一種南美白對蝦半同胞家系構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及對蝦家的系選育方法，具體是一種南美白對蝦半同胞家系構(gòu)建方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]南美白產(chǎn)對蝦業(yè)是我國漁業(yè)經(jīng)濟(jì)的支柱性產(chǎn)業(yè)，每年我國南美白對蝦種苗需求量巨大。然而，我國南美白對蝦優(yōu)質(zhì)親蝦仍主要依靠進(jìn)口，這嚴(yán)重制約了我國對蝦產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。所以，加強(qiáng)南美白對蝦優(yōu)良品種選育，是實現(xiàn)我國南美白產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵。
[0003]近年來，美國夏威夷海洋研究所通過家系選育結(jié)合綜合指數(shù)選育法，培育出生長快品系和抗桃拉病南美白對蝦品系；法國海洋開發(fā)研究院通過家系選育法選育出藍(lán)對蝦抗傳染性皮下與造血組織壞死病毒品系；澳大利亞通過家系選育法提高了日本對蝦的生長速度?？梢?，采用大規(guī)模家系選育是對蝦遺傳改良的有效方法。在家系選育過程中，準(zhǔn)確估計選育性狀的遺傳參數(shù)，是提高育種值預(yù)測準(zhǔn)確性，加快育種進(jìn)程的重要保障。而大量構(gòu)建半同胞家系是遺傳力、遺傳相關(guān)等遺傳參數(shù)準(zhǔn)確估計的必要技術(shù)手段。
[0004]目前，已報道的南美白對蝦家系構(gòu)建方法有定向交尾技術(shù)和人工授精法。其中，定向交尾技術(shù)存在交配率低、交尾雄蝦難確定、精莢容易脫落等、特別是兩個半同胞的建立時間難于同步等問題；傳統(tǒng)的人工授精法，采用擠壓或刺激雄蝦腹部使精莢排除，然后將精莢貼在成熟雌蝦第三、第四步足的納精囊上，這種方法可能對雄蝦和雌蝦造成傷害，且存在精莢容易脫落、受精率低等問題(Arce S M, Moss S M, Argue B J.Artificialinseminat1n and spawning of Pacific white shrimp, Litopenaeus vanname1:1mplicat1ns for a selective breeding program[J].Spawning and Maturat1n ofAquatic Species.Proceedings of the Twenty-Eighth US-Japan Natural ResourcesAquaculture Panel.UJNR Technical Report, 2000，28: 5-8.)D 另外，兩種方法均難于同時建立多個半同胞。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種南美白對蝦半同胞家系構(gòu)建方法，該方法受精率高，無需人工精莢移殖，不會對雌蝦造成傷害，可同時建立多個半同胞家系，將精子通過人工釋放于產(chǎn)卵水體中，可避免自然交配導(dǎo)致的不交配或者交配后雌蝦精莢脫落的缺陷，在設(shè)定的近交系數(shù)的前提下可人為地設(shè)計交配方案，有效避免所建家系的近交衰退，是一種高效的南美白對蝦家系構(gòu)建方法。
[0006]本發(fā)明技術(shù)方案如下:一種南美白對蝦半同胞家系構(gòu)建方法，采用如下步驟:
(O成熟親好的挑選:家系建立當(dāng)天，進(jìn)行親4下選擇，選擇體形強(qiáng)壯，附肢健全，體色透明，胃腸飽滿，體表光滑，無附著物，規(guī)格在35-50克/尾，體長15-18cm，經(jīng)定期抽檢不攜帶特定病原，且事先在親蝦培育池中按照雌、雄蝦分別進(jìn)行強(qiáng)化培育、性腺已發(fā)育成熟的雌、雄蝦作為親蝦；其中，雌蝦的選擇:性腺成熟的雌蝦從表面觀察生殖腺顏色為紅色，每體節(jié)卵巢分葉清晰，性腺在第一、二腹節(jié)的突起大，卵粒飽滿，根據(jù)性腺的發(fā)育情況判斷當(dāng)天可以產(chǎn)卵的雌蝦，選出后分別單獨暫養(yǎng)于體積為I立方米的小水槽中；雄蝦的選擇:觀察雄蝦第五步足基部的精莢囊飽滿，精莢呈乳白色，選出后單獨暫養(yǎng)于體積為I立方米的網(wǎng)箱或小水槽中；所述雌、雄蝦暫養(yǎng)的養(yǎng)殖水體水環(huán)境與親蝦培育池相同，親蝦培育池中，雌、雄蝦池水溫分別為30±0.5°C、28±0.5°C，鹽度均為31 ±1、溶氧均控制在5mg.L S
(2)親蝦個體的標(biāo)記與交配方案的設(shè)定:雌雄親蝦用眼柄套環(huán)進(jìn)行個體標(biāo)記，并確定定向交配方案，一般是按一尾雄蝦與二至三尾雌蝦進(jìn)行定向交配；
(3)精莢的獲得:根據(jù)步驟(2)設(shè)定的交配方案，挑選一尾成熟的雄蝦，記錄親蝦套環(huán)編號，用大拇指和食指在雄蝦第五部步足基部從蝦體側(cè)向腹部進(jìn)行按壓，精莢突出即用鑷子將精莢取出，按壓過程注意操作力度以免雄蝦受傷，取完精莢的雄蝦，于1ppm的聚維酮碘溶液中消毒Imin后，放入原親蝦培育池中備用；
(4)精子的活化:將步驟(3)取得的精莢放入200目篩絹網(wǎng)中，于盛有滅菌的無鈣生理鹽水燒杯中充分搓洗讓精子釋放，獲得精子釋放液；將精子釋放液視半同胞家系的構(gòu)建個數(shù)，平均分成2~3份，備用；
(5)雌蝦產(chǎn)卵及卵子的收集:將在暫養(yǎng)池中自然產(chǎn)卵后的雌蝦移入親蝦培育池中備用，所產(chǎn)卵子分別用網(wǎng)目為100目的篩絹網(wǎng)收集后分別移入裝有1L過濾海水的受精桶中；
(6)人工授精:將精子釋放液分別潑入裝有定向交配雌蝦所產(chǎn)卵子的受精桶中，并用消毒過的玻璃棒進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，使精卵充分混合，直接結(jié)合授精；
(7)受精卵的孵化:精卵充分混合后10分鐘，用網(wǎng)目為100目的篩絹網(wǎng)對各個受精桶中的受精卵進(jìn)行收集，分別移入體積為I立方米的小水槽中單獨孵化，孵化密度為20萬粒/立方水體以下，孵化水溫29±0.5°C，微充氣或每隔2h攪拌水體一次，使卵子均勻分布于水孵化水體中；
(8)無節(jié)幼體的收集:受精13小時后，用200目篩絹網(wǎng)收集無節(jié)幼體，并計算無節(jié)幼體的量，進(jìn)行半同胞家系的標(biāo)準(zhǔn)化育苗培養(yǎng)。
[0007]本發(fā)明技術(shù)方案中，所述用于活化精子的無鈣生理鹽水用量為:每個精莢所用無鈣生理鹽水不超過500mL。
[0008]步驟(6)人工授精時，受精桶中精子的濃度為??每I水體含精塊質(zhì)量在Ig以上。
[0009]所述卵子產(chǎn)出至卵子進(jìn)入精子釋放液中的時間控制在I小時之內(nèi)。
[0010]對蝦成熟情況的鑒定方法如下:根據(jù)雌蝦卵巢的形態(tài)、大小、色澤等特征，將其劃分為形成期、增殖期、小生長期、大生長期、成熟期和恢復(fù)期共6期；雌蝦在形成期和增殖期幾乎看不出卵巢的形態(tài)和色澤，小生長后期卵巢明顯增大，外觀清晰，到成熟期可觀察到雌蝦卵巢幾乎占滿整個頭胸部、并向背部延伸至尾節(jié)，呈橘紅色；雄蝦的性成熟主要通過觀察其精莢和是否有追尾現(xiàn)象判別，精莢的發(fā)育情況可從外形上分為四個階段:未發(fā)育階段，特征為少量不透明乳白色粘液，沒有精子和精子團(tuán)，透過精莢囊可看到一點白色的區(qū)域；早發(fā)育階段，精莢囊中可見白線狀，內(nèi)有大量粘液、薄而硬的片狀物質(zhì)；晚期發(fā)育階段，精莢呈白色、柔軟；成熟階段，精莢飽滿凸出，變硬呈乳白色，用手輕輕擠壓時，精莢可隨用力方向上下移動，雄蝦在池中有明顯的追尾現(xiàn)象。
[0011]本發(fā)明與傳統(tǒng)的人工授精法相比，不用將精莢黏附在雌蝦納精囊上，不會對雌蝦造成傷害；將精子通過人工釋放于產(chǎn)卵水體中，可避免自然交配導(dǎo)致的不交配或者交配后雌蝦精莢脫落的缺陷；本發(fā)明在設(shè)定的近交系數(shù)的前提下，人為地設(shè)計交配方案，可有效避免所建家系的近交衰退，是一種高效的南美白對蝦家系構(gòu)建方法。
【具體實施方式】
[0012]下面通過實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，這些實施例僅用來說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明的范圍。
[0013]實施例1采用以下步驟實現(xiàn)本發(fā)明:
(O成熟親蝦的挑選:
a.事先在親蝦培育池中按照雌、雄蝦分別進(jìn)行強(qiáng)化培育、性腺已發(fā)育成熟的雌、雄蝦作為備選親蝦；親蝦培育池中，雌、雄蝦池水溫分別為30±0.5°C、28±0.5°C，鹽度均為31±1、溶氧均控制在5mg.L1，
b.家系建立當(dāng)天，在步驟a的親蝦培育池中按以下條件進(jìn)行親蝦選擇:選擇體形強(qiáng)壯，附肢健全，體色透明，胃腸飽滿，體表光滑，無附著物，規(guī)格在35-50克/尾，體長15-18cm，經(jīng)定期抽檢不攜帶特定病原的親蝦；其中，雌蝦的選擇標(biāo)準(zhǔn)是:從表面觀察雌蝦生殖腺顏色為紅色，每體節(jié)卵巢分葉清晰，性腺在第一、二腹節(jié)的突起大，卵粒飽滿，根據(jù)性腺的發(fā)育情況判斷當(dāng)天可以產(chǎn)卵的雌蝦為性腺成熟的雌蝦，將其選出后分別單獨暫養(yǎng)于體積為I立方米的小水槽中；雄蝦的選擇標(biāo)準(zhǔn)是:觀察雄蝦第五步足基部的精莢囊飽滿，精莢呈乳白色，選出后單獨暫養(yǎng)于體積為I立方米的小水槽中；雌、雄蝦暫養(yǎng)的養(yǎng)殖水體水環(huán)境與親蝦培育池相同；
(2)親蝦個體的標(biāo)記與交配方案的設(shè)定:雌雄親蝦用眼柄套環(huán)進(jìn)行個體標(biāo)記，確定定向交配方案，按一尾雄蝦與