專利名稱：：生產(chǎn)丁醇的菌劑及其應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及生產(chǎn)丁醇的菌劑及其應用。
背景技術：
：丁醇是一種重要的化工原料，主要用于制造增塑劑、溶劑、萃取劑等。近年來發(fā)現(xiàn)丁醇的熱值、辛烷值與汽油相當，且能與汽油以任意比混合，可以使用現(xiàn)有的石油管道運輸方式，丁醇已成為被世界各國企業(yè)和研究機構強烈關注的一種極具潛力的新型生物燃料。丁醇可由發(fā)酵和石油化工合成法生產(chǎn)。20世紀50年代以后，由于石化合成技術的成熟導致發(fā)酵法生產(chǎn)丁醇不再具有經(jīng)濟競爭優(yōu)勢，丁醇發(fā)酵逐漸淡出市場。70年代后，隨著石油危機的出現(xiàn)及國際原油價格的不斷上漲，世界各國對能源安全和資源安全的憂慮日增，人們又重新開始關注丁醇的發(fā)酵生產(chǎn)。但仍有以下困擾丁醇生產(chǎn)的難題存在第一，底物費用高昂，發(fā)酵用的基質占丁醇生產(chǎn)成本的70%左右；第二，產(chǎn)物濃度低，由于丁醇的毒性，導致發(fā)酵過程中產(chǎn)物濃度很低，總溶劑不到2%;第三，產(chǎn)物回收費用高，由于產(chǎn)物濃度太低，故回收需要大量耗能。在上世紀四、五十年代，工業(yè)生產(chǎn)中生物丁醇的發(fā)酵使用的是大容積的批式發(fā)酵罐(從200n^到800m"，主要的發(fā)酵基質是8-10^的玉米粉和糖蜜。由于丁醇毒性的問題，在反應器中丁醇濃度達到13g/L時，發(fā)酵不得不終止。在生物丁醇分批發(fā)酵過程中，一般反應器中細胞濃度小于4g/L，由于極低的細胞濃度以及產(chǎn)物的抑制作用使反應器的生產(chǎn)強度很較低。分批補料發(fā)酵初始基質濃度較低，產(chǎn)物抑制減弱，使得細胞濃度和丁醇的生產(chǎn)強度有所提高。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)丁醇的菌劑及其應用。本發(fā)明所提供的一種生產(chǎn)丁醇的菌劑，它的活性成份包括丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutyli固)SMB-1(pMPl)禾口丙酮丁醇梭菌(C.acetobutyli固)SMB-1(pITG-B);所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-l(pMPl)是將紅霉素抗性基因導入丙酮丁醇梭菌中構建的重組菌，所述丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)是將含有谷胱甘肽編碼基因的DNA分子導入丙酮丁醇梭菌中構建的重組菌。其中，所述含有谷胱甘肽編碼基因的DNA分子中自上游至下游依次為硫解酶啟動子、谷胱甘肽編碼基因和終止子。所述谷胱甘肽編碼基因的核苷酸序列具體可為序列表中的序列l(wèi)。所述硫解酶啟動子的核苷酸序列具體可為序列表中的序列2。所述紅霉素抗性基因的核苷酸序列為序列表中的序列3。所述菌劑中，丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)和所述丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)的集落形成單位數(shù)目比為(1-5):1。所述菌劑中，所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)和所述丙酮3丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)可分別獨立包裝，也可混合在一起。本發(fā)明生產(chǎn)丁醇的菌劑可為液體制劑，也可為固體制劑。在液體制劑中加入吸附劑即可獲得固體制劑，如加入輕質碳酸鈣或草炭等。所述所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)具體可為丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)CGMCCNo.2800;所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pITG-B)具體可為丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pITG-B)CGMCCNo.2797。本發(fā)明的另一個目的是提供一種生產(chǎn)丁醇的方法。本發(fā)明所提供的生產(chǎn)丁醇的方法，是用所述的菌劑發(fā)酵玉米淀粉生產(chǎn)丁醇。其中，所述玉米淀粉為玉米淀粉水溶液，所述玉米淀粉水溶液中所述玉米淀粉的質量百分含量為8-10%。所述發(fā)酵條件可為35-37t:，靜置發(fā)酵。本發(fā)明的生產(chǎn)丁醇的菌劑的活性成分為丙酮丁醇梭菌(Clostridi麗cetobutyli固)SMB-1(pMPl)禾口丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)。丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)能夠在胞內(nèi)合成谷胱甘肽(GSH)，改變細胞生理代謝途徑，提高對玉米粉培養(yǎng)基的利用效率，生長速率較快；丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)具有相對較好的耐受丁醇和發(fā)酵生產(chǎn)丁醇的能力。本發(fā)明的菌劑發(fā)酵玉米淀粉生產(chǎn)丁醇，發(fā)酵36小時，可得到13.3g/l的丁醇發(fā)酵液，平均生產(chǎn)強度達到0.37g/lh;發(fā)酵40小時，可得到14.5g/l的丁醇發(fā)酵液，平均生產(chǎn)強度達到0.36g/lh;且殘渣凝結，發(fā)酵液澄清，有利于丁醇回收純化。圖1為pITG-B載體的結構示意圖。圖2為pIMPl載體的結構示意圖。具體實施例方式下述實施例中如無特殊說明所用方法均為常規(guī)方法，所用試劑均可從商業(yè)途徑獲得。酵母粉購自英國0X0ID公司(目錄號1023098)，蛋白胨購自英國0X0ID公司(目錄號594566)，牛肉膏購自北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠，玉米粉購自普通超市。強化梭菌培養(yǎng)基(RCM)組成為每升含酵母粉3.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、葡萄糖5.0g、淀粉10.0g、乙酸鈉3.0g，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，pH6.8。10%玉米淀粉培養(yǎng)基每100mL水中加入10.0g玉米淀粉，加熱糊化。實施例1、制備生產(chǎn)丁醇的菌劑—、構建合成谷胱甘肽的丙酮丁醇梭菌采用細菌基因組提取試劑盒提取對數(shù)生長中后期的E.coliJM109的染色體DNA，以此為模板，用以下引物進行PCR擴增gshB-F:5，-ttcagaggatccATGATCAAGCTCGGCATCGTG-3，(化線部分為BamHI識別位點)；gshB-R:5，-aaggcgaattcTTACTGCTGCTGTAAACGTGCTTC_3，(劃線部分為EcoRI識別位點)。采用TaKaRa公司的高效保真酶Primerstart進行PCR擴增，其PCR擴增程序為95°C3min;98。C10s、55。C15s、72。Clmin，30個循環(huán)；72。C10min。將所得的PCR產(chǎn)物采用PCR產(chǎn)物回收試劑盒純化，連接到pGEM-TEasy載體上，構建重組質粒并轉化大腸桿菌DH5a，對重組質粒進行測序，測序結果表明PCR產(chǎn)物的核苷酸序列如序列表中序列1所示。隨后用Fermetas公司的BamHI和EcoRI對純化的PCR產(chǎn)物進行雙酶切，37t:靜置4h后，用DNA回收試劑盒純化酶切后的PCR產(chǎn)物，與用同樣酶雙酶切的P頂P1-Pthl載體在T4DNA連接酶作用下連接，連接產(chǎn)物，轉化E.coliJM109的高效感受態(tài)細胞，在含氨芐青霉素的LB平板上篩選。菌落PCR驗證陽性克隆子。陽性克隆子含有的重組表達載體命名為pITG-B(圖1)。pIMPl-Pthl載體按照如下方法獲得采用溶菌酶、SDS等試劑破壞細胞壁的常規(guī)細菌基因組提取方法，提取丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)ATCC824(美國典型培養(yǎng)物保藏中心，美國專利US7432090)的基因組DNA，按照常規(guī)PCR方法，使用高保真DNA聚合酶Pfu擴增硫解酶啟動子區(qū)域(Pthl)。表l.引物的核苷酸序列引物名稱序列酶切位點(下劃線)Pthl-FagtgtcgactatattgataaaaataataatagtgggSailPthl-RcgtggatccttctttcattctaactaacctccB咖HI將PCR擴增硫解酶啟動子區(qū)域的產(chǎn)物克隆到pMD18-T載體中，獲得pMD18-T-Pthl載體，測序，測序結果表明Pthl的核苷酸序列如序列表中序列2所示。SalI和BamHI酶切擴增得到的硫解酶啟動子區(qū)域(Pthl)與經(jīng)過同樣酶切的pIMPl載體(圖2)(pIMPl載體中含有紅霉素抗性基因，其核苷酸序列為序列表中的序列3)(Mermelstein，L.D.，N.E.Welker，G.N.Be騰tt，andE.T.Papoutsakis.(1992).ExpressionofclonedhomologousfermentativegenesinClostridiumacetobutylicumATCC824.Bio/Technology.10:190-195)(中國科學院微生物研究所)連接構建載體pMPl-Pthl。pITG-B質粒轉化到E.coliER2275(E.coliER2275含質粒pANl，pANl含來自枯草芽孢桿菌的①3T甲基化酶基因)(Mermelstein,L.D.andE.T.P即outsakis(1993)〃InvivomethylationinEscherichiacolibytheBacillussubtilisphagephi3TImethyltransferasetoprotectplasmidsfromrestrictionupontransformationofClostridiumacetobutylicumATCC824.〃Appl.Environ.Microbiol.59(4):1077-1081.)(中國科學院微生物研究所)中，并將轉化后細胞涂布于含有氨芐青霉素和氯霉素的LB平板上，挑取單菌落富集培養(yǎng)，菌落PCR驗證陽性克隆子，陽性克隆中pITG-B質粒即是甲基化的pITG-B質粒。厭氧環(huán)境下，取強化梭菌培養(yǎng)基(RCM)培養(yǎng)的對數(shù)生長中后期的丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutyli固)SMB-1CGMCCN22287(中國專利:200810102673.2)培養(yǎng)液冰浴放置10min，4°C、4000rpm離心1Omin，厭氧環(huán)境下，去上清，加入足量的預冷的電轉緩沖液(270mM蔗糖，5mMNaH2P04，pH7.4)，洗滌兩次，并用電轉緩沖液重懸，然后轉入0.4cm的電轉杯，放置在冰浴中冷卻，加入甲基化的pITG-B質粒，冰浴放置2min，2.Okv脈沖電壓和25iiF的電容進行電轉化，隨后將電轉液加到RCM培養(yǎng)基中37t:復活培養(yǎng)4h，離心收集細胞，并將所得細胞涂布于含紅霉素抗性的RCM瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24-36h后，獲得含有甲基化的PITG-B質粒丙酮丁醇梭菌，命名為丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)。pMPl載體按照上述方法轉入丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1CGMCCN2.2287中，獲得含有甲基化的pMPl質粒的丙酮丁醇梭菌，命名為丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pMPl)。三、制備生產(chǎn)丁醇的菌劑丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)和丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)分別在含有50yg/ml紅霉素的強化梭菌培養(yǎng)基(RCM)(酵母粉3.0g/L、蛋白胨10.Og/L、牛肉膏10.0g/L、葡萄糖5.Og/L、淀粉10.Og/L、乙酸鈉3.0g/L、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L，pH6.8)中培養(yǎng)至對數(shù)生長中期，然后按照如下任一方法制備發(fā)酵生產(chǎn)丁醇的菌劑1)丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pIMPl)與丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)按照1:lcfu/L混合，獲得菌劑1;2)丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pIMPl)與丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)按照5:lcfu/L混合，獲得菌劑2;3)丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pIMPl)與丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)按照2.5:lcfu/L混合，獲得菌劑3。菌劑1、2和3分別接種到預裝50ml10%玉米淀粉培養(yǎng)基的150ml厭氧瓶，37。C，培養(yǎng)36h，用液相色譜檢測發(fā)酵36小時后的發(fā)酵液。液相色譜檢測條件為樣品前處理12000rpm離心lmin，取上清液，用0.22ym濾膜過濾；色譜條件:Agilent1200液相色i普儀，示差檢測器；BioRadAminexHPX-87H有機酸柱(300*7.8mm)，柱溫15。C;上樣量10ii1;流動相為O.05mM112504，流速0.5ml/min。丁醇標準品購自Sigma公司(目錄號4C006217);在如上色譜條件下標準品的保留時間為40.9分鐘。以丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pMPl)作為對照1;以丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)作為對照2;丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1CGMCCN22287作為對照3。發(fā)酵36小時后丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)易于消化玉米粉培養(yǎng)基，而丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pMPl)的玉米粉利用效率相對較差。發(fā)酵生產(chǎn)丁醇的菌劑1、2和3的玉米粉利用率相對較高，發(fā)酵濾液也同時增加，澄清的發(fā)酵液有利于丁醇的回收。液相色譜檢測36小時發(fā)酵液的結果如表2所示。表2.液相色譜檢測36小時發(fā)酵液的結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>四、制備生產(chǎn)丁醇的菌劑丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)中的一株菌已于2008年12月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號為CGMCCNo.2797。丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)中的一株菌已于2008年12月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號為CGMCCNo.2800。丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)CGMCCNo.2800和丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)CGMCCNo.2797分別在含有50iig/ml紅霉素的強化梭菌培養(yǎng)基(RCM)(酵母粉3.0g/L、蛋白胨10.0g/L、牛肉膏10.0g/L、葡萄糖5.0g/L、淀粉10.0g/L、乙酸鈉3.0g/L、L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L，pH6.8)中培養(yǎng)至對數(shù)生長中期，然后按照如下任一方法制備發(fā)酵生產(chǎn)丁醇的菌劑1)丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pIMPl)CGMCCNo.2800與丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)CGMCCNo.2797按照1:lcfu/L混合，獲得菌劑A;2)丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pIMPl)CGMCCNo.2800與丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)CGMCCNo.2797按照5:lcfu/L混合，獲得菌劑B;3)丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pIMPl)CGMCCNo.2800與丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)CGMCCNo.2797按照2.5:lcfu/L混合，獲得菌劑C。菌劑A、B和C分別接種到預裝3L10%玉米淀粉培養(yǎng)基的7L發(fā)酵罐，37°C，培養(yǎng)36h，用液相色譜檢測發(fā)酵36小時后的發(fā)酵液。以丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pIMP1)CGMCCNo.2800作為對照1;以丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-l(pITG-B)CGMCCNo.2797作為對照2;丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1CGMCCN2.2287作為對照3。表3.菌劑發(fā)酵生產(chǎn)丁醇<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>序列表〈110〉中國科學院微生物研究所〈120〉生產(chǎn)丁醇的菌劑及其應用〈130〉〈160>3〈210>1〈211>951〈212>DNA〈213>大腸桿菌(Escherichiacoli)〈400>1atgatc朋gctcggcatcgtgatggaccccg^agattcc60agttttgctatgttgctgga3gC3C3gCgtcgtggttacgaacttcactatetgg卿tg120ggcgatctgtatctgatcaatggtg朋gcccgcgcccatacccgcacgctg^cgtg^g180cag朋ctecgEl卿gtggttttcgttcgtcggtg朋C3ggatctgccgctggccgatctc240gatgtgatcctgatgcgteaagacccgccgtttgataccgagtttetctacgcgacctat300attctggaacgtgccgaagag￡l￡l￡lggg￡lCgctgatcgtta3C^gCCgC3gagcctgcgc360gactgt朋cg3g朋3Ctgtttaccgcctggttctctgactteacgccagaaacgctggtt420acgcgc朋te朋gcgcagct朋朋gcgttctggg3g朋3Ccattcttaag480ccgctggacggtetgggcggcgcgtcgattttccgcgtga■g33ggCg3tccaaacctc540ggcgtgattgccgaaaccctgactgagcatggcactcgctactgcatggc600ctgccagccatte朋gatggCg3C3朋CgCgtgctggtggtggatggcgagccggtaccg660tactgcctggcgcgtattccgc鄉(xiāng)ggggcga朋cccgtggcaatctggctgccggtggt720cgcggtgaacctcgtccgctg3Cgg朋3gtg3Ctgg朋朋tcgcccgtcagatcgggccg7803CgCtg朋3g朋a朋gggctgatttttgttggtctggatatcatcggcgaccgtctgact840gaaattaacgtcaccagcccaacctgtattcgtgagattgaagcagagtttccggtgtcg900atcaccggaatgttaatggatgccatcgaagcacgtttacagcagcagtaa951〈210>2〈211〉150〈212>DNA〈213〉丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutyli固)〈400>2tatattgatategtgggtetcgteteaatt60agggate朋ctetggaacttttga皿tggtttetctgtteccccgtetca1203朋ttteggaggttegtteg150〈210>3〈211>735〈212>DNA〈213〉〈400>33tg朋Cg3g3aactttetteteatetegat60c皿3teteagcatgateatetctttgaaatCggCtC3gg31203朋gggC3ttttecccttgatcgteactgc180gaccate朋taaacttgttgtttccaagtt240tte朋c朋ggatetettgcagttteaatttaatetttggt300aateteccttateacateagtecggateteatecgc皿皿ttgtttttgategtetegct360gatgagatttattteatcgtgg皿tecgggtttgcteaaatec皿皿cgc420tcattggcattettttteatggc卿agttgatetttcteggttcc皿ga■gaatettttcatccteaaccagctcactte540tc朋g朋tette皿cag皿gtcgttetgaa600attcctteaa660attgacgatttegctttgaacaattcttetctcttttcaategctete皿720ttettteateagtea73權利要求一種生產(chǎn)丁醇的菌劑，它的活性成份包括丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMP1)和丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pITG-B)；所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMP1)是將紅霉素抗性基因導入丙酮丁醇梭菌中構建的重組菌，所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pITG-B)是將含有谷胱甘肽編碼基因的DNA分子導入丙酮丁醇梭菌中構建的重組菌。2.根據(jù)權利要求1所述的菌劑，其特征在于所述含有谷胱甘肽編碼基因的DNA分子中自上游至下游依次為硫解酶啟動子、谷胱甘肽編碼基因和終止子。3.根據(jù)權利要求1或2所述的菌劑，其特征在于所述谷胱甘肽編碼基因的核苷酸序列為序列表中的序列1;所述硫解酶啟動子的核苷酸序列為序列表中的序列2。4.根據(jù)權利要求3所述的菌劑，其特征在于所述紅霉素抗性基因的核苷酸序列為序列表中的序列3。5.根據(jù)權利要求4所述的菌劑，其特征在于所述菌劑中，丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutyli固)SMB-1(pMPl)禾口所述丙酮丁醇梭菌(Clostridi麗cetobutyli固)SMB-1(pITG-B)的集落形成單位數(shù)目比為(1-5):1。6.根據(jù)權利要求5所述的菌齊U，其特征在于所述菌劑中，所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pMPl)和所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pITG-B)分別獨立包裝。7.根據(jù)權利要求6所述的菌齊U，其特征在于所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)為丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMPl)CGMCCNo.2800;所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutyli固)SMB-1(pITG-B)為丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-l(pITG-B)CGMCCNo.2797。8.—種生產(chǎn)丁醇的方法，是用權利要求1至7中任一所述的菌劑發(fā)酵玉米淀粉生產(chǎn)丁醇。9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其特征在于所述玉米淀粉為玉米淀粉水溶液，所述玉米淀粉水溶液中所述玉米淀粉的質量百分含量為8-10%。10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵條件為35-37t:，靜置發(fā)酵。全文摘要本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)丁醇的菌劑及其應用。所述生產(chǎn)丁醇的菌劑，它的活性成份包括丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMP1)和丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)；所述丙酮丁醇梭菌(Clostridiumacetobutylicum)SMB-1(pIMP1)是將質粒pIMP1導入丙酮丁醇梭菌中構建的重組菌，所述丙酮丁醇梭菌(C.acetobutylicum)SMB-1(pITG-B)是將含有谷胱甘肽編碼基因的DNA分子導入丙酮丁醇梭菌中構建的重組菌。用本發(fā)明的菌劑發(fā)酵玉米淀粉生產(chǎn)丁醇，其產(chǎn)率高，且發(fā)酵液澄清，易于丁醇回收純化。文檔編號C12R1/145GK101760440SQ20081024101公開日2010年6月30日申請日期2008年12月24日優(yōu)先權日2008年12月24日發(fā)明者張延平,朱林江,李寅,王少華申請人:中國科學院微生物研究所