專利名稱：五氟硫基苯甲酰基胍、其制備方法、其作為藥物或診斷劑的用途以及包含它們的藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及式I和II的五氟硫基苯甲?；壹捌淇伤幱名} 其中R1是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基、含1、2、3或4個碳原子的烷氧基、F、Cl、Br、I、CN、NR10R11、-Op-(CH2)n-(CF2)o-CF3或-(SOm)q-(CH2)r-(CF2)s-CF3；R10和R11彼此獨立地是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；m是0、1或2n、o、p、q、r和s彼此獨立地是0或1；R2是氫、F、Cl、Br、I、-CN、-SO2CH3、-(SOh)z-(CH2)k-(CF2)l-CF3、含1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基、含3、4、5、6、7或8個碳原子的環(huán)烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子所替代；h是0、1或2；z是0或1；k是0、1、2、3或4；
l是0或1；或者R2是-(CH2)t-苯基或-O-苯基，其是未取代的或被1、2或3個選自F、Cl、Br、I、-Ou-(CH2)v-CF3、含1、2、3或4個碳原子的烷氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；t 是0、1、2、3或4；u 是0或1；v 是0、1、2或3；或者R2是-(CH2)w-雜芳基，其是未取代的或被1、2或3個選自F、Cl、Br、I、-Ox-(CH2)y-CF3、含1、2、3或4個碳原子的烷氧基和含1、2、3或4個碳原子的烷基、-SO2CH3的基團所取代；w 是0、1、2、3或4；x 是0或1；y 是0、1、2或3；R3和R4彼此獨立地是氫或F。
優(yōu)選的是以下的式I或式II的化合物及其可藥用鹽，其中的含義是R1是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基、含1、2、3或4個碳原子的烷氧基、F、Cl、NR10R11、-O-CH2-CF3或SOm(CH2)r-CF3；R10和R11彼此獨立地是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；m 是0、1或2；r 是0或1；R2 是氫、F、Cl、-SO2CH3、-(SOh)z-(CH2)k-CF3、含1、2、3或4個碳原子的烷基、含3、4、5、6或7個碳原子的環(huán)烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子所替代；h 是0、1或2；z 是0或1；k 是0、1、2、3或4；或者R2是苯基或-O-苯基，其是未取代的或被1或2個選自F、Cl、-Ou-(CH2)v-CF3、甲氧基、乙氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；u 是0或1；v 是0、1、2或3；或者R2 是雜芳基，其是未取代的或被1或2個選自F、Cl、-Ox-(CH2)y-CF3、甲氧基、乙氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；x 是0或1；y 是0、1、2或3；R3和R4彼此獨立地是氫或F。
特別優(yōu)選的是以下的式I和II化合物及其可藥用鹽，其中的含義是R1 是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基、甲氧基、乙氧基、F、Cl、NR10R11、-O-CH2-CF3或-SOm-(CH2)r-CF3；R10和R11彼此獨立地是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；m 是0、1或2；r 是0或1；R2 是氫、F、Cl、-SO2CH3、-(SOh)z-(CH2)k-CF3、含1、2、3或4個碳原子的烷基、含3、4、5、6或7個碳原子的環(huán)烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子所替代；h 是0或2；z 是0或1；k 是0或1；或者R2是苯基或-O-苯基，其是未取代的或被1或2個選自F、Cl、-O-(CH2)v-CF3、甲氧基、乙氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；v 是0、1、2或3；或者R2是雜芳基，其是未取代的或被1或2個選自F、Cl、-O-(CH2)y-CF3、甲氧基、乙氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；y 是0、1、2或3；R3和R4是氫。
特別優(yōu)選在式I和/或II化合物中R1是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基、F或Cl。還特別優(yōu)選在式I和/或II化合物中R2是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基、F、Cl或所述的未取代或取代的-O-苯基。
如果取代基R1至R4包含一個或多個不對稱中心，則這些不對稱中心可以彼此獨立地具有S和R構型。這些化合物可以是旋光異構體、非對映體、外消旋體或它們的混合物形式。
本發(fā)明包括式I和II化合物的所有互變異構形式。
烷基可以是直鏈或支鏈的。如果它們帶有取代基或作為其它基團的取代基，例如在氟代烷基或烷氧基的情況中，這也是適用的。烷基的實例有甲基、乙基、正丙基、異丙基(＝1-甲基乙基)、正丁基、異丁基(＝2-甲基丙基)、仲丁基(＝1-甲基丙基)、叔丁基(＝1，1-二甲基乙基)、正戊基、異戊基、叔戊基、新戊基和己基。優(yōu)選的烷基有甲基、乙基、正丙基和異丙基。烷基中的一個或多個、例如1、2、3、4或5個氫原子可以被氟原子所替代。所述氟代烷基的實例有三氟甲基、2，2，2-三氟乙基和五氟乙基。被取代的烷基可以在任何位置上被取代。
環(huán)烷基的實例有環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基。環(huán)烷基中的一個或多個、例如1、2、3或4個氫原子可以被氟原子所替代。被取代的環(huán)烷基可以在任何位置上被取代。
苯基可以是未取代的或被相同或不同的基團取代一次或多次，例如被取代一次、兩次或三次。如果苯基被取代，其優(yōu)選具有一個或兩個相同或不同的取代基。這同樣適用于在基團如例如苯基烷基或苯氧基中的被取代的苯基。單取代苯基中的取代基可以在2位、3位或4位上。二取代的苯基可以在2，3位、2，4位、2，5位、2，6位、3，4位或3，5位上被取代。三取代苯基中的取代基可以在2，3，4位、2，3，5位、2，4，5位、2，4，6位、2，3，6位或3，4，5位上。
雜芳基可以是其中一個或多個環(huán)原子是氧原子、硫原子或氮原子、例如1、2或3個氮原子、1或2個氧原子、1或2個硫原子或各種雜原子的組合的芳環(huán)化合物。所述雜芳基可以在所有位置上被連接，例如在1位、2位、3位、4位、5位、6位、7位或8位上被連接。雜芳基可以是未取代的或被相同或不同的基團取代一次或多次，例如一次、兩次或三次。這同樣適用于如例如雜芳基烷基中的雜芳基。雜芳基的實例有呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、2，3-二氮雜萘基、喹喔啉基、喹唑啉基和噌啉基。
雜芳基特別是2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、1-、2-或3-吡咯基、1-、2-、4-或5-咪唑基、1-、3-、4-或5-吡唑基、1，2，3-三唑-1-、-4-或-5-基、1，2，4-三唑-1-、-3-或-5-基、1-或5-四唑基、2-、4-或5-噁唑基、3-、4-或5-異噁唑基、1，2，3-噁二唑-4-或-5-基、1，2，4-噁二唑-3-或-5-基、1，3，4-噁二唑-2-基或-5-基、2-、4-或5-噻唑基、3-、4-或5-異噻唑基、1，3，4-噻二唑-2-或-5-基、1，2，4-噻二唑-3-或-5-基、1，2，3-噻二唑-4-或-5-基、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-、5-或6-嘧啶基、3-或4-噠嗪基、吡嗪基、1-、2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基、1-、2-、4-或5-苯并咪唑基、1-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異喹啉基、2-、4-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基、3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基、2-、3-、5-、6-、7-或8-喹喔啉基、1-、4-、5-、6-、7-或8-2，3-二氮雜萘基。還包括這些化合物的相應的N-氧化物，即例如2-、3-或4-吡啶基1-氧化物。
特別優(yōu)選的雜芳基是2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、1-、2-或3-吡咯基、1-、2-、4-或5-咪唑基、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基、1-、3-、4-或5-吡唑基、2-、3-或4-吡啶基、2-或3-吡嗪基、2-、4-、5-或6-嘧啶基和3-或4-噠嗪基。
本發(fā)明還涉及制備式I和II化合物和/或其可藥用鹽的方法，該方法包括使式III或IV化合物與胍反應， 其中R1至R4具有所述的含義，且L是易于進行親核取代的離去基團。
其中L是烷氧基、優(yōu)選甲氧基、苯氧基、苯硫基、甲硫基、2-吡啶硫基、含氮雜環(huán)、優(yōu)選1-咪唑基的式III和IV的活化酸衍生物可以以本身已知的方法由相應的酰氯(式III、IV；L＝Cl)獲得，酰氯又可以通過本身已知的方法由相應的羧酸(式III、IV；L＝OH)獲得，例如使用亞硫酰氯。除式III和IV的酰氯(L＝Cl)外，通過本身已知的方法直接由相應的苯甲酸(式III、IV；L＝OH)制備式III和IV的其它活化酸衍生物也是可能的，例如，通過用氯化氫氣體的甲醇溶液處理制備其中L＝OCH3的式III和IV的甲酯、通過用羰基二咪唑處理制備式III和IV的?；溥?imidazolide)[L＝1-咪唑基，Staab，Angew.Chem.Int.英文版1，351-367(1962)]、用Cl-COOC2H5或甲苯磺酰氯在惰性溶劑中在存在三乙胺的情況下制備式III和IV的混合酸酐、用二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)或用O-[(氰基(乙氧基羰基)-亞甲基)氨基]-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(“TOTU”)對苯甲酸進行活化[21屆歐洲肽會議的會議錄，Peptides 1990，編者E.Giralt和D.Andreu，Escom，Leiden，1991]。在J.March，Advanced Organic Chemistry，第3版(John Wiley & Sons，1985，350頁)中給出了許多制備式III和IV的活化羧酸衍生物的適宜方法，其中給出了源文獻。
式III和IV的活化羧酸衍生物與胍的反應優(yōu)選在質子或非質子極性但惰性有機溶劑中以本身已知的方法進行。已經證明適于苯甲酸甲酯(III、IV；L＝OCH3)與胍的反應的那些溶劑有20℃至這些溶劑沸點的甲醇、異丙醇或THF?；衔颕II和IV與無鹽胍的大部分反應已在非質子惰性溶劑如THF、二甲氧基乙烷、二噁烷中有利地進行。但是，在III和IV與胍的反應中，在堿如例如NaOH存在下用水作為溶劑也是可能的。
如果L是Cl，則加入酸清除劑例如過量的胍以結合氫鹵酸是有利的。
本發(fā)明還包括式V的前體， R5等于氫或(C1-C4)-烷基，其中甲基可以位于芳環(huán)的2位或3位上。
五氟硫基苯甲酰基胍I和II通常是弱堿并且能與酸結合形成鹽。適宜的酸加成鹽是所有藥理學可接受的酸的鹽，例如鹵化物，特別是鹽酸鹽、乳酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽。
化合物I和II是被取代的?；?，并且可抑制細胞的鈉-質子反向轉運器(Na+/H+交換器，NHE)。
與已知化合物相比，本發(fā)明的化合物的顯著區(qū)別在于具有十分高的抑制Na+/H+交換的活性和改善的ADMET性質。異生素結構(特別是合適的“非天然/人造”SF5取代基的引入)阻礙代謝攻擊的可能性。這尤其導致更長的S9穩(wěn)定性(肝穩(wěn)定性、對酶攻擊的穩(wěn)定性)和更長的體內半衰期。這對吸收特性沒有顯著的影響，并且保留了酰基胍的高生物利用度。
與文獻中所述的一些酰基胍相反，此處所述的式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽沒有顯示出不需要的和不利的促尿鈉排泄性質。
由于其NHE-抑制性質，式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽適用于預防和治療由NHE活化或活化的NHE引起的疾病以及由與NHE有關的損害繼發(fā)引起的疾病。
因為NHE抑制劑主要通過其對細胞pH調節(jié)的影響發(fā)揮作用，所以它們通常可以與調節(jié)胞內pH的其它化合物有益地進行組合，適宜的組合伙伴有碳酸酐酶抑制劑、碳酸氫根離子轉運系統(tǒng)的抑制劑，如碳酸氫鈉協(xié)同轉運蛋白(NBC)抑制劑或鈉依賴性氯離子-碳酸氫根交換器(NCBE)抑制劑和對其它NHE亞型具有抑制作用的NHE抑制劑，因為通過它們增強或調節(jié)此處所述的NHE抑制劑的藥理學相關的pH-調節(jié)作用是可能的。
本發(fā)明的化合物的用途涉及預防和治療獸醫(yī)學和人類醫(yī)學中的急性和慢性疾病。
因此，本發(fā)明的NHE抑制劑適用于治療由局部缺血和由再灌注引起的疾病。
因為其藥理學性質，此處所述的化合物適于用作抗心律失常藥。
由于其心臟保護性質，式I和/或II的NHE抑制劑和/或其可藥用鹽非常適用于預防和治療梗塞并適用于治療心絞痛，在這些情況中其還可以預防性地抑制或顯著降低與局部缺血誘發(fā)的損害的發(fā)展有關的病理生理學過程，特別是在引發(fā)局部缺血誘發(fā)的心律失常中。由于其對病理性缺氧和局部缺血情況的保護作用，本發(fā)明所用的式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽由于其抑制細胞Na+/H+交換的機制而可用作治療所有急性或慢性局部缺血誘發(fā)的損害或由此原發(fā)性或繼發(fā)性誘發(fā)的疾病的藥物。
本發(fā)明還涉及它們作為用于手術介入的藥物的用途。因此，可以在器官移植過程中使用所述化合物，可以用這些化合物在摘除前和切除期間保護供體的器官、保護例如用生理浴液處理或在生理浴液中保存的以及轉移至受體機體過程中的已摘除的器官。
當進行血管成形手術介入時，例如對心臟以及外周器官和血管進行手術介入時，本發(fā)明的化合物同樣是具有保護作用的有價值的藥物。
已經表明本發(fā)明的化合物對于威脅生命的心律失常是非常有效的藥物?？赏Ｖ剐氖依w維性顫動并恢復心臟的生理竇性心律。
因為人組織和器官、尤其是心臟的NHE1抑制劑不僅可以針對局部缺血和再灌注引起的損害，而且可以針對藥物、如特別是用于癌癥治療和自身免疫性疾病治療的那些藥物的細胞毒性作用提供有效保護，所以與式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽組合施用適用于抑制所述化合物的細胞毒性、尤其是心臟毒性副作用。與NHE1抑制劑共同給藥而產生的細胞毒性作用、尤其是心臟毒性的降低使得還可能增加細胞毒性治療劑的劑量和/或延長該類藥物的藥物治療。通過與NHE抑制劑組合可以大大增加所述細胞毒性治療的治療益處。
此外，當存在損害心臟的甲狀腺激素過量產生、甲狀腺毒癥或外部供給甲狀腺激素時，可以使用本發(fā)明式I和/或II的NHE1抑制劑和/或其可藥用鹽。因此，式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽適用于改善用心臟毒性藥物進行的治療。
鑒于其針對局部缺血誘發(fā)的損害的保護作用，本發(fā)明的化合物還適于作為治療神經系統(tǒng)、尤其是中樞神經系統(tǒng)局部缺血的藥物，例如適于作為治療中風或腦水腫的藥物。
式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽還適用于治療和預防由中樞神經系統(tǒng)興奮過度引起的疾病和病癥，特別是用于治療癲癇病癥、中樞誘發(fā)的陣攣性和強直性痙攣、心理抑郁狀態(tài)、焦慮癥和精神病。在這些情況中，可以使用單獨的、或者與具有抗癲癇活性的其它物質或抗精神病活性成分或碳酸酐酶抑制劑例如乙酰唑胺組合的、或者與其它NHE抑制劑或其它鈉依賴性氯離子-碳酸氫根交換器(NCBE)抑制劑組合的此處所述的NHE抑制劑。
本發(fā)明所用的式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽也同樣適用于治療各種類型的休克，例如，過敏性休克、心源性休克、低血容量性休克和細菌性休克。
式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽也可用于預防和治療血栓形成性病癥，因為作為NHE抑制劑它們能抑制血小板本身的凝集。它們還能抑制或預防在局部缺血和再灌注后發(fā)生的炎癥和凝血介質、尤其是馮·維勒布蘭德(Von Willebrand)因子和血栓形成性選擇蛋白的過度釋放。因此，其可減少和消除重要血栓形成因子的致病作用。因此，本發(fā)明的NHE抑制劑可以與其它抗凝劑和/或血栓溶解活性成分如例如重組或天然的組織纖溶酶原激活物、鏈激酶、尿激酶、乙酰水楊酸、凝血酶拮抗劑、Xa因子拮抗劑、具有溶解纖維蛋白活性的藥物、血栓烷受體拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑、VIIa因子拮抗劑、氯吡格雷、噻氯匹定等組合使用。本發(fā)明的NHE抑制劑與NCBE抑制劑和/或與碳酸酐酶抑制劑如例如乙酰唑胺組合使用特別有益。
本發(fā)明所用的式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽的另一顯著特征在于其對細胞增殖、例如成纖維細胞增殖和平滑肌細胞增殖的強抑制作用。因此，式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽適于作為其中細胞增殖是主要或次要原因的疾病的有價值的治療劑，因此，可以用作抗動脈粥樣硬化藥、用于慢性腎衰竭、癌癥的藥物。
還表明本發(fā)明的化合物可抑制細胞遷移。因此，式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽適于作為其中細胞遷移是主要或次要原因的疾病如例如具有顯著轉移傾向的癌癥的有價值的治療劑。
式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽的另一顯著特征在于其可延緩或預防纖維化病癥。因此，它們適于作為治療心臟纖維化、肺纖維化、肝纖維化、腎纖維化及其它纖維化病癥的極佳物質。因此，它們還可用于治療器官肥大和增生，例如心臟肥大和增生以及前列腺肥大和增生。因此，其適用于預防和治療心力衰竭(充血性心力衰竭＝CHF)和用于治療和預防前列腺增生或前列腺肥大。
因為在原發(fā)性高血壓中NHE顯著升高，所以式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽適用于預防和治療高血壓以及心血管病癥。
在這些情況中，它們可以被單獨使用或與適宜的組合和制劑伙伴一起使用用于治療高血壓和心血管病癥。因此，例如，可以與一種或多種具有噻嗪樣作用的利尿藥、袢利尿藥、醛固酮和偽醛固酮(pseudoaldosterone)拮抗劑，如氫氯噻嗪、吲達帕胺、泊利噻嗪、呋塞米、吡咯他尼、托拉塞米、布美他尼、阿米洛利、氨苯蝶啶、螺內酯或依普利酮(eplerone)組合使用。本發(fā)明的NHE抑制劑還可以與鈣通道阻斷劑如維拉帕米、地爾硫、氨氯地平或硝苯地平以及與ACE抑制劑例如雷米普利、依那普利、賴諾普利、福辛普利或卡托普利組合使用。其它有益的組合伙伴還有β-阻斷劑如美托洛爾、沙丁胺醇等、血管緊張素受體及其受體亞型拮抗劑如氯沙坦、依貝沙坦、纈沙坦、奧馬曲拉、gemopatrilat、內皮縮血管肽拮抗劑、腎素抑制劑、腺苷受體激動劑、鉀通道抑制劑和活化劑如格列本脲、格列美脲、二氮嗪、克羅卡林、米諾地爾及其衍生物、線粒體ATP-敏感性鉀通道(mitoK(ATP)通道)活化劑、Kv1.5抑制劑等。
已經表明式I和/或II的NHE1抑制劑和/或其可藥用鹽具有顯著的抗炎作用，因此可用作抗炎藥。在這方面，對炎癥介質釋放的抑制作用特別值得注意。因此，可以使用單獨的或與抗炎藥組合的所述化合物用于預防或治療慢性和急性炎性病癥。優(yōu)選使用的組合伙伴是甾體和非甾體抗炎藥。
另外，已經發(fā)現(xiàn)式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽對血清脂蛋白表現(xiàn)出有益作用。根據(jù)公知常識可知，被稱為高脂蛋白血癥的血脂水平過高是形成動脈硬化性血管損傷、尤其是冠心病的主要危險因素。因此，使升高的血清脂蛋白降低對于預防和消退動脈粥樣硬化損傷非常重要。除了降低血清總膽固醇外，特別重要的是降低所述總膽固醇中特定的致動脈粥樣化脂質部分的比例，特別是降低低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)的比例，因為這些脂質部分是致動脈粥樣化危險因子。相反，針對冠心病的保護作用歸因于高密度脂蛋白。因此，降血脂藥應當不僅能降低總膽固醇，而且特別是應能降低VLDL和LDL血清膽固醇分數(shù)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)NHE1抑制劑在影響血清脂質水平方面表現(xiàn)出有價值的治療上可利用的性質。因此，正如所觀察到的那樣，它們顯著降低升高的LDL和VLDL血清濃度，所述的血清濃度升高可例如由攝入的富含膽固醇-和脂質-飲食增加或發(fā)生病理性代謝改變、例如與遺傳有關的高脂血癥引起。因此，它們可通過消除作為起因的危險因素而用于預防和消退動脈粥樣硬化損傷。在此不僅包括原發(fā)性高脂血癥，而且還包括某些繼發(fā)性高脂血癥，例如與糖尿病相伴而發(fā)生的高脂血癥。此外，式I和/或II化合物和/或其可藥用鹽可以顯著降低由代謝異常所誘發(fā)的梗塞，特別是可以顯著降低所誘發(fā)的梗塞尺寸及其嚴重程度。因此，所述化合物可有利地用于制備治療高膽固醇血癥的藥物；制備預防動脈粥樣化形成的藥物；制備預防和治療動脈粥樣硬化的藥物；制備預防和治療由膽固醇水平升高誘發(fā)的疾病的藥物；制備預防和治療由內皮功能障礙誘發(fā)的疾病的藥物；制備預防和治療動脈粥樣硬化誘發(fā)的高血壓的藥物；制備預防和治療動脈粥樣硬化誘發(fā)的血栓形成的藥物；制備預防和治療高膽固醇血癥誘發(fā)的和內皮功能障礙誘發(fā)的局部缺血性損害和局部缺血后的再灌注損害的藥物；制備預防和治療高膽固醇血癥誘發(fā)的和內皮功能障礙誘發(fā)的心臟肥大和心肌病的藥物以及預防和治療充血性心力衰竭(CHF)的藥物；制備預防和治療高膽固醇血癥誘發(fā)的和內皮功能障礙誘發(fā)的冠狀動脈血管痙攣和心肌梗塞的藥物；制備與降血壓物質、優(yōu)選與血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑組合的治療和預防所述病癥的藥物。已證明式I和/或II的NHE抑制劑和/或其可藥用鹽與降低血脂水平的活性成分、優(yōu)選與HMG-CoA還原酶抑制劑(例如洛伐他汀或普伐他汀)的組合(后者產生降血脂作用并因此增加式I和/或II的NHE抑制劑和/或其可藥用鹽的降血脂性質)是一種具有增強的作用并可降低活性成分用量的有利組合。
因此，式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽對各種起因的內皮損害都具有有效的保護作用。這種保護血管不受內皮功能障礙綜合征影響的保護作用指的是式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽是預防和治療冠狀動脈痙攣、外周血管疾病，特別是間歇性跛行、動脈粥樣化形成和動脈粥樣硬化、左心室肥大和擴張性心肌病和血栓形成性病癥的有價值的藥物。
還已經發(fā)現(xiàn)，式I和/或II的苯甲?；液?或其可藥用鹽適用于治療胰島素耐受性受限的非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)。在這種情況中，將本發(fā)明的化合物與雙胍如甲福明，與抗糖尿病的磺酰脲類如格列本脲、格列美脲、甲苯磺丁脲等等，與葡萄糖苷酶抑制劑，與PPAR激動劑如羅格列酮、吡格列酮等等，與不同給藥形式的胰島素產品，與DB4抑制劑，與胰島素敏化劑或與氯茴苯酸聯(lián)合可有益地增強本發(fā)明化合物的抗糖尿病活性及其作用的質量。
除急性抗糖尿病作用外，式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽還可以阻礙糖尿病后期并發(fā)癥的形成，因此，可以用作預防和治療糖尿病晚期損害，如糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、糖尿病性心肌病和由于糖尿病而發(fā)生的其它病癥的藥物。在這種情況中，可以有利地將其與剛才在NIDDM治療中所描述的抗糖尿病藥聯(lián)用。在這種情況中，與胰島素有益劑型的組合特別重要。
除了保護不受急性局部缺血事件和隨后同樣急性的應力性再灌注事件影響的保護作用外，本發(fā)明I和/或II的NHE抑制劑和/或其可藥用鹽還具有對抗整個哺乳動物生物體與表現(xiàn)出慢性進行性老化過程有關的疾病和病癥和獨立發(fā)生的急性灌注不足狀態(tài)以及低于正常的非局部缺血性情況的疾病和病癥的可利用的直接治療作用?，F(xiàn)在可以用NHE抑制劑進行治療的在漫長的老化過程中誘發(fā)的這些病理學的與年齡有關的表現(xiàn)，如疾病、勞動能力喪失和死亡是實際上是由生命器官及其功能中與年齡有關的改變所造成的疾病和病癥，并且對于日益變老的生物體而言越來越重要。
和與年齡有關的功能損害或與年齡有關的器官衰竭的表現(xiàn)有關的病癥有例如，血管對收縮和松弛反應的響應和反應性不足。這種與年齡有關的血管對收縮和松弛刺激的反應性方面的下降是心血管系統(tǒng)的必然過程，因此也是生命和健康的必然過程，NHE抑制劑可以顯著消除或降低這種過程。血管反應性得到維護的一個重要函數(shù)和量度是內皮功能障礙中與年齡有關的進程被阻滯或延遲，NHE抑制劑可以十分顯著地消除這一進程。因此，式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽十分適用于治療和預防內皮功能障礙中與年齡有關的進程，尤其是間歇性跛行。
可以刻劃老化進程的另一個變量的實例是心臟的收縮性下降和心臟對所需的心臟泵出量的適應性下降。在大多數(shù)情況中，由于老化過程而導致的這種心臟效率的降低與特別是心肌組織中結締組織的沉積而造成的心臟功能障礙有關。這種結締組織的沉積的特征為心臟的重量增加、心臟增大和心臟功能受限。令人吃驚地是，幾乎可以完全抑制心臟器官的該類老化。因此，式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽十分適用于治療和預防心力衰竭、充血性心力衰竭(CHF)。
雖然之前的專利和專利申請已經對已經發(fā)生的各種形式的癌癥的治療提出了保護，但是現(xiàn)在不僅十分令人吃驚地發(fā)現(xiàn)通過用NHE抑制劑抑制增殖可治愈已經存在的癌癥，而且還可以用NHE抑制劑預防和十分顯著地阻滯與年齡有關的癌癥的發(fā)生率。一種特別制得注意的發(fā)現(xiàn)是不僅某些類型的癌癥，而且由于變老而發(fā)生的所有器官的病癥都可以被抑制，或其發(fā)生可以被顯著延遲。因此，式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽十分適用于治療并且特別是預防與年齡有關的各種類型的癌癥。
現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，不僅可以延遲(在時間上明顯偏移并且超出了正常統(tǒng)計的程度)所研究的所有器官，包括心、血管、肝發(fā)生與年齡有關的病癥，而且可以顯著延遲老年人的癌癥。相反，還令人吃驚地將生命延長至迄今為止沒有其它任何藥物或任何天然產物可以獲得的程度上。除給人和動物單獨應用該活性成分外，NHE抑制劑這種獨特的作用還使得可以將這些NHE抑制劑與老年醫(yī)學中所用的基于不同機理起作用的其它活性成分、措施、物質和天然產物聯(lián)用。在老年醫(yī)學治療中所用的該類活性成分有特定的維生素和具有抗氧化活性的物質。因為在熱量負載或食物攝入和老化過程之間有相關性，所以可以采取與飲食措施的組合，例如與食欲抑制劑相結合。同樣可以考慮與降血壓藥如ACE抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑、利尿藥、Ca+2拮抗劑等等相結合或與代謝正?；幬锶缃档湍懝檀嫉奈镔|相結合。
因此，在保持高的生活質量的同時，式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽十分適用于預防與年齡有關的組織改變并且十分適用于延長生命。
本發(fā)明的化合物是有效的細胞鈉-質子反向轉運器(Na/H交換器)抑制劑，在許多病癥(原發(fā)性高血壓、動脈粥樣硬化、糖尿病等等)中所說的細胞鈉-質子反向轉運在易于進行測量的細胞如紅細胞、血小板或白細胞中也會增加。因此，本發(fā)明所用的化合物適宜作為重要和簡單的科學工具，例如其不僅可作為測定和區(qū)分不同類型的高血壓的診斷劑，而且還可以作為測定和區(qū)分不同類型的動脈粥樣硬化、糖尿病和糖尿病晚期并發(fā)癥、增殖性病癥等的診斷劑。
還要求保護一種用于人、獸醫(yī)或植物保護應用的藥物，其包含有效量的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽以及可藥用的載體和添加劑，其可以僅包含式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽或者可以還包含其它的藥學成分或藥物。
在這種情況中，例如可以將包含式I和/或II的化合物或其可藥用鹽的藥物口服給藥、胃腸外給藥、靜脈內給藥、直腸給藥、經皮給藥或吸入給藥，優(yōu)選的給藥將取決于病癥的特定特性。此外，在獸藥和人藥中可以單獨使用化合物I和/或II或者可以將其與藥學賦形劑一起使用。所說的藥物一般每個劑量單位包含0.01mg至1g式I和/或II的化合物或其可藥用鹽作為活性成分。
適于所需藥物制劑的賦形劑對于本領域普通技術人員而言是熟悉的。除溶劑、膠凝劑、栓劑基質、片劑賦形劑和其它活性成分載體外，其還可以使用例如抗氧劑、分散劑、乳化劑、止泡劑、矯味劑、防腐劑、增溶劑或著色劑。
對于口服給藥而言，將活性化合物與適用于此目的的添加劑如載體、穩(wěn)定劑或惰性稀釋劑進行混合，然后用常規(guī)方法將其轉化成適宜的劑型如片劑、包衣片、硬明膠膠囊、水性、醇性或油性溶液?？梢允褂玫亩栊暂d體的實例有阿拉伯膠、氧化鎂、碳酸鎂、磷酸鉀、乳糖、葡萄糖或淀粉，尤其是玉米淀粉。此外，該制備既可以采取干顆粒的形式又可以采取濕顆粒的形式。適宜的油性載體或溶劑的實例有植物或動物油如向日葵油或魚肝油。
對于皮下、肌內或靜脈內給藥而言，如果需要，可以用常用于此目的的物質如增溶劑、乳化劑或其它賦形劑將該活性化合物轉化成溶液、混懸液或乳劑。適宜溶劑的實例有水、生理鹽水或醇，例如乙醇、丙醇、甘油、以及糖溶液如葡萄糖或甘露醇溶液，或者所提及的各種溶劑的混合物。
適宜作為以氣霧劑或噴霧劑的形式進行給藥的藥物制劑有例如式I和/或II的活性成分和/或其可藥用鹽在可藥用的溶劑中的溶液、混懸液或乳劑，所說的可藥用的溶劑如，特別是乙醇或水，或者該類溶劑的混合物。
如果需要的話，該類制劑還包含其它藥用賦形劑如表面活性劑、乳化劑和穩(wěn)定劑以及拋射劑氣體。該類制劑通常包含約0.1至10，特別是約0.3至3％重量的活性成分。
式I和/或II的活性成分的給藥劑量以及給藥頻率取決于所用化合物作用的效力和持續(xù)時間；此外，還取決于被治療病癥的性質和嚴重程度以及被治療哺乳動物的性別、年齡、體重和個體響應能力。
對于體重約75kg的患者而言，式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽的日劑量平均為至少0.001mg/kg體重，優(yōu)選0.01mg/kg體重至最大10mg/kg，優(yōu)選1mg/kg體重。對于病癥的急性發(fā)作而言，例如出現(xiàn)心肌梗塞后立即，可能需要給予更高，并且特別是更頻繁的劑量，例如每天高至4個單一劑量。例如對于重癥監(jiān)護病房的梗塞患者而言，可能需要每天高至700mg，特別是以靜脈給藥來進行，并且本發(fā)明的化合物可以通過輸入來進行給藥。
縮寫列表ADMET吸收-分布-代謝-排泄-毒理學CDI 二咪唑-1-基甲酮
DIP 二異丙醚DIPEA 二異丙基乙胺DME 1，2-二甲氧基乙烷DMF N，N-二甲基甲酰胺EA 乙酸乙酯(EtOAc)eq. 當量HEP 正-庚烷HOAc醋酸KOtBu 2-甲基丙-2-醇鉀MeOH甲醇mp 熔點MTB 叔-丁基甲基醚Pd(dppf)2氯化[1，1′-二-(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)(1∶1)二氯甲烷復合物RT 室溫TFA 三氟醋酸THF 四氫呋喃TMEDA N，N，N′，N′-四甲基乙烷-1，2-二胺實驗部分實施例13-五氟硫基苯甲?；?，鹽酸鹽 a)3-五氟硫基苯甲酸將700mg(3-碘苯基)硫五氟化物(Tetrahedron 56，(2000)3399)和300mg碘甲烷溶解于20ml乙醚(無水)中，然后將該溶液緩慢滴加到155mg鎂/10ml乙醚中。在將其在回流下攪拌1小時后，將該反應混合物冷卻至-10℃并在大氣壓下通入CO2。將該反應混合物在RT下攪拌16小時，然后用稀HCl水溶液將其調節(jié)至pH＝1并用EA對其萃取3次，每次使用50ml EA。在用MgSO4干燥后，在真空中除去溶劑。進行硅膠色譜，用DIP/2％HOAc進行洗脫，得到200mg無色的無定形粉末。
Rf(DIP/2％HOAc)＝0.51MS(ES+)249b)3-五氟硫基苯甲?；?，鹽酸鹽將30mg 3-五氟硫基苯甲酸與24mg CDI一起在5ml DMF(無水)中在RT下攪拌3小時。同時，將69mg氯化胍與68mg KOtBu一起在5ml DMF(無水)中在RT下攪拌30分鐘。然后，將兩種溶液合并并將其在RT下放置18小時。將該反應混合物用20ml EA進行稀釋并用50％濃NaHCO3水溶液洗滌3次，每次使用5ml 50％濃NaHCO3水溶液。將其用MgSO4進行干燥，然后在真空下除去溶劑，然后加入過量的5％HCl水溶液。在真空下除去揮發(fā)性組分，得到33mg無定形的固體。
Rf(EA)＝0.30MS(ES+)290實施例24-五氟硫基苯甲?；?，鹽酸鹽 a)4-五氟硫基苯甲酸將2.7g(4-碘苯基)硫五氟化物(Tetrahedron 56，(2000)3399)與實施例1a)相似地進行反應，得到630mg無色的無定形固體。
Rf(DIP/2％HOAc)＝0.51MS(ES+)249b)4-五氟硫基苯甲?；遥}酸鹽將50mg 4-五氟硫基苯甲酸與實施例1b)相似地進行反應，得到33mg無定形粉末形式的實施例2的標題化合物。
Rf(EA)＝0.30MS(ES+)290實施例34-五氟硫基-2-甲基苯甲?；?a)4-五氟硫基-2-甲基苯甲酸將3.09g TMEDA溶解于30ml THF(無水)中并將其在-90℃下滴加到20.5ml 1.3M仲-丁基鋰的環(huán)己烷溶液中。然后在-90℃下向其中滴加3.0g 4-五氟硫基苯甲酸在20ml THF(無水)中的溶液。在將其在-90℃下攪拌1小時后，向其中滴加5.15g碘甲烷在20ml THF(無水)中的溶液。在此期間，將溫度保持在-80℃下。在將其在-78℃下攪拌20分鐘后，向其中注入100ml水，用稀HCl水溶液將pH調至pH＝1，用MTB將該混合物萃取3次，每次使用100ml MTB。在用MgSO4干燥后，在真空條件下除去溶劑。先用硅膠色譜對殘余物進行純化，用DIP/2％HOAc進行洗脫，得到1.60g 4-五氟硫基苯甲酸和4-五氟硫基-2-甲基苯甲酸的混合物。在下面的條件下，將該混合物重新用色譜法進行處理柱Waters X-terra 250×50mm+預柱50×50mm填充物C18 10μM流速 150ml/分鐘梯度(線性過程)溶劑A水+2％三氟醋酸溶劑B乙腈
得到900mg保留時間為21.14分鐘的無色固體形式的標題化合物和360mg保留時間為20.18分鐘的4-五氟硫基苯甲酸(在220nm的波長下進行檢測)。
Rf(DIP/2％HOAc)＝0.5MS(CI+)263；MS(ES-)261b)4-五氟硫基-2-甲基苯甲?；覍?10mg 4-五氟硫基-2-甲基苯甲酸溶解于25ml DMF(無水)中，在RT下向其中加入844mg CDI，然后將該混合物在RT下攪拌6小時(溶液1)。此外，將1.988g鹽酸胍和1.947g KOtBu在RT下在10ml DMF(無水)中攪拌30分鐘(溶液2)。然后，將溶液2加入到溶液1中，并將該反應混合物在RT下攪拌17小時。然后，將其用200ml MTB進行稀釋并用100ml水洗滌一次。然后用100ml MTB對水相進行萃取。然后將所合并的有機相再用水洗滌三次，每次使用50ml水，然后用MgSO4對其進行干燥。在真空下除去溶劑，將殘余物用硅膠色譜進行處理，用EA進行洗脫。得到600mg白色結晶，mp為185℃。
Rf(EA)＝0.22MS(ES+)304實施例4 N-[2-氯-4-五氟硫基苯甲酰基]胍 a)2-氯-4-五氟硫基苯甲酸將20.0ml TMEDA溶解于150ml THF(無水)中并且在-80℃至-90℃的溫度下向其中加入93.0ml 1.25M仲丁基鋰的環(huán)己烷溶液。然后，在-87℃至-93℃的溫度下，在35分鐘內向其中滴加4-五氟硫基苯甲酸(實施例2a)在50ml THF(無水)中的溶液。在將其在-90℃下攪拌2小時后，在-90℃下向其中滴加38.2g 1，1，1，2，2，2-六氯乙烷在60ml THF(無水)中的溶液。將該混合物加溫至-70℃，然后，向其中滴加100ml水。在真空下除去溶劑，將殘余物用硅膠色譜進行處理，用DIP/2％HOAc進行洗脫，得到5.0g部分結晶的油狀物形式的所需產物。
Rf(DIP/2％HOAc)＝0.21MS(EI)282(M+1)+b)N-[2-氯-4-五氟硫基苯甲酰基]胍將170mg 2-氯-4-五氟硫基苯甲酸溶解于3ml DMF(無水)中，并且在RT下向其中加入127mg CDI。將其在RT下攪拌2小時，產生中間體?；溥?。
同時，將337mg KOt-Bu溶解于5ml DMF(無水)中，然后向其中滴加344mg鹽酸胍在5ml DMF(無水)中的溶液。將該溶液在RT下攪拌30分鐘，然后在RT下向其中滴加?；溥虻娜芤?。將該反應混合物在RT下放置16小時，然后在真空下除去溶劑。向殘余物中加入50ml EA/20ml水并用水將其洗滌兩次，每次使用20ml水，然后用飽和NaCl水溶液洗滌兩次，每次使用20ml飽和NaCl水溶液。用MgSO4干燥，然后在真空下除去溶劑。將殘余物用硅膠色譜進行處理，用EA進行洗脫，得到90mg產物(無定形的)。
Rf(EA)0.13MS(ES+)324(M+1)+實施例5 N-[2-(4-氟苯氧基)-4-五氟硫基苯甲?；鵠胍 a)2-氯-4-五氟硫基苯甲酸甲酯將4.3g 2-氯-4-五氟硫基苯甲酸溶解于50ml甲醇中，并在RT下向其中緩慢滴加5.6ml SOCl2。在將其在回流下煮沸6小時并在真空下除去揮發(fā)性組分后，向殘余物中加入100ml甲苯吸收，并再次在真空下除去揮發(fā)性組分。得到4.1g無色的油狀物。
Rf(HEP/DIP 1∶1)＝0.44b)2-(4-氟苯氧基)-4-五氟硫基苯甲酸甲酯將300mg 2-氯-4-五氟硫基苯甲酸甲酯、113mg 4-氟苯酚和659mgCs2CO3溶解于1.5ml DMF(無水)中并將其在120℃下進行攪拌。然后，將該混合物冷卻并用10ml EA對其進行稀釋，然后用水洗滌3次，每次使用5ml水。用MgSO4干燥，然后在真空下除去溶劑。得到120mg無定形的固體，然后用反相硅膠色譜對其進行處理流速30ml/分鐘梯度ACN＝A；水+0.2％TFA＝B
0-3分鐘5％A；-14分鐘95％A；15-18分鐘95％A；-20分鐘5％A柱XTerra C18 5μm 30×100mm得到20mg無定形的固體。
Rf硅膠(HEP/DIP 1∶1)＝0.44c)N-[2-(4-氟苯氧基)-4-五氟硫基苯甲?；鵠胍將270mg KOt-Bu和324mg鹽酸胍在RT下在1ml DMF(無水)中攪拌30分鐘。然后向其中加入54mg 2-(4-氟苯氧基)-4-五氟硫基苯甲酸甲酯在1ml DMF(無水)中的溶液。將其在RT下攪拌2小時后，將其倒入到10ml水中，用HCl水溶液將其pH調至pH＝8，用MTB對其萃取3次，每次使用5ml MTB。將有機相用10ml水進行洗滌，然后用MgSO4干燥，最后，在真空下除去溶劑。得到20mg無定形的固體。
Rf(EA)＝0.22MS(ES+)400(M+1)+實施例6 N-(2-甲基-5-五氟硫基苯甲?；?胍 a)1-二氯甲基-2-硝基-4-五氟硫基苯將5.4g KOtBu溶解于25ml DMF(無水)和20ml THF(無水)中并將其冷卻至-73℃。然后在將溫度維持在低于-67℃的情況下，盡可能迅速地向其中滴加3.0g 1-硝基-3-五氟硫基苯和1.1ml CHCl3在15ml DMF(無水)中的溶液。將該混合物在-70℃下攪拌1分鐘，然后向其中注入15ml在15ml甲醇中的冰醋酸并將其加溫至RT。將該反應混合物傾倒到200ml水中并用CH2Cl2對其萃取3次，每次使用100ml CH2Cl2。然后將有機相用飽和Na2CO3水溶液洗滌三次，每次使用50ml飽和Na2CO3水溶液。用MgSO4進行干燥，然后在真空下除去溶劑。將殘余物用硅膠色譜進行處理，用EA/HEP 1∶10進行洗脫，得到3.0g無色油狀物。
Rf(EA/HEP 1∶10)＝0.78b)2-甲基-5-五氟硫基苯胺將2.0g 1-二氯甲基-2-硝基-4-五氟硫基苯溶解于25ml DME中，然后，在加入200mg Pd/C(5％)和100ml飽和NaHCO3水溶液后，將其在5巴H2下氫化54小時。然后，通過過濾除去催化劑并用MTB對該反應溶液萃取3次，每次使用50ml MTB。用MgSO4進行干燥，然后在真空下除去溶劑。得到1.1g無色的油狀物。
Rf(DIP)＝0.42c)2-溴-1-甲基-4-五氟硫基苯將1.6g 2-甲基-5-五氟硫基苯胺溶解于15ml冰醋酸中，然后在5℃下向其中滴加3ml 48％的HBr水溶液。在此期間形成沉淀。然后，在0℃至5℃的溫度下，在10分鐘內向其中滴加0.52g在3ml水中的NaNO2。然后，將這種重氮鹽的溶液傾倒到1.2g CuBr在10ml 48％HBr水溶液和10ml水中的混懸液中。將其在RT下攪拌30分鐘，然后用50ml水進行稀釋，然后用DIP萃取3次，每次使用50ml DIP。然后將有機相用飽和Na2CO3水溶液洗滌2次，每次使用50ml飽和Na2CO3水溶液。用MgSO4進行干燥，然后在真空下除去溶劑。得到1.6g可流動的油狀物。
Rf(MTB/正-戊烷1∶5)＝0.67d)2-甲基-5-五氟硫基苯甲酸將200mg 2-溴-1-甲基-4-五氟硫基苯溶解于6ml DMF、3ml三-正丁基胺和0.5ml水中，并向其中加入129mg Cs2CO3。然后向其中加入15.1mgPd(OAc)2和35.3mg三苯基膦，并將該混合物在CO下，在大氣壓下回流煮沸6小時。將該反應混合物用100ml EA和30ml水稀釋，用HCl水溶性將其調至pH＝2-3并用EA對其萃取兩次，每次使用30ml EA。用MgSO4進行干燥，然后在真空下除去溶劑。用反相色譜進行處理，得到17mg無定形固體。
色譜法運行3次HPLC；用梯度1運行1次，用梯度2運行2次。
HPLC梯度1和梯度2，二者的運行時間都為20分鐘流動相水(雙蒸水)+0.2％TFA，乙腈(Chromasolv)；流速30ml/分鐘柱Waters XterraTMMS C18 5μm，30×100mmMS標準20分鐘，級分隨時間流逝進行(by time)梯度1 梯度20-2.5分鐘10％ACN0-2.5分鐘10％ACN3.0分鐘 25％ACN3.0分鐘 20％ACN14.0分鐘 75％ACN14.0分鐘 60％ACN15.0分鐘 95％ACN15.0分鐘 95％ACN17.5分鐘 10％ACN17.5分鐘 10％ACNLCMS(ES-)261(M-1)-e)N-(2-甲基-5-五氟硫基苯甲?；?胍將17.0mg 2-甲基-5-五氟硫基苯甲酸溶解于2ml DMF(無水)中，在加入15mg CDI后，將其在RT下攪拌4小時。
同時，將36.5mg KOt-Bu和37.3mg鹽酸胍溶解于2ml無水DMF中并將其在RT下攪拌30分鐘。然后，將該胍堿的溶液滴加到上面的?；溥蛑胁⑵湓赗T下放置16小時。在真空下除去溶劑，將殘余物用5ml水稀釋并用HCl水溶液調至pH＝9。然后用EA萃取3次，每次使用10ml EA。用MgSO4進行干燥，然后在真空下除去溶劑。用硅膠色譜進行處理，用EA進行洗脫，得到7.0mg無定形固體形式的產物。
Rf(EA)＝0.20MS(ES+)304(M+1)+NHE抑制方法如下所述的那樣來測定NHE-1抑制的IC50[nM]
通過測量在表達人NHE-1的轉染細胞系中pHi的恢復來測定NHE-1抑制作用的FLIPR試驗該試驗是用具有帶有透明底的黑壁96-孔微量滴定板的FLIPR(熒光成像板讀數(shù)器)進行的。在前一天以25000個細胞/孔的密度將表達各種NHE亞型的轉染細胞系(由于誘變和隨后的選擇，母細胞系LAP-1不表現(xiàn)出內源性NHE活性)進行接種。[用于轉染細胞的生長培養(yǎng)基(Iscove+10％胎牛血清)還包含作為選擇抗生素的G418從而確保存在轉染的序列。]實際的試驗是通過除去生長培養(yǎng)基并向每個孔中加入100μl加樣緩沖液(5μM在20mM NH4Cl、115mM氯化膽堿、1mM MgCl2、1mM CaCl2、5mM KCl、20mM HEPES、5mM葡萄糖中的BCECF-AM [2′，7′-二(羧基乙基)-5-(和-6-)羧基熒光素，乙酰氧基甲基酯]；pH 7.4[用KOH進行調節(jié)])開始的。然后將這些細胞在37℃下培養(yǎng)20分鐘。這種培養(yǎng)可使細胞帶有熒光染料(其熒光強度取決于pHi)和NH4Cl(其使得細胞略微呈堿性)。[酯形式的無熒光的染料前體BCECF-AM可以透過膜。真正的染料BCECF不能透過膜，但是可以通過酯酶被釋放到細胞內。]培養(yǎng)20分鐘后，通過在細胞洗滌器(Tecan Columbus)中用400μl洗滌緩沖液(133.8mM氯化膽堿，4.7mM KCl，1.25mM MgCl2，1.25mM CaCl2，0.97mM K2HPO4，0.23mM KH2PO4，5mM HEPES，5mM葡萄糖；pH 7.4[用KOH進行調節(jié)])洗滌3次來除去包含NH4Cl和游離BCECF-AM的加樣緩沖液。留在孔里的殘余體積為90μl(可能為50-125μl)。這種洗滌步驟可以除去游離BCECF-AM，并且由于除去了外部的NH4+離子而產生了細胞內的酸化(～pHi 6.3-6.4)。
因為通過除去細胞外的NH4+和隨后NH3立即通過細胞膜排出而擾亂了NH4+與NH3和H+的細胞內平衡，所以洗滌過程使得H+留在細胞內，其造成了細胞內的酸化。如果其持續(xù)的足夠長，則其最終可導致細胞死亡。
因此，在洗滌緩沖液中不含鈉(＜1mM)很重要，這是因為細胞外鈉離子將通過克隆的NHE異構形的活性而導致pHi的立即恢復。
同樣重要的是，所用的所有緩沖液(加樣緩沖液、洗滌緩沖液、恢復緩沖液)均不包含任何HCO3-離子，這是因為存在的碳酸氫根將導致存在于母LAP-1細胞系中的干擾性碳酸氫根依賴性pHi調節(jié)系統(tǒng)的活化。
然后，將該具有酸化的細胞的微量滴定板(在酸化后最多20分鐘)轉移到FLIPR中。在FLIPR中，用氬激光器所產生的波長為488nm的光來激發(fā)細胞內的熒光染料，并對測量參數(shù)(激光功率、照明時間和FLIPR中所含有的CCD相機的孔徑)進行選擇，從而使得每孔的平均熒光信號為30000至35000個相對熒光單位。
FLIPR中的實際測量是在軟件控制下每隔兩秒用CCD相機進行照相來開始的。在10秒后，通過用FLIPR中的96-孔吸管操縱器加入90μl恢復緩沖液(133.8mM NaCl，4.7mM KCl，1.25mM MgCl2，1.25mM CaCl2，0.97mM K2HPO4，0.23mM KH2PO4，10mM HEPES，5mM葡萄糖；pH 7.4[用NaOH進行調節(jié)])來開始細胞內pH的恢復。
陽性對照孔(100％NHE活性)是向其中加入了純恢復緩沖液的孔，而陰性對照(0％NHE活性)中加入的是洗滌緩沖液。向所有其它孔中加入具有兩倍試驗物質濃度的恢復緩沖液。在60次測量(2分鐘)后結束FLIPR中的測量。
將原始數(shù)據(jù)輸出到ActivityBase程序中。這種程序首先計算所試驗的各物質濃度的NHE活性，然后從這些值計算出這些物質的IC50值。由于在整個實驗期間pHi的恢復過程不是線性的(其在末端下降，因為NHE活性在較高pHi值下降低)，所以選擇其中陽性對照熒光的增加呈線性的部分用于測量的評估是很重要的。
權利要求
1.式I和/或II的五氟硫基苯甲?；壹捌淇伤幱名} 其中R1是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基、含1、2、3或4個碳原子的烷氧基、F、Cl、Br、I、CN、NR10R11、-Op-(CH2)n-(CF2)o-CF3或-(SOm)q-(CH2)r-(CF2)s-CF3；R10和R11彼此獨立地是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；m是0、1或2n、o、p、q、r和s彼此獨立地是0或1；R2是氫、F、Cl、Br、I、-CN、-SO2CH3、-(SOh)z-(CH2)k-(CF2)1-CF3、含1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基、含3、4、5、6、7或8個碳原子的環(huán)烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子所替代；h是0、1或2；z是0或1；k是0、1、2、3或4；l是0或1；或者R2是-(CH2)t-苯基或-O-苯基，其是未取代的或被1、2或3個選自F、Cl、Br、I、-Ou-(CH2)v-CF3、含1、2、3或4個碳原子的烷氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；t 是0、1、2、3或4；u 是0或1；v 是0、1、2或3；或者R2是-(CH2)w-雜芳基，其是未取代的或被1、2或3個選自F、Cl、Br、I、-Ox-(CH2)y-CF3、含1、2、3或4個碳原子的烷氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；w 是0、1、2、3或4；x 是0或1；y 是0、1、2或3；R3和R4彼此獨立地是氫或F。
2.如權利要求1所述的式I和/或II的化合物及其可藥用鹽，其中的含義為R1是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基、含1、2、3或4個碳原子的烷氧基、F、Cl、NR10R11、-O-CH2-CF3或SOm(CH2)r-CF3；R10和R11彼此獨立地是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；m 是0、1或2；r 是0或1；R2是氫、F、Cl、-SO2CH3、-(SOh)z-(CH2)k-CF3、含1、2、3或4個碳原子的烷基、含3、4、5、6或7個碳原子的環(huán)烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子所替代；h 是0、1或2；z 是0或1；k 是0、1、2、3或4；或者R2是苯基或-O-苯基，其是未取代的或被1或2個選自F、Cl、-Ou-(CH2)v-CF3、甲氧基、乙氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；u 是0或1；v 是0、1、2或3；或者R2是雜芳基，其是未取代的或被1或2個選自F、Cl、-Ox-(CH2)y-CF3、甲氧基、乙氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；x 是0或1；y 是0、1、2或3；R3和R4彼此獨立地是氫或F。
3.如權利要求1或2所述的式I和/或II的化合物及其可藥用鹽，其中的含義為R1是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基、甲氧基、乙氧基、F、Cl、NR10R11、-O-CH2-CF3或-SOm-(CH2)r-CF3；R10和R11彼此獨立地是氫、含1、2、3或4個碳原子的烷基或-CH2-CF3；m 是0、1或2；r 是0或1；R2是氫、F、Cl、-SO2CH3、-(SOh)z-(CH2)k-CF3、含1、2、3或4個碳原子的烷基、含3、4、5、6或7個碳原子的環(huán)烷基，其中1、2、3或4個氫原子可以被氟原子所替代；h 是0或2；z 是0或1；k 是0或1；或者R2是苯基或-O-苯基，其是未取代的或被1或2個選自F、Cl、-O-(CH2)v-CF3、甲氧基、乙氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；v 是0、1、2或3；或者R2是雜芳基，其是未取代的或被1或2個選自F、Cl、-O-(CH2)y-CF3、甲氧基、乙氧基、含1、2、3或4個碳原子的烷基和-SO2CH3的基團所取代；y 是0、1、2或3；R3和R4是氫。
4.一種制備式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽的方法，其包括將式III和/或IV的化合物分別與胍進行反應， 其中R1至R4具有權利要求1、2或3中所定義的含義，并且L是易于進行親核取代的離去基團。
5.用作藥物的如權利要求1至3中一項或多項所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽。
6.如權利要求1至3中一項或多項所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽在制備用于治療或預防由局部缺血或再灌注事件所造成的器官和組織的急性或慢性損害、病癥或間接后遺癥，用于治療或預防心律失常、威脅生命的心室纖維性顫動、心肌梗塞、心絞痛，用于治療或預防心臟的局部缺血狀態(tài)、外周和中樞神經系統(tǒng)的局部缺血狀態(tài)或中風或外周器官和組織的局部缺血狀態(tài)，用于治療或預防休克狀態(tài)、其中細胞增殖代表了原發(fā)或繼發(fā)性因素的疾病、癌癥、轉移灶、前列腺肥大和前列腺增生、動脈粥樣硬化或脂質代謝紊亂、高血壓、特別是原發(fā)性高血壓、中樞神經系統(tǒng)病癥、特別是CNS興奮過度引起的病癥，例如癲癇或中樞誘導的驚厥、或中樞神經系統(tǒng)病癥，特別是焦慮狀態(tài)、抑郁或精神病，用于治療或預防非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)或糖尿病的晚期損害、血栓形成、由內皮功能障礙所導致的病癥、間歇性跛行，用于治療或預防內部器官的纖維化病癥、肝的纖維化病癥、腎的纖維化病癥、血管的纖維化病癥和心臟的纖維化病癥，用于治療或預防心力衰竭或充血性心力衰竭、急性或慢性炎癥、由原生動物所引起的病癥、瘧疾和家禽的球蟲病、用于手術和器官移植、用于保護和儲存用于手術操作的移植物、用于預防與年齡有關的組織改變的藥物，用于對抗老化、延長生命、治療和降低甲狀腺毒癥中的心臟毒性作用的藥物中的應用或用于制備診斷助劑的應用。
7.如權利要求1至3中一項或多項所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽與其它藥物或活性劑聯(lián)用在制備用于治療或預防由局部缺血或再灌注事件所造成的器官和組織的急性或慢性損害、病癥或間接后遺癥，用于治療或預防心律失常、威脅生命的心室纖維性顫動、心肌梗塞、心絞痛，用于治療或預防心臟的局部缺血狀態(tài)、外周和中樞神經系統(tǒng)的局部缺血狀態(tài)或中風或外周器官和組織的局部缺血狀態(tài)，用于治療或預防休克狀態(tài)、其中細胞增殖代表了原發(fā)或繼發(fā)性因素的疾病、癌癥、轉移灶、前列腺肥大和前列腺增生、動脈粥樣硬化或脂質代謝紊亂、高血壓、特別是原發(fā)性高血壓、中樞神經系統(tǒng)病癥、特別是CNS興奮過度引起的病癥，例如癲癇或中樞誘導的驚厥、或中樞神經系統(tǒng)病癥，特別是焦慮狀態(tài)、抑郁或精神病，用于治療或預防非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)或糖尿病的晚期損害、血栓形成、由內皮功能障礙所導致的病癥、間歇性跛行，用于治療或預防內部器官的纖維化病癥、肝的纖維化病癥、腎的纖維化病癥、血管的纖維化病癥和心臟的纖維化病癥，用于治療或預防心力衰竭或充血性心力衰竭、急性或慢性炎癥、由原生動物所引起的病癥、瘧疾和家禽的球蟲病、用于手術和器官移植、用于保護和儲存用于手術操作的移植物、用于預防與年齡有關的組織改變的藥物，用于對抗老化、延長生命、治療和降低甲狀腺毒癥中的心臟毒性作用的藥物中的應用或用于制備診斷助劑的應用。
8.如權利要求7所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽與心臟毒性和細胞毒性藥物或活性成分聯(lián)合在制備具有降低的心臟毒性和細胞毒性的藥物中的應用。
9.如權利要求6和/或7所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽單獨或與其它藥物或活性成分聯(lián)合用于制備治療或預防由局部缺血或再灌注事件所造成的器官和組織的急性或慢性損害、病癥或間接后遺癥的藥物的應用。
10.如權利要求6和/或7所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽單獨或與其它藥物或活性成分聯(lián)合用于制備治療威脅生命的心室纖維性顫動的藥物的應用。
11.如權利要求6和/或7所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽單獨或與其它藥物或活性成分聯(lián)合用于制備治療或預防轉移灶的藥物的應用。
12.如權利要求6和/或7所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽單獨或與其它藥物或活性成分聯(lián)合用于制備治療或預防心臟的纖維化病癥、心力衰竭或充血性心力衰竭的藥物的應用。
13.一種用于人、獸醫(yī)和/或植物保護應用的藥物，其包含有效量的如權利要求1至3中一項或多項所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽以及可藥用的載體和添加劑。
14.一種用于人、獸醫(yī)和/或植物保護應用的藥物，其包含有效量的如權利要求1至3中一項或多項所述的式I和/或II的化合物和/或其可藥用鹽與可藥用的載體和添加劑以及其它的藥理學活性成分或藥物。
15.式V的化合物 其中R5等于氫或(C1-C4)-烷基。
全文摘要
其中R1至R4具有權利要求中所述含義的式I和/或II的五氟硫基苯甲?；疫m于與用于預防梗塞和治療梗塞和用于治療心絞痛的心臟保護成分一起作為抗心律失常藥。其還可以預防性地抑制與局部缺血誘發(fā)的損害形成、尤其是引發(fā)局部缺血誘發(fā)的心律失常有關的病理生理學過程。
文檔編號A61P9/10GK1653044SQ03811319
公開日2005年8月10日 申請日期2003年5月5日 優(yōu)先權日2002年5月18日
發(fā)明者H-W·克勒曼 申請人:安萬特醫(yī)藥德國有限公司