一組通關(guān)藤快速繁殖培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物無(wú)性繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥材通關(guān)藤的快速繁殖方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 通關(guān)藤（Marsdeniatenocissima(Roxb)WightetArm)為蘿摩科牛奶菜屬藤本植 物，又名烏骨藤。始載于《滇南本草》，廣泛分布于亞洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)。其全株都具 有清熱解毒、消炎止痛和止咳平喘之功效。通關(guān)藤所含的烏骨消癌素（C21-留體甙和烏骨總 堿）對(duì)癌細(xì)胞分裂的根源_微管排列有很強(qiáng)的破壞作用，可阻斷癌細(xì)胞的有絲分裂，從而有 效切斷癌細(xì)胞擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移，癌癥因此萎縮直至完全消失?？捎糜谕砥诜伟⒓毙园籽?、食管 癌、胃癌、肝癌、喉癌、鼻咽癌等各種晚期惡性腫瘤的治療。以通關(guān)藤為主要原料制備而成的 中藥消癌平制劑，療效良好。
[0003] 目前，通關(guān)藤主要依靠自然繁育和有限的野生資源供給。由于通關(guān)藤野生資源遭 到嚴(yán)重破壞，而藥材需求量仍逐年提高，通關(guān)藤自身花多果少的生物特性，其植物自然繁殖 力低。加之，高強(qiáng)度的砍伐采收，致使當(dāng)前通關(guān)藤野生資源量急劇萎縮，人工繁育勢(shì)在必行。 優(yōu)質(zhì)種苗的快速獲取是通關(guān)藤栽培最為關(guān)鍵的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)。而種子繁殖得到的實(shí)生苗，品種 容易退化，并且生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，結(jié)實(shí)率低；其次扦插繁殖雖然成活率高，但后期感病嚴(yán)重，很難 滿足市場(chǎng)的需求。因此，探索一種具有快速的、適宜規(guī)?；a(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗的通關(guān)藤組培培養(yǎng) 基配方，對(duì)保證通關(guān)藤原料藥材的持續(xù)供應(yīng)具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是要解決通關(guān)藤種子繁殖率低、生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，變異性較大，扦插繁殖 苗容易感病的技術(shù)問(wèn)題，提供一組適宜規(guī)?；a(chǎn)、繁殖快、成活率高的通關(guān)藤快速繁殖培 養(yǎng)基配方。
[0005] 本發(fā)明所提供的一組通關(guān)藤快速繁殖培養(yǎng)基配方由如下誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng) 基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基組成：
[0006] 所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 7.lg/L， pH5. 8 ；
[0007]所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+6-BAI.Omg/L+NAA0? 3mg/L+蔗糖 25g/L+瓊脂 7.lg/L，pH5. 8 ；
[0008] 所述的壯苗培養(yǎng)基為：MS+6-BAI.Omg/L+NAA0? 3mg/L++NH4N030 . 66g/ L+NaH2P040. 56g/L+K2S04l. 78g/L+ 香蕉 100g/L+ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 7.lg/L，pH5. 8 ;
[0009] 所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+6-BA0? 5mg/L+IAA0? 2mg/L+ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 7.lg/L,pH5. 8〇
[0010] 本發(fā)明的有益效果是：
[0011] 1、本發(fā)明為通關(guān)藤人工繁育提供了新的途徑。
[0012] 本發(fā)明所提供的一組通關(guān)藤組織培養(yǎng)基對(duì)通關(guān)藤進(jìn)行組培快繁，使通關(guān)藤能保持 親本的優(yōu)良性狀，縮短繁育周期，提高繁殖系數(shù)，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，緩解了市場(chǎng)用藥壓力，解 決了通關(guān)藤由于花多果少而致的結(jié)實(shí)率低，種子繁育周期長(zhǎng)，易變異的缺陷。
[0013] 2、本發(fā)明通過(guò)大量試驗(yàn)和研宄，篩選出一組通關(guān)藤各個(gè)生理時(shí)期生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)的 培養(yǎng)基配方，達(dá)到誘導(dǎo)率高（88%以上），增殖倍數(shù)高（每月可增殖2?2.5倍），生根率高， 可達(dá)95 %以上，組培繁殖周期短，繁殖率高，整個(gè)繁殖周期僅需64天?72天，實(shí)現(xiàn)了通關(guān)藤 有效快速的無(wú)性繁殖，達(dá)到了適宜規(guī)模化生產(chǎn)、繁殖快、有抗性、成活率高的目的，對(duì)加快通 關(guān)藤優(yōu)良無(wú)性系的推廣和保證抗癌原料藥持續(xù)穩(wěn)定供應(yīng)具有非常重要的作用和意義。
[0014] 3、采用本發(fā)明一組通關(guān)藤快速繁殖培養(yǎng)基還能提高通關(guān)藤苗木對(duì)病蟲(chóng)害的抗性， 解決了由于通關(guān)藤植株藤莖疏松多孔，內(nèi)含大量乳汁，扦插繁殖后容易感病的缺點(diǎn)，為通關(guān) 藤人工栽培提供了優(yōu)質(zhì)種苗。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。以下各實(shí)施例按常規(guī)組培要求對(duì)各種 玻璃器皿、培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，并在常規(guī)的組培無(wú)菌條件下進(jìn)行快速繁殖。各實(shí)施例無(wú)特殊說(shuō) 明為常規(guī)方法。
[0016] 實(shí)施例1
[0017] (1)外植體的選擇與處理
[0018] 外植體來(lái)源于云南省蒙自縣野外的通關(guān)藤植株，選取無(wú)病蟲(chóng)害通關(guān)藤的當(dāng)年新生 梢，剪成帶一個(gè)芽的單芽莖段為外植體，按如下順序進(jìn)行初步滅菌：用流水沖洗2. 5h，放入 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%洗衣粉水中浸泡5min，流水條件下沖洗25min;將經(jīng)過(guò)初步滅菌處理過(guò)的通 關(guān)藤莖段用體積分?jǐn)?shù)為75%乙醇溶液浸泡lmin，然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1%氯化汞溶液浸泡 12min后，再用無(wú)菌水洗滌3?5次，用無(wú)菌紙吸干通關(guān)藤莖段表面水分備用。
[0019] 由于通關(guān)藤嫩枝密被淡黃色絨毛，上面會(huì)粘著許多的塵埃物，采用一般方法不能 達(dá)到好的滅菌效果，甚至造成整個(gè)組培的失敗，本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量試驗(yàn)（見(jiàn)表1)，得出必須 用本發(fā)明所述的滅菌方法才能達(dá)到的污染率最低，成活率是最高的狀況，再用無(wú)菌水洗滌 3?5次，用無(wú)菌紙吸干通關(guān)藤莖段表面水分，放在已經(jīng)滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿上備用。
[0020] 表1用0. 1%氯化汞在不同消毒時(shí)間
[0021] 對(duì)外植體成活率及培養(yǎng)基污染率的影響
[0022]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一組通關(guān)藤快速繁殖培養(yǎng)基，其特征在于由如下誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng) 基和生根培養(yǎng)基組成： 所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+6-BA2.Omg/L+NAA0? 5mg/L+ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 7.lg/L，pH 5. 8 ； 所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+6-BALOmg/L+NAA0? 3mg/L+ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂Llg/L，pH 5. 8 ； 所述的壯苗培養(yǎng)基為：MS+6-BAI.Omg/L+NAA0? 3mg/L+NH4N030 . 66g/L+NaH2P040 . 56g/L+K2S041. 78g/L+ 香蕉 100g/L+ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 7.lg/L，pH5. 8 ; 所述的生根培養(yǎng)基為：l/2MS+6-BA0? 5mg/L+IAA0? 2mg/L+ 蔗糖 25g/L+ 瓊脂 7.lg/L，pH5. 8〇
【專(zhuān)利摘要】一組通關(guān)藤快速繁殖培養(yǎng)基。該組培養(yǎng)基的主要配方為：誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L；壯苗培養(yǎng)基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L+NH4NO30.66g/L+NaH2PO40.56g/L+K2SO41.78g/L+香蕉100g/L；生根培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA 0.5mg/L+IAA0.2mg/L；本發(fā)明的誘導(dǎo)率高達(dá)88％以上，增殖倍數(shù)高，生根率高達(dá)95％以上，組培繁殖周期短，僅需64天～72天，實(shí)現(xiàn)了通關(guān)藤有效快速的無(wú)性繁殖。
【IPC分類(lèi)】A01H4-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104542303
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510044064
【發(fā)明人】韓俊, 楊生超, 顏秋燕, 候建凱, 龍光強(qiáng), 黃鶴, 楊云, 沈雪梅, 楊丕瓊
【申請(qǐng)人】云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月28日