專利名稱：護(hù)理皮膚的美容方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及改進(jìn)皮膚狀態(tài)和外觀的美容方法并涉及在改進(jìn)皮膚狀態(tài)和外觀的局部組合物制備中8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的使用。
背景技術(shù)：
皮膚常隨著皮膚病、環(huán)境因素(風(fēng)、空調(diào)、中央暖氣系統(tǒng)等)或正常的老化過程(隨時(shí)間的老化)——老化可通過將皮膚暴露在太陽下而加速(光老化)——而遭受破壞。近年來，對(duì)于美容產(chǎn)品組合物以及改進(jìn)皮膚狀態(tài)和外觀的美容方法的需求劇增。
消費(fèi)者日益尋求“抗老化”美容產(chǎn)品，它護(hù)理或延緩明顯的隨時(shí)間老化和光老化的跡象如皺紋、線紋、松弛、嚴(yán)重色素沉積和老年斑。
消費(fèi)者還常常從美容產(chǎn)品中尋求除抗老化之外的其它益處?！懊舾衅つw”的概念也提高了消費(fèi)者對(duì)美容產(chǎn)品的要求，他們希望產(chǎn)品可以改進(jìn)敏感、干燥和/或易起皮皮膚的外觀和狀態(tài)并舒緩發(fā)紅和/或受刺激皮膚。消費(fèi)者還期望治療雀斑、面泡和瑕疵的美容產(chǎn)品。
8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮是一種已知物質(zhì)。例如，在Journal of Endocrinology & Metabolism第83卷第6期中Milligan等人的“ Identification of a potent phytoestrogen in hops andbeer”中，8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮被認(rèn)為是有效的植物雌激素。8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的結(jié)構(gòu)在那篇文獻(xiàn)中也有顯示。8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮存在于天然的蛇麻草中，從中它可以被分離并濃縮出來。
現(xiàn)在我們驚訝地發(fā)現(xiàn)8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的更多未公開的特性，它在美容產(chǎn)品組合物中有用，局部地應(yīng)用于皮膚以提供以前未公開的護(hù)膚益處。
現(xiàn)在我們已發(fā)現(xiàn)對(duì)于正常皮膚隨時(shí)間老化和光老化的狀況，如皺紋、線紋、松弛、嚴(yán)重色素沉積和老年斑的有效護(hù)理和預(yù)防，可以通過對(duì)皮膚使用含8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮或其衍生物的美容產(chǎn)品組合物而實(shí)現(xiàn)。我們還發(fā)現(xiàn)美容產(chǎn)品組合物中8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的使用有利地提供了除抗老化之外的更多皮膚益處如舒緩發(fā)紅和/或受刺激的皮膚。

發(fā)明內(nèi)容
第一方面，本發(fā)明含有應(yīng)用于人類皮膚的局部組合物，組合物含有效量的8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮。
依照本發(fā)明的更進(jìn)一步方面，是提供至少一種美容產(chǎn)品護(hù)膚益處的方法，護(hù)膚益處選自治療/預(yù)防皺紋、松弛、老化和/或光損傷皮膚；促進(jìn)皮膚的膠原沉積、促進(jìn)皮膚的核心蛋白聚糖生成；舒緩受刺激、發(fā)紅和/或敏感皮膚；改善皮膚肌理、光滑度和緊致度；此方法包括對(duì)皮膚使用含有8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和/或其衍生物的局部組合物。
本發(fā)明還包含在制備提供至少一種護(hù)膚益處的局部組合物時(shí)，8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和/或其衍生物的用途，護(hù)膚益處選自治療/預(yù)防皺紋、松弛、老化和/或光損傷皮膚；促進(jìn)皮膚的膠原沉積、促進(jìn)皮膚的核心蛋白聚糖生成；舒緩受刺激、發(fā)紅和/或敏感皮膚；改進(jìn)皮膚肌理、光滑度和/或緊致度。
本發(fā)明的另一方面提供8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮，用于治療皺紋、松弛、老化和/或光損傷皮膚；促進(jìn)皮膚的膠原沉積、促進(jìn)皮膚的核心蛋白聚糖生成；舒緩受刺激、發(fā)紅和/或敏感皮膚；改進(jìn)皮膚肌理、光滑度和/或緊致度。
從而本發(fā)明方法和8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的使用提供了抗老化益處，結(jié)果促進(jìn)皮膚的光滑和柔軟并改善彈性且減少或延緩皺紋和老化肌膚的出現(xiàn)并改善膚色?？梢垣@得外觀、肌理和狀態(tài)的普遍改善，尤其對(duì)于光澤度、明晰度和皮膚通常的年輕外觀而言。本發(fā)明方法和使用也利于舒緩和鎮(zhèn)靜敏感和/或受刺激肌膚。因此本發(fā)明方法有利地提供了大范圍的護(hù)膚益處。
這些益處應(yīng)包括改進(jìn)的含水性、肌理/色調(diào)、光滑度、柔軟度、緊致度、強(qiáng)度/彈性和光澤度。
術(shù)語“護(hù)理”用在此，其范圍包括減少、延緩和/或預(yù)防上述皮膚狀況如皺紋、老化、光損傷和/或受刺激皮膚，通常提高皮膚質(zhì)量并通過預(yù)防或減少皺紋且提高皮膚的適應(yīng)性、緊致度、光滑度、柔軟度和彈性而改進(jìn)其外觀和肌理。依照本發(fā)明的美容方法和8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和/或其衍生物的使用可能對(duì)護(hù)理已處于皺紋、老化、光損傷和受刺激狀態(tài)的皮膚有用，或護(hù)理年輕皮膚以預(yù)防或減少前述因正常老化/光老化過程而引起的不良變化。
本發(fā)明還包括含有8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮部分的游離分子衍生物。
依照本發(fā)明使用的活性8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮以有效量存在于局部組合物中。通?；钚晕镔|(zhì)的總量以組合物的0.0001重量％-50重量％的量存在。更優(yōu)選的量為0.001％-10％且為了用最小的花費(fèi)得到最大的利益，最優(yōu)選的量是0.01％-1％。
依照本發(fā)明使用的組合物還含有皮膚病學(xué)/美容可接受的賦形劑，作為活性物質(zhì)的稀釋劑、分散劑或載體。賦形劑可含有通常用于護(hù)膚品的物質(zhì)，如水、液體或固態(tài)潤膚劑、有機(jī)硅油、乳化劑、保濕劑、增稠劑、粉、促進(jìn)劑等。
賦形劑通常占組合物的5重量％-99.9重量％，優(yōu)選25重量％-80重量％，且可以在無其它美容助劑時(shí)平衡組合物。
除了活性成分8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮外，還可以包括其它特殊的益于皮膚的活性成分如遮光劑、皮膚發(fā)光劑和皮膚鞣制劑。賦形劑還可進(jìn)一步包括助劑如香料、不透明劑、防腐劑、著色劑和緩沖劑。
為制備用于本發(fā)明方法的局部組合物，可使用制備護(hù)膚品的通常方式?；钚猿煞滞ǔＲ詡鹘y(tǒng)方式結(jié)合在皮膚病學(xué)可接受的載體內(nèi)?；钚猿煞挚墒紫惹‘?dāng)?shù)厝芙饣蚍稚⒃谝环菟蚱渌軇┗蛞后w中以結(jié)合到組合物中。優(yōu)選的組合物是水包油或油包水乳液。
組合物可以是傳統(tǒng)的護(hù)膚品形式如霜、凝膠或洗液等。組合物也可以是所謂的“洗掉”產(chǎn)品形式例如沐浴或淋浴凝膠，它可能含有活性成分的傳遞系統(tǒng)以提高沖洗過程中對(duì)皮膚的粘附。最優(yōu)選地，產(chǎn)品是“留住”產(chǎn)品；是一種使用到皮膚上后不需馬上進(jìn)行仔細(xì)沖洗的產(chǎn)品。
組合物可以以任意合適的傳統(tǒng)形式包裝如罐裝、瓶裝、管裝、滾球裝等。
本發(fā)明的方法可以每天對(duì)需要護(hù)理的皮膚進(jìn)行一次或多次。皮膚外觀的改進(jìn)通常在1-3個(gè)月后變得明顯，這依賴于皮膚的狀態(tài)、本發(fā)明所用活性物質(zhì)的濃度、所用組合物的量以及使用頻率。通常，從合適的容器或涂藥器中取少量組合物，如0.1-5mL使用到皮膚上并用手或手指或合適的設(shè)備覆蓋和/或擦在皮膚上?？筛綆_洗步驟，這依賴于組合物是否按照“留住”或“洗掉”產(chǎn)品配制。
附圖簡述為使本發(fā)明更易于理解，僅以示例方式給出下面實(shí)施例，并參考附圖，其中-

圖1顯示了8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮對(duì)核心蛋白聚糖合成的影響；-圖2顯示了8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮對(duì)原膠原合成的影響；和-圖3顯示了8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮對(duì)PGE2表達(dá)降低的影響。
實(shí)施例第一個(gè)實(shí)施例證實(shí)了8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮的抗老化益處。
從我們的共同未決歐洲專利申請(qǐng)99908956.8知道，局部視黃酸處理可引起活生物體內(nèi)原膠原I和核心蛋白聚糖的上調(diào)。最終，那份申請(qǐng)中標(biāo)題“ Identification of procollagen I and核心蛋白聚糖upregulation in skin in vivo following topical retinoic acidtreatment for comparat ive purposes”下的段落在此總體引入。
實(shí)施例1測(cè)量人真皮成纖維細(xì)胞中原膠原I和核心蛋白聚糖合成的步驟真皮成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液的制備第2代(P2)主要的人包皮成纖維細(xì)胞以10000細(xì)胞/cm2接種到12孔板中，并在5％二氧化碳和4％氧氣氛圍下于含10％胎牛血清的Dulbeccos Modified Eagles Medium(DMEM)中培養(yǎng)24小時(shí)。此時(shí)間過后，用不含血清的DMEM漂洗，然后在不含血清的新鮮DMEM中進(jìn)一步孵育60小時(shí)。然后再次用不含血清的DMED漂洗成纖維細(xì)胞單層。測(cè)試試劑和賦形劑對(duì)照分三份加入到細(xì)胞中，在最終體積為0.4ml/孔不含血清的新鮮DMEM中進(jìn)一步培養(yǎng)24小時(shí)。立即分析此成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液或是將其在液氮中迅速冷凍并保存在-70℃留待以后分析。然后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并將從斑點(diǎn)印跡分析得來的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化為細(xì)胞數(shù)。
真皮成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液中原膠原-I和核心蛋白聚糖蛋白的斑點(diǎn)印跡分析從賦形劑(作為對(duì)照)或測(cè)試試劑處理過的真皮成纖維細(xì)胞中得來的條件培養(yǎng)液樣品，其中補(bǔ)充20mM的二硫蘇糖醇(200mM儲(chǔ)備液的1∶10稀釋液)和0.1％十二烷基硫酸鈉(10％儲(chǔ)備液的1∶100稀釋液)，充分混合后在75℃培養(yǎng)2分鐘。通過連續(xù)稀釋純的成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液得到分析標(biāo)準(zhǔn)，純的成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液從以10000細(xì)胞/cm2密度接種在175cm2培養(yǎng)瓶中并在上述無血清的DMEM中培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞得來。
然后依照生產(chǎn)商的使用說明，使用Bio-Rad生產(chǎn)的96孔Bio-Dot儀將鑒定樣品分三份施用到Imobilon-P轉(zhuǎn)移膜的預(yù)濕片上。每孔大約施用200μL培養(yǎng)液。培養(yǎng)液在重力作用下通過膜濾過(30分鐘)，然后將膜用PBS洗滌兩次(200μL)。此PBS洗液可允許在重力下通過膜濾過(2×15分鐘)。然后將Bio-Dot儀連接到真空歧管上并在吸力下第三次也是最后一次用PBS洗滌。拆開儀器，取出膜并在置于封存緩沖液中4℃過夜之前根據(jù)需要快速切割。
為核心蛋白聚糖分析制備的膜在PBS中用3％(重量/體積)BSA/0.1％(體積/體積)Tween 20阻斷，同時(shí)用于原膠原分析的膜在PBS中用5％(重量/體積)干燥脫脂奶粉/0.05％ Tween 20阻斷。在接下來幾天中，膜用1∶10000抗人原膠原-I(MAB1912；鼠單克?。籆hemicon Int.Inc.，Temecula，CA)或抗人核心蛋白聚糖(兔多克??；Biogenesis)的一抗稀釋液在室溫下標(biāo)記2小時(shí)。隨后膜用TBS/0.05％ Tween 20(3×5分鐘)淋洗，接著如所需用125I-標(biāo)記鼠抗或兔抗F(ab’)2片段(Amersham)的1∶1000稀釋液在室溫下孵育1小時(shí)。
此后，在允許空氣中室溫干燥之前，Immobilon帶再次用TBS/Tween 20(3×5分鐘)淋洗。干燥的膜包裹在玻璃紙中并暴露于Molecular Dynamics的磷光屏(phosphor screen)達(dá)16-18小時(shí)。然后暴露的磷光屏用ImageQuantTM軟件通過磷顯示計(jì)(MolecularDynamics Phosphorimager SF)掃描。點(diǎn)密度通過計(jì)算機(jī)輔助圖像分析來評(píng)估，使用ImageQuantTM中的定量工具，標(biāo)準(zhǔn)化為細(xì)胞數(shù)，并確定了不同檢測(cè)試劑對(duì)核心蛋白聚糖和原膠原-I合成的影響與100個(gè)隨機(jī)單元的賦形劑處理對(duì)照值相關(guān)。
檢測(cè)測(cè)試結(jié)果圖示于圖1和圖2。為了將測(cè)試結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化，確定了檢測(cè)物質(zhì)的效用與100個(gè)隨機(jī)單元的賦形劑處理對(duì)照值相關(guān)。
作為對(duì)照，用視黃酸進(jìn)行試驗(yàn)以評(píng)估它對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞中核心蛋白聚糖合成的影響。
圖1和圖2的結(jié)果表明，與對(duì)照樣相比，8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮顯著地促進(jìn)了人真皮成纖維細(xì)胞中原膠原-I和核心蛋白聚糖的合成。
皮膚中核心蛋白聚糖的水平與皮膚改善的狀態(tài)和外觀有關(guān)。提高皮膚中核心蛋白聚糖的水平對(duì)于控制和校正皮膚中膠原沉積很重要，這與許多皮膚益處有關(guān)，如光損傷皮膚的除皺和真皮修復(fù)。
視黃酸(1μm)對(duì)照試驗(yàn)表明核心蛋白聚糖升高，138 3 14(p＝0.035，n＝4)，經(jīng)確定與100個(gè)隨機(jī)單元的賦形劑處理對(duì)照值相關(guān)。令人驚訝的是，數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明受影響的人真皮成纖維細(xì)胞中核心蛋白聚糖合成的上調(diào)程度超過了原有的抗老化真皮修復(fù)活性成分，即視黃酸。
使用8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和其它已知雌激素或植物雌激素進(jìn)行了進(jìn)一步的對(duì)照檢測(cè)，以比較原膠原-I和核心蛋白聚糖的上調(diào)。
在檢測(cè)中使用與上述相同的程序。
開始，得到含苯酚紅(它本身具有雌激素活性)的培養(yǎng)液中已知雌激素和植物雌激素的結(jié)果。然后進(jìn)行8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮和不含苯酚紅的培養(yǎng)液中已知雌激素和植物雌激素的重復(fù)檢測(cè)。結(jié)果列于下面表1和表2中。
表1用含苯酚紅的培養(yǎng)液培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞分泌的原膠原I和核心蛋白聚糖水平的增長百分比。

數(shù)據(jù)以與賦形劑處理對(duì)照值100相關(guān)的隨機(jī)單元表示。
表2用不含苯酚紅培養(yǎng)液培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞分泌的原膠原I和核心蛋白聚糖水平的增長百分比。

數(shù)據(jù)用與賦形劑處理對(duì)照值100相關(guān)的隨機(jī)單元表示。
上面的檢測(cè)結(jié)果清楚地表明8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮與其它已知的雌激素和植物雌激素相比是一種更好的原膠原I和核心蛋白聚糖誘導(dǎo)劑。不希望被理論束縛，相信8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮不會(huì)像雌激素一樣發(fā)揮作用但可以通過另一種分子途徑促進(jìn)這兩種修復(fù)標(biāo)記物的合成。
實(shí)施例2成纖維細(xì)胞的PGE2分析下面的實(shí)施例表明8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮能有效地降低體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞分泌的前列腺素E2(PGE2)的基本水平。
第2代(P2)主要的人包皮成纖維細(xì)胞以10000細(xì)胞/孔接種到96孔板中，并在5％二氧化碳?xì)夥障掠诤?0％胎牛血清的DulbeccosModified Eagles Medium(DMEM)中培養(yǎng)24小時(shí)。然后將8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮溶于乙醇并加入到新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液中(乙醇在含10％胎牛血清的DMEM中的最終濃度為1％)并分三份加入孔內(nèi)細(xì)胞中進(jìn)一步培養(yǎng)24小時(shí)。佛波醇十四(烷)酸酯乙酸鹽(PMA)(Sigma)加入到培養(yǎng)液中并進(jìn)一步培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)。PMA用作引發(fā)細(xì)胞中氧化應(yīng)激和發(fā)炎反應(yīng)的應(yīng)激物。然后立即如下述分析成纖維細(xì)胞/培養(yǎng)液或?qū)⑵湓谝旱醒杆倮鋬霾⒈４嬖?70℃以進(jìn)行進(jìn)一步分析。
前列腺素E2(PGE2)分析輕搖培養(yǎng)板后取50μL體積的培養(yǎng)液進(jìn)行PGE2分析。培養(yǎng)液中的PGE2水平用Biotrak PGE2免疫測(cè)定試劑盒(Amersham，英國)測(cè)定。對(duì)有限量的固定的PGE2特異性抗體的分析基于樣品中未標(biāo)記的PGE2與固定量的用山葵過氧化物酶標(biāo)記的PGE2之間的競爭。未標(biāo)記的PGE2的濃度根據(jù)同時(shí)獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定。
通過化合物與對(duì)照樣相比降低所分泌PGE2基本水平的能力來測(cè)試化合物的抗炎能力。所得結(jié)果示于圖3。
PGE2是一種人所熟知的皮膚炎癥調(diào)節(jié)劑，見Greaves等“Prostagludus，leukotriemes，phospholipase，plateletactuating factor and cytokinean intergrated approach toinflammation of human skin”，Arch.Dermatol.Res.(1988)280[supp]533-541。結(jié)果表明用8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮處理過的成纖維細(xì)胞產(chǎn)生較少的促炎前列腺素PGE2，從而降低皮膚的發(fā)炎可能性。
實(shí)施例3下面的配方描述了一種適合于本發(fā)明方法和用途的水包油霜。百分比為組合物的重量百分比。

*Brij 56是十六烷基醇POE(10)Alfol 16RD是十六烷基醇實(shí)施例4下面的配方描述了依照本發(fā)明的乳霜。

上述實(shí)施例3和4的局部組合物都提供了有效的美容護(hù)理以改進(jìn)皺紋、老化、光損傷和/或受刺激皮膚的外觀，當(dāng)施用到隨老化或光老化而變壞的皮膚上時(shí)或施用到年輕皮膚上以幫助預(yù)防或延緩這些變質(zhì)時(shí)。組合物可用傳統(tǒng)方式加工。
權(quán)利要求
1.一種局部組合物，包含(a)有效量的8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮；和(b)皮膚病學(xué)可接受的賦形劑。
2.依照權(quán)利要求1的局部組合物，其中8-異戊二烯基-4′，5，7-三羥黃烷酮以組合物的0.001-1.0重量％存在。
3.一種提供了至少一種美容護(hù)膚益處的美容方法，益處選自護(hù)理/預(yù)防皺紋、松弛、干燥、老化和/或光老化皮膚；促進(jìn)/保持皮膚的膠原水平；促進(jìn)/保持皮膚的核心蛋白聚糖水平；改善皮膚的肌理、光滑度和/或緊致度；并舒緩受刺激的、發(fā)紅的和/或敏感皮膚；此方法包括給皮膚施用如權(quán)利要求1或2的局部組合物。
4.權(quán)利要求1或2之一的局部組合物用于提供至少一種護(hù)膚益處的用途，益處選自護(hù)理/預(yù)防皺紋、松弛、干燥、老化和/或光老化皮膚；促進(jìn)/保持皮膚的膠原水平；促進(jìn)/保持皮膚的核心蛋白聚糖水平；舒緩受刺激的、發(fā)紅的和/或敏感皮膚；改善皮膚的肌理、光滑度和/或緊致度。
全文摘要
護(hù)理老化、起皺和/或光損傷皮膚的美容方法，通過局部施用含8－異戊二烯基－4′，5，7－三羥黃烷酮的組合物而提供。
文檔編號(hào)A61K8/30GK1474684SQ01818894
公開日2004年2月11日 申請(qǐng)日期2001年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月14日
發(fā)明者R·M·多諾文, M·R·格林, M·C·塔斯克, P·R·亞特斯, R M 多諾文, 亞特斯, 塔斯克, 格林 申請(qǐng)人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司