一種城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑及其制備方法。包括如下微生物菌劑，均為體積份：嗜酸乳桿菌制劑、熱帶假絲酵母菌劑、枯草芽孢桿菌制劑；將上述菌劑混合均勻后，即得復(fù)合微生物制劑。本發(fā)明制得的城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑，有效活菌數(shù)量大于或等于40億CFU/克，適于城市河道河水COD和氨氮含量超標(biāo)、河水污濁、發(fā)臭等污染的修復(fù)與治理，其可快速修復(fù)水體生態(tài)環(huán)境，防止水體二次污染，并能很快恢復(fù)水體的自?xún)艋δ?，消解河底污泥，是一種高效、快速、低成本和可持續(xù)發(fā)展的生物治污產(chǎn)品。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑及其制備方法，屬于環(huán)境修復(fù)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]城市河道作為城市生態(tài)系統(tǒng)重要的組成部分，對(duì)城市的生態(tài)建設(shè)具有重要意義。但是隨著城市化進(jìn)程的不斷加快，城市人口聚集，經(jīng)濟(jì)活動(dòng)日趨頻繁，工業(yè)廢水和生活污水大量排放增加，垃圾的隨意丟棄，使城市環(huán)境污染、水質(zhì)惡化，原來(lái)清澈的河水變得又黑又臭，環(huán)境污染問(wèn)題日益嚴(yán)重，嚴(yán)重制約城市的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)與環(huán)境可持續(xù)發(fā)展，同時(shí)危及人民的身體健康。
[0003]去除水體污染物的治理手段主要分為化學(xué)修復(fù)技術(shù)、物理修復(fù)技術(shù)和生物修復(fù)技術(shù)。生物修復(fù)技術(shù)是新發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)清潔環(huán)境的新興技術(shù)，它利用特定生物對(duì)水體中污染物的吸收、轉(zhuǎn)化或降解，達(dá)到減緩或最終消除水體污染、恢復(fù)水體生態(tài)功能的生物措施。污染水體污染物主要是通過(guò)微生物的代謝活動(dòng)將其降解轉(zhuǎn)化。與物理化學(xué)修復(fù)技術(shù)相比，生物修復(fù)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):1)設(shè)施簡(jiǎn)單，運(yùn)行費(fèi)用省；2)操作簡(jiǎn)單，環(huán)境影響小，不會(huì)導(dǎo)致污染物的轉(zhuǎn)移或形成二次污染；3)可最大限度降低污染物濃度。因此生物修復(fù)技術(shù)是最具有發(fā)展前的水體污染修復(fù)技術(shù)。微生物從以下幾個(gè)方面對(duì)河道水體進(jìn)行凈化。
[0004]微生物對(duì)水體有機(jī)污染物的去除:一方面菌體的同化作用會(huì)轉(zhuǎn)化部分有機(jī)污染物為自身物質(zhì)，另一方面微生物分泌的胞外酶能快速降解大分子有機(jī)物，實(shí)現(xiàn)對(duì)水體有機(jī)污染物的降解和去除。
[0005]微生物對(duì)藻類(lèi)的抑制:一方面通過(guò)復(fù)合微生物的協(xié)同作用，降低水體中氮、磷營(yíng)養(yǎng)鹽水平，通過(guò)營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)的方式抑制藻類(lèi)的生長(zhǎng)，同時(shí)通過(guò)改善水體理化環(huán)境，促進(jìn)浮游動(dòng)物種群的生長(zhǎng)壯大，以浮游動(dòng)物捕食藻類(lèi)的方式控制藻類(lèi)的生長(zhǎng)。
[0006]我國(guó)在利用微生物技術(shù)修復(fù)水體污染領(lǐng)域研究起步晚，與發(fā)達(dá)國(guó)家相比技術(shù)還有差距。微生物修復(fù)在污染治理中的占的比例較小，主要原因是缺乏高效的菌種和成熟的技術(shù)。
[0007]中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN101886041A(申請(qǐng)?zhí)?01010206701)公開(kāi)了一種高效處理城市湖水污染的微生物制劑，由以下成分按體積比配制成，亞硝化螺菌:紅螺菌:納豆芽孢桿菌:鏈孢擬諾卡氏菌:乳酸桿菌為0-10: 5-15: 5-15: 5-15: 5_15。所選取和培養(yǎng)的微生物在城市湖水環(huán)境中具有迅速繁殖并發(fā)展為優(yōu)勢(shì)菌群的能力，各菌種能單獨(dú)和協(xié)同分解城市湖水中富營(yíng)養(yǎng)成份，并能使常態(tài)下不易分解的某些富營(yíng)養(yǎng)成份變得容易分解。能很好地凈化水質(zhì)和改良底質(zhì)，優(yōu)化和保全生態(tài)環(huán)境。養(yǎng)水、保水、穩(wěn)定水色，治濁水、水濃、水紅、水黑、底臭、藻類(lèi)老化、調(diào)節(jié)和穩(wěn)定水體PH值的作用明顯。
[0008]中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN102815792A(申請(qǐng)?zhí)?01210094446)公開(kāi)了一種用于城鄉(xiāng)污染河道水體修復(fù)的微生物-酶復(fù)合制劑及其制備的方法。該發(fā)明涉及的修復(fù)城鄉(xiāng)污染河道的微生物-酶復(fù)合制劑，微生物主要是由30-60%的地衣芽孢桿菌、25-35%的硝化細(xì)菌和15-35%的惡臭假單胞菌組成；復(fù)合酶主要是由40% -60%的蛋白酶、15-25%的淀粉酶和25% -35的纖維素酶構(gòu)成。針對(duì)不同污染程度的水體，優(yōu)化組合的微生物與復(fù)合酶復(fù)配為微生物-酶復(fù)合制劑，使得微生物的投加量為l_5g/m3，復(fù)合酶的投加量為0.01-0.05g/m3。該微生物-酶復(fù)合制劑投入到城鄉(xiāng)污染河道水體中，以曝氣為輔助措施，進(jìn)行微生物強(qiáng)化修復(fù)，可有效改善現(xiàn)有技術(shù)存在的微生物代謝活性低、環(huán)境耐受力低、在污染水體中停留時(shí)間短等缺陷，具有顯著的水質(zhì)凈化效果。
[0009]中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN102050523A(申請(qǐng)?zhí)?01010610486)公開(kāi)了一種微生物對(duì)黑臭河道處理及原位生態(tài)修復(fù)的方法。該發(fā)明的技術(shù)特征是從污水中篩選出有針對(duì)性的目的菌種，與現(xiàn)有菌種進(jìn)行匹配組合成復(fù)合微生物菌劑，然后使用匹配的復(fù)合微生物菌劑對(duì)河道污水進(jìn)行處理。該發(fā)明根據(jù)河道污染的具體情況，采用篩選污水中生長(zhǎng)的菌株對(duì)污水進(jìn)行治理，并針對(duì)河道水體的污染情況將其與現(xiàn)有菌種進(jìn)行匹配、組合，使之在微生物污水處理系統(tǒng)中發(fā)揮協(xié)同作用，快速形成優(yōu)勢(shì)菌群，對(duì)河道中污染物進(jìn)行分解、吸收、轉(zhuǎn)移，從而達(dá)到最佳處理效果。
[0010]中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN103911312A(申請(qǐng)?zhí)?01310429597.7) 一種具有凈水，肥水和保健多重功效的為微生物制劑及其制備方法，將嗜酸乳桿菌，產(chǎn)朊假絲酵母菌，沼澤紅假單胞菌單獨(dú)發(fā)酵后組成復(fù)合微生物制劑，減低了水產(chǎn)養(yǎng)殖戶(hù)的養(yǎng)殖成本，提高了養(yǎng)殖效率。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑及其制備方法。
[0012]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0013]一種城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑，包括如下微生物菌劑，均為體積份:
[0014]嗜酸乳桿菌制劑40~60份、熱帶假絲酵母菌劑20~30份、枯草芽孢桿菌制劑10~20份；
[0015]所述嗜酸乳桿菌制劑中嗜酸乳桿菌菌體濃度不小于5.0X 109CFU/mL ；
[0016]所述熱帶假絲酵母菌制劑中熱帶假絲酵母菌菌體濃度不小于1.0X 109CFU/mL ；
[0017]所述枯草芽孢桿菌制劑中枯草芽孢桿菌菌體濃度不小于1.0X 1010CFU/mL ；
[0018]將上述菌劑混合均勻后，即得復(fù)合微生物制劑。
[0019]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述復(fù)合微生物制劑，包括如下微生物菌劑，均為體積份:
[0020]嗜酸乳桿菌制劑60份、熱帶假絲酵母菌劑30份、枯草芽孢桿菌制劑10份。
[0021]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的嗜酸乳桿菌購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，菌種編號(hào):1.1854。
[0022]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的熱帶假絲酵母菌購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，菌種編號(hào):2.2735。
[0023]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YYW-1，來(lái)源于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，菌種保藏編號(hào):CGMCC N0.2396ο枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) YYW-1，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)=CGMCC N0.2396，可參見(jiàn)中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN101240302A(申請(qǐng)?zhí)?200810014395.5)。
[0024]上述城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑的制備方法，步驟如下:
[0025](I)取嗜酸乳桿菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化嗜酸乳桿菌；然后將活化嗜酸乳桿菌接種于液體培養(yǎng)基I進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于5.0X 109CFU/mL的嗜酸乳桿菌制劑；
[0026](2)取熱帶假絲酵母菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化熱帶假絲酵母菌；然后將活化熱帶假絲酵母菌接種于液體培養(yǎng)基II進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于1.0X 109CFU/mL的熱帶假絲酵母菌制劑；
[0027](3)取枯草芽孢桿菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化枯草芽孢桿菌；然后將活化枯草芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基III進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于1.0X 101(lCFU/mL的枯草芽孢桿菌制劑；
[0028](4)將步驟(1)制得的嗜酸乳桿菌制劑、步驟(2)制得的熱帶假絲酵母菌制劑和步驟(3)制得的枯草芽孢桿菌制劑按比例混合后，制得復(fù)合微生物制劑。
[0029]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(1)中，活化條件為:35~38°C活化培養(yǎng)45~50h ；所述的固體培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份:
[0030]蛋白胨1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏1份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，瓊脂1.5份，水93.021份，自然pH值；
[0031]所述步驟(1)中，擴(kuò)大培養(yǎng)步驟如下:
[0032]將活化嗜酸乳桿菌接種于液體培養(yǎng)基I中，在35~38°C培養(yǎng)45~50h，制得一級(jí)種子液；然后按照重量百分比5-8%的接種量將一級(jí)種子液接種于液體培養(yǎng)基I中，在培養(yǎng)溫度35~38°C、罐壓為0.02MPa、攪拌速度為100~120rpm的條件下，培養(yǎng)24~30小時(shí)，制得嗜酸乳桿菌種子液；
[0033]所述的液體培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份:
[0034]蛋白胨1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏1份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，水94.521份，自然pH值；
[0035]所述步驟(1)中，發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0036]將嗜酸乳桿菌種子液按照體積百分比7~10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，在溫度35~38°C，罐壓為0.02MPa,攪拌速度為100~120，培養(yǎng)36~48h，制得嗜酸乳桿囷制劑；
[0037]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份:
[0038]糖蜜I~10份、紅糖I~10份、葡萄糖I~3份、蛋白胨0.1~2份、磷酸氫二鉀
0.01~1份、氯化鈉0.1~2份、水72~96.8份。
[0039]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(2)中，活化條件為:28~30°C活化培養(yǎng)45~50h ；所述的固體培養(yǎng)基II每升組分如下:
[0040]馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，水定容至IL ；
[0041 ] 所述步驟(2)中，擴(kuò)大培養(yǎng)步驟如下:
[0042]將活化熱帶假絲酵母菌接種于液體培養(yǎng)基II中，在28~30°C、通風(fēng)比為1: 1、罐壓0.02MPa，攪拌速度為180~200rpm，培養(yǎng)36~48h，制得熱帶假絲酵母菌種子液；
[0043]所述的液體培養(yǎng)基II組分如下，均為重量份:
[0044]糖蜜I~10份，紅糖3~5份，10~15波美度的麥芽汁4~6份，水79~92份；
[0045]所述步驟(2)中發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0046]將熱帶假絲酵母菌種子液按照體積百分比5~8%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，在溫度28~30°C，通風(fēng)量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為180~200rpm，培養(yǎng)36~48h,制得熱帶假絲酵母菌制劑；
[0047]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基II組分如下，均為重量份:
[0048]糖蜜I~10份，紅糖3~5份，10~15波美度的麥芽汁4~6份，水79~92份。
[0049]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述步驟(3)中，活化條件為:35~38°C活化培養(yǎng)34~40h;所述的固體培養(yǎng)基III每升組分如下:
[0050]蛋白胨10克，酵母膏5克，氯化鈉10克，瓊脂粉15克，水定溶至IL ；
[0051]將活化枯草芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基III中，在35~38°C、通氣量以發(fā)酵液體積m3/空氣體積m3 ?分鐘計(jì)為1: (1.1~1.2)、罐壓0.02MPa,攪拌速度為220~260rpm，培養(yǎng)12~16h,制得枯草芽孢桿菌種子液；
[0052]所述的液體培養(yǎng)基III組分如下，均為重量份:
[0053]玉米粉0.5~4份、豆餅粉0.5~5份、麩皮粉0.5~3份、氯化鈉0.01~0.2份、氯化鎂0.01~0.2份、硫酸錳0.01~0.5份，水87.1~98.5份；
[0054]所述步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0055]將枯草芽孢桿菌種子液按照體積百分比7~10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，在溫度35~38°C， 通風(fēng)量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為200~240rpm，培養(yǎng)32~48h，制得枯草芽孢桿菌制劑；
[0056]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基III組分如下，均為重量份:
[0057]玉米粉0.5~4份、豆餅粉0.5~5份、麩皮粉0.5~3份、氯化鈉0.01~0.2份、氯化鎂0.01~0.2份、硫酸錳0.01~0.5份，水87.1~98.5份。
[0058]上述培養(yǎng)基中的原料均為本領(lǐng)域常用配制培養(yǎng)基原料，均可市場(chǎng)購(gòu)得。
[0059]有益效果
[0060]本發(fā)明制得的城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑，有效活菌數(shù)量大于或等于40億CFU/克，適于城市河道河水COD和氨氮含量超標(biāo)、河水污濁、發(fā)臭等污染的修復(fù)與治理，其可快速修復(fù)水體生態(tài)環(huán)境，防止水體二次污染，并能很快恢復(fù)水體的自?xún)艋δ?，消解河底污泥，是一種高效、快速、低成本和可持續(xù)發(fā)展的生物治污產(chǎn)品。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0061]圖1是試驗(yàn)例3復(fù)合微生物制劑對(duì)污泥有機(jī)物的消解作用的效果照片；

【具體實(shí)施方式】
[0062]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說(shuō)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0063]實(shí)施例1
[0064]嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus),菌種編號(hào) CGMCCl.1854,購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。
[0065]熱帶假絲酵母菌(Candida tropical is)，菌種編號(hào)CGMCC 2.2735，購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心。
[0066]枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YYW-1,來(lái)源于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏編號(hào)CGMCC N0.2396。
[0067]城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑的制備方法，步驟如下:
[0068](I)取嗜酸乳桿菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化嗜酸乳桿菌；然后將活化嗜酸乳桿菌接種于液體培養(yǎng)基I進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度5.5X109CFU/mL的嗜酸乳桿菌制劑；
[0069](2)取熱帶假絲酵母菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化熱帶假絲酵母菌；然后將活化熱帶假絲酵母菌接種于液體培養(yǎng)基II進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度1.35X 109CFU/mL的熱帶假絲酵母菌制劑；
[0070](3)取枯草芽孢桿菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化枯草芽孢桿菌；然后將活化枯草芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基III進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度1.05X1010CFU/mL的枯草芽孢桿菌制劑；
[0071](4)將步驟⑴制得的嗜酸乳桿菌制劑60份、步驟⑵制得的熱帶假絲酵母菌制劑30份和步驟(3)制得的枯草芽孢桿菌制劑10份混合后，制得復(fù)合微生物制劑。
[0072]所述步驟(1)中，活化條件為:37°C活化培養(yǎng)48h ;所述的固體培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份:
[0073]蛋白胨1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏1份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，瓊脂1.5份，水93.021份，自然pH值；
[0074]所述步驟(1)中，擴(kuò)大培養(yǎng)步驟如下:
[0075]將活化嗜酸乳桿菌接種于液體培養(yǎng)基I中，在37°C培養(yǎng)48h，制得一級(jí)種子液；然后按照重量百分比8%的接種量將一級(jí)種子液接種于液體培養(yǎng)基I中，在培養(yǎng)溫度37°C、罐壓為0.02MPa、攪拌速度為IlOrpm的條件下，培養(yǎng)24小時(shí)，制得嗜酸乳桿菌種子液；
[0076]所述的液體培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份:
[0077]蛋白胨1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏1份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，水94.521份，自然pH值；
[0078]所述步驟(1)中，發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0079]將嗜酸乳桿菌種子液按照體積百分比10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，在溫度37°C，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為llOrpm，培養(yǎng)48h，制得嗜酸乳桿菌制劑；
[0080]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份:
[0081]糖蜜2份、紅糖2份、葡萄糖1份、蛋白胨0.1份、磷酸氫二鉀0.01份、氯化鈉0.1份、水94.8份。
[0082]所述步驟(2)中，活化條件為:30°C活化培養(yǎng)48h ;所述的固體培養(yǎng)基II每升組分如下:
[0083]馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，水定容至IL ；
[0084]所述步驟⑵中，擴(kuò)大培養(yǎng)步驟如下:
[0085]將活化熱帶假絲酵母菌接種于液體培養(yǎng)基II中，在30°C、通風(fēng)比為1: 1、罐壓
0.02MPa，攪拌速度為200rpm，培養(yǎng)36h，制得熱帶假絲酵母菌種子液；
[0086]所述的液體培養(yǎng)基II組分如下，均為重量份:
[0087]糖蜜2份，紅糖3份，10~15波美度的麥芽汁4份，水91份；
[0088]所述步驟⑵中，發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0089]將熱帶假絲酵母菌種子液按照體積百分比8%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，在溫度30°C，通風(fēng)量為1: 1，罐壓為0.02MPa,攪拌速度為200rpm，培養(yǎng)48h，制得熱帶假絲酵母菌制劑；
[0090]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基II組分如下，均為重量份:
[0091]糖蜜2份，紅糖3份，10~15波美度的麥芽汁4份，水91份。
[0092]所述步驟(3)中，活化條件為:37°C活化培養(yǎng)36h ;所述的固體培養(yǎng)基III每升組分如下，均為重量份:
[0093]蛋白胨 10克，酵母膏5克，氯化鈉10克，瓊脂粉15克，水定溶至IL ；
[0094]將活化枯草芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基III中，在37°C、通氣量以發(fā)酵液體積m3/空氣體積Hi3.分鐘計(jì)為1: 1.1、罐壓0.02MPa,攪拌速度為240rpm，培養(yǎng)16h，制得枯草芽孢桿菌種子液；
[0095]所述的液體培養(yǎng)基III組分如下，均為重量份:
[0096]玉米粉2份、豆餅粉2份、麩皮粉1份、氯化鈉0.05份、氯化鎂0.05份、硫酸錳0.05份，水94.85份；
[0097]所述步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0098]將枯草芽孢桿菌種子液按照體積百分比10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，在溫度37°C，通風(fēng)量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為220rpm，培養(yǎng)48h，制得枯草芽孢桿囷制劑；
[0099]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基III組分如下，均為重量份:
[0100]玉米粉2份、豆餅粉2份、麩皮粉1份、氯化鈉0.05份、氯化鎂0.05份、硫酸錳0.05份，水94.85份。
[0101]制得復(fù)合微生物制劑有效活菌含量4.755 X 19億/mL。
[0102]實(shí)施例2
[0103]如實(shí)施例1所述的城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑的制備方法，不同之處在于，
[0104]所述步驟(1)中，發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0105]將嗜酸乳桿菌種子液按照體積百分比10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，在溫度37°C，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為llOrpm，培養(yǎng)48h，制得嗜酸乳桿菌制劑；
[0106]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份:
[0107]糖蜜5份、紅糖6份、葡萄糖2份、蛋白胨1份、磷酸氫二鉀1份、氯化鈉0.5份、水84.5份；制得菌體濃度8.1 X 109CFU/mL的嗜酸乳桿菌制劑；
[0108]所述步驟(2)中，發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0109]將熱帶假絲酵母菌種子液按照體積百分比8%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，在溫度30°C，通風(fēng)量為1: 1，罐壓為0.02MPa,攪拌速度為200rpm，培養(yǎng)48h，制得熱帶假絲酵母菌制劑；制得菌體濃度2.5 X 109CFU/mL的熱帶假絲酵母菌制劑；
[0110]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基II組分如下，均為重量份:
[0111]糖蜜6份，紅糖3份，10~15波美度的麥芽汁6份，水85份。
[0112]所述步驟(2)中，發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下:
[0113]將枯草芽孢桿菌種子液按照體積百分比10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，在溫度37°C，通風(fēng)量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為220rpm，培養(yǎng)48h，制得枯草芽孢桿菌制劑；制得菌體濃度1.25X1010CFU/mL的嗜酸乳桿菌制劑；
[0114]所述的發(fā)酵培養(yǎng)基III組分如下，均為重量份:
[0115]玉米粉4份、豆餅粉4份、麩皮粉3份、氯化鈉0.1份、氯化鎂0.1份、硫酸錳0.5份，水88.3份。
[0116]將嗜酸乳桿菌制劑50份、熱帶假絲酵母菌制劑30份和枯草芽孢桿菌制劑20份混合后，制得復(fù)合微生物制劑。
[0117]制得的復(fù)合微生物制劑有效活菌含量7.30 X 19億/mL。
[0118]對(duì)比例
[0119]按中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN103911312A(申請(qǐng)?zhí)?01310429597.7)中按實(shí)施例1的記載，分別將嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母菌、沼澤紅假單胞菌單獨(dú)發(fā)酵后，制備制劑。
[0120]試驗(yàn)例I
[0121]取本申請(qǐng)實(shí)施例1制得的復(fù)合微生物制劑和對(duì)比例制得的制劑。
[0122]從濟(jì)南市內(nèi)河道取水樣，利用河道模型進(jìn)行水質(zhì)改良實(shí)驗(yàn)。菌劑:水質(zhì)量比為1:1000。分別于O小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)測(cè)定水體CODcr、氨氮和濁度。結(jié)果分別見(jiàn)表1、表2、表3。
[0123]表1對(duì)比例和實(shí)施例1對(duì)水體CODcr (mg/L)的影響
[0124]

【權(quán)利要求】
1.一種城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑，其特征在于，包括如下微生物菌劑，均為體積份: 嗜酸乳桿菌制劑40~60份、熱帶假絲酵母菌劑20~30份、枯草芽孢桿菌制劑10~20份； 所述嗜酸乳桿菌制劑中嗜酸乳桿菌菌體濃度不小于5.0X 109CFU/mL ； 所述熱帶假絲酵母菌制劑中熱帶假絲酵母菌菌體濃度不小于1.0X 109CFU/mL ； 所述枯草芽孢桿菌制劑中枯草芽孢桿菌菌體濃度不小于1.0X 101(lCFU/mL ； 將上述菌劑混合均勻后，即得復(fù)合微生物制劑。
2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于，包括如下微生物菌劑，均為體積份: 嗜酸乳桿菌制劑60份、熱帶假絲酵母菌劑30份、枯草芽孢桿菌制劑10份。
3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于，所述的嗜酸乳桿菌購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種編號(hào):1.1854。
4.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于，所述的熱帶假絲酵母菌購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種編號(hào):2.2735。
5.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物制劑，其特征在于，所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)YYW_l,來(lái)源于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏編號(hào):CGMCC N0.2396。
6.權(quán)利要求1所述的城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑的制備方法，其特征在于，步驟如下: (1)取嗜酸乳桿菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化嗜酸乳桿菌；然后將活化嗜酸乳桿菌接種于液體培養(yǎng)基I進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于5.0X 109CFU/mL的嗜酸乳桿菌制劑； (2)取熱帶假絲酵母菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化熱帶假絲酵母菌；然后將活化熱帶假絲酵母菌接種于液體培養(yǎng)基II進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于1.0X 109CFU/mL的熱帶假絲酵母菌制劑； (3)取枯草芽孢桿菌，接種于固體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)，制得活化枯草芽孢桿菌；然后將活化枯草芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基III進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于1.0X 101(lCFU/mL的枯草芽孢桿菌制劑； (4)將步驟⑴制得的嗜酸乳桿菌制劑、步驟(2)制得的熱帶假絲酵母菌制劑和步驟(3)制得的枯草芽孢桿菌制劑按比例混合后，制得城市河水污染治理的復(fù)合微生物制劑。
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，活化條件為:35~38°C活化培養(yǎng)45~50h ;所述的固體培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份: 蛋白胨1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏I份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，瓊脂1.5份，水93.021份，自然pH值； 所述步驟(1)中，擴(kuò)大培養(yǎng)步驟如下: 將活化嗜酸乳桿菌接種于液體培養(yǎng)基I中，在35~38°C培養(yǎng)45~50h，制得一級(jí)種子液；然后按照重量百分比5-8%的接種量將一級(jí)種子液接種于液體培養(yǎng)基I中，在培養(yǎng)溫度35~38°C、罐壓為0.02MPa、攪拌速度為100~120rpm的條件下，培養(yǎng)24~30小時(shí)，制得嗜酸乳桿菌種子液； 所述的液體培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份: 蛋白胨1份，酵母粉0.5份，檸檬酸銨0.2份，葡萄糖2份，硫酸鎂0.054份，牛肉膏I份，磷酸氫二鉀0.2份，醋酸鈉0.5份，硫酸錳0.025份，水94.521份，自然pH值； 所述步驟(1)中，發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下: 將嗜酸乳桿菌種子液按照體積百分比7~10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基I中，在溫度35~38°C，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為100~120，培養(yǎng)36~48h，制得嗜酸乳桿菌制劑； 所述的發(fā)酵培養(yǎng)基I組分如下，均為重量份: 糖蜜I~10份、紅糖I~10份、葡萄糖I~3份、蛋白胨0.1~2份、磷酸氫二鉀0.01~1份、氯化鈉0.1~2份、水72~96.8份。
8.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，活化條件為:28~30°C活化培養(yǎng)45~50h ;所述的固體培養(yǎng)基II每升組分如下: 馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉15g，水定容至IL ； 所述步驟(2)中，擴(kuò)大培養(yǎng)步驟如下: 將活化熱帶假絲酵母菌接種于液體培養(yǎng)基II中，在28~30°C、通風(fēng)比為1: 1、罐壓0.02MPa，攪拌速度為180~200rpm，培養(yǎng)36~48h，制得熱帶假絲酵母菌種子液； 所述的液體培養(yǎng)基II組分如下，均為重量份: 糖蜜I~10份，紅糖3~5份，10~15波美度的麥芽汁4~6份，水79~92份； 所述步驟(2)中發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下: 將熱帶假絲酵母菌種子液按照體積百分比5~8%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基II中，在溫度28~30°C，通風(fēng)量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為180~200rpm，培養(yǎng)36~48h,制得熱帶假絲酵母菌制劑； 所述的發(fā)酵培養(yǎng)基II組分如下，均為重量份: 糖蜜I~10份，紅糖3~5份，10~15波美度的麥芽汁4~6份，水79~92份。
9.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，活化條件為:35~38°C活化培養(yǎng)34~40h ;所述的固體培養(yǎng)基III每升組分如下: 蛋白胨10克，酵母膏5克，氯化鈉10克，瓊脂粉15克，水定溶至IL ； 將活化枯草芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基III中，在35~38°C、通氣量以發(fā)酵液體積m3/空氣體積m3.分鐘計(jì)為1: (1.1~1.2)、罐壓0.02MPa，攪拌速度為220~260rpm，培養(yǎng)12~16h，制得枯草芽孢桿菌種子液； 所述的液體培養(yǎng)基III組分如下，均為重量份: 玉米粉0.5~4份、豆餅粉0.5~5份、麩皮粉0.5~3份、氯化鈉0.01~0.2份、氯化鎂0.01~0.2份、硫酸錳0.01~0.5份，水87.1~98.5份； 所述步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)步驟如下: 將枯草芽孢桿菌種子液按照體積百分比7~10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基III中，在溫度35~38°C，通風(fēng)量為1: 1，罐壓為0.02MPa，攪拌速度為200~240rpm，培養(yǎng)32~48h,制得枯草芽孢桿菌制劑；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基III組分如下，均為重量份: 玉米粉0.5~4份、豆餅粉0.5~5份、麩皮粉0.5~3份、氯化鈉0.01~0.2份、氯化鎂0.01~0.2份、硫酸錳 0.01~0.5份，水87.1~98.5份。
【文檔編號(hào)】C12R1/23GK104178433SQ201410449850
【公開(kāi)日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2014年9月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月4日
【發(fā)明者】岳壽松, 王翠萍, 鄒曉鳳, 游銀偉, 王留名, 彭繼敏, 鄭建榮 申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心