專利名稱：：一種利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種生物制氫的方法，尤其是一種利用兼性厭氧菌制氫的方法。
背景技術(shù)：
：隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，我國能源消費總量也迅速增力口。在目前所用的商品能源中95%是化石能源，但是由于化石能源開發(fā)利用過程中引起的環(huán)境問題，嚴重制約著可持續(xù)發(fā)展。在世界化石能源資源快速消耗，環(huán)境污染日益嚴重和氣候變暖威脅逐漸增大的形勢下，為了支持中國政府提出的到2020年單位國內(nèi)生產(chǎn)總值二氧化碳排放比2005年較少40%至45%的目標，氫等可再生能源的開發(fā)利用尤其要受到高度重視。氫作為一種清潔的新型能源，大大地減輕了對環(huán)境的污染，保護了自然界的生態(tài)平衡，而且它本身可再生，儲量十分豐富，能量密度高，是汽油的2175倍，熱轉(zhuǎn)化率也很高。因此，它最有希望成為未來人類的清潔能源。相對于日益完善的氫能利用下游體系，氫氣卻沒有在以可再生資源為原料生產(chǎn)方面實現(xiàn)突破。目前，氫氣主要來源還是化石燃料的重整轉(zhuǎn)化(占96%)和電解水制氫(占4%)，這顯然未能擺脫原有的化石能源體系。因此，如何可持續(xù)地從自然界獲取氫氣尤其受到人們的關(guān)注。生物制氫是解決這一問題的重要途徑之一。現(xiàn)代生物制氫的研究始于20世紀70年代的能源危機，到90年代隨著對溫室效應(yīng)的進一步認識，生物制氫作為可持續(xù)發(fā)展的工業(yè)技術(shù)再次引起人們的重視。生物制氫包括光驅(qū)動制氫和厭氧發(fā)酵制氫兩種路徑。與光合生物制氫相比，厭氧發(fā)酵制氫具有產(chǎn)氫率高、產(chǎn)氫速率快、產(chǎn)氫持續(xù)穩(wěn)定、反應(yīng)裝置的設(shè)計操作簡單、原料來源廣泛且成本低等特點，更易于實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，因而成為生物制氫研究的主要方向。厭氧發(fā)酵制氫菌種包括專性厭氧菌和兼性厭氧菌，其中，專性厭氧菌的培養(yǎng)、運輸及工業(yè)化條件苛刻，而兼性厭氧菌具有廣泛的適應(yīng)性，是生物制氫工業(yè)化更理想的細菌。目前，兼性厭氧菌種類比較單一，缺乏新型菌種，產(chǎn)氫效率偏低，并且制氫條件待進一步優(yōu)化。通過專利檢索，目前已有專利主要是對發(fā)酵底物和發(fā)酵裝置的研究，如植物秸稈生物制氫發(fā)酵液的制備方法(01140458.2沈建權(quán)等)，一種污泥與有機垃圾混合生物制氫的方法(申請?zhí)?00710032658·0周少奇等)，生物發(fā)酵制氫裝置(申請?zhí)?0231651·X沈建權(quán))和高效發(fā)酵法生物制氫膨脹床設(shè)備(申請?zhí)?03260012.7任南琪等)等，而對于發(fā)酵菌種特別是高效產(chǎn)氫菌種的篩選研究相對薄弱，僅有一種生物制氫方法及其專用菌(申請?zhí)?00910088408.8邢新會等)，但該方法所用菌種是通過基因?qū)牒蟮闹亟M菌，操作較復(fù)雜，且發(fā)酵條件要求嚴格厭氧，不易推廣。所以，對于兼性厭氧新型菌種的篩選以及制氫工藝條件的探索優(yōu)化迫在眉睫。
發(fā)明內(nèi)容為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的生物制氫法操作復(fù)雜，發(fā)酵條件要求嚴格的問題，本發(fā)明主要包括一種利用兼性厭氧菌制氫的方法，該方法是在非嚴格厭氧條件下，，使用產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)CICC10293，以葡萄糖為發(fā)酵底物，采用分批發(fā)酵的方式，20小時即可高效完成制氫過程。本發(fā)明的技術(shù)方案是本發(fā)明所選用的兼性厭氧菌具體為腸桿菌禾斗(Enterobacteriaceae)腸桿菌屬(Enterobacter)的產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)CICC10293，該菌屬原養(yǎng)型兼性厭氧革蘭氏陰性菌，購自中國工業(yè)微生物菌種保藏中心(ChinaCenterofIndustrialCultureCollection，CICC)。—種利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法，使用兼性厭氧菌為腸桿菌禾斗(Enterobacteriaceae)腸桿菌屬(Enterobacter)的產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)CICC10293,以蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、水的混合液為培養(yǎng)基，以葡萄糖為發(fā)酵底物，在發(fā)酵初期，最好能夠保證處于厭氧或是近厭氧環(huán)境，采用分批發(fā)酵的方法，制備得到氫氣，其中，所述的培養(yǎng)基中蛋白胨的濃度為46g/L，牛肉膏為24g/L，NaCl為46g/L，在產(chǎn)生氣體后的發(fā)酵中就不需要保證處于厭氧或是近厭氧環(huán)境了，此時對環(huán)境中的氧氣濃度沒有什么要求。具體方法為無菌操作下，配制培養(yǎng)基并滅菌，將產(chǎn)氣腸桿菌的高濃縮菌液以2%5%體積比例接種于培養(yǎng)基，所述的高濃縮菌液的菌液濃度為Sxio9NSxio11ceIl/mL,在溫度為2050°C、維持pH在58，170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)2448h后，將得到的培養(yǎng)好的菌液轉(zhuǎn)移到已滅菌的濃度為560g/L葡萄糖發(fā)酵底物中，封閉后繼續(xù)在溫度2050°C、轉(zhuǎn)速170r/min搖床振蕩培養(yǎng)，并連接氫氣收集裝置收集氫氣。更優(yōu)選的方法是在無菌操作下，按照560g/L比例向培養(yǎng)基中添加葡萄糖發(fā)酵底物，滅菌后得到培養(yǎng)發(fā)酵基，將產(chǎn)氣腸桿菌的高濃縮菌液以2%5%體積比例接種至培養(yǎng)發(fā)酵基，封閉后于溫度為2050°C、pH在58的范圍內(nèi)，170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)，并連氫氣接收集裝置氫氣。在培養(yǎng)基中添加K2HPO411.5g/L,FeSO4·4Η200·10.2g/L產(chǎn)氫效果會更好。反應(yīng)中控制反應(yīng)過程pH在67產(chǎn)氫特性更佳。產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)CICC10293為兼性厭氧菌，對培養(yǎng)環(huán)境氧氣要求不嚴格。影響厭氧發(fā)酵產(chǎn)氫的主要因素是菌種接種方式、培養(yǎng)基配置、發(fā)酵底物濃度，PH和溫度等。本發(fā)明經(jīng)過對多種發(fā)酵條件組合配置試驗，對比分析發(fā)現(xiàn)以下最佳工藝條件可以達到產(chǎn)氫效率的最優(yōu)化培養(yǎng)基配制具體為蛋白胨5g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L，K2HPO4L5g/L，F(xiàn)eSO4·4H200.2g/L；葡萄糖為發(fā)酵底物，濃度為20g/L；發(fā)酵pH為6.07.0;采用最基本的分批發(fā)酵方式，在40°C條件下進行恒溫振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為170r/min，培養(yǎng)時間約為20h，至氣體產(chǎn)生停止。經(jīng)試驗，產(chǎn)氫量可達到134mLH2/100mL液體培養(yǎng)基，產(chǎn)氫效率高，對發(fā)酵條件要求低，具有廣闊的應(yīng)用前景。有益效果首先，在現(xiàn)有的各種產(chǎn)氣菌種中挑選出一種效果最好的發(fā)酵制氫菌種，此菌種為兼性厭氧菌，具有生長迅速，產(chǎn)氫效率高，對厭氧條件要求低等優(yōu)點；其次，只在發(fā)酵初期要求在厭氧或是近厭氧環(huán)境，產(chǎn)生氣體后，對環(huán)境的要求就沒有那么嚴格了，非厭氧條件下就一樣可以正常發(fā)酵；再次，詳盡地優(yōu)化了該菌種的最佳發(fā)酵工藝條件，達到發(fā)酵底物的利用率和產(chǎn)氫效率最大化，確定發(fā)酵底物為濃度是20g/L的葡萄糖，培養(yǎng)基配制為蛋白胨5g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L，K2HPO4L5g/L，F(xiàn)eS04·4Η200.2g/L，在pH為6.07.0，溫度為40°C條件下采用分批發(fā)酵的方式進行恒溫振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為170r/min，培養(yǎng)時間約為20h，產(chǎn)氫量可達到134mLH2/100mL液體培養(yǎng)基。圖1為本發(fā)明所用實驗裝置簡圖。其中，1為液體取樣口，2為反應(yīng)瓶，3為氣體純化瓶，4為氣體取樣口，5為氣體收集裝置，6為水準瓶。圖2為產(chǎn)氫量隨時間變化圖。圖3為不同發(fā)酵底物濃度產(chǎn)氫量圖。圖4為不同溫度下產(chǎn)氫量圖。圖5為不同pH值下產(chǎn)氫量隨時間變化圖。具體實施例方式高濃縮菌液的制備將菌株產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)CICC10293接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液里，每升培養(yǎng)液含有蛋白胨46g、牛肉膏24g、氯化鈉46g，蒸餾水IOOOmL,并控制pH為68，于30°C下培養(yǎng)2448h，得到高濃縮菌液，菌液濃度為5XIO9SXio11CelVmL本發(fā)明所用實驗裝置簡圖如圖1所示，其中，1為液體取樣口，2為反應(yīng)瓶，3為氣體純化瓶，4為氣體取樣口，5為氣體收集裝置，6為水準瓶。反應(yīng)瓶2中盛有培養(yǎng)基和作為底物的葡萄糖。氣體純化瓶3中盛有飽和氫氧化鈉溶液，氣體收集裝置用來收集氣體。實施例1菌種接種方式的選擇確定培養(yǎng)基組分為蛋白胨5g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L，調(diào)節(jié)初始pH=7.0,以此作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；所有滅菌均為115°C高溫滅菌25min；(1)方案一配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基并滅菌，將Enterobacteraerogenes高濃縮菌液以2%5%體積比例接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基(無菌操作)，在溫度為30°C、170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)2448h后，將得到的培養(yǎng)好的菌液轉(zhuǎn)移到已滅菌的濃度為20g/L葡萄糖發(fā)酵底物中，發(fā)酵液總量為450mL，封閉后繼續(xù)在溫度40°C、轉(zhuǎn)速170r/min搖床振蕩培養(yǎng)，并連接氫氣收集裝置。(2)方案二按照20g/L比例向基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加葡萄糖作為發(fā)酵底物，滅菌后得到培養(yǎng)發(fā)酵基，將Enterobacteraerogenes高濃縮菌液以2%5%體積比例直接接種至培養(yǎng)發(fā)酵基(無菌操作)，發(fā)酵液總量為450mL，封閉后于溫度為40°C、170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)并連氫氣接收集裝置。發(fā)酵初期，均以氮氣吹洗發(fā)酵產(chǎn)氫裝置35min，保證裝置處于厭氧或者近厭氧狀態(tài)。在培養(yǎng)過程中，收集氣體并實時記錄氣體產(chǎn)量，定時取發(fā)酵液樣測定PH和葡萄糖分解率等指標；氫氣含量測量采用氣相色譜儀TCD熱導(dǎo)器檢測；pH測定采用pH酸度計；葡萄糖分解率采用菲林比色法測定。實驗結(jié)果表明方案一產(chǎn)氣總持續(xù)時間約6小時，產(chǎn)氣速度快，pH迅速降低，產(chǎn)氫量212mL，氫氣比率20%，葡萄糖分解率為71%；方案二產(chǎn)氣總持續(xù)時間約20小時，初始為菌種的繁殖階段，產(chǎn)氣速率低，在616小時產(chǎn)氣速率最高，pH值緩慢降低，產(chǎn)氫量494mL，氫氣比率34.5%，葡萄糖分解率為83.05%。對比發(fā)現(xiàn)，方案二具有較高的產(chǎn)氫效率優(yōu)勢，適合于發(fā)酵過程中應(yīng)用。實施例2最佳發(fā)酵基組分配置的確定依據(jù)實施例1的結(jié)果，在應(yīng)用方案二基礎(chǔ)上，進一步對發(fā)酵條件進行優(yōu)化，探索最佳的發(fā)酵培養(yǎng)基組分配置，進行下面的試驗分別配制3種發(fā)酵培養(yǎng)基，編號為13，其組成分別見下表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH=7.0，于115°C高溫滅菌25min，將Enterobacteraerogenes高濃縮菌液以2%5%體積比例接種(無菌操作)，發(fā)酵液總量為450mL，發(fā)酵條件均相同。在培養(yǎng)開始之前，均以氮氣吹洗35min至厭氧或近厭氧環(huán)境后置于溫度為40°C,170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)并連接氫氣收集裝置，持續(xù)時間為20小時。發(fā)酵過程中收集氣體，并實時記錄氣體產(chǎn)量；氫氣含量測量采用氣相色譜儀TCD熱導(dǎo)器檢測；pH測定采用PH酸度計；葡萄糖分解率采用菲林比色法測定，產(chǎn)氫量隨時間變化見附圖2。通過實驗發(fā)現(xiàn)，編號1、2、3培養(yǎng)基氫氣產(chǎn)量分別為229mL、337mL、494mL。葡萄樣分解率為55.3%、76%、83.05%。實驗表明，一定量緩沖溶液K2HPO4，可明顯降低pH值下降的速度和幅度，使酸度維持在適合產(chǎn)氣腸桿菌生長活性的范圍中，利于產(chǎn)氫過程的發(fā)生；同時如文獻中所述添加適當(dāng)濃度的Fe2+促進了產(chǎn)氫酶的產(chǎn)生，促進產(chǎn)氫；與編號1相比較，編號3的發(fā)酵培養(yǎng)基組分配置可提高氫氣產(chǎn)量50%以上。實施例3最佳發(fā)酵底物濃度的確定依據(jù)實施例1和2的結(jié)果，通過改變發(fā)酵底物初始濃度，探索提高產(chǎn)氫效率的可能。配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基，組成為蛋白胨5g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L，K2HPO4L5g/L，F(xiàn)eSO4·4H200.2g/L，設(shè)置4組平行實驗，分別設(shè)定初始底物葡萄糖濃度為5、10、20、30、40和60g/L，總發(fā)酵液量為450mL，其他發(fā)酵條件均相同。在培養(yǎng)開始之前，均以氮氣吹洗35min至厭氧或近厭氧環(huán)境，置于溫度為40°C，170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)并連接氫氣收集裝置，持續(xù)時間為20小時。發(fā)酵過程中收集氣體，并實時記錄氣體產(chǎn)量；氫氣含量測量采用氣相色譜儀TCD熱導(dǎo)器檢測；pH測定采用pH酸度計；葡萄糖分解率采用菲林比色法測定，不同發(fā)酵底物濃度產(chǎn)氫量見附圖3。通過試驗發(fā)現(xiàn)，不同濃度底物產(chǎn)氫量分別為234mL、329mL、494mL、466mL、414mL、322mL，當(dāng)?shù)孜餄舛葹?0g/L時，產(chǎn)氫量最高。底物濃度較低時，可被利用葡萄糖量較少，底物濃度過高，產(chǎn)氫量程迅速降低趨勢，這是因為底物濃度會造成發(fā)酵方式或者氣體動力擴散的改變。實施例4最佳發(fā)酵溫度的確定依據(jù)實施例1、2和3的結(jié)果，按照最佳培養(yǎng)基組分配置配制，在發(fā)酵底物濃度條件下，調(diào)節(jié)初始PH為7.0，總發(fā)酵液量為450mL，設(shè)置5組平行試驗，分別設(shè)置環(huán)境溫度20、30、35、40、50°C，在170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)并連接氫氣收集裝置，持續(xù)時間為20小時。在培養(yǎng)開始之前，均以氮氣吹洗35min至厭氧或近厭氧環(huán)境。發(fā)酵過程中收集氣體，并實時記錄氣體產(chǎn)量；氫氣含量測量采用氣相色譜儀TCD熱導(dǎo)器檢測；pH測定采用pH酸度計；葡萄糖分解率采用菲林比色法測定，不同溫度下產(chǎn)氫量見附圖4。實驗表明，40°C條件下產(chǎn)氫效率最高，達到494mL，溫度過高或者過低都會因影響菌的活性而導(dǎo)致產(chǎn)氫能力降低。實施例5最佳發(fā)酵pH確定(1)依據(jù)實施例1和2的結(jié)果，為探索最佳發(fā)酵pH條件，進行以下試驗發(fā)酵培養(yǎng)基組分為實施例2中編號3的培養(yǎng)基組分配置，設(shè)置4組平行實驗，通過添加適量NaOH和HCl分別調(diào)節(jié)初始pH為5、6、7和8，發(fā)酵液總量為450mL其他發(fā)酵條件均相同。在培養(yǎng)開始之前，均以氮氣吹洗35min至厭氧或近厭氧環(huán)境置于溫度為40°C，170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)并連接氫氣收集裝置，時間為20小時。發(fā)酵過程中收集氣體，并實時記錄氣體產(chǎn)量；氫氣含量測量采用氣相色譜儀TCD熱導(dǎo)器檢測；pH測定采用pH酸度計；葡萄糖分解率采用菲林比色法測定，產(chǎn)氫量隨時間變化見附圖5。通過實驗發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)初始pH為6、7時，產(chǎn)氫量分別為428mL、494mL，具有較高的產(chǎn)氫效率。(2)在上述試驗基礎(chǔ)上，進一步進行下面試驗發(fā)酵培養(yǎng)基組分為實施例2中編號3的培養(yǎng)基組分配置，設(shè)置2組對比試驗，均調(diào)節(jié)初始PH值為7.0，發(fā)酵液總量為450mL發(fā)酵條件均相同。在培養(yǎng)開始之前，均以氮氣吹洗35min至厭氧或近厭氧環(huán)境置于溫度為40°C，170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)并連接氫氣收集裝置，時間為20小時。其中一組將設(shè)計通過pH酸度計實時測定發(fā)酵液pH值，并通過添加酸堿調(diào)節(jié)PH約保持67范圍之內(nèi)，另一組不做處理，作為對照；發(fā)酵過程中收集氣體，并實時記錄氣體產(chǎn)量；氫氣含量測量采用氣相色譜儀TCD熱導(dǎo)器檢測；pH測定采用pH酸度計；葡萄糖分解率采用菲林比色法測定，產(chǎn)氫量隨時間變化見附圖5。通過實驗發(fā)現(xiàn)，保持發(fā)酵液酸度在67范圍產(chǎn)氫量達600mL，葡萄糖分解率為97%，利于發(fā)酵產(chǎn)氫的持續(xù)和高效進行，而對照組pH降低迅速，pH值的降低影響菌的活性而導(dǎo)致產(chǎn)氫能力降低。綜上所述，產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)CICC10293作為兼性厭氧產(chǎn)氫菌種，可用于發(fā)酵底物為葡萄糖的發(fā)酵制氫過程中，通過試驗發(fā)現(xiàn)，其最佳的發(fā)酵工藝條件是①最佳菌種接種時機未基礎(chǔ)培養(yǎng)基與發(fā)酵底物共存時；②最佳培養(yǎng)基配制為蛋白胨5g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L，K2HPO4L5g/L，F(xiàn)eS04·4H200.2g/L③最佳發(fā)酵底物葡萄糖的濃度為20g/L④最佳發(fā)酵溫度為40°C；⑤最佳發(fā)酵初始pH為7，且維持發(fā)酵發(fā)酵pH的平衡利于產(chǎn)氫的發(fā)生。權(quán)利要求一種利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法，其特征在于，使用兼性厭氧菌為腸桿菌科(Enterobacteriaceae)腸桿菌屬(Enterobacter)的產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)CICC10293，以蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉、水的混合液為培養(yǎng)基，以葡萄糖為發(fā)酵底物，采用分批發(fā)酵的方法，制備得到氫氣，其中，所述的培養(yǎng)基中蛋白胨的濃度為4～6g/L，牛肉膏為2～4g/L，NaCl為4～6g/L。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法，其特征在于，具體方法為無菌操作下，配制培養(yǎng)基并滅菌，將產(chǎn)氣腸桿菌的高濃縮菌液以2%5%體積比例接種于培養(yǎng)基，所述的高濃縮菌液的菌液濃度為5X109SxiO11ceIVmL,在溫度為2050°C、維持PH在58，170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)2448h后，將得到的培養(yǎng)好的菌液轉(zhuǎn)移到已滅菌的濃度為560g/L葡萄糖發(fā)酵底物中，封閉后繼續(xù)在溫度2050°C、轉(zhuǎn)速170r/min搖床振蕩培養(yǎng)，并連接氫氣收集裝置收集氫氣。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法，其特征在于，無菌操作下，按照560g/L比例向培養(yǎng)基中添加葡萄糖發(fā)酵底物，滅菌后得到培養(yǎng)發(fā)酵基，將產(chǎn)氣腸桿菌的高濃縮菌液以2%5%體積比例接種至培養(yǎng)發(fā)酵基，封閉后于溫度為2050°C、pH在58的范圍內(nèi)，170r/min的搖床振蕩培養(yǎng)，并連氫氣接收集裝置氫氣。4.根據(jù)權(quán)利要求13任一所述利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法，其特征在于，在培養(yǎng)基中添加K2HPO4I1.5g/L,FeSO4·4Η200·10.2g/L。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法，其特征在于，pH在67。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法，其特征在于，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中各成分的濃度為蛋白胨5g/L，牛肉膏3g/L，NaCl5g/L,K2HPO41.5g/L，F(xiàn)eSO4·4H200.2g/L；葡萄糖底物濃度為20g/L；在pH為6.O7.O、溫度為40°C條件下采用分批發(fā)酵的方式進行恒溫振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為170r/min，培養(yǎng)時間20h。全文摘要本發(fā)明提供了一種利用兼性厭氧菌發(fā)酵制氫的方法，具體涉及到菌種篩選和發(fā)酵條件優(yōu)化兩個方面。篩選出兼性厭氧菌為產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)CICC10293；經(jīng)過試驗得到，該菌種最佳發(fā)酵工藝條件是培養(yǎng)基配制具體為蛋白胨4～6g/L，牛肉膏2～4g/L，NaCl4～6g/L，K2HPO41～1.5g/L，F(xiàn)eSO4·4H2O0.1～0.2g/L；發(fā)酵底物為葡萄糖，濃度為20g/L；發(fā)酵采用分批發(fā)酵的方式；在pH為6.0～7.0，溫度為40℃條件下進行恒溫振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為170r/min；培養(yǎng)時間約為20h，至氫氣產(chǎn)生停止。產(chǎn)氫量可達到134mLH2/100mL液體培養(yǎng)基，產(chǎn)氫效率高，對發(fā)酵環(huán)境條件要求低，具有廣闊的應(yīng)用前景。文檔編號C12R1/01GK101824437SQ201019026129公開日2010年9月8日申請日期2010年3月2日優(yōu)先權(quán)日2010年3月2日發(fā)明者王瑞興,袁曉明,錢春香申請人:東南大學(xué)