一種檢測茶鮮葉中農(nóng)藥殘留的前處理方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測茶鮮葉中農(nóng)藥殘留的前處理方法，選擇對有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥具有良好吸附性能的分散劑，直接與鮮葉樣品一起混合研磨，使樣品細(xì)胞破碎程度加大，最終均勻分散，得到半干狀態(tài)的混合物并將其作為填料，裝入已預(yù)先填有一定吸附劑和除水劑的層析柱，然后用混配的有機(jī)溶劑洗脫，洗脫液濃縮后可直接進(jìn)行儀器分析。該方法集樣品的提取、凈化于一體，避免了樣品均化、沉淀、離心、轉(zhuǎn)溶、乳化、濃縮等造成的被測物的損失，且操作簡便，回收率高，溶劑消耗量小，分析成本低，是一種綠色環(huán)保的樣品預(yù)處理方法。
【專利說明】一種檢測茶鮮葉中農(nóng)藥殘留的前處理方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品安全檢測領(lǐng)域，具體涉及一種基質(zhì)固相分散檢測茶鮮葉中農(nóng)藥殘留的前處理方法。
【背景技術(shù)】
[0002]茶是公認(rèn)的中國國飲，是國人引以為榮的文化符號。我國已成為世界第一產(chǎn)茶大國，2012年，茶園面積達(dá)到238.5200萬公頃，茶葉產(chǎn)量達(dá)178萬噸，種植面積和產(chǎn)量均居世界首位；2012年茶葉出口 31.3萬噸，創(chuàng)匯突破10億美元。飲茶已成為多數(shù)中國人的一種生活習(xí)慣，茶已成為社會生活中不可缺少的健康飲品和精神飲品。而且，隨著人們健康消費(fèi)觀念的普及，茶正在被越來越多的人接受、喜愛和追求。然而，茶葉出口一直面臨著嚴(yán)重的質(zhì)量與安全方面的非關(guān)稅壁壘，涉及重金屬、農(nóng)藥殘留和微生物等方面。其中，農(nóng)藥殘留問題最為突出，是阻礙我國茶葉出口規(guī)?？焖僭鲩L的主要因素。近年來，歐盟、日本、韓國等不斷實(shí)施新的更為嚴(yán)格的茶葉農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)，加大進(jìn)口農(nóng)副產(chǎn)品的農(nóng)殘監(jiān)測力度，并正式禁止含有化學(xué)活性物質(zhì)的320種農(nóng)藥在境內(nèi)銷售，其中，涉及我國正在生產(chǎn)、使用及銷售的農(nóng)藥有62個(gè)品種，使用這些農(nóng)藥的農(nóng)產(chǎn)品在出口上述地區(qū)時(shí)，頻遭退貨或銷毀。
[0003]因此，我國衛(wèi)生部與農(nóng)業(yè)部聯(lián)合發(fā)布了食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》GB2763-2012,于2013年3月I日正式實(shí)施，該標(biāo)準(zhǔn)替代了 "GB2763-2005"等10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，所涉及的農(nóng)藥品種由原來的136種增加為322種，茶葉中的農(nóng)殘限量由原先的19項(xiàng)增加到25項(xiàng)。
[0004]目前，國內(nèi)外的研究多聚焦于商品茶葉，或者速溶茶、茶葉提取物等深加工產(chǎn)品，而較少研究茶鮮葉中的農(nóng)藥殘留問題。有研究表明，茶葉的加工過程并不會造成鮮葉中殘留農(nóng)藥的大幅降解或損失，茶樹鮮葉作為成品茶的加工原料，其農(nóng)藥殘留量將直接影響茶葉及其深加工產(chǎn)品的農(nóng)殘超標(biāo)問題。茶鮮葉中農(nóng)藥殘留水平，可作為茶園是否可以開采的質(zhì)量安全指標(biāo)，對于降低我國茶葉農(nóng)藥殘留水平具有重要的實(shí)際意義。因此，建立茶鮮葉中農(nóng)殘的便捷、高效、價(jià)廉、環(huán)保的檢測方法，有利于相關(guān)企業(yè)從源頭上控制產(chǎn)品的質(zhì)量，把握原材料的品質(zhì)，減少產(chǎn)品的農(nóng)殘超標(biāo)所造成的損失。
[0005]茶鮮葉內(nèi)含多酚、氨基酸、生物堿、糖類、蛋白質(zhì)、色素等多種不同屬性的有機(jī)組分，分析中所要檢測的農(nóng)藥殘留組分往往含量極低，可能還有多種組分共存，所以，如何進(jìn)行有效的樣品預(yù)處理，從鮮葉中富集痕量甚至是超痕量的目標(biāo)組分往往成為有效檢測的關(guān)鍵，也是目前分析測試工作的瓶頸和國內(nèi)外研究的薄弱環(huán)節(jié)。經(jīng)典的索氏提取、液液萃取等樣品預(yù)處理方法，步驟繁瑣，不僅耗時(shí)，消耗大量有機(jī)溶劑，且萃取效率較低。同樣，現(xiàn)行的GB/T23205-2008和GB/T23204-2008國標(biāo)方法，是針對成品茶葉而言的，同時(shí)測定其中的448種和519種農(nóng)殘，其均采用乙腈高速勻漿提取-固相萃取小柱凈化的方法，也存在如下問題:1、復(fù)雜耗時(shí)，一般需要3.0?3.5小時(shí)；2、成本高，凈化過程中所使用的固相萃取小柱價(jià)格昂貴(100?120元/支)，且只能一次性使用；3、預(yù)處理過程中有毒有害的有機(jī)溶劑消耗較多(80?120暈升),對環(huán)境和分析人員造成危害。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是針對茶鮮葉樣品預(yù)處理，提供一種便捷、高效、價(jià)廉、環(huán)保的基質(zhì)固相分散方法，用于茶鮮葉中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供一種檢測茶鮮葉中農(nóng)藥殘留的前處理方法，所述方法包括如下步驟:
[0008]I)在玻璃層析柱中依次預(yù)填吸附劑和除水劑，備用；
[0009]2)將茶鮮葉洗凈、打碎、混勻，制成待測樣品，稱取茶鮮葉待測樣品于玻璃研缽中，加入分散劑充分研磨，使待測樣品均勻分散在佛羅里硅土中，后將研磨混合物轉(zhuǎn)移至步驟O的層析柱；所述分散劑為60-100目佛羅里硅土 ；
[0010]3)輕敲玻璃層析柱外壁使分散劑填實(shí)，再填入無水硫酸鈉；
[0011]4)向玻璃層析柱中加入正己烷和丙酮混配溶劑洗脫，所述混配溶劑的混配體積比為正己烷:丙酮=9:1 ;收集洗脫液后濃縮至<0.5毫升，目的是極大程度濃縮洗脫液中的農(nóng)藥以便儀器檢出，以正己烷定容至1.0毫升后，過0.45 μ m有機(jī)系濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析檢測。
[0012]作為優(yōu)選，所述吸附劑為60-100目的佛羅里硅土 ；所述除水劑為無水硫酸鈉。
[0013]進(jìn)一步地，所述農(nóng)藥殘留指茶鮮葉中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留。
[0014]進(jìn)一步地，所述方法具體為:
[0015]I)在玻璃層析柱下端依次預(yù)填3.0克佛羅里硅土和I厘米高的無水硫酸鈉；
[0016]2)將茶鮮葉洗凈、打碎、混勻，準(zhǔn)確稱取1.0克于玻璃研缽中，加入60-100目佛羅里硅土 4.0克，充分研磨，使待測樣品均勻分散在佛羅里硅土中，將研磨混合物轉(zhuǎn)移至玻璃層析柱；
[0017]3)輕敲玻璃層析柱外壁使研磨混合物填實(shí)，再填入I厘米高的無水硫酸鈉；
[0018]4)向玻璃層析柱中加入20毫升正己烷和丙酮混配溶劑洗脫，收集洗脫液后濃縮至< 0.5毫升，以正己烷定容至1.0毫升，過0.45 μ m有機(jī)系濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析檢測。
[0019]作為優(yōu)選，所述玻璃層析柱為內(nèi)徑I厘米X高30厘米。
[0020]前述方法中，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析檢測的色譜條件為:色譜柱:DB_5(5%Phenyl Methyl Siloxane, 30 米 X 0.25 毫米 X 0.25 微米);進(jìn)樣 口溫度:290 攝氏度；檢測器溫度:300攝氏度；升溫程序:起始溫度40攝氏度(保持1.0分鐘)，以30攝氏度/分鐘的速率升溫至130攝氏度，再以5攝氏度/分鐘的速率升溫至300攝氏度(保持5.0分鐘)；進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣；載氣:高純氦氣(99.999%);柱流量:1.0毫升/分鐘；隔墊吹掃流量:3.0暈升/分鐘；進(jìn)樣量:1微升；進(jìn)樣時(shí)間:1.5分鐘；定量方法:外標(biāo)法。
[0021]前述方法中，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析檢測的質(zhì)譜條件為:離子化方式:電子轟擊離子源；離子源溫度:230攝氏度；接口溫度:280攝氏度；掃描方式:選擇離子監(jiān)測(SIM)方式；溶劑切除時(shí)間4.0分鐘；檢測器電壓1.0千伏；掃描時(shí)間4.5?43.0分鐘；掃描范圍:50?650m/z。
[0022]本發(fā)明還提供了前述方法在快速檢測茶鮮葉中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量中的應(yīng)用。
[0023]本發(fā)明的有益效果在于:
[0024]1、本發(fā)明方法預(yù)處理過程比較簡單，集提取、凈化于一體，大大縮短了分析時(shí)間。
[0025]2、本發(fā)明方法相對于其他方法，尤其是國標(biāo)方法，本方法消耗的溶劑量大大減少(需要20毫升)，對環(huán)境更加友好，是一種綠色環(huán)保的樣品預(yù)處理方法。
[0026]3、本發(fā)明方法除洗脫溶劑之外的耗材，僅僅用到了少量的佛羅里硅土分散劑(7.0克)和無水硫酸鈉除水劑(共2厘米高)，有效排除鮮葉的復(fù)雜基質(zhì)干擾，且減小分析成本，經(jīng)濟(jì)、實(shí)用。
[0027]4、本發(fā)明方法避免了樣品均化、沉淀、離心、轉(zhuǎn)溶、乳化、濃縮等造成的被測物的損失，且操作簡便，提取效率高，加標(biāo)回收率高，減少了被測目標(biāo)化合物的損失，且回收率結(jié)果之間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小。
[0028]因此，本發(fā)明方法便捷、高效、價(jià)廉、環(huán)保，且準(zhǔn)確度好，精密度高，易于重復(fù)，適合于茶鮮葉樣品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的測定，具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值和社會意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029]圖1為本發(fā)明所述茶鮮葉樣品前處理方法的操作流程圖；
[0030]圖2為本發(fā)明所述7種有機(jī)氯農(nóng)藥和7種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器檢測的總離子流色譜圖(TIC)，其中標(biāo)記I?14的色譜峰依次對應(yīng)的農(nóng)藥目標(biāo)物為:1.Ct-六六六；2.β-六六六；3.Y-六六六；4.δ-六六六；5.β -硫丹；6.p，p' -DDD ；
7.p，p' -DDT ；8.甲氰菊酯；9.聯(lián)苯菊酯；10.三氟氯氰菊酯；11.氟氯氰菊酯；12.氯氰菊酷;13.氛戍菊酷；14.漠氛菊酷。
【具體實(shí)施方式】
[0031]以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0032]實(shí)施例1測定茶鮮葉中的7種有機(jī)氯農(nóng)藥和7種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量
[0033]將茶鮮葉洗凈、打碎、混勻，準(zhǔn)確稱取1.0克于玻璃研缽中，按照圖1所示，首先加入4.0克佛羅里硅土(60-100目)，充分研磨，使待測樣品均勻分散在佛羅里硅土中，再用小鏟將研磨混合物轉(zhuǎn)移至玻璃層析柱(內(nèi)徑I厘米X高30厘米)，如圖1所示，柱子下端依次預(yù)先填入3.0克佛羅里硅土(60-100目)和I厘米高的無水硫酸鈉，輕敲柱子外壁使研磨混合物填實(shí)，再填入I厘米高的無水硫酸鈉，以20毫升正己烷:丙酮(9:1，V:V)洗脫，收集洗脫液后濃縮至< 0.5毫升，以正己烷定容至1.0毫升，過0.45 μ m有機(jī)系濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測。
[0034]色譜條件:色譜柱:DB_5(5%Phenyl Methyl Siloxane, 30 米 X 0.25 毫米 X 0.25微米)；進(jìn)樣口溫度:290攝氏度；檢測器溫度:300攝氏度；升溫程序:起始溫度40攝氏度(保持1.0分鐘)，以30攝氏度/分鐘的速率升溫至130攝氏度，再以5攝氏度/分鐘的速率升溫至300攝氏度(保持5.0分鐘)；進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣；載氣:高純氦氣(99.999%);柱流量:1.0暈升/分鐘；隔墊吹掃流量:3.0暈升/分鐘；進(jìn)樣量:1微升；進(jìn)樣時(shí)間:1.5分鐘；定量方法:外標(biāo)法。[0035]質(zhì)譜條件:離子化方式:電子轟擊離子源；離子源溫度:230攝氏度；接口溫度:280攝氏度；掃描方式:選擇離子監(jiān)測(SIM)方式；溶劑切除時(shí)間4.0分鐘；檢測器電壓1.0千伏；掃描時(shí)間4.5~43.0分鐘；掃描范圍:50~650m/z。
[0036]各農(nóng)藥目標(biāo)物的相對保留時(shí)間、定性離子、定量離子見表1，其氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器檢測的總離子流色譜圖(TIC)見圖2，表1中的序號I~14號農(nóng)藥目標(biāo)物依次對應(yīng)于圖2中I~14號標(biāo)記的色譜峰。
[0037]表17種有機(jī)氯農(nóng)藥和7種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的相對保留時(shí)間、定性離子、定量離子
[0038]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測茶鮮葉中農(nóng)藥殘留的前處理方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: 1)在玻璃層析柱中依次預(yù)填吸附劑和除水劑，備用； 2)將茶鮮葉洗凈、打碎、混勻，制成待測樣品，稱取茶鮮葉待測樣品于玻璃研缽中，加入分散劑充分研磨，使待測樣品均勻分散在分散劑中，后將研磨混合物轉(zhuǎn)移至步驟I)的層析柱； 所述分散劑為60-100目佛羅里硅土 ； 3)輕敲玻璃層析柱外壁使研磨混合物填實(shí)，再填入無水硫酸鈉； 4)向玻璃層析柱中加入正己烷和丙酮混配溶劑洗脫，所述混配溶劑的混配體積比為正己烷:丙酮=9:1 ;收集洗脫液后濃縮至< 0.5毫升，以正己烷定容至1.0毫升后，過0.45 μ m有機(jī)系濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述吸附劑為60-100目佛羅里硅土。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述除水劑為無水硫酸鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具體為: 1)在玻璃層析柱下端依次預(yù)填3.0克佛羅里硅土和I厘米高的無水硫酸鈉； 2)將茶鮮葉洗凈、打碎、混勻，準(zhǔn)確稱取1.0克于玻璃研缽中，加入60-100目佛羅里硅土 4.0克，充分研磨，使待測樣品均勻分散在佛羅里硅土中，將研磨混合物轉(zhuǎn)移至玻璃層析柱； 3)輕敲玻璃層析柱外壁使研磨混合物填實(shí)，再填入I厘米高的無水硫酸鈉； 4)向玻璃層析柱中加入20毫升正己烷和丙酮混配溶劑洗脫，收集洗脫液后濃縮至< 0.5毫升，以正己烷定容至1.0毫升，過0.45 μ m有機(jī)系濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析檢測。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述玻璃層析柱為內(nèi)徑I厘米X高30厘米。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述農(nóng)藥為有機(jī)氯或擬除蟲菊酯類農(nóng)藥。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析檢測的色譜條件為:色譜柱:DB_5 (5%Phenyl Methyl Siloxane, 30 米 Χ0.25 毫米 X 0.25 微米);進(jìn)樣口溫度:290攝氏度；檢測器溫度:300攝氏度；升溫程序:起始溫度40攝氏度(保持1.0分鐘)，以30攝氏度/分鐘的速率升溫至130攝氏度，再以5攝氏度/分鐘的速率升溫至300攝氏度(保持5.0分鐘)；進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣；載氣:高純氦氣(99.999%);柱流量:1.0毫升/分鐘；隔墊吹掃流量:3.0暈升/分鐘；進(jìn)樣量:1微升；進(jìn)樣時(shí)間:1.5分鐘；定量方法:外標(biāo)法。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析檢測的質(zhì)譜條件為:離子化方式:電子轟擊離子源；離子源溫度:230攝氏度；接口溫度:280攝氏度；掃描方式:選擇離子監(jiān)測(SIM)方式；溶劑切除時(shí)間4.0分鐘；檢測器電壓1.0千伏；掃描時(shí)間4.5?43.0分鐘；掃描范圍:50?650m/z。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的方法在快速檢測茶鮮葉中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N30/06GK103869025SQ201410050196
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年2月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月13日
【發(fā)明者】譚君, 劉仲華, 黃建安 申請人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)