本發(fā)明屬于花生芽培養(yǎng)方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高花生芽中白藜蘆醇含量的方法。
背景技術(shù)：
花生芽，花生發(fā)芽后產(chǎn)生的，是一種食療兼?zhèn)涞氖称?，它不但能夠生吃，而且營(yíng)養(yǎng)還特別豐富?；ㄉ康哪芰?，蛋白質(zhì)和粗脂肪含量居各種蔬菜之首，并富含維生素、鉀、鈣、鐵、鋅等礦物質(zhì)及人體所需的各種氨基酸和微量元素，被譽(yù)為“萬(wàn)壽果芽”，也叫長(zhǎng)壽芽。花生芽還可以使花生中的蛋白質(zhì)水解為氨基酸，易于人體吸收；油脂被轉(zhuǎn)化為熱量，脂肪含量大大降低，害怕肥胖的人建議長(zhǎng)期使用，與此同時(shí)，提高了各種人體必需的微量元素利用率?；ㄉ砍苑ǘ鄻樱瑹岢?、涼拌、泡菜、涮火鍋、都很美味，也可根據(jù)各人的喜好搭配食用。
研究發(fā)現(xiàn)，花生芽的白藜蘆醇含量比花生的要高5倍，由此可見(jiàn)，花生發(fā)芽的過(guò)程是產(chǎn)生白藜蘆醇過(guò)程，因此想提高花生芽中白藜蘆醇含量應(yīng)當(dāng)從花生發(fā)芽的過(guò)程入手。
白藜蘆醇是多酚類(lèi)化合物，主要來(lái)源于花生、葡萄（紅葡萄酒）、虎杖、桑椹等植物。白藜蘆醇是一種生物性很強(qiáng)的天然多酚類(lèi)物質(zhì)，又稱為芪三酚，是腫瘤的化學(xué)預(yù)防劑，也是對(duì)降低血小板聚集，預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管疾病的化學(xué)預(yù)防劑。白藜蘆醇具有抑制癌細(xì)胞、降血脂、防治心血管疾病、延緩衰老等作用，保健價(jià)值極高。
白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝結(jié)和血管舒張，保持血液暢通，可預(yù)防癌癥的發(fā)生及發(fā)展，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病，缺血性心臟病，高血脂的防治作用。抑制腫瘤的作用還具有雌激素樣作用，可用于治療乳腺癌等疾病。
20世紀(jì)90年代，中國(guó)科技工作者對(duì)白藜蘆醇的研究不斷深入，并揭示其藥理作用：抑制血小板非正常凝聚，預(yù)防心肌硬塞、腦栓塞，對(duì)缺氧心臟有保護(hù)作用，對(duì)肥胖者可以起一個(gè)控制與減肥作用，對(duì)燒傷或失血性休克引起的心輸出量下降有效恢復(fù)，并能夠擴(kuò)張動(dòng)脈血管及改善微循環(huán)。同時(shí)中國(guó)生物技術(shù)有限公司研究白藜蘆醇的提取和工業(yè)化生產(chǎn)，已經(jīng)初具規(guī)模。
1998年美國(guó)艾爾·敏德?tīng)柧幾犊顾ダ鲜サ洹窌r(shí)，將白藜蘆醇列為“100種最熱門(mén)有效抗衰老物質(zhì)”之一。中國(guó)農(nóng)科院花生研究所禹山林研究員和國(guó)家著名醫(yī)藥專(zhuān)家毛文岳教授說(shuō)，有關(guān)花生中白藜蘆醇的研究開(kāi)發(fā)將是21世紀(jì)最重要的營(yíng)養(yǎng)課題之一。迄今美國(guó)宇航局已將花生定為航天食品，常吃花生制品，可緩解心血管疾病，降低血脂，延緩衰老。白藜蘆醇保健食品將會(huì)成為21世紀(jì)營(yíng)養(yǎng)健康的新時(shí)尚。
豆渣是生產(chǎn)豆奶或豆腐過(guò)程中的副產(chǎn)品，每年全球豆渣的產(chǎn)量都很大。中國(guó)是豆腐生產(chǎn)的發(fā)源地，具有悠久的豆腐生產(chǎn)歷史，豆腐的生產(chǎn)、銷(xiāo)售量都較大，相應(yīng)的豆渣產(chǎn)量也很大。而豆渣的利用率很低，一般都將其作為動(dòng)物飼料使用。
現(xiàn)有醫(yī)療和食用保健的白藜蘆醇基本是從高白藜蘆醇含量的天然產(chǎn)物中提取的，其產(chǎn)量受其天然產(chǎn)物中白藜蘆醇含量影響很大。發(fā)明人為了提高白藜蘆醇的產(chǎn)量，研究了花生發(fā)芽過(guò)程中的白藜蘆醇含量變化，提供一種全新的提高花生芽中白藜蘆醇含量的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的提供了一種提高花生芽中白藜蘆醇含量的方法，依次包括：選取花生種子、浸泡液Ⅰ浸泡、清水浸泡和浸泡液Ⅱ浸泡；
其中，所述浸泡液Ⅰ的配方如下：
檸檬酸：0.02~0.04%，纖維素酶：0.3~0.5%，抗壞血酸：0.1~0.2%，余量為水；
所述浸泡液Ⅱ的制備方法如下：
選料：選取水分含量為5~12%的豆渣，按照料液比1:2~1:5加入濃度為3~10%的NaHCO3溶液，得到豆渣漿；
②板框壓濾：板框壓濾去除豆渣漿中的水;
③調(diào)漿：在瀝水豆渣中加水，在攪拌過(guò)程中按固液比1:3~1:5加入水，升溫至40-60℃，并采用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值為8.0±0.2，得到豆渣溶液；
④酶解：在豆渣溶液中加入0.5-1.5%的胰酶，酶解結(jié)束后，滅酶活，得到酶解后的豆渣溶液；
⑤乳酸菌發(fā)酵：將活化好的乳酸乳球菌8148菌株以2~5%的量接種在酶解后的豆渣溶液中，有氧發(fā)酵24~96h，靜置，并滅菌處理，得到發(fā)酵后的豆渣溶液；
⑥活性炭吸附：將3~10%（m/V）的DS-305糖用活性炭加入到所述發(fā)酵后的豆渣溶液中，靜置吸附20~30min，吸附完成后過(guò)濾，去除不溶物，得到浸泡液Ⅱ。
進(jìn)一步，所述板框壓濾的過(guò)濾介質(zhì)為高溫定型濾布，壓力為0.1~0.2MPa,得到瀝水豆渣。
進(jìn)一步，所述滅酶活的方法為：對(duì)酶解體系迅速升溫至80~90℃，保持10~20min。
進(jìn)一步，所述酶解的酶解時(shí)間為20~50min。
進(jìn)一步，所述浸泡液Ⅰ的浸泡時(shí)間為3~5h。
進(jìn)一步，所述清水的浸泡時(shí)間為4~8h。
有益效果
本發(fā)明首先使用浸泡液Ⅰ對(duì)花生種子中的纖維素進(jìn)行輕度酶解，能夠適當(dāng)?shù)钠茐幕ㄉN子中的細(xì)胞壁，而檸檬酸和抗壞血酸可以保護(hù)花生種子中的細(xì)胞膜不會(huì)被破壞，保證細(xì)胞在發(fā)芽過(guò)程中的活性，隨后配合清水洗滌并浸泡4~8h，再用豆渣制備的浸泡液Ⅱ浸泡，能夠顯著提高花生芽成品中白藜蘆醇的含量，經(jīng)過(guò)本發(fā)明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明將傳統(tǒng)方法制備的花生芽中白藜蘆醇含量10~30μg/g之間提高到174.495±1.063μg/g，提高了5倍以上，可見(jiàn)本發(fā)明對(duì)提高花生芽中白藜蘆醇含量有顯著的效果，而申請(qǐng)人也做了實(shí)驗(yàn)，如果僅用浸泡液Ⅰ或浸泡液Ⅱ均無(wú)法達(dá)到提高白藜蘆醇的目的。
本發(fā)明巧妙的理由了豆腐制備的廢棄物豆渣作為原料，經(jīng)過(guò)酶解和發(fā)酵后，能夠被花生所利用，不僅提高了花生芽中白藜蘆醇的含量，而且能夠?qū)⒍乖@一廢棄物利用掉，不僅使得花生芽的制備成本降低，而且綜合利用了我國(guó)豐富的大豆資源。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例子進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域的技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所規(guī)定的范圍。
本發(fā)明實(shí)施例中，所述胰酶購(gòu)買(mǎi)自廣西龐博生物工程公司；所述乳酸乳球菌8148菌株購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，CICC編號(hào)20406。所述DS-305糖用活性炭來(lái)自溧陽(yáng)市德勝活性炭廠。
所涉及到的其他試劑均為食品級(jí)。
實(shí)施例1
本實(shí)施例提供了一種提高花生芽白藜蘆醇含量的方法，所述提高花生芽白藜蘆醇含量的方法具體包括如下步驟：
1、選取花生種子：選取當(dāng)年顆粒飽滿，無(wú)破損的花生作為花生芽的制備原料，稱之為花生種子。
2、浸泡液Ⅰ浸泡：將選好的花生種子用浸泡液Ⅰ浸泡4h。
3、清水浸泡：將用浸泡液Ⅰ浸泡后的花生種子去除，用清水沖洗后，放在清水中浸泡6h。
4、浸泡液Ⅱ浸泡：將花生種子放在浸泡液Ⅱ中浸泡催芽，直至完成發(fā)芽，可以顯著提高花生芽中白藜蘆醇的含量，得到高白藜蘆醇的花生芽。
其中，所述浸泡液Ⅰ的制備方法如下：
用純水配制成檸檬酸：0.04%，纖維素酶：0.5%，抗壞血酸：0.2%的混合溶液，完全溶解得到浸泡液Ⅰ。
所述浸泡液Ⅱ的制備方法如下：
選料：選取水分含量為5~12%的豆渣，按照料液比1:2加入濃度為10%的NaHCO3溶液，充分?jǐn)嚢?，得到豆渣漿。
②板框壓濾：采用板框壓濾去除豆渣漿中的水，過(guò)濾介質(zhì)為高溫定型濾布，壓力為0.1 MPa,得到瀝水豆渣。
③調(diào)漿：在瀝水豆渣中加水，在攪拌過(guò)程中按固液比1:4加入水，升溫至40-60℃，得到豆渣溶液。采用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值為8.0±0.2。
④酶解：在豆渣溶液中加入0.5-1.5%的胰酶，邊加邊攪拌，酶解30min。酶解結(jié)束后，對(duì)酶解體系迅速升溫至90℃，保持90℃的溫度10 min，冷卻到室溫，得到酶解后的豆渣溶液。
⑤乳酸菌發(fā)酵：將活化好的乳酸乳球菌8148菌株以2%的量接種在酶解后的豆渣溶液中，有氧發(fā)酵24~96h，靜置，在90℃的條件下滅菌處理，得到發(fā)酵后的豆渣溶液。
⑥活性炭吸附：取10%（m/V）的DS-305糖用活性炭加入到所述發(fā)酵后的豆渣溶液中，靜置吸附20~30min，吸附完成后得到浸泡液Ⅱ。
申請(qǐng)人測(cè)定了采用本發(fā)明花生芽的白藜蘆醇的含量，具體方法如下：
將粉碎后的花生芽樣品過(guò)80目篩，參考國(guó)標(biāo)GBT24903-2010花生中白藜蘆醇的測(cè)定方法；采用高效液相色譜法測(cè)定發(fā)芽花生中白藜蘆醇含量。
申請(qǐng)人根據(jù)花生芽的特性，白藜蘆醇的測(cè)定方法如下:
準(zhǔn)確稱取1g發(fā)芽花生凍干粉末于150mL的三角瓶中,加入50mL濃度為80%的乙醇溶液，于80℃的恒溫水浴振蕩器中，以140r/min振蕩45min，在5000rpm離心10min取上清液，過(guò)0.45微米的微孔濾膜待測(cè)。
色譜測(cè)試條件：?jiǎn)伪?，流速?.0mL/min；色譜柱為Waters Sunfire C18 5μm（4.6x250mm），柱溫30℃；流動(dòng)相為乙腈25%，水75%，冰乙酸0.1%；檢測(cè)波長(zhǎng)306nm；進(jìn)樣量20μL.
白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：用配制好的100mg/L的白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)液分別稀釋100、50、25、12.5、10倍,吸取20μL進(jìn)樣，重復(fù)三次，以白藜蘆醇的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定結(jié)果顯示，本發(fā)明實(shí)施例1得到的白藜蘆醇含量為174.495±1.063μg/g，而傳統(tǒng)方法制備的花生芽白藜蘆醇含量在10~30μg/g之間。由此可見(jiàn)本發(fā)明方法可以顯著提高花生芽中白藜蘆醇的含量。
實(shí)施例2
本實(shí)施例提供了一種提高花生芽白藜蘆醇含量的方法，所述提高花生芽白藜蘆醇含量的方法具體包括如下步驟：
1、選取花生種子：選取當(dāng)年顆粒飽滿，無(wú)破損的花生作為花生芽的制備原料，稱之為花生種子。
2、浸泡液Ⅰ浸泡：將選好的花生種子用浸泡液Ⅰ浸泡3h。
3、清水浸泡：將用浸泡液Ⅰ浸泡后的花生種子去除，用清水沖洗后，放在清水中浸泡8h。
4、浸泡液Ⅱ浸泡：將花生種子放在浸泡液Ⅱ中浸泡催芽，直至完成發(fā)芽。
本方法可以顯著提高花生芽中白藜蘆醇的含量，得到高白藜蘆醇的花生芽。
其中，所述浸泡液Ⅰ的制備方法如下：
用純水配制成檸檬酸含量：0.02%，纖維素酶含量：0.3%，抗壞血酸含量：0.15%的混合溶液，完全溶解得到浸泡液Ⅰ。
所述浸泡液Ⅱ的制備方法如下：
選料：選取水分含量為12%的豆渣，按照料液比1:4加入濃度為5%的NaHCO3溶液，充分?jǐn)嚢瑁玫蕉乖鼭{。
②板框壓濾：采用板框壓濾去除豆渣漿中的水，過(guò)濾介質(zhì)為高溫定型濾布，壓力為0.2 MPa,得到瀝水豆渣。
③調(diào)漿：在瀝水豆渣中加水，在攪拌過(guò)程中按固液比1:3加入水，升溫至40℃，得到豆渣溶液。采用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值為8.0±0.2。
④酶解：在豆渣溶液中加入0.5%的胰酶，邊加邊攪拌，酶解30min。酶解結(jié)束后，對(duì)酶解體系迅速升溫至90℃，保持90℃的溫度10 min，冷卻到室溫，得到酶解后的豆渣溶液。
⑤乳酸菌發(fā)酵：將活化好的乳酸乳球菌8148菌株以3%的量接種在酶解后的豆渣溶液中，有氧發(fā)酵24h，靜置，并在90℃的條件下滅菌處理，得到發(fā)酵后的豆渣溶液。
⑥活性炭吸附：取3%（m/V）的DS-305糖用活性炭加入到所述發(fā)酵后的豆渣溶液中，靜置吸附20~30min，吸附完成后得到浸泡液Ⅱ。
實(shí)施例3
本實(shí)施例提供了一種提高花生芽白藜蘆醇含量的方法，所述提高花生芽白藜蘆醇含量的方法具體包括如下步驟：
1、選取花生種子：選取當(dāng)年顆粒飽滿，無(wú)破損的花生作為花生芽的制備原料，稱之為花生種子。
2、浸泡液Ⅰ浸泡：將選好的花生種子用浸泡液Ⅰ浸泡5h。
3、清水浸泡：將用浸泡液Ⅰ浸泡后的花生種子去除，用清水沖洗后，放在清水中浸泡4h。
4、浸泡液Ⅱ浸泡：將花生種子放在浸泡液Ⅱ中浸泡催芽，直至完成發(fā)芽。
本方法可以顯著提高花生芽中白藜蘆醇的含量，得到高白藜蘆醇的花生芽。
其中，所述浸泡液Ⅰ的制備方法如下：
用純水配制成檸檬酸含量：0.03%，纖維素酶含量：0.4%，抗壞血酸含量：0.1%的混合溶液，完全溶解得到浸泡液Ⅰ。
所述浸泡液Ⅱ的制備方法如下：
選料：選取水分含量為10%的豆渣，按照料液比1:5加入濃度為8%的NaHCO3溶液，充分?jǐn)嚢?，得到豆渣漿。
②板框壓濾：采用板框壓濾去除豆渣漿中的水，過(guò)濾介質(zhì)為高溫定型濾布，壓力為0.15 MPa,得到瀝水豆渣。
③調(diào)漿：在瀝水豆渣中加水，在攪拌過(guò)程中按固液比1:5加入水，升溫至60℃，得到豆渣溶液。采用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液的pH值為8.0±0.2。
④酶解：在豆渣溶液中加入1.5%的胰酶，邊加邊攪拌，酶解30min。酶解結(jié)束后，對(duì)酶解體系迅速升溫至90℃，保持90℃的溫度10 min，冷卻到室溫，得到酶解后的豆渣溶液。
⑤乳酸菌發(fā)酵：將活化好的乳酸乳球菌8148菌株以8%的量接種在酶解后的豆渣溶液中，有氧發(fā)酵96h，靜置，并在95℃的條件下滅菌處理，得到發(fā)酵后的豆渣溶液。
⑥活性炭吸附：取6%（m/V）的DS-305糖用活性炭加入到所述發(fā)酵后的豆渣溶液中，靜置吸附30min，吸附完成后得到浸泡液Ⅱ。