專利名稱：一種薇菜組織培養(yǎng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蕨類植物組織培養(yǎng)的方法，特別是一種薇菜組織培養(yǎng)的方法。
背景技術(shù)：
薇菜是一種生長在山林中的純天然、無污染綠色保健食品，因富含蛋白質(zhì)、鐵、鈣、硒等17種人體所需的營養(yǎng)成分，加上具有獨(dú)特的清脆爽口的特點(diǎn)，深受日本、韓國及東南亞等國客戶的喜愛，被譽(yù)為“林海山珍”。薇菜因常規(guī)分株繁殖較慢，故目前均采用組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行繁殖。韓敬、趙莉在其文章《蕨類植物繁殖研究進(jìn)展》(安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2005Vol.33No.7P.1261-1263)中指出各種蕨類植物的組織培養(yǎng)主要是孢子無菌萌發(fā)，即將孢子表面消毒后均勻涂布于培養(yǎng)基上，于恒溫恒濕條件下進(jìn)行無菌培養(yǎng)，待其萌發(fā)后經(jīng)常規(guī)組培擴(kuò)繁得到大量生根苗，然后煉苗移栽。目前國內(nèi)薇菜組培均采用孢子無菌萌發(fā)，也有直接在溫室基質(zhì)中播種孢子萌發(fā)成苗的，但通過孢子萌發(fā)組培受季切的限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種薇菜組織培養(yǎng)的方法，它克服了現(xiàn)有技術(shù)中通過孢子萌發(fā)組培受季節(jié)限制的缺點(diǎn)，通過薇菜的莖尖做為外植體進(jìn)行組培，實(shí)現(xiàn)了薇菜組培途徑的多樣化。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種薇菜組織培養(yǎng)的方法，它包括下列步驟a、外植體消毒將薇菜展開葉片及根全部去掉，僅留幼嫩莖尖，用清水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上用0.1％升汞消毒液消毒5分鐘-20分鐘，然后用無菌水沖洗干凈備用；b、誘導(dǎo)原球莖培養(yǎng)將a步驟消毒好的薇菜莖尖插于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于20℃-27℃溫度下避光培養(yǎng)3天-7天后光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度由弱漸強(qiáng)，培養(yǎng)20天-40天即可在嫩葉上形成大量原球莖，以一升培養(yǎng)基用量，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS 250毫升-4000毫升激動(dòng)素 0.5毫克-4毫克3-吲哚丁酸 0.5毫克-4毫克磷酸二氫鈉 100毫克-2000毫克活性炭 1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克；以一升培養(yǎng)基用量，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方還可為
MS250毫升-4000毫升6-芐氨基嘌呤 0.5毫克-4毫克3-吲哚丁酸0.5毫克-4毫克磷酸二氫鈉100毫克-2000毫克活性炭1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克；c、擴(kuò)繁培養(yǎng)b步驟生成的原球莖繼續(xù)培養(yǎng)30天-40天便萌發(fā)形成原葉體，然后分切原葉體在繼代培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)25天-35天為一個(gè)周期，如此循環(huán)培養(yǎng)即可得大量組培苗，以一升培養(yǎng)基用量，繼代培養(yǎng)基配方為MS 250毫升-4000毫升激動(dòng)素 0.5毫克-4毫克3-吲哚丁酸 0.1毫克-4毫克磷酸二氫鈉 100毫克-2000毫克活性炭 1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克；以一升培養(yǎng)基用量，繼代培養(yǎng)基的配方還可為MS 250毫升-4000毫升6-芐氨基嘌呤 0.5毫克-4毫克3-吲哚丁酸 0.1毫克-4毫克磷酸二氫鈉 100毫克-2000毫克活性炭 1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克。
d、生根培養(yǎng)c步驟擴(kuò)繁培養(yǎng)所得的組培苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，30天后能形成孢子體，再繼續(xù)培養(yǎng)30天即可形成羽狀葉并長出數(shù)條根須，以一升培養(yǎng)基用量，生根培養(yǎng)基的配方為MS 250毫升-4000毫升激動(dòng)素 0.5毫克-4毫克磷酸二氫鈉 100毫克-2000毫克活性炭 1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克；
e、煉苗移栽將d步驟已生根的組培苗瓶放到大棚中擺放3天-7天，然后取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后栽入基質(zhì)中，控制環(huán)境溫度在20℃，濕度在90％，遮蔭并逐步增加光照，15天后即可按常規(guī)種苗進(jìn)行管理。
本發(fā)明是利用植物細(xì)胞的全能性采取適當(dāng)?shù)耐庵搀w，再配以合適的激素配比，即可于短期內(nèi)擴(kuò)繁出大量薇菜組培苗。與孢子無菌萌發(fā)組培相比，本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于提供了一條全新的薇菜組培途徑，同時(shí)對其它蕨類植物的組培具有借鑒參考價(jià)值；突破了孢子組培的季節(jié)性限制，可一年四季采集外植體進(jìn)行組培。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一薇菜組織培養(yǎng)的步驟如下1、將薇菜展開葉片及根全部去掉，僅留幼嫩莖尖，并用自來水沖洗干凈。然后在超凈工作臺(tái)上用0.1％升汞消毒5-20分鐘，最后用無菌水沖洗干凈備用。
2、將消毒好的薇菜莖尖插于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于20℃-27℃環(huán)境中避光培養(yǎng)3-7天后光照培養(yǎng)，強(qiáng)度由弱漸強(qiáng)。約20-40天即可在嫩葉上形成大量原球莖。
以一升培養(yǎng)基用量，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS 250毫升激動(dòng)素 0.5毫克磷酸二氫鈉 100毫克活性炭 1000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克3、原球莖繼續(xù)培養(yǎng)30天便萌發(fā)形成原葉體，然后分切原葉體在繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，約25-35天一個(gè)周期。如此不斷循環(huán)便可得到大量組培苗。
以一升培養(yǎng)基用量，繼代培養(yǎng)基配方為MS250毫升激動(dòng)素0.5毫克3-吲哚丁酸0.1毫克磷酸二氫鈉100毫克活性炭1000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克4、獲得所需數(shù)量的組培苗后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)30天后就能形成孢子體，再經(jīng)培養(yǎng)30天即可形成羽狀葉并長出數(shù)條根須。以一升培養(yǎng)基用量，生根培養(yǎng)基配方為MS250毫升激動(dòng)素0.5毫克磷酸二氫鈉100毫克活性炭1000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克5、將已生根的組培苗瓶搬到大棚中自然擺放3-7天，使組培苗逐漸適應(yīng)環(huán)境的溫差變化。然后自瓶中取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后栽入基質(zhì)中。移栽后的一周內(nèi)應(yīng)控制環(huán)境溫度在20℃左右，濕度在90％左右，適當(dāng)遮蔭并逐步增強(qiáng)光照。15天后即可按常規(guī)種苗進(jìn)行管理。
實(shí)施例二薇菜組織培養(yǎng)的步驟及培養(yǎng)條件同實(shí)施例一，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS2500毫升激動(dòng)素2毫克3-吲哚丁酸2毫克磷酸二氫鈉1000毫克活性炭2000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克繼代培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS2500毫升激動(dòng)素2毫克3-吲哚丁酸2毫克磷酸二氫鈉1000毫克活性炭2000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克生根培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS2500毫升激動(dòng)素2毫克磷酸二氫鈉1000毫克活性炭2000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克實(shí)施例三薇菜組織培養(yǎng)的步驟及培養(yǎng)條件同實(shí)施例一，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS4000毫升激動(dòng)素4毫克3-吲哚丁酸4毫克磷酸二氫鈉2000毫克活性炭3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克繼代培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS4000毫升激動(dòng)素4毫克3-吲哚丁酸4毫克磷酸二氫鈉2000毫克活性炭3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克生根培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS4000毫升激動(dòng)素4毫克磷酸二氫鈉2000毫克活性炭3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克實(shí)施例四薇菜組織培養(yǎng)的步驟及培養(yǎng)條件同實(shí)施例一，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS250毫升6-芐氨基嘌呤 0.5毫克3-吲哚丁酸0.5毫克磷酸二氫鈉100毫克活性炭1000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克繼代培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS250毫升
6-芐氨基嘌呤0.5毫克3-吲哚丁酸 0.1毫克磷酸二氫鈉 100毫克活性炭 1000毫克蔗糖30000毫克瓊脂9000毫克生根培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS 250毫升激動(dòng)素 0.5毫克磷酸二氫鈉 100毫克活性炭 1000毫克蔗糖30000毫克瓊脂9000毫克實(shí)施例五薇菜組織培養(yǎng)的步驟及培養(yǎng)條件同實(shí)施例一，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS 2000毫升6-芐氨基嘌呤2毫克3-吲哚丁酸 2毫克磷酸二氫鈉 1000毫克活性炭 2000毫克蔗糖30000毫克瓊脂9000毫克繼代培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS 2000毫升6-芐氨基嘌呤2毫克3-吲哚丁酸 1.5毫克磷酸二氫鈉 1000毫克活性炭 2000毫克蔗糖30000毫克瓊脂9000毫克生根培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS 2000毫升激動(dòng)素 2毫克磷酸二氫鈉 1000毫克活性炭2000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克實(shí)施例六薇菜組織培養(yǎng)的步驟及培養(yǎng)條件同實(shí)施例一，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS4000毫升6-芐氨基嘌呤 4毫克3-吲哚丁酸4毫克磷酸二氫鈉2000毫克活性炭3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克繼代培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS4000毫升6-芐氨基嘌呤 4毫克3-吲哚丁酸4毫克磷酸二氫鈉2000毫克活性炭3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克生根培養(yǎng)基配方為(以一升培養(yǎng)基用量)MS4000毫升激動(dòng)素4毫克磷酸二氫鈉2000毫克活性炭3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克
權(quán)利要求
1.一種薇菜組織培養(yǎng)的方法，其特征在于它包括下列步驟a、外植體消毒將薇菜展開葉片及根全部去掉，僅留幼嫩莖尖，用清水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上用0.1％升汞消毒液消毒5分鐘-20分鐘，然后用無菌水沖洗干凈備用；b、誘導(dǎo)原球莖培養(yǎng)將a步驟消毒好的薇菜莖尖插于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于20℃-27℃溫度下避光培養(yǎng)3天-7天后光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度由弱漸強(qiáng)，培養(yǎng)20天-40天即可在嫩葉上形成大量原球莖，以一升培養(yǎng)基用量，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為MS250毫升-4000毫升激動(dòng)素0.5毫克-4毫克3-吲哚丁酸0.5毫克-4毫克磷酸二氫鈉100毫克-2000毫克活性炭1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克；c、擴(kuò)繁培養(yǎng)b步驟生成的原球莖繼續(xù)培養(yǎng)30天-40天便萌發(fā)形成原葉體，然后分切原葉體在繼代培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)25天-35天為一個(gè)周期，如此循環(huán)培養(yǎng)即可得大量組培苗，以一升培養(yǎng)基用量，繼代培養(yǎng)基配方為MS 250毫升-4000毫升激動(dòng)素 0.5毫克-4毫克3-吲哚丁酸 0.1毫克-4毫克磷酸二氫鈉 100毫克-2000毫克活性炭 1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克；d、生根培養(yǎng)c步驟擴(kuò)繁培養(yǎng)所得的組培苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，30天后能形成孢子體，再繼續(xù)培養(yǎng)30天即可形成羽狀葉并長出數(shù)條根須，以一升培養(yǎng)基用量，生根培養(yǎng)基的配方為MS 250毫升-4000毫升激動(dòng)素 0.5毫克-4毫克磷酸二氫鈉 100毫克-2000毫克活性炭 1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克；e、煉苗移栽將d步驟已生根的組培苗瓶放到大棚中擺放3天-7天，然后取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基后栽入基質(zhì)中，控制環(huán)境溫度在20℃，濕度在90％，遮蔭并逐步增加光照，15天后即可按常規(guī)種苗進(jìn)行管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種薇菜組織培養(yǎng)的方法，其特征是以一升培養(yǎng)基用量，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方還可為MS250毫升-4000毫升6-芐氨基嘌呤 0.5毫克-4毫克3-吲哚丁酸0.5毫克-4毫克磷酸二氫鈉100毫克-2000毫克活性炭1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種薇菜組織培養(yǎng)的方法，其特征是以一升培養(yǎng)基用量，繼代培養(yǎng)基的配方還可為MS250毫升-4000毫升6-芐氨基嘌呤 0.5毫克-4毫克3-吲哚丁酸0.1毫克-4毫克磷酸二氫鈉100毫克-2000毫克活性炭1000毫克-3000毫克蔗糖 30000毫克瓊脂 9000毫克。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種薇菜組織培養(yǎng)的方法，它通過薇菜的莖尖做為外植體，經(jīng)誘導(dǎo)原球莖培養(yǎng)、擴(kuò)繁培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽的步驟，對薇菜的莖尖進(jìn)行組培，該方法簡單實(shí)用，克服了薇菜孢子萌發(fā)組培受季節(jié)限制的缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了薇菜組培途徑的多樣化，能在短期內(nèi)生產(chǎn)出大量薇菜組培苗，滿足工廠化生產(chǎn)的需求。
文檔編號(hào)C12N5/04GK1871898SQ20061001952
公開日2006年12月6日 申請日期2006年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月30日
發(fā)明者徐年聲, 艾德甫 申請人:宜昌市高農(nóng)科技有限公司