專利名稱：一種測定樹莓中鞣花酸物質(zhì)含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種樹莓中鞣花酸物質(zhì)含量的測定方法，具體的講就是利 用紫外吸收光譜掃描，確定鞣花酸物質(zhì)的最大吸收峰，然后根據(jù)鞣花酸濃度與吸光度之間 的線性關(guān)系來計算樹莓中鞣花酸物質(zhì)的含量。
背景技術(shù)：
鞣花酸是廣泛存在于各種水果、堅果等植物組織中的一種帶苯環(huán)的天 然酚類化合物，是沒食子酸的二聚衍生物，它不僅以游離的形式存在，而且更多的是以縮合 形式(以鞣花單寧或苷等)存在于自然界。據(jù)資料顯示，紅樹莓——"第三代水果"是當(dāng)今 發(fā)現(xiàn)的天然鞣花酸含量最高的食物，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了核桃和越橘等，并且美國明尼蘇達(dá)大學(xué)和 南卡羅來納醫(yī)科大學(xué)賀嶺斯癌癥中心研究證實，紅樹莓中含有大量的鞣花酸，可有效抵抗 致癌癥物質(zhì)和致有機突變的物質(zhì)。 鞣花酸的測定方法很多，主要有紙色譜分析，高效液相色譜分析(HPLC)，質(zhì)譜分析 等，其中，紙色譜分析方法操作簡單，方便，但數(shù)據(jù)不夠精確、穩(wěn)定；HPLC法和質(zhì)譜分析法雖 數(shù)據(jù)可靠，但測定耗費昂貴，普及率不高。因此，在食品加工中，采用光學(xué)分析法來測定鞣花 酸物質(zhì)的含量，不僅方法便捷，數(shù)據(jù)可靠，而且容易普及。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的問題是提供一種樹莓中鞣花酸物質(zhì)含量的測定方 法，這種方法準(zhǔn)確性高，操作性強，易推廣普及。 本發(fā)明提供的技術(shù)方案是將樹莓中鞣花酸物質(zhì)提取出來得鞣花酸提取物，然后 比色法測定其含量。其特征在于常溫萃取，經(jīng)濃縮，得供試液。所述的樹莓中鞣花酸物質(zhì)的 提取方法是用有機溶劑分三次萃取，合并萃取相。 本發(fā)明的特征在于以甲醇為顯色劑，取供試液lml以甲醇定容稀釋，搖勻。本發(fā)明的特征在于經(jīng)230nm-380nm紫外吸收光譜掃描得鞣花酸物質(zhì)的最大吸收
波長為254nm。 本發(fā)明能檢測樹莓中鞣花酸物質(zhì)的含量，方法穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，方法靈敏度為
0. 121/ug，最低檢測限為0. 25ug，加樣回收率為99. 3%。


圖1.鞣花酸和甲醇混合液的吸收曲線 圖2.鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)曲線 圖3.鞣花酸物質(zhì)含量與吸光度關(guān)系曲線
具體實施方法 以下實施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對本發(fā)明的限制。 以下實施例所采用的試劑為分析純，儀器為UV762-紫外可見分光光度計。鞣花 酸_甲醇測定溶液準(zhǔn)確吸取鞣花酸濃縮液lml，于甲醇中搖勻得供試液；以無水甲醇作為 空白對照。 實施例1 :最大吸收波長的測定標(biāo)準(zhǔn)溶液配制精密稱取鞣花酸對照品0. 0068g，用無水甲醇溶解定容至25ml。
精確吸取鞣花酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液lml，于甲醇中定容至50ml，以無水甲醇作為空白對 照，于紫外光譜230nm 380nm范圍掃描，在254nm測得最大吸收光度值，吸收曲線見附圖1。
實施例2 :鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0. 1、0. 2、0. 5、1. 0、1. 5、2. Oml于50ml容量瓶內(nèi)，以無水甲醇 稀釋定容。用紫外可見分光光度計于254nm處分別測吸光度值A(chǔ)。鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)曲線見附圖 2，計算得線性回歸方程為:y = 120. 96x-0. 0203及相關(guān)系數(shù)R2 = 0. 9994。
實施例3 :樹莓樣品測定 精密稱取樹莓汁20ml，用等量的乙酸乙酯常溫下萃取三次，合并溶劑相，經(jīng)薄膜蒸 發(fā)器濃縮得供試液。精密吸取濃縮液lml，以無水甲醇稀釋定容至250ml，搖勻；以無水甲醇 為空白對照，用紫外可見分光光度計254nm處測得吸光度值A(chǔ)。通過線性回歸方程，用下述 式(1)算得試樣中鞣花酸物質(zhì)的含量X。結(jié)果為
CX50X250X 1(T3 Y=--X訓(xùn)式1



5Xm/V
式1)中X—試樣中鞣花酸物質(zhì)的含量(mg/100g); C——經(jīng)回歸方程計算的試樣濃度(ug/ml); -試樣質(zhì)量(g)或體積(ml)。
m國
:常溫萃取三
實施例4 :回收率試驗
精密吸取樹莓20g，精密加入鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0. 8mg，以乙酸乙酯等 次，合并溶劑相，經(jīng)旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器濃縮。 精密稱取lml濃縮液作為供試液，加無水甲醇定容至250ml，搖勻，以無水甲醇為 空白對照，用紫外可見分光光度計在254nm處測吸光度值A(chǔ)，見表1。
表l.回收率試驗結(jié)果
取樣量取樣量相當(dāng)加入鞣吸光鞣花酸總鞣花鞣花酸回收率
(tng)于鞣花酸量花酸量含量酸量量(mg)(90
(mg)(mg)A(mg)(mg)
20. 00. 84060. 80. 7720. 00661. 6380. 797499. 68
19. 80. 83220. 80, 7650. 00651. 6240.791898. 98
19. 60. 82380. 80. 7590. 00641. 6100. 786298. 28
19. 60. 82380. 80. 7610. 00651. 6150. 791298. 90
19. 90. 83640. 80. 7690. 0065I. 6310. 794799. 34 注平均回收率=99. 03% ;RSD = 0. 53%。
實施例5:線性范圍試驗 精密吸取鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0. lml 3. Oml于50ml容量瓶中，無水甲醇定容搖勻， 同時作一空白。用紫外可見分光光度計254nm處測吸光度值A(chǔ)，測定結(jié)果見附圖3。由附圖 3可知，在濃度0. 5ug/ml 13ug/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
4
實施例6 :靈敏度試驗 實際工作中，靈敏度常以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率表示。由附圖3計算得靈敏度即曲線的
斜率為0. 121/ug。 實施例7:檢出限試驗 本發(fā)明以無水甲醇為參比，測量空白值10次，測量結(jié)果見表2。多次測量空白值的 標(biāo)準(zhǔn)差Sb = 0. OlOl，檢出限"0. 25ug。
表2. IO次空白測定結(jié)果
;欠 123456789 10
數(shù)___
9 92 61 29 47 39713 91 18 從實施例5 7以甲醇為顯色劑，標(biāo)準(zhǔn)鞣花酸為對照品，比色法測定樹莓中鞣花酸 物質(zhì)含量的方法，具有靈敏度高，檢出限低，線性關(guān)系良好和顯色穩(wěn)定的優(yōu)點。
權(quán)利要求
一種樹莓鞣花酸的測定方法，將樹莓中的鞣花酸用乙酸乙酯有機溶劑萃取出來，用甲醇稀釋到一定濃度，測定樣品吸光度值；根據(jù)鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品所作標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品的鞣花酸濃度。
2. 根據(jù)權(quán)利要求書1所述的測定方法，其特征是萃取樹莓鞣花酸溶劑為乙酸乙酯，萃取溫度為常溫。
3. 根據(jù)權(quán)利要求書1所述的測定方法，其特征是鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品與其相對應(yīng)的吸光度值的線性關(guān)系圖的適用濃度范圍在0ug/ml 18ug/ml，吸光度值范圍在0 2. 5。
4. 根據(jù)權(quán)利要求書1所述的測定方法，其特征是紫外光譜掃描時所用溶劑為甲醇。
全文摘要
一種樹莓鞣花酸的測定方法，采用紫外光譜掃描鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，確定鞣花酸的最大吸收峰及測定溶劑甲醇，確定并驗證在一定濃度范圍內(nèi)鞣花酸含量與吸光度之間的線性關(guān)系；然后利用有機溶劑乙酸乙酯將樹莓中的鞣花酸成分提取出來，采用紫外吸收法測定鞣花酸的含量。該方法所測定鞣花酸的濃度范圍在0ug/ml~18ug/ml，檢測限≈0.25ug，實現(xiàn)了操作簡捷，數(shù)據(jù)可靠，快速高效，低成本的測定。
文檔編號G01N21/31GK101718690SQ20091022914
公開日2010年6月2日 申請日期2009年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月11日
發(fā)明者劉建華, 張志軍, 李淑芳, 楊麗維, 羅瑩, 魏雪生 申請人:天津市林業(yè)果樹研究所