專利名稱：使用溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽作為卵識(shí)別信息素的害蟲滅殺的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于滅殺和防治害蟲，特別是白蟻的新的模擬
卵， 一種利用所述模擬卵進(jìn)行害蟲滅殺和防治的方法，等。
背景技術(shù)：
關(guān)于害蟲滅殺，迄今已經(jīng)開發(fā)了多種方法。特別地，白蟻對(duì)木 制房屋造成巨大破壞，并因此在世界范圍已經(jīng)研究并開發(fā)了害蟲的滅殺劑 和滅殺方法。用于滅殺白蟻的方法包括將溶液藥劑如有機(jī)磷藥劑、氨基 甲酸酯藥劑或擬除蟲菊酯藥劑注射到侵入位置中以殺滅昆蟲的方法，或通 過溴代甲烷等進(jìn)行煙熏以殺滅昆蟲的方法(參見，例如，非專利文獻(xiàn)l)。作為噴射藥劑方法的備選方法，存在誘餌法，其中將緩慢作用 的殺蟲活性成分混合在誘餌中，并且將誘餌喂給白蟻，并從而滅殺白蟻(參 見，例如，非專利文獻(xiàn)2)。常規(guī)滅殺技術(shù)基本上是從被破壞的木材外投擲大量藥劑以殺滅 害蟲。然而，這些技術(shù)導(dǎo)致健康損害如病態(tài)建筑綜合癥(sick building syndrome),或?qū)е颅h(huán)境污染。,而且，存在這樣的問題，即如果剩余一些白 蟻群體，則該破壞將擴(kuò)散到另一個(gè)地方。最嚴(yán)重的問題是，滅殺所需的勞 動(dòng)力成本過多。使用溴代甲烷的熏蒸技術(shù)已被頻繁采用，然而，溴代甲烷 是引起臭氧層破壞的物質(zhì)，并且近年來，試圖控制溴代甲垸的使用的趨勢(shì) 己經(jīng)增加。作為用于滅殺以與白蟻相同的方式組織群居生活的蟻類的有效 方法，存在這樣的方法，即將蟻類喜好的食物混合到毒藥中，并且將混合 的食物作為誘餌提供，以允許蟻類將所述食物帶到它們的巢中，并且殺滅 蟻類的整個(gè)種群。然而，由于白蟻食用在其中建巢的木材本身，因此允許 白蟻將藥劑從巢的外部運(yùn)送到巢的內(nèi)部的誘餌方法并不總是有效。特別是，難以通過誘餌方法根除黃胸散白蟻(Reticulitermes speratus)的巢(參見， 非專利文獻(xiàn)2)。作為用于比誘餌方法更有效地使害蟲攝取活性成分的方法，己 經(jīng)開發(fā)了 "通過運(yùn)送模擬卵滅殺害蟲的方法"(專利文獻(xiàn)1)，其中利用了 作為害蟲的基本群居行為的卵運(yùn)送本能。在此方法中的害蟲是白蟻。然而， 在此方法中，已經(jīng)可能通過使用從白蟻的卵提取的粗提取成分使白蟻運(yùn)送 模擬卵，然而，還沒有確定卵識(shí)別信息素。除非卵識(shí)別信息素得以確定并 且可以大量地并且廉價(jià)地制備，否則實(shí)施這種方法存在巨大的成本問題。特別地，如果害蟲是白蟻，則由于下述原因難以滅殺，并且尚 未發(fā)現(xiàn)決定性的解決方案。
由于白蟻將它們的居所構(gòu)筑在封閉的空間中，即在木材中，因此難以 從外部滲透藥劑。
由于白蟻組織群居生活，如果群體中的一部分殘留，則白蟻移動(dòng)并且 使破壞擴(kuò)散。
由于白蟻通過食用它們?cè)谄渲袠?gòu)筑它們的居所的木材本身，因此毒藥 誘餌的引入無效。
專利文獻(xiàn)l: JP 2000-342149 A
非專禾U文獻(xiàn)1: "Termites and strategies of extermination^白蟻及滅殺策 略)"，The Japan Termite Control Association (日本白蟻控制協(xié)會(huì))，2000,第 219頁(yè)
非專利文獻(xiàn)2: "Activity evaluation of Japanese underground termites using a monitoring station and the extermination by bait methods(使用監(jiān)控站 的日本地下白蟻的活動(dòng)評(píng)價(jià)以及通過誘餌方法的滅殺)"，New developments of monitoring technique of insect ecology in a living zone (生活 區(qū)中昆蟲生態(tài)監(jiān)控技術(shù)的新發(fā)展)，2006,第48頁(yè)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題考慮以上情形，本發(fā)明人進(jìn)行了深入細(xì)致的研究，以確定害蟲， 特別是白蟻的卵識(shí)別信息素，從而使利用模擬卵運(yùn)送滅殺害蟲的方法更有效并且更廉價(jià)地提供。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，白蟻的卵識(shí)別信息素是溶菌酶， 即一種抗菌蛋白，并且白蟻?zhàn)R別包含溶菌酶的卵，并且將所述卵運(yùn)送并保 護(hù)在巢的生長(zhǎng)室中。由此，本發(fā)明人完成了本發(fā)明。
解決問題的手段即，本發(fā)明涉及以下
(I) 一種模擬卵，所述模擬卵在其模擬害蟲的卵的基質(zhì)中包含溶菌酶、 其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽作為卵識(shí)別信息素，以及活性成分；
(2灘據(jù)(1)的模擬卵，其中所述活性成分是選自由殺蟲劑成分、孵化抑 制物質(zhì)、繁殖抑制物質(zhì)和生長(zhǎng)抑制成分組成的組中的一種或多種化合物； (3灘據(jù)(1)或(2)的模擬卵，其中所述活性成分是緩慢作用的； (4灘據(jù)(1)至(3)中的任一項(xiàng)的模擬卵，其中所述基質(zhì)由持續(xù)釋放材料制
成；
(5) 根據(jù)(4)的模擬卵，其中所述基質(zhì)被所述害蟲的唾液降解；
(6) 根據(jù)(4)或(5)的模擬卵，其中所述基質(zhì)具有膠囊形狀，并且所述活性 成分包含在其中；
(7) 根據(jù)(1)至(6)中任一項(xiàng)的模擬卵，其中所述基質(zhì)包含甘油和/或纖維 素酶；
(8) 根據(jù)(1)至(7)中任一項(xiàng)的模擬卵，其中所述基質(zhì)包含從所述害蟲的卵 提取的成分；
(9) 根據(jù)(1)至(8)中任一項(xiàng)的模擬卵，其中所述害蟲為白蟻；
(10) —種用于滅殺害蟲的方法，所述方法包括對(duì)害蟲提供根據(jù)權(quán)利 要求1至9中任一項(xiàng)的模擬卵，和利用卵運(yùn)送行為使所述害蟲將所述模擬 卵運(yùn)送到它們的巢中；
(II) 溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽作為害蟲的卵識(shí)別 信息素的用途。
發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，可以大規(guī)模并且廉價(jià)地制備模擬卵，所述模擬卵 在其模擬害蟲的卵的基質(zhì)中包含溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-
5相關(guān)肽作為卵識(shí)別信息素，以及活性成分。并且可以有效地、簡(jiǎn)單地并且 廉價(jià)地進(jìn)行害蟲，特別是白蟻的滅殺或防治。
附圖簡(jiǎn)述


圖1顯示關(guān)于白蟻的溶菌酶的卵識(shí)別活性的研究結(jié)果?？s寫詞 指示如下；TEE:白蟻卵提取物；pK:由蛋白酶降解的白蟻卵提取物，TEL: 從白蟻卵提取物分離的溶菌酶，HEL:卵清溶菌酶，CEL:纖維素酶， HEL+CEL:卵清溶菌酶和纖維素酶的混合溶液。n.s.:與對(duì)照沒有顯著區(qū) 別。*、存在1%的顯著水平的顯著區(qū)別。存在0.1%的顯著水平的顯 著區(qū)別(雙側(cè)T檢驗(yàn)(two-sidedTtest))。
圖2顯示這樣的照片，其顯示在將涂敷有白蟻卵提取物的模擬卵提供 給白蟻的情況下，模擬卵進(jìn)入到卵塊(egg mass)中的運(yùn)送情況(左)。對(duì)模 擬卵附加了白圈，以清楚顯示己經(jīng)被傳送的模擬卵(右)。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式具有運(yùn)送卵的特征的昆蟲如白蟻具有這樣的特征，即通過以下 方式照顧卵將卵運(yùn)送并堆疊在它們的巢中，并且舔舐卵的表面等，或在 個(gè)體之間進(jìn)行交哺。通過利用這種特征，可以滅殺或防治害蟲。例如，白 蟻將具有類似于天然卵的尺寸和形狀，并且在其表面上包含卵識(shí)別信息素 的模擬卵識(shí)別為天然卵，'并且將該模擬卵運(yùn)送到巢中的它們的卵塊中。從 而，白蟻進(jìn)行護(hù)理行為，例如舔舐模擬卵的表面，并且在個(gè)體之間進(jìn)行交 哺。因此，通過使模擬卵包含活性物質(zhì)，例如，活性成分諸如殺蟲劑成分、 孵化抑制物質(zhì)、繁殖抑制物質(zhì)、或生長(zhǎng)抑制成分，和使白蟻將該模擬卵運(yùn) 送到卵塊中，可以有效破壞群體的繁殖中心。本發(fā)明人己經(jīng)反復(fù)地深入細(xì)致地進(jìn)行研究，以確定白蟻的卵識(shí) 別信息素。已經(jīng)對(duì)通過離子交換色譜法和疏水色譜法提純和分離的白蟻的 卵識(shí)別信息素進(jìn)行了精確質(zhì)量分析，并且已經(jīng)揭示，卵識(shí)別信息素是分子 量為約14.5kDa的蛋白。此外，由于活性成分顯示出高溶菌活性，因此提 示白蟻的卵識(shí)別信息素是溶菌酶，即一種抗菌蛋白?；谠摪l(fā)現(xiàn)，已經(jīng)針 對(duì)源自雞卵清的溶菌酶樣品確定了白蟻的卵識(shí)別活性，并且己經(jīng)識(shí)別了高活性。因此，已經(jīng)揭示，白蟻的卵識(shí)別信息素是溶菌酶。因此，在第一方面中，本發(fā)明提供模擬卵，所述模擬卵在其模 擬害蟲的卵的基質(zhì)中包含溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽作 為卵識(shí)別信息素，以及活性成分?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的模擬卵和方法滅殺的害蟲可以是任何害蟲， 條件是它們具有卵運(yùn)送本能并且識(shí)別溶菌酶作為卵識(shí)別信息素。對(duì)其優(yōu)選 應(yīng)用本發(fā)明的模擬卵和方法的害蟲是白蟻。通過本發(fā)明滅殺的白蟻可以是 任何種類的白蟻，并且不僅在日本，而且在世界范圍內(nèi)的白蟻可以是目標(biāo)。 通過本發(fā)明滅殺的典型白蟻包括白蟻諸如散白蟻屬(Reticulitermes)和家白 蟻屬(Coptotermes)，但是不局限于此。在本說明書中，害蟲的滅殺包括防 治害蟲。在本說明書中，害蟲是對(duì)人、農(nóng)業(yè)動(dòng)物、農(nóng)產(chǎn)品、財(cái)產(chǎn)等造成有 害效果的昆蟲。本發(fā)明的卵識(shí)別信息素是溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌 酶-相關(guān)肽。溶菌酶可以源自任何物種的生物體，例如，可以源自哺乳動(dòng)物、 禽物種諸如雞、魚、爬行動(dòng)物、兩棲動(dòng)物、昆蟲諸如蠶，等?？梢源笠?guī)模 并廉價(jià)地獲得并且可用于本發(fā)明的優(yōu)選溶菌酶包括源自雞卵清的溶菌酶。 而且，源自白蟻卵提取物的溶菌酶可以用于本發(fā)明。用于本發(fā)明的溶菌酶 可以是提純或未提純的。此外，用于本發(fā)明的溶菌酶可以通過遺傳重組方 法制備。蛋白、多肽、或肽通過遺傳重組方法的制備對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人 員是熟知的。通常，使期望蛋白的基因與載體相連接并且引入到適當(dāng)?shù)乃?主細(xì)胞如大腸桿菌(Escherichia coli)或酵母中，并且通過增殖該細(xì)胞， 可以獲得期望的蛋白。載體或宿主細(xì)胞的類型、載體引入條件、宿主細(xì)胞 的培養(yǎng)條件、分離和提純期望蛋白的方法等，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員從已 知材料和已知方法中適當(dāng)?shù)剡x擇。本發(fā)明中使用的溶菌酶可以是鹽的形式。溶菌酶鹽可以是具有 可以形成鹽的各種物質(zhì)的鹽，例如具有有機(jī)酸的鹽、具有無機(jī)酸的鹽、具 有有機(jī)堿的鹽或具有無機(jī)堿的鹽。而且，例如，構(gòu)成溶菌酶的天冬酰胺或
谷氨酰胺的(3-或Y-羧基與金屬如鈉或鉀可以形成鹽。而且，例如，構(gòu)成溶 菌酶的堿性氨基酸的側(cè)鏈可以形成鹽。在本發(fā)明中，溶菌酶的生物學(xué)片段 或溶菌酶-相關(guān)肽可以具有鹽的形式。
此外，在本發(fā)明中，溶菌酶的生物學(xué)片段可以用作卵識(shí)別信息 素。溶菌酶的生物學(xué)片段是多肽或肽，其具有溶菌酶的部分氨基酸序列， 并且具有與溶菌酶類似的卵識(shí)別活性。該片段是短鏈的，且因此適于通過 遺傳重組方法大規(guī)模制備。此外，在本發(fā)明中，溶菌酶-相關(guān)鈦可以用作卵識(shí)別信息素。溶
菌酶-相關(guān)肽是蛋白、多肽或肽，其具有與溶菌酶類似的卵識(shí)別活性，并且 與溶菌酶和溶菌酶的生物學(xué)片段不同。溶菌酶-相關(guān)肽可以源自天然來源，
或可以是合成的化合物。通過技術(shù)如定點(diǎn)誘變法(site-directed mutagenesis method),溶菌酶-相關(guān)肽可以具有與天然溶菌酶不同的氨基酸序列。例如， 在本發(fā)明中可以制備和使用具有白蟻更喜好的氨基酸序列的溶菌酶、其生 物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽。而且，例如，在本發(fā)明中可以制備和使用具 有這樣的氨基酸序列的溶菌酶、其生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽，所述氨 基酸序列對(duì)特定種類的白蟻具有高特異性。必要的是，本發(fā)明的模擬卵具有與待滅殺的害蟲的卵的形狀、 尺寸和特征類似的形狀、尺寸和特征。本發(fā)明中使用的模擬卵的形式和尺 寸可以通過模擬害蟲的實(shí)際卵的形式和尺寸而制備。在白蟻的情形中，模 擬卵的形式可以是長(zhǎng)卵形或球形。在模擬卵具有長(zhǎng)卵形的情形中，優(yōu)選地， 其短直徑近似等于或稍微大于待滅殺的白蟻的卵的短直徑。例如，當(dāng)長(zhǎng)卵 形白蟻卵的短直徑為約0.25至約0.45毫米時(shí)，白蟻的長(zhǎng)卵形模擬卵的短 直徑可以為約0.25至約0.6毫米，優(yōu)選約0.4至約0.55毫米，并且進(jìn)一步 優(yōu)選約0.45毫米。而且，在白蟻的球形模擬卵的情形'中，優(yōu)選地，其直徑 近似等于或稍微大于待滅殺的白蟻的卵的短直徑。例如，當(dāng)球形白蟻卵的 短直徑為約0.25至約0.45毫米時(shí)，白蟻的球形模擬卵的直徑可以為約0.25 至約0.6毫米，優(yōu)選約0.4至約0.6毫米，并且進(jìn)一步優(yōu)選約0.45至約0.55 毫米。從容易形成的觀點(diǎn)考慮，球形模擬卵是優(yōu)選的。必要的是，本發(fā)明的模擬卵不僅物理性質(zhì)如上述形狀和尺寸以 及重量或硬度，而且化學(xué)性質(zhì)，特別是卵識(shí)別信息素，都與害蟲的天然卵 的那些相同或類似。艮P，必要的是，當(dāng)模擬卵的基質(zhì)包含溶菌酶、其生物 學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽時(shí)，這些物質(zhì)存在于基質(zhì)的表面上。本發(fā)明的模擬卵的基質(zhì)可以是可以制備具有與害蟲的天然卵的形狀和特征類似的形狀和特征的模擬卵的任意材料。優(yōu)選用于制備本發(fā)明 的模擬卵的基質(zhì)包括熱塑性樹脂如聚乙烯，聚丙烯，聚苯乙烯，聚酯， 聚氯乙烯和聚碳酸酯，熱固性樹脂如尿素樹脂，環(huán)氧樹脂，酚樹脂和聚氨 基甲酸酯，多孔材料如硅膠和沸石、陶瓷、玻璃等?；|(zhì)包含溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽，以及 活性成分，并且由此制備本發(fā)明的模擬卵。許多用于制備包含在基質(zhì)中的 這些物質(zhì)的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的。可以將這些物質(zhì)在制備基 質(zhì)中混合在其中，或可以將這些物質(zhì)在制備基質(zhì)以后包含在基質(zhì)中。例如，
可以將這些物質(zhì)在制備基質(zhì)中混合或揉和(knead)在其中，或可以用這 些物質(zhì)覆蓋、浸漬、涂敷或噴射(splay)所制備的基質(zhì)。而且，由于用于將 蛋白、多肽、或肽固定到固體支持物的方法是己知的，因此可以將這些方 法應(yīng)用于此。固定方法包括吸附法、共價(jià)鍵法、離子鍵法、包囊法等。對(duì)本發(fā)明的模擬卵的基質(zhì)施用的溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、 或溶菌酶-相關(guān)肽的量可以容易地由本領(lǐng)域的技術(shù)人員確定，這取決于多種 因素，諸如害蟲的物種(來源有機(jī)體)、物理化學(xué)性質(zhì)等、類型，活性物質(zhì) 的種類和量、以及期望效果的種類和程度(參見，例如，本申請(qǐng)的實(shí)施例)。優(yōu)選地，使得基質(zhì)包含溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽的模式的具體實(shí)施方案包括表面涂敷模式、基質(zhì)添加模式、和膠囊 溶解模式等。在表面涂敷模式的一個(gè)實(shí)施例中，將活性成分涂敷到基質(zhì)的 表面上，并且將溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽涂敷于其上。 在基質(zhì)添加模式的一個(gè)實(shí)施例中，在其中混合有活性成分的基質(zhì)的表面 上，涂敷溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽。在膠囊溶解模式 的一個(gè)實(shí)施例中，將膜形基質(zhì)成形為膠囊形基質(zhì)，并且將活性成分密封在 其中，并且在基質(zhì)的表面上涂敷溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽。可以用于本發(fā)明的模擬卵和滅殺方法的活性物質(zhì)可以是可以實(shí) 現(xiàn)害蟲的滅殺或防治的任意物質(zhì)。例如，活性物質(zhì)可以擾亂害蟲的行為， 并且因而導(dǎo)致群體的破壞。適于滅殺或防治害蟲的活性物質(zhì)包括殺蟲劑成 分、孵化抑制物質(zhì)、繁殖抑制物質(zhì)、或生長(zhǎng)抑制成分?？紤]到多種因素， 諸如活性物質(zhì)的種類或害蟲的種類和期望活性的種類或程度(要對(duì)害蟲給
9予的破壞)，可以選擇可以用于本發(fā)明的模擬卵和方法的活性物質(zhì)的種類和 量。通常，選擇活性物質(zhì)的種類和量，以使得可以對(duì)目標(biāo)害蟲充分施加期 望的作用。然而，還進(jìn)行選擇，以使得害蟲的模擬卵的運(yùn)送率不會(huì)下降， 并且使得通過使用本發(fā)明的模擬卵和方法，對(duì)人和周圍農(nóng)業(yè)動(dòng)物或有益昆 蟲不會(huì)產(chǎn)生不利影響。可以將一種或兩種以上的活性成分用于本發(fā)明的模擬卵和滅殺 方法?？梢允褂脷⑾x劑成分，諸如擬除蟲菊酯化合物、有機(jī)磷化合物、氨
基甲酸酯化合物、N-芳基二唑化合物、腙化合物、氨磺酰化合物或天然殺
蟲劑成分。另外，可以將昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑如殼多糖合成抑制劑、保幼激素 -樣活性化合物和蛻皮激素-樣活性化合物用作活性成分。不用說，可以用 于本發(fā)明的活性成分不限于以上化合物。在本發(fā)明的模擬卵中，優(yōu)選地，活性成分是緩慢作用的。如上 所述，害蟲如白蟻?zhàn)R別這樣的模擬卵并且將模擬卵運(yùn)送到巢中的它們的卵 塊中，所述模擬卵具有與天然卵類似的尺寸和形狀，并且在其表面中包含 卵識(shí)別信息素。害蟲通過護(hù)理行為例如舔舐模擬卵的表面攝取活性成分。 當(dāng)群體的一些個(gè)體攝取活性成分時(shí)，活性成分通過經(jīng)由口道食物和肛道食 物的高頻交哺而遍及整個(gè)群體。因此，用于本發(fā)明的優(yōu)選活性成分不在運(yùn) 送模擬卵時(shí)，或在害蟲攝取以后即刻發(fā)揮作用?；騼?yōu)選的活性成分，以不 影響行為如模擬卵運(yùn)送或交哺的程度發(fā)揮作用，且在將模擬卵運(yùn)送到巢中 并且在許多個(gè)體之前進(jìn)行交哺以后發(fā)揮作用。通過使用這種緩慢作用的活 性成分，可以有效滅殺目標(biāo)群體中的許多個(gè)體，并且活性成分的用量小。 因此，對(duì)其它生態(tài)系統(tǒng)的影響小?？梢杂糜诒景l(fā)明的模擬卵的緩慢作用的 活性成分不僅包括緩慢作用的殺蟲劑成分如伏蟻腙(hydramethylnon)，還包
括緩慢作用的孵化抑制成分、緩慢作用的繁殖抑制成分、以及緩慢作用的 生長(zhǎng)抑制成分，但不僅限于此。在本發(fā)明的模擬卵中，還優(yōu)選的是，基質(zhì)由持續(xù)釋放材料制成。 其基質(zhì)由持續(xù)釋放材料制成的模擬卵是優(yōu)選的，且由此，模擬卵被運(yùn)送到 巢中，然后活性物質(zhì)逐漸釋放并被害蟲攝取。這種模擬卵包括由可被害蟲 的唾液降解的材料制成的卵。優(yōu)選地，活性成份包含在基質(zhì)內(nèi)部(通過混入、 混合、填充等)。模擬卵被運(yùn)送到巢中，然后基質(zhì)被害蟲的唾液降解。由此釋放內(nèi)部活性成分。特別地，在以上基質(zhì)的添加模式或膠囊溶解模式等中， 優(yōu)選使用可以被害蟲的唾液降解的基質(zhì)。可以被害蟲的唾液降解的基質(zhì)的 材料可以取決于害蟲的唾液中的消化酶的種類而選擇。例如，當(dāng)在害蟲的 唾液中包含纖維素酶時(shí)，可以使用由纖維素材料制成的基質(zhì)。本發(fā)明的模擬卵的特別優(yōu)選類型是上述膠囊溶解類型。具體地， 將包含溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽的膜形基質(zhì)成形為類 似于實(shí)際卵的形狀(即，成為膠囊形式)，并且將活性成分包含在膠囊內(nèi)。 由此，可以制備本發(fā)明的模擬卵。形成這種膠囊的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人 員是已知的。所述膜的材料的實(shí)例包括氧化物膜和纖維素膜等。優(yōu)選地， 膜形基質(zhì)具有持續(xù)釋放性質(zhì)，并且優(yōu)選使用例如可以被害蟲的唾液降解的
纖維素膜。由這種膠囊密封模式制備的模擬卵還適于在野外(field)滅殺大 的群體。包含由這種持續(xù)釋放材料制成的基質(zhì)的模擬卵，在活性物質(zhì)緩 慢作用的情況下也有效，并且在活性物質(zhì)不緩慢作用的情況下特別有效。還優(yōu)選的是，基質(zhì)中包含甘油和/或纖維素酶，以維持在本發(fā)明 的模擬卵中作為卵識(shí)別信息素的溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽的活性，并且將其保持在基質(zhì)的表面上。不必須使用高度提純的甘 油或纖維素酶?；|(zhì)中甘油或纖維素酶的含量可以取決于多種因素，諸如 待使用的溶菌酶的種類、特征、量等，害蟲的種類，活性物質(zhì)的種類或量， 以及期望效果的種類的程度而確定。而且，還優(yōu)選的是，本發(fā)明的模擬卵的基質(zhì)包含從目標(biāo)害蟲的 卵提取的組分。因此，可以獲得較高的卵運(yùn)送效果?？梢詫碜月训拇痔?取物包含在基質(zhì)中，或可以將提純的提取物包含在基質(zhì)中。基質(zhì)中的粗提 取物或其提純產(chǎn)物的含量可以取決于多種因素，諸如待使用的溶菌酶的種 類、特征、量等，害蟲的種類，以及期望效果的種類和程度而確定。從卵 提取和提純有效成分的方法在本領(lǐng)域中是已知的并且可以使用。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種用于滅殺害蟲的方法，所述 方法包括對(duì)害蟲提供上述模擬卵。通過本發(fā)明的方法滅殺或防治的害蟲可 以是任何害蟲，條件是它們具有卵運(yùn)送本能并且識(shí)別溶菌酶作為卵識(shí)別信 息素。對(duì)其優(yōu)選應(yīng)用本發(fā)明的滅殺方法的害蟲是白蟻。例如，在滅殺白蟻況 下，可以對(duì)保護(hù)膜添加攝取促進(jìn)物質(zhì)如木材提取溶液或腐爛的木材提取溶 液。為了本發(fā)明的害蟲滅殺方法使用監(jiān)控站也是有效的。將通過下列實(shí)施例具體并詳細(xì)地進(jìn)一步描述本發(fā)明，但是實(shí)施
例僅用于示例，并且它們不意在限制本發(fā)明。 實(shí)施例1實(shí)施例1:制備模擬卵和驗(yàn)證溶菌酶的卵識(shí)別活性
通過使用黃胸散白蟻職蟲(職蟲白蟻)，研究白蟻卵提取物、從白蟻卵 提取物提純的溶菌酶、被蛋白酶降解的白蟻卵提取物、卵清溶菌酶、纖維
素酶、卵清溶菌酶和纖維素酶的混合物以及作為對(duì)照的30%的甘油水溶液 的卵識(shí)別活性。各個(gè)測(cè)試樣品制備如下。
將800pL的超純水加入到在Eppendorf管中的400 mg的黃胸散白蟻卵 中，并攪勻，并且進(jìn)行超聲處理5分鐘，并且在15,000 rpm進(jìn)行離心30 分鐘。將上清液凍干，并且將5.0mg凍干的粉末溶解在IOO)liL的30%的甘 油水溶液中(白蟻卵提取物)。將以如上所述同樣方式制備的白蟻卵提取物 通過BioRex 70 (BioRad實(shí)驗(yàn)室，CA, USA)陽(yáng)離子交換樹脂提純，并且進(jìn) 而，通過Q-l柱色譜法(BioRad實(shí)驗(yàn)室，CA, USA)和甲基HIC柱色譜法 (BioRad實(shí)驗(yàn)室，CA, USA)分離溶菌酶組分，并且將l.Omg的其凍干的粉 末溶解在20pL的30%的甘油水溶液中(從白蟻卵提取物分離的溶菌酶)。 將蛋白酶(蛋白酶K, Nacalai Tesque有限公司，京都)添加到以如上所述相 同方式制備的白蟻卵提取物中，并且在37。C處理24小時(shí)(被蛋白酶降解的 白蟻卵提取物)。將2.0 mg的卵清溶菌酶(西格瑪(SIGMA) , St. Louis, MO, 美國(guó))溶解在lOpL的30%的甘油水溶液中(卵清溶菌酶)。將2.0 mg的纖維 素酶(西格瑪(SIGMA) ，St.Louis,MO,美國(guó))溶解在10jaL的30%的甘油水 溶液中(纖維素酶)。將10mg的卵清溶菌酶和10mg的纖維素酶溶解在50pL 的30%的甘油水溶液中(卵清溶菌酶和纖維素酶的混合溶液)。
將2.0)iL各種測(cè)試樣品添加到相等量的100個(gè)各自具有0.5 mm 的直徑的玻璃珠，并且充分混合，并由此將測(cè)試樣品涂敷在玻璃珠的表面 上。將僅涂敷有30%的甘油水溶液的玻璃珠用作對(duì)照。
將10個(gè)白蟻卵和20個(gè)通過以上方法得到的模擬卵隨機(jī)放置在直徑為 30mm的培養(yǎng)皿上，并且將10只黃胸散白蟻的職蟲白蟻(職蟲)放置于其中， 并且容許培養(yǎng)皿在25t:恒溫室中靜置24小時(shí)，然后研究模擬卵進(jìn)入到卵 塊中的運(yùn)送率(對(duì)于每一份測(cè)試樣品，以相同的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn))。對(duì)于每一 個(gè)試驗(yàn)重復(fù)9次實(shí)驗(yàn)。將運(yùn)送率轉(zhuǎn)化成反正弦根，并且通過雙側(cè)T檢驗(yàn)與 對(duì)照進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。在除被蛋白酶降解的白蟻卵提取物和對(duì)照以外的情 況下，職蟲白蟻將分散在培養(yǎng)皿上的卵聚攏以形成卵塊，并且顯示了保育 行為。涂敷有測(cè)試樣品中每一種的模擬卵進(jìn)入到卵塊中的運(yùn)送率顯示在圖 1中。在將涂敷有白蟻卵提取物的模擬卵提供給白蟻的情況下，顯示模擬 卵進(jìn)入到卵塊中的運(yùn)送情況的照片如圖2所示。
實(shí)施例2實(shí)施例2:在野外研究中將模擬卵引入到群體中 將630pL的30%的甘油水溶液加入到63 mg在實(shí)施例1中得到的凍干 的白蟻卵提取物中，并且將溶液加入相等量的31,500個(gè)各自具有0.5 mm 的直徑的玻璃珠中，并且進(jìn)行涂敷。在赤松木材中，通過鉆對(duì)具有黃胸散 白蟻的成熟群體的枯萎并且被筑巢的赤松樹材料鉆孔。將所有的模擬卵分 為5份并且注射到5個(gè)孔中。'在48小時(shí)以后，將筑巢的材料完全粉碎， 并且將全所有卵塊取出，并且研究運(yùn)送到卵塊中的模擬卵的比率。在注射到筑巢的材料中的31,500個(gè)模擬卵中，6，098個(gè)模擬卵存 在于卵塊中。野外48小時(shí)后的模擬卵的引入率為19.35%。模擬卵被運(yùn)送 到此群體中存在的全部60個(gè)卵塊中并且模擬卵的運(yùn)送率為100%，這極高。
實(shí)施例3實(shí)施例3:將攜帶滅殺劑的模擬卵引入到在培養(yǎng)皿中繁殖的群體
中
將相等量的200個(gè)各自具有0.5 mm的直徑的玻璃珠混合到含有10叫 L緩慢作用的殺蟲活性物質(zhì)伏蟻腙和50 |ig/pL白蟻卵提取物的40 pL 的30%的甘油水溶液中，并且進(jìn)行涂敷(每個(gè)珠被涂敷2嗎伏蟻腙和10 jig 白蟻卵提取物)。將所得到的模擬卵用作滅殺劑。將200個(gè)上述模擬卵提供 給在90mm培養(yǎng)皿中繁殖的黃胸散白蟻的職蟲(職蟲白蟻)，并且容許職蟲 進(jìn)行卵運(yùn)送和卵保護(hù)，并且每12小時(shí)研究存活率和運(yùn)送率。以上伏蟻腙量不影響運(yùn)送活性，并且在僅有白蟻卵提取物的情 況下顯示與其相等的高運(yùn)送活性(運(yùn)送率為80%)。職蟲白蟻以與它們的卵 相同的方式照料攜帶滅殺劑的模擬卵，并將伏蟻腙攝取到白蟻體內(nèi)(伏蟻腙 是黃色的，并且由于白蟻的照料，黃色變淺)。在12小時(shí)以后的存活率為 100%，然而，在3天以后，存活率為0%(目卩，IOO只職蟲全部死亡)。從這 些結(jié)果，得出的結(jié)論是，伏蟻腙充分分散在群體中，并且它的功效通過照 料和交哺而發(fā)揮。
工業(yè)適用性本發(fā)明提供害蟲，特別是白蟻的有效滅殺。本發(fā)明可適用于殺 蟲劑生產(chǎn)領(lǐng)域、害蟲滅殺工業(yè)領(lǐng)域、建筑工業(yè)領(lǐng)域、園藝工業(yè)領(lǐng)域等。
1權(quán)利要求
1.一種模擬卵，所述模擬卵在其模擬害蟲的卵的基質(zhì)中包含溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段或溶菌酶-相關(guān)肽作為卵識(shí)別信息素，和活性成分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的模擬卵，其中所述活性成分是選自由殺蟲劑成分、 孵化抑制物質(zhì)、繁殖抑制物質(zhì)、和生長(zhǎng)抑制成分組成的組中的一種或多種 化合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的模擬卵，其中所述活性成分是緩慢作用的。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的模擬卵，其中所述害蟲為白蟻。
5. —種用于滅殺害蟲的方法，所述方法包括對(duì)所述害蟲提供根據(jù)權(quán) 利要求1至4中任一項(xiàng)的模擬卵，和利用卵運(yùn)送行為使所述害蟲將所述模 擬卵運(yùn)送到它們的巢中。
6. 溶菌酶、其鹽或生物學(xué)片段、或溶菌酶-相關(guān)肽作為害蟲的卵識(shí)別 信息素的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供一種模擬卵，所述模擬卵在其模擬害蟲的卵的基質(zhì)中包含溶菌酶、其鹽或生物片段、或溶菌酶-相關(guān)肽，以及活性成分；以及一種使用所述模擬卵的害蟲滅殺方法。
文檔編號(hào)A01N43/54GK101605453SQ200880004600
公開日2009年12月16日 申請(qǐng)日期2008年2月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月15日
發(fā)明者小林憲正, 松浦健二, 田村隆 申請(qǐng)人:國(guó)立大學(xué)法人岡山大學(xué)