專利名稱：誘發(fā)日本真牡蠣產(chǎn)生三倍體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于遺傳變異工程，具體地說是一種誘發(fā)日本真牡蠣產(chǎn)生三倍體的方法。
由于三倍體的不育性，把本來用于貝類生殖腺發(fā)育的糖原，用在肌肉生長(zhǎng)上，近幾年來，三倍體技術(shù)已廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，其通常使用兩種方法一是物理因子誘導(dǎo)法，如靜水壓、冷刺激、熱休克;二是化學(xué)因子誘導(dǎo)法，如細(xì)胞松馳素B、秋水仙素、咖啡因等。《海洋湖沼通報(bào)》92年第2期公開了一篇<細(xì)胞松馳素B誘導(dǎo)櫛孔扇貝產(chǎn)生三倍體的研究>，該文介紹了一種用細(xì)胞松馳素B處理櫛孔扇貝獲得同源三倍體的方法，其處理過程是一、選擇性腺成熟櫛孔扇貝作為親體，開啟貝殼取得生殖腺，剪碎其性腺，分別收集精、卵;二、精、卵混和使卵子受精，受精后10分鐘用細(xì)胞松馳素B處理，通過刺激受精卵阻止第一極體或第二極體的釋放，從而直接形成了三倍體;三、所產(chǎn)生的三倍體受精卵經(jīng)孵化、附著、稚貝、養(yǎng)成階段發(fā)育為成熟三倍體櫛孔扇貝。采用這種誘導(dǎo)方式獲得的三倍體為同源三倍體，即為生殖細(xì)胞自身的染色體，后代生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)不很顯著;另外，三倍體誘導(dǎo)率不穩(wěn)定，一般在17%～50%之間;再者，要獲得大量的三倍體幼苗，必須使用數(shù)量較多的化學(xué)藥品，一方面大水體使用生產(chǎn)費(fèi)用昂貴，另一方面廢液對(duì)工作人員身體及環(huán)境都存在著一定影響。
本發(fā)明的目的就在于提供一種誘發(fā)日本真牡蠣產(chǎn)生三倍體的方法，其生產(chǎn)成本低、對(duì)工作人員身體及環(huán)境影響小且三倍體為異源多倍體。
為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明可通過如下措施來實(shí)現(xiàn)選擇性腺成熟的雌性及雄性日本真牡蠣，并分別收集其精、卵，把卵子放入經(jīng)清毒處理溫度在21℃±1℃海水中，在充氣的條件下加入精液，在1分鐘～3分鐘內(nèi)施入細(xì)胞松馳素B刺激受精卵20～28分鐘，此時(shí)受精卵內(nèi)的染色體雖然已復(fù)制，但細(xì)胞質(zhì)卻不能分裂，從而形成了同源四倍體，將四倍體受精卵在潔凈的海水中反復(fù)洗滌后放入育苗池孵化，孵化后所得到的幼蟲經(jīng)附著、變態(tài)、稚貝、養(yǎng)成階段發(fā)育成熟，以性腺成熟的四倍體為父本，二倍體日本真牡蠣為母本進(jìn)行雜交，從而獲得異源三倍體受精卵，由于三倍體的獲得是依靠四倍體與二倍體雜交，也就是說只需數(shù)量較少的四倍體作為親本即可得到數(shù)量很多的三倍體，從而減少了細(xì)胞松馳素B的用量，降低了生產(chǎn)成本，減輕了對(duì)環(huán)境及操作人員身體的影響。
本發(fā)明清寒可通過如下措施來達(dá)到，細(xì)胞松馳素B施入后的濃度為0.8ppm～1.5ppm。
本發(fā)明化學(xué)誘導(dǎo)藥品用量小，可大幅度地降低生產(chǎn)成本，較少的廢液對(duì)工作人員身體及環(huán)境不會(huì)造成嚴(yán)重的影響，四倍體的誘導(dǎo)率高，再者三倍體是四倍體與二倍體雜交后產(chǎn)生的，為異源三倍體，可表現(xiàn)出較強(qiáng)的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。
最佳實(shí)施例日本真牡蠣是雌雄異體，外觀不能分出性別，在水溫20℃～22℃時(shí)性腺發(fā)育成熟，挑選殼長(zhǎng)在12cm以上的個(gè)體，用刀啟開貝殼，取出生殖腺放在海水中剪碎，再用120目篩絹網(wǎng)濾出雜物，把精、卵分別收集起來;將收集的卵子放入經(jīng)清毒處理21℃的海水的小型水體中，在充氣的條件下加入精液，2分鐘后向水體中施入1ppm的細(xì)胞松馳素B，攪動(dòng)均勻，25分鐘后將受精卵移出，并放入潔凈的海水中反復(fù)洗滌，此時(shí)的受精卵因細(xì)胞松馳B的刺激雖然染色體已復(fù)制，但細(xì)胞質(zhì)不分裂，從而形成同源四倍體，四倍體率為62%，把所得到的四倍體受精卵放入育苗池中孵化，孵化所需條件是水溫20℃～23℃，溶氧含量在5ml/L以上，受精卵密度30～40粒/ml，連續(xù)充氣，鹽度28-32%，酸堿度7.8～8.2。按常規(guī)的育苗條件幼蟲經(jīng)附著、變態(tài)、稚貝、養(yǎng)成階段發(fā)育成熟;然后選擇性腺成熟的四倍體成貝為父本，二倍體日本真牡蠣為母本采用常規(guī)的方法進(jìn)行雜交，最終獲得異源三倍體。
本發(fā)明所提供的誘發(fā)日本真牡蠣產(chǎn)生三倍體的方法，還可根據(jù)下列圖表所示方法實(shí)現(xiàn)，其中施入細(xì)胞松馳素B的時(shí)間是指精子與卵子混和后的時(shí)間，處理時(shí)間是指加入細(xì)胞松馳素B后對(duì)受精卵的作用時(shí)間。
權(quán)利要求
1.一種誘發(fā)日本真牡蠣產(chǎn)生三倍體的方法，首先選擇性腺成熟的雌、雄二倍體日本真牡蠣作為親體，開啟親體貝殼取出生殖腺，在水中剪碎其生殖腺，用篩絹網(wǎng)濾出雜物，并把精、卵分別收集，并將卵子放入經(jīng)消毒處理水溫在21℃±1℃的海水中，其特征在于a、在加入精子后1～3分鐘內(nèi)施入細(xì)胞松馳素B，b、持續(xù)處理20分鐘～28分鐘后將受精卵(此時(shí)因染色體已復(fù)制，而細(xì)胞質(zhì)不分裂，從而形成同源四倍體)移出，在潔凈的海水中反復(fù)洗滌后放入育苗池中孵化，c、孵化所得四倍體幼蟲固著后經(jīng)變態(tài)、稚貝、養(yǎng)成階段發(fā)育成熟，d、以性腺成熟的四倍體日本真牡蠣為父本，二倍體日本真牡蠣為母本進(jìn)行雜交，從而得到三倍體受精卵。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述誘發(fā)日本真牡蠣產(chǎn)生三倍體的方法，其特征在于所說的細(xì)胞松馳素B施入濃度為0.8ppm～1.5ppm。
全文摘要
本發(fā)明屬遺傳變異工程，具體說是一種誘發(fā)日本真牡蠣產(chǎn)生三倍體的方法，其特征是收集日本真牡蠣精卵使其受精，在1min～3min內(nèi)施入細(xì)胞松馳素B，處理20min～28min后將受精卵(此時(shí)為四倍體)取出并經(jīng)洗滌后置人海水中孵化，孵化后所得幼蟲經(jīng)發(fā)育為成熟的四倍體，以性腺成熟的四倍體為父本，二倍體日本真牡蠣為母本進(jìn)行雜交，從而獲得三倍體受精卵。本發(fā)明使用細(xì)胞松馳素B的數(shù)量少，降低了生產(chǎn)成本，減輕了對(duì)環(huán)境及工作人員身體的影響，適合于大水體培育三倍體日本真牡蠣。
文檔編號(hào)C12N15/02GK1070945SQ9210666
公開日1993年4月14日 申請(qǐng)日期1992年8月13日 優(yōu)先權(quán)日1992年8月13日
發(fā)明者王興章, 徐春華 申請(qǐng)人:榮成市海珍品育苗場(chǎng)