一種利用龍腦樟段木培育牛樟芝子實(shí)體的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種牛樟芝子實(shí)體的培育方法，尤其涉及一種以龍腦樟段木為基質(zhì)培育牛樟芝子實(shí)體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]牛樟芝(Antrodia camphorata)又名牛樟燕，為中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)特有真菌，是迄今牛樟樹上發(fā)現(xiàn)的唯一木腐菌。其宿主專一性較強(qiáng)，僅生長(zhǎng)于牛樟樹上，而牛樟樹為中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)特有的保育類樹種，數(shù)量稀少。牛樟芝含有許多的生理活性成分，如多糖體、三萜類化合物、超氧歧化酶、腺苷、蛋白質(zhì)(含免疫蛋白)、維生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、甾醇類、纖維素、血壓穩(wěn)定物質(zhì)等。牛樟芝的有效成分中以三萜類化合物為最特別，高達(dá)200種以上，是其他菌類無(wú)法比擬的，使牛樟芝具有顯著的抗癌、保肝等功效。牛樟芝子實(shí)體氣芳香味辛苦、平，有祛風(fēng)行氣、化淤活血、溫中消結(jié)、解毒消腫、鎮(zhèn)靜止痛、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、提升機(jī)體免疫力之效；對(duì)于治療胃腸疼痛、腹瀉嘔吐、食物中毒、毒蕈中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有獨(dú)特功能。
[0003]目前關(guān)于牛樟芝的人工培育方法，主要有液體深層發(fā)酵法、太空包法、皿式培養(yǎng)法及牛樟木段木培育法。以上方法各有其缺點(diǎn)，液體深層發(fā)酵法雖然周期短，但是得到的是菌絲體的形式，牛樟芝特有的三萜類化合物不能合成；太空包法及皿式培養(yǎng)法僅有含量極低的三萜類化合物；牛樟芝段木培育法能得到與野生牛樟芝完全一致的子實(shí)體，但是需要以牛樟木為基質(zhì)，存在資源稀少、成本較高的缺點(diǎn)。
[0004]龍腦樟樹(Cirmamonun camphora)原產(chǎn)于印尼蘇門答臘島，1988年湖南首次發(fā)現(xiàn)有分布，現(xiàn)在已發(fā)展龍腦樟林木超過4萬(wàn)畝；隨后江西也發(fā)展近萬(wàn)畝。
[0005]迄今為止，還未有以龍腦樟段木為基質(zhì)進(jìn)行牛樟芝栽培的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種利用龍腦樟段木培育牛樟芝子實(shí)體的方法，本發(fā)明擴(kuò)大了牛樟芝宿主范圍，保護(hù)了珍稀的牛樟樹資源，子實(shí)體與野生牛樟芝功效成分一致，三蔽總量不少于80mg/100g，總多糖不少于50mg/100g，促進(jìn)了牛樟芝產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
[0007]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:一種利用龍腦樟段木培育牛樟芝子實(shí)體的方法，該方法包括以下步驟:
[0008](I)將牛樟芝菌種接種到斜面培養(yǎng)基中，于20_30°C培養(yǎng)10-30d，制得斜面菌種；所述斜面培養(yǎng)基為:龍腦樟提取液10-20mL/L，蔗糖10_30g/L，MgSO4.7H20 0.5_2g/L，K2HPO4.3H20 l_5g/L，維生素Bj-lOmg/L，瓊脂15_20g/L，用馬鈴薯提取液補(bǔ)足體積至1L，pH為6.0-7.0 ;其中，所述龍腦樟提取液為:龍腦樟木料粉碎，過40目篩，得龍腦樟木料粉，按照龍腦樟木料粉和水的質(zhì)量比1:200加水，常壓煮沸2小時(shí)，過濾得龍腦樟提取液；所述馬鈴薯提取液為:馬鈴薯100-300g去皮切塊，得馬鈴薯塊，按照馬鈴薯塊和水的質(zhì)量比1-3:10加水，常壓煮沸30min，過濾得馬鈴薯提取液。
[0009](2)用無(wú)菌水沖洗步驟I制得的斜面菌種的孢子，制成孢子懸液，并用無(wú)菌水將孢子懸液的OD6。。調(diào)整為1.5;
[0010](3)將步驟2制成的孢子懸液按5% -10% (v/v)的比例接種到液體菌種培養(yǎng)基，于25-35 °C、100-200r/min條件下，避光培養(yǎng)5_25d，制得液體菌種；所述液體菌種培養(yǎng)基為:龍腦樟提取液 10-20mL/L，蔗糖 10_30g/L，MgSO4.7H200.5_2g/L，K2HPO4.3H20 l_5g/L，維生素Bj-lOmg/L，用馬鈴薯提取液補(bǔ)足體積至1L，pH為6.0-7.0 ;
[0011](4)將龍腦樟木料分解成5X 10X20cm的段木，用水浸泡12_48h，然后121°C滅菌20-60min。冷卻后，將步驟3制得的液體菌種接種到龍腦樟段木上。
[0012](5)于25_35°C、濕度70%-90%條件下，避光培養(yǎng)1-12個(gè)月。
[0013](6)鏟掉龍腦樟木段木表面的牛樟芝菌絲體形成的菌皮，于20-40°C、濕度70% -90%，避光培養(yǎng)12-36個(gè)月，即可得到牛樟芝子實(shí)體。
[0014]進(jìn)一步地，采收后的龍腦樟段木，噴水濕潤(rùn)后繼續(xù)培養(yǎng)，重復(fù)步驟(5)和(6)，可再收獲1-2次牛樟芝子實(shí)體。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明具有產(chǎn)量高、周期短、功效成分與野生牛樟芝一致、原料來源豐富穩(wěn)定等特點(diǎn)，其三蔽總量不少于80mg/100g，總多糖不少于50mg/100g ;實(shí)現(xiàn)了牛樟芝宿主范圍的擴(kuò)大，既有利于對(duì)資源稀少的牛樟樹的保護(hù)，又促進(jìn)了牛樟芝產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，能帶來良好的生態(tài)效應(yīng)、社會(huì)效應(yīng)及經(jīng)濟(jì)效應(yīng)。
【附圖說明】
[0016]圖1為正在培養(yǎng)中的牛樟芝子實(shí)體的實(shí)物圖；
[0017]圖2為采收后的牛樟芝子實(shí)體的實(shí)物圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明所保護(hù)的范圍并不僅限于此:
[0019]實(shí)施例1:牛樟芝子實(shí)體培育
[0020]1.配制斜面培養(yǎng)基:龍腦樟提取液10mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4.7H20 0.5g/L，K2HPO4.3H20 lg/L，維生素Bjmg/L，瓊脂15g/L，用馬鈴薯提取液補(bǔ)足體積至1L，pH 6.0。龍腦樟提取液為:龍腦樟木料粉碎，過40目篩，得龍腦樟木料粉，按照龍腦樟木料粉和水的質(zhì)量比1:200加水，常壓煮沸2小時(shí)，過濾得龍腦樟提取液；馬鈴薯提取液為:馬鈴薯100-300g去皮切塊，得馬鈴薯塊，按照馬鈴薯塊和水的質(zhì)量比1-3:10加水，常壓煮沸30min，過濾得馬鈴薯提取液。
[0021]2.將牛樟芝菌種接種到斜面培養(yǎng)基，于20°C避光培養(yǎng)7-20d，制得斜面菌種。
[0022]3.用無(wú)菌水洗下斜面菌種上的孢子，用無(wú)菌水將孢子懸液的0D_調(diào)整為1.5，以5% (v/V)的接種量接入液體種子培養(yǎng)基，于28°C、200r/min條件下，避光培養(yǎng)3d。所述液體種子培養(yǎng)基配方:液體種子培養(yǎng)基:龍腦樟提取液10mL/L，蔗糖10g/L，MgSO4.7H20 0.5g/L，K2HPO4.3H20 lg/L，維生素Bjmg/L，用馬鈴薯提取液補(bǔ)足體積至1L，pH 6.0。
[0023]4.龍腦樟木料分解成大小為5 X 10 X 20cm的段木，用水浸泡8h，然后121°C高溫滅菌20min。冷卻后，將液體菌種接種到龍腦樟段木。
[0024]5.于20°C、濕度70%條件下，避光培養(yǎng)1-12個(gè)月。
[0025]6.1產(chǎn)掉龍腦樟木段木表面牛樟芝菌絲體形成的菌皮，于20°C、濕度70%，避光培養(yǎng)12-36個(gè)月，可得到牛樟芝子實(shí)體。
[0026]7.采收后的龍腦樟段木，噴水濕潤(rùn)后繼續(xù)培養(yǎng)，重復(fù)步驟5和6，可再收獲1-2次牛樟芝子實(shí)體。
[0027]