥物，從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的納米磁粉-轉(zhuǎn)鐵蛋白納米靶向藥物具有生物降解性和無毒副作用。
實(shí)施例63取小白鼠和豚鼠各10只，雌雄各半，在小白鼠和豚鼠腹腔分別注射0.5ml含0.3g和1.5ml含1.0g上述實(shí)施例25的納米磁粉-葉酸納米靶向藥物，觀察7天和30天后未見不良反應(yīng)和體重下降，處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官切片做病理檢查，未見明顯異常。觀察30天后處死后，取心、腦、脾、腎、腸、肝等重要器官做磁熱療治療試驗(yàn)，未見發(fā)熱出現(xiàn)。通常腫瘤磁熱療治療僅需要5～100mg納米磁粉-葉酸納米靶向藥物，從上述初步毒副實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的納米磁粉-葉酸納米靶向藥物具有生物降解性和無毒副作用。
權(quán)利要求
1.一種惡性腫瘤磁熱療用納米靶向藥物，其特征在于其中包括質(zhì)量配比為1∶0.0001～0.20的效應(yīng)分子和導(dǎo)向分子，所述的效應(yīng)分子為磁粉，該磁粉粒徑不超過1000nm，產(chǎn)熱比功率SAR為10-7000W/g，所述的導(dǎo)向分子包括抗體或配體，也包括同時(shí)具有磁性靶向功能的磁粉，該靶向藥物的粒徑為2-1000nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的磁粉產(chǎn)熱比功率SAR為500-7000W/g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的磁粉為經(jīng)過表面活性劑和/或表面改性劑改性修飾處理的磁粉，其與表面活性劑和/或表面改性劑的質(zhì)量比例為1∶0.0001～0.20。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的表面活性劑和/或表面改性包括選自十二烷基硫酸鈉、油酸鈉、正癸酸、有機(jī)硅偶聯(lián)劑、十二烷基苯磺酸鈉、核苷酸或多肽中任一或組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的磁粉為鐵磁性、亞鐵磁性和超順磁性納米磁粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的抗體為針對(duì)腫瘤特異性抗原、腫瘤相關(guān)抗原、獨(dú)特型決定簇、細(xì)胞因子的受體、以激素及瘤基因的產(chǎn)物為靶分子的抗體，其包括異源多克隆抗體、鼠源單克隆抗體、人源單克隆抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的配體包括葉酸配體、轉(zhuǎn)鐵蛋白、糖類配體、多肽、核酸和激素中任一或其組合，所述的葉酸配體包括葉酸、亞葉酸、二氫葉酸、四氫葉酸、四氫蝶呤、蝶呤酰多谷酸、2-去氨基-羥基葉酸、1-去氨基-羥基葉酸、1-去氮葉酸、3-去氮葉酸、8-去氮葉酸、5-甲基四氫葉酸、5-甲?；臍淙~酸、抗葉酸劑氨甲喋呤和5，10-亞甲基四氫葉酸中任一或其組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的抗體選自抗CEA、AFP、CA19-9、CA125、PSA、Trigen、TheraCIMh-R3、Smart ID10、Vitaxin、4B5、SS1(dsFv)PE38、ABX-EGF、BrevaRex、CA15-3、PAP、CA50、hCG、SCC、β2M、Rituxan、anti-VEGF、epratuzmab、NSE、HER2和TPA抗體和抗人肝癌單克隆抗體HAb18中的任一或其組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的磁粉為表面經(jīng)過有機(jī)或無機(jī)物質(zhì)包裹的磁粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的有機(jī)物質(zhì)包括脂質(zhì)體、聚乳酸、聚己內(nèi)酯、聚乙二醇、葡聚糖、殼聚糖、右旋糖酐或蛋白質(zhì)中任一或組合，無機(jī)物質(zhì)為二氧化硅、氧化鋁或金中任一或組合，或有機(jī)物質(zhì)和無機(jī)物質(zhì)的組合。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的納米靶向藥物，其特征在于其中所述的磁粉與有機(jī)或無機(jī)物質(zhì)的原料質(zhì)量比例為1∶0.01～5.0。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的納米靶向藥物，其特征在于其中該藥物為注射劑，也可以制成固體或粉針制劑。
13.權(quán)利要求1所述的納米靶向藥物的制備方法，其特征在于其中包括將質(zhì)量配比為1∶0.0001～0.20的磁粉和導(dǎo)向分子在水或有機(jī)物質(zhì)乙醇、醋酸、甲苯、二亞甲砜或無機(jī)物質(zhì)磷酸或其混合溶液中偶聯(lián)得到。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述納米靶向藥物的制備方法，其特征在于其中包括先將所述的磁粉用選自十二烷基硫酸鈉、油酸鈉、正癸酸、十二烷基苯磺酸鈉、有機(jī)硅偶聯(lián)劑、核苷酸或多肽的表面活性劑和/或表面改性劑處理，磁粉與表面活性劑和/或表面改性劑的重量比為1∶0.0001～0.20，再與導(dǎo)向分子在水或溶液中混合偶聯(lián)。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述納米靶向藥物的制備方法，其特征在于其中包括先將所述的磁粉用有機(jī)或無機(jī)物質(zhì)包裹，該有機(jī)物質(zhì)包括脂質(zhì)體、聚乙二醇、葡聚糖、殼聚糖、右旋糖酐、聚乳酸、聚己內(nèi)酯或蛋白質(zhì)，無機(jī)物質(zhì)為二氧化硅、氧化鋁、金，磁粉與有機(jī)或無機(jī)物質(zhì)包裹物的重量比為1∶0.01～5.0，再與導(dǎo)向分子在溶液或水中混合偶聯(lián)。
16.權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的納米磁粉靶向藥物在制備治療和預(yù)防腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種惡性腫瘤磁熱療用納米靶向藥物及其制備方法與應(yīng)用，即一種高產(chǎn)熱比功率的惡性腫瘤磁熱療用的納米磁粉－抗體/配體靶向藥物及納米磁粉磁性靶向藥物。惡性腫瘤磁熱療用納米靶向藥物包括重量配比為1∶0.0001～0.20的效應(yīng)分子和導(dǎo)向分子，所述的效應(yīng)分子為磁粉，該磁粉粒徑不超過1000nm，產(chǎn)熱比功率SAR為10～7000W/gFe，所述的導(dǎo)向分子包括抗體或配體或磁粉，該靶向藥物的粒徑為2～1000nm；其制備方法包括將重量配比為1∶0.0001～0.20的磁粉和導(dǎo)向分子在水或有機(jī)、無機(jī)物質(zhì)及其混合溶液中偶聯(lián)得到，上述得到的納米磁粉靶向藥物可以對(duì)腫瘤實(shí)施靶向溫?zé)岷透邿岽艧岑熤委熀皖A(yù)防，并可有效地殺滅癌細(xì)胞，治愈惡性腫瘤。
文檔編號(hào)A61K47/02GK1951495SQ20061013199
公開日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2006年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月25日
發(fā)明者朱宏 申請(qǐng)人:朱宏