專利名稱：一種通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法。
背景技術(shù)：
半夏(P. ternata)是我國特有的一種傳統(tǒng)中藥材，具有燥濕化痰、降逆止 嘔、消痞散結(jié)之功效。但是根據(jù)有關(guān)資料檢測顯示，在我國半夏普遍受到芋花 葉病毒(Dasheen mosaic virus, DsMV)和黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus CMV)的侵染，使病毒在植株中大量積累，抑制植株的正常生長，使其種質(zhì)逐年 衰退，從而嚴(yán)重影響了產(chǎn)量及品質(zhì)的提高。對病毒病的防治，目前缺乏有效的 防治藥劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，它可以獲得品 質(zhì)均一和無病毒侵染的半夏種莖。
本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案 一種通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法， 它采用如下步驟步驟一，取泰半夏塊莖，誘導(dǎo)出的營養(yǎng)芽，塊莖用清水洗凈 在相應(yīng)條件下直接催芽處理；步驟二，切取帶芽塊莖及珠芽用流水沖洗，然后 進(jìn)行外植體消毒；步驟三，取消毒后的帶芽塊莖，無菌條件下，在解剖鏡下分 別剝?nèi)∏o尖分生組織接種于芽的分化培養(yǎng)基；步驟四，接種后于暗培養(yǎng)7d之后 再轉(zhuǎn)入光下進(jìn)行正常培養(yǎng)。
本發(fā)明步驟一中泰半夏塊莖的直徑為l.Ocm。本發(fā)明步驟一中的相應(yīng)條件 為溫度為28士l。C，相對濕度80y。。本發(fā)明步驟二中用流水沖洗的時間為60min。 步驟二中外植體消毒方法為先用75%酒精處理30s,然后用無菌水沖洗3-4次， 0. 1%升汞同時滴加Tween-80至終濃度約0.1%，再振搖10min,無菌水沖洗6-8 次，最后用10y。的H202浸泡6min，無菌水沖洗4-5次。本發(fā)明步驟二中的分化 培養(yǎng)基為以MS為基本的分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件包括溫度、光照，溫度為25'C, 光照度為200-4001x,每天光照16小時。本發(fā)明步驟三中莖尖分生組織的長度 為0.2-O.5mm。本發(fā)明步驟三中的分化培養(yǎng)基釆用MS為基本培養(yǎng)基，添加瓊脂 8 g/L，蔗糖30 g/L,調(diào)整pH值為5. 8， 121X:高壓滅菌20分鐘。本發(fā)明步驟
三中解剖鏡40x。本發(fā)明步驟四中正常培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度1500—20001x，光 照為12h/d,溫度為25士1。C。
釆用了以上技術(shù)方案后，通過組織培養(yǎng)脫除侵染半夏的主要病毒，可以獲 得品質(zhì)均一、無(未檢出)病毒侵染的半夏種莖，這是半夏新的優(yōu)良品種(系)選 育的基礎(chǔ)。本發(fā)明應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)脫毒，既清除植株營養(yǎng)體的病毒，并由已 去除病毒的組織再生出無病毒植株，保證植株的正常生長，提高產(chǎn)量及品質(zhì)， 進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖。
具體實施例方式
本發(fā)明為一種通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，它釆用如下步驟 步驟一，取直徑為l.Ocm泰半夏塊莖，誘導(dǎo)出的營養(yǎng)芽，塊莖用清水洗凈在溫 度為28± rC，相對濕度80%的條件下直接催芽處理；步驟二，切取帶芽塊莖 及珠芽用流水沖洗60min,進(jìn)行外植體消毒，外植體消毒方法為先用75%酒精處 理30s，然后用無菌水沖洗3-4次，0. 1%升汞同時滴加Tween-80至終濃度約 0.1°/。，再振搖10min，無菌水沖洗6-8次，最后用10% HA浸泡6min，無菌水 沖洗4-5次，步驟二中的分化培養(yǎng)基為以MS為基本的分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件包 括溫度、光照，溫度為25。C,光照度為200-4001x，每天光照16小時；步驟三， 取消毒后的帶芽塊莖，無菌條件下，40x解剖鏡下分別剝?nèi)￠L度為0.2-0.5mm 的莖尖分生組織接種于芽分化培養(yǎng)基，分化培養(yǎng)基釆用MS為基本培養(yǎng)基，添加 瓊脂8g/L，蔗糖30g/L,調(diào)整pH值為5.8， 121°C高壓滅菌20分鐘；步驟四， 接種后于暗培養(yǎng)7d之后再轉(zhuǎn)入光下進(jìn)行正常培養(yǎng)，正常培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度為 1500—20001x，光照為12h/d，溫度為25士1。C。
權(quán)利要求
1、一種通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，它采用如下步驟步驟一，取泰半夏塊莖，誘導(dǎo)出的營養(yǎng)芽，塊莖用清水洗凈在相應(yīng)條件下直接催芽處理；步驟二，切取帶芽塊莖及珠芽用流水沖洗，然后進(jìn)行外植體消毒；步驟三，取消毒后的帶芽塊莖，無菌條件下，在解剖鏡下分別剝?nèi)∏o尖分生組織接種于芽的分化培養(yǎng)基；步驟四，接種后于暗培養(yǎng)7d之后再轉(zhuǎn)入光下進(jìn)行正常培養(yǎng)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特征 步驟一中泰半夏塊莖的直徑為l.Ocm。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特征 是所述的步驟一中的相應(yīng)條件為溫度為28土lt:，相對濕度80%。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特征 是所述的步驟二中用流水沖洗的時間為60min。
5、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特征 是所述的步驟二中外植體消毒方法為先用75%酒精處理303，然后用無菌水沖洗 3-4次，0. 1%升汞同時滴加Tween-80至終濃度約0. 1%，再振搖10min，無菌水 沖洗6-8次，最后用10%的&02浸泡6min,無菌水沖洗4-5次。
6、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特征 是所述的步驟二中的分化培養(yǎng)基為以MS為基本的分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件包括溫 度、光照，溫度為25。C，光照度為200-4001x,每天光照16小時。
7、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特征 是所述的步驟三中莖尖分生組織的長度為0. 2-0. 5min。
8、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特征 是步驟三中的分化培養(yǎng)基采用MS為基本培養(yǎng)基，添加瓊脂8g/L,蔗糖30g/L, 調(diào)整pH值為5.8, 121'C高壓滅菌20分鐘。
9、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特征 是步驟三中解剖鏡40x。
10、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，其特 征是步驟四中正常培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度為1500—20001x，光照為12h/d，溫度 為25土1。C。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種通過微莖尖培養(yǎng)獲得半夏脫毒苗的方法，它采用如下步驟步驟一，取泰半夏塊莖，誘導(dǎo)出的營養(yǎng)芽，塊莖用清水洗凈在相應(yīng)條件下直接催芽處理；步驟二，切取帶芽塊莖及珠芽用流水沖洗，然后進(jìn)行外植體消毒；步驟三，取消毒后的帶芽塊莖，無菌條件下，在解剖鏡下分別剝?nèi)∏o尖分生組織接種于芽的分化培養(yǎng)基；步驟四，接種后于暗培養(yǎng)7d之后再轉(zhuǎn)入光下進(jìn)行正常培養(yǎng)。
文檔編號A01H4/00GK101194596SQ20071019182
公開日2008年6月11日 申請日期2007年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月15日
發(fā)明者杰 李 申請人:杰 李