專利名稱：藥物誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種皺紋盤鮑新品種的培育方法，尤其是一種藥物誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法。
背景技術(shù)：
鮑是海洋貝類的一種，曾被譽(yù)為海產(chǎn)八珍之一。產(chǎn)于我國遼寧、山東等地的皺紋盤鮑(Haliotis discushannai)、福建、廣東、臺灣、海南等地的九孔鮑魚(H.diversicolor supertexta)最負(fù)盛名，其皺紋盤鮑被稱為“軟黃金”，在國際市場上每噸售價達(dá)4～6萬美元。
我國從70年代開始了皺紋盤鮑的人工繁殖或增養(yǎng)殖研究，80年代在遼寧、山東等地開展人工增養(yǎng)殖工作，取得了可喜成就。全國鮑年產(chǎn)量已達(dá)3000噸以上，產(chǎn)值約10億元。但是90年代初開始，鮑的養(yǎng)殖業(yè)出現(xiàn)滑坡現(xiàn)象，主要是由于多年人工自繁導(dǎo)致苗種質(zhì)量下降、人工育苗期間稚鮑剝離后大量死亡、單位面積和總體出苗率降低，從而嚴(yán)重影響了養(yǎng)成用苗，同時養(yǎng)殖成鮑也出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。
染色體倍性操作是水生生物細(xì)胞工程育種的一個行之有效的途徑，自1956年首次誘導(dǎo)三棘刺魚獲得三倍體以來，已在20余種魚類、30余種貝類和3種甲殼類上開展了三倍體誘導(dǎo)的研究。到目前為止，進(jìn)行染色體倍性操作的方法主要有如下幾種一種是用冷、熱休克和靜水壓法等物理方法處理受精卵；另一種是用化學(xué)藥劑處理發(fā)育到不同時期的胚胎。由于鮑養(yǎng)殖周期較長，三倍體育種技術(shù)是鮑人工育苗技術(shù)的首選技術(shù)之一。從1986年開始，我國也開始研究鮑的三倍體，主要是采用細(xì)胞松弛素B(CB)和溫度休克法誘導(dǎo)鮑的多倍體，但效果不佳，主要問題是倍化率不穩(wěn)定和胚胎畸形率高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的倍化率不穩(wěn)定和胚胎畸形率高等技術(shù)問題，提供一種以6-二甲基氨基嘌呤溶液處理皺紋盤鮑抑制第二極體的藥物誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種藥物誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法，包括如下步驟a.制取6-二甲基氨基嘌呤溶液；b.用常規(guī)方法獲得鮑魚的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；c.將受精卵置于海水中，用6-二甲基氨基嘌呤溶液抑制皺紋盤鮑第二極體，6-二甲基氨基嘌呤溶液的最終濃度為75～150μmol/l，起始時間為第一極體出現(xiàn)30～50％時，持續(xù)時間為15～20min。
所述的制取6-二甲基氨基嘌呤溶液的溶質(zhì)為蒸餾水或二甲基亞砜。
所述的所述水溫最好為24～25℃，6-二甲基氨基嘌呤溶液的最終濃度最好為150μmol/l，持續(xù)時間最好為20min。
本發(fā)明是用6-二甲基氨基嘌呤溶液抑制皺紋盤鮑第二極體，合理的藥物濃度、起始時間以及持續(xù)時間，使得鮑三倍體的倍化率穩(wěn)定和胚胎畸形率低，即使在倍化率最高的條件下，其相對成活率也達(dá)到90.5％。最好是將水溫控制在24～25℃，6-二甲基氨基嘌呤溶液的最終濃度為150μmol/l，持續(xù)時間為20min。由于三倍體鮑魚的不育和低育性，使鮑魚體內(nèi)能量分配發(fā)生變化，在體細(xì)胞生長方面的能量相對增加，可加快養(yǎng)殖鮑魚的生長速度、改善養(yǎng)殖性狀、增強(qiáng)其抗逆性，以提高鮑魚的產(chǎn)量，具有較高的經(jīng)濟(jì)效益及社會效益。
具體實施例方式實施例1a.將美國Sigma公司所產(chǎn)的6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)溶于蒸餾水或二甲基亞砜中，并儲存于-20～4℃的溫度中備用；b.采捕殼長8～12cm、無外傷、軟體部明顯突出于殼口的種鮑，種鮑促熟有效積溫達(dá)1200℃以上，用常規(guī)方法獲得鮑魚的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；c.將受精卵置于溫度為24～25℃的海水中，測試第一極體出現(xiàn)30～50％時，加入6-二甲基氨基嘌呤溶液，使海水中的6-二甲基氨基嘌呤最終濃度為75～150μmol/l，起始時間為第一極體出現(xiàn)30～50％時，持續(xù)時間為15min，抑制第二極體后取出種鮑；c.可用紫外線照射海水法對種鮑催產(chǎn)，幼體孵化。
實施例2a.將美國Sigma公司所產(chǎn)的6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)溶于蒸餾水或二甲基亞砜中，并儲存于-20～4℃的溫度中備用；
b.采捕殼長8～12cm、無外傷、軟體部明顯突出于殼口的種鮑，種鮑促熟有效積溫達(dá)1200℃以上，用常規(guī)方法獲得鮑魚的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；c.將受精卵置于溫度為24～25℃的海水中，測試第一極體出現(xiàn)30～50％時，加入6-二甲基氨基嘌呤溶液，使海水中的6-二甲基氨基嘌呤最終濃度為75～150μmol/l，起始時間為第一極體出現(xiàn)30～50％時，持續(xù)時間為20min，抑制第二極體后取出種鮑；c.可用紫外線照射海水法對種鮑催產(chǎn)，幼體孵化。
實施例1的結(jié)果如表1所示

實施例2的結(jié)果如表2所示

權(quán)利要求
1.一種藥物誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法，包括如下步驟a.制取6-二甲基氨基嘌呤溶液；b.用常規(guī)方法獲得鮑魚的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；c.將受精卵置于海水中，用6-二甲基氨基嘌呤溶液抑制皺紋盤鮑第二極體，6-二甲基氨基嘌呤的最終濃度為75～150μmol/l，起始時間為第一極體出現(xiàn)30～50％時，持續(xù)時間為15～20min。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法，其特征在于所述的制取6-二甲基氨基嘌呤溶液的溶質(zhì)為蒸餾水或二甲基亞砜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法，其特征在于所述的水溫為24～25℃，6-二甲基氨基嘌呤的最終濃度為150μmol/l，所述的持續(xù)時間為20min。
全文摘要
本發(fā)明公開一種藥物誘導(dǎo)皺紋盤鮑三倍體的方法，包括如下步驟制取6－二甲基氨基嘌呤溶液；用常規(guī)方法獲得鮑魚的精子和卵子，用人工授精方法得到受精卵；將受精卵將種鮑置于海水中，用6－二甲基氨基嘌呤溶液抑制皺紋盤鮑第二極體，6－二甲基氨基嘌呤的最終濃度為75～150μmol/l，起始時間為第一極體出現(xiàn)30～50％時，持續(xù)時間為15～20min。合理的藥物濃度、起始時間以及持續(xù)時間，使得鮑三倍體的倍化率穩(wěn)定和胚胎畸形率低，即使在倍化率最高的條件下，其相對成活率也達(dá)到90.5％。由于三倍體鮑魚的不育和低育性，使鮑魚體內(nèi)能量分配發(fā)生變化，在體細(xì)胞生長方面的能量相對增加，可加快養(yǎng)殖鮑魚的生長速度、改善養(yǎng)殖性狀、增強(qiáng)其抗逆性，以提高鮑魚的產(chǎn)量。
文檔編號C12N5/06GK1733908SQ20051004683
公開日2006年2月15日 申請日期2005年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月5日
發(fā)明者王子臣 申請人:大連水產(chǎn)學(xué)院