一種篩選灘涂貝類幼苗微藻餌料的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖巧料培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種篩選灘涂貝類幼苗微藻巧 料的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前我國"始、蝴、賠"等灘涂貝類產(chǎn)量占海水貝類養(yǎng)殖總產(chǎn)量近40%。而在灘涂 貝類育苗中，微藻巧料的品種直接決定著育苗的成敗。長期實踐發(fā)現(xiàn)，育苗過程中投喂不同 微藻時，灘涂貝類幼體生長速度差異很大，說明微藻種類對灘涂貝類幼苗的生長發(fā)育有著 直接影響。在實際灘涂貝類幼苗繁育過程中，我們需要選擇對灘涂貝類幼體具有明顯巧料 效果的微藻巧料進行擴繁投喂。
[0003] 某種巧料微藻對灘涂貝類幼體巧料效果如何，一般都通過向灘涂貝類投喂不同種 類的微藻，通過觀測對應(yīng)貝類幼苗的生長速度和成活率來判斷對應(yīng)微藻的巧料效果【朱雨 瑞等，2010. 5種微藻對4種灘涂稚貝生長的影響，海洋學(xué)研究，28(3) :60-66】。但該手段 需要比較長的培養(yǎng)周期，另外，水質(zhì)條件、環(huán)境條件均會對幼苗的生長速度和存活率產(chǎn)生影 響。所W往往需要通過多次的反復(fù)試驗才能最后確定不同微藻對貝類的巧料效果。因此， 就需要提供一種有效的檢測微藻作為貝類巧料的方法。而且，目前普遍采用投喂兩種或多 種微藻的混合投喂方式，而運種方式需要對不同的微藻進行培養(yǎng)，導(dǎo)致巧料的成本上升。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種篩選灘涂貝類幼苗微藻巧料的方法，即通過定量檢測灘涂貝類幼 體攝食混合微藻后貝類體內(nèi)脂肪酸和醬醇的組成，來準確篩選灘涂貝類幼苗優(yōu)質(zhì)微藻巧料 的方法，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0005] 本發(fā)明的方法，包括如下的步驟：
[0006] 1)標準組PCA得分圖的獲得
[0007] 用混合微藻投喂貝類幼體作為標準組，投喂一定周期后測定貝類幼體的脂肪酸和 醬醇組成，然后對脂肪酸和醬醇組成進行主成分分析（PCA)，獲得PCA得分圖；
[0008] 2)在同樣的養(yǎng)殖條件下，對貝類幼體分別投喂不同種類的單種微藻進行培養(yǎng)作為 實驗組，在投喂相同周期后測定不同實驗組貝類幼體的脂肪酸和醬醇組成，然后對脂肪酸 和醬醇組成進行主成分分析，根據(jù)各實驗組在PCA得分圖上的分布篩選出與標準組接近的 實驗組的微藻作為該貝類的巧料。
[0009] 所述的貝類為灘涂養(yǎng)殖的貝類，例如泥蝴、毛蝴、青始、鎌賠、彩虹明樓始、文始等。
[0010] 本發(fā)明所用的微藻均于位于指數(shù)生長期，濃度達到80~120cell?y11時進行投 喂；
[0011] 本發(fā)明的貝類投喂微藻巧料前，需要在經(jīng)過沙濾基本不含任何微藻的潔凈天然海 水中不投巧饑餓8-lOhW盡量排空腸胃內(nèi)殘巧。
[0012] 本發(fā)明使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用來進行脂肪酸和醬醇的定量分析。
[0013] 采用本發(fā)明的方法，確定泥蝴的巧料微藻為角毛藻或金藻。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：培養(yǎng)周期短，避免了水質(zhì)環(huán)境條件對培養(yǎng)效 果可能產(chǎn)生的影響，基于貝類幼體脂肪酸醬醇組成篩選出的微藻，其巧料效果更切合實際 生長過程中貝類幼體的選擇性攝食和同化，從而可作為貝類幼體優(yōu)質(zhì)巧料的選擇。
【附圖說明】
[0015] 圖1:基于泥蝴幼苗脂肪酸醬醇主成分分析的第一和第=主成分得分圖（A)及第 二和第=主成分得分圖度）
[0016]圖上樣品分別為單種投喂P.Viridis的泥蝴幼苗（IG-PV)、單種投喂 C.calcitrans(TG-CC)、Lga化ana(TG-IG)和N.O州Iata(NO)的泥蝴幼苗；兩兩混合投喂 I.ga化ana和N.oculata(TG-IG-NO)、I.ga化ana和P.Viridis(TG-IG-NO)、C.calcitrans 和Lga化ana(TG-CC-IG)、C.calcihans和P.Viridis(TG-CC-PV)、C.calcitrans和 N.oculata燈G-CC-N0)及所有4種微藻全混合投喂的泥蝴幼苗燈G-MIX)。
【具體實施方式】
[0017] 本發(fā)明通過對投喂混合微藻巧料和單種微藻巧料的貝類幼體測定脂肪酸醬醇組 成，并進行PCA分析，在PCA得分圖上，如果投喂了某種微藻后的貝類幼體樣品跟混合投喂 微藻巧料的貝類幼體樣品比較接近，就可W說明該微藻被該貝類優(yōu)先攝食和同化了，實際 貝類幼體培育過程中就可W選擇該藻作為該貝類幼體的優(yōu)質(zhì)巧料。本發(fā)明應(yīng)用該技術(shù)，大 大縮短了傳統(tǒng)技術(shù)中漫長的培養(yǎng)過程，并避免了水質(zhì)環(huán)境條件對培養(yǎng)效果可能產(chǎn)生的影 響，篩選出的微藻巧料效果更切合實際過程中貝類幼體的攝食同化選擇。
[0018] 本發(fā)明所使用的主成分分析方法（principalcomponentsanalysis,PCA)是一 種多變量數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法，在二維空間上顯示物質(zhì)聚類分布的PCA得分圖，可W直觀樣品間 物質(zhì)組成的相似或非相似性【VlietEVetal.,2008.Anovelinvitromet油olomics approachforneurotoxicitytesting,proofofprincipleformethylmercury chlorideandcaffeine.NeuroToxicology, 29(I):I- 12]〇
[0019] 所述的纔合微藻是將已報道的該貝類的各種微藻纔合后完成的。
[0020] W下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。
[0021] 實施例1
[0022] 2014年9月在福建省寶智水產(chǎn)科技有限公司，選擇灘涂貝類常用4種海洋微藻， 分別是：娃藻口的角毛藻煙iaetoceros calcitrans)、金藻口的球等鞭金藻（Isoclxrysis ga化ana)和綠色己夫藻（Pavlova viridis)、Eustigmato地yceae藻口的微綠球藻 (Nannochloropsis oculata)進行培養(yǎng)，微藻的培養(yǎng)海水（鹽度為20)經(jīng)0. 45 Jim醋酸纖 維濾膜過濾后，煮沸冷卻。加入NMBs營養(yǎng)液（IOOmg 'L 1謂〇3, IOmg 'L 1皿2?〇4, 0. 25mg 'L IMnS 〇4 ?&0, 2. 50mg .L中eS〇4.7&0, IOmg .L lEDTA-Naz, 6 y g .L IyBi, 0. 05 y g .L1VBi2)，同時加入娃 酸鋼（20mg. Li)作為角毛藻的娃源。微藻藻種在2500mL的錐形瓶中[自然光，培養(yǎng)溫度為 (20±^°C]培養(yǎng)1周后，把它們轉(zhuǎn)入50L的塑料白桶中，在