專利名稱：棉花中噻苯隆和敵草隆及其代謝物的殘留量測定方法
棉花中噻苯隆和敵草隆及其代謝物的殘留量測定方法術領域本發(fā)明屬于棉花中農藥殘留量的測定技術領域，涉及棉花中噻苯隆和敵草隆及其 代謝物的殘留量測定方法。
背景技術：
植物的生長發(fā)育過程受外界環(huán)境條件，如水分、陽光、棉花、溫度等的影響和內部 遺傳因素的控制，而調節(jié)控制植物生理活動的是某些代謝物質，即植物激素。植物激素的發(fā) 現(xiàn)，是生物學領域中的巨大進步。它推動了 “化學調控”在農業(yè)中的應用，使人們有可能通 過化學調控而改變植物生長、發(fā)育的固有模式。研究植物激素的目的，不僅是為了揭示其在 調節(jié)植物生長發(fā)育過程中的作用機制及調節(jié)控制的規(guī)律性，更重要的是探索植物生長物質 的應用技術，使之能按生產需要，調控植物的生長發(fā)育，提高作物的品質與產量。目前化學 調控技術，已在農、林、牧、園藝、花卉、育種、栽培管理、提高植物抗性等領域中廣泛應用，并 取得了一定的效果，受到了生物、化工科技工作者與栽培、育種工作者的重視。在某些情況 下，合理地應用植物生長物質的生產效果甚至比栽培與育種快得多。噻苯隆(thidiazuron)化學名稱1_苯基_3_(1，2，3_噻二唑_5_基)脲，是一種 植物生長調節(jié)劑，在棉花種植上做落葉劑使用。敵草隆(Diuron)化學名稱N-3，4-二氯苯 基-N’，N’ - 二甲基脲為內吸傳導型廣譜除草劑，屬于內吸型除草劑，能夠抑制作物光合作 用，用于防除非耕作區(qū)一般雜草。主要用于棉花、玉米、高梁、甘蔗、水稻、茶園、果園、葡萄園 以及非耕地。其測定方法有液相方法、氣相方法等。申請?zhí)?00710022396公開了一種去除 水中除草劑敵草隆的方法，它是采用介質阻擋放電方法對含除草劑敵草隆的水進行處理， 將水體中的敵草隆降解；將污染物降解為二氧化碳、水和簡單有機物，反應條件溫和，可控 制性較強，反應器設備及其操作比較簡單。其他有關敵噻苯隆和敵草隆及其代謝物(DCPU， DCPMU)的殘留量在棉花中的殘留檢測分析，目前國內并未見公開報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明通過棉花中的噻苯隆和敵草隆及其代謝物添加回收率研究，采用液相色譜 法，建立簡捷可行的棉花中苯隆和敵草隆及其代謝物殘留分析方法。具體是使用有機溶劑 對棉花中噻苯隆及其代謝物、敵草隆及其代謝物進行提取，然后在提取液中加入氯化鈉，通 過液液分配分離出有機溶劑層，并利用旋轉蒸發(fā)將分離出的有機溶劑層完全濃縮至干，利 用固相萃取法去除提取液中干擾物質，最后采用液相色譜法進行檢測方法的研究。為實現(xiàn) 上述目的，本發(fā)明提供如下的技術方案棉花中噻苯隆和敵草隆及其代謝物的殘留量測定方法，按如下的步驟進行(1)提取稱取樣品20. 0g，置于具塞錐形瓶中，加入50-80mL乙腈，10_20mL蒸餾 水，在振蕩器上振蕩提取60-100min，濾液置于500mL分液漏斗中，加入6. O-IOg氯化鈉，振 蕩2-5min，靜止分層，收集上層有機相，經無水硫酸鈉脫水，在40°C水浴下減壓濃縮近干， 氮氣吹干，加入10-20mL乙酸乙酯，待凈化；
(2)凈化采用C18柱，5mL乙酸乙酯預淋，上樣，IOmL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液， 在40°C水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，甲醇2mL定容，濾膜過濾。(3)測定采用DAD檢測器測定，其中流動相甲醇/水，50/50 (V/V)流速0. 5mL/ min 色譜柱父08-(18，1.8“111，4.6\50讓，進樣5yL，柱溫40°C波長0_4min 290nm，4min 后 254nm。本發(fā)明所述的敵草隆及其代謝物為敵草隆(diUron)3-(3， 4-dichlorophenyl)-l, 1-dimethylurea 及其可轉化為 3，4-dichloroaniline 的代謝物。本發(fā)明所述的噻苯隆(thidiazuron)及其代謝物為噻苯隆及其含代謝物的苯胺。棉花中噻苯隆和敵草隆及其代謝物的殘留量的具體測定方法如下一、試劑與儀器Agilent 1200液相色譜儀，BUCHI旋轉蒸發(fā)器，HZQ-C空氣浴振蕩器，IKA勻漿機 乙腈(分析純，重蒸)，乙酸乙酯(分析純，重蒸)，無水硫酸鈉，氯化鈉(分析純)，甲醇(色 譜純)標樣噻苯隆(98. 3 % )，噻苯隆代謝物thidiazolylurea(90. 0% )，敵草隆 (99. 6% )，敵草隆代謝物 DCPU(99. 5% ), DCPMU(99. 0% )混合農藥標準儲備液分別準確稱取以上農藥標準品，以甲醇為溶劑，配制成質量 濃度均為20mg · L—1的混合標準儲備液，于冰箱中保存。二、樣品的制備1、前處理過程提取稱取樣品20.(^，置于具塞錐形瓶中，加入50!^乙腈，IOmL蒸餾水，在振蕩 器上振蕩提取60min，濾液置于500mL分液漏斗中，加入6. Og左右的氯化鈉，振蕩2min，靜 止分層，收集上層有機相，經無水硫酸鈉脫水，在40°C水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，加入 IOmL乙酸乙酯，待凈化。凈化C18柱，5mL乙酸乙酯預淋，上樣，IOmL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40°C水 浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，甲醇2mL定容，濾膜過濾。2、儀器條件Agilent 1200，DAD 檢測器流動相甲醇/ 水，50/50 (V/V)流速0· 5mL/min色譜柱:XDB-C18,1.8ym,4.6X50mm進樣5yL柱溫40°C波長0-4min 290nm，4min 后 254nm。3、保留時間噻苯隆代謝物，1.048min,噻苯隆 thidiazolylurea，3. 625min 敵草隆代謝物DCPU，5. 214min, ·敵草隆代謝物DCPMU，6. 879min,敵草隆， 7. 621min4、儀器精密度試驗將農藥的混合標樣，按上述儀器條件連續(xù)進樣5針，測得噻苯隆及其代謝物
4thidiazoiylurea和敵草隆及其代謝物DCPU、DCPMU的相對標準偏差，見表1表1.相對標準偏差
農藥RSD (% )噻苯隆1. 62thidiazoiylurea2. 83敵草隆1. 31DCPU0. 52DCPMU1. 915、加標回收率和相對標準偏差在空白棉花中添加混合標準品，回收率和相對標準偏差見表2，表3。結果符合要 求，證明了該方法有較好的回收率和重復性。表2噻苯隆及其代謝產物添加回收率
農藥 名稱添加濃度 (mg/kg)回 收率 (%)平均 回收率 (%)相對標準 偏差(％)噻 苯 隆0.0485.7286.2190.5879.6591.7486.785.510.582.5186.189.0585.2179.9984.574.10B3Jn[X|0ZBip[qj0.0892.4294.38104.284.17100.595.138.130.595.4798.191.3289.5299.2594.734.45表3敵草隆及其代謝產物添加回收率試驗
5農藥 名稱添加濃度 (mg/kg)冋收 (%)率 1平 均 冋收率 (%)相對標準 偏差(%)故 草0. 0592.7193.8290. 589.1279.0589. 046. 60隆1. 091.7995.9693. 9691.3491.6492. 942. 13D C0. 0482.1783.1580. 2185.3489.6484. 104. 29P U0. 486.3280.5482.4685.6788.7684. 753. 84D C0. 0399.8189295. 6988.2187.3292. 055. 92P M U0. 585.4386.7586. 4288.8786.5786. 811. 45本發(fā)明棉花中噻苯隆和敵草隆殘留量的測定方法和現(xiàn)有方法比較，所具有的積極 效果在于(1)本發(fā)明的方法簡化了提取步驟，減少了二氯甲苯等溶劑的使用量，通過使用固 相萃取凈化，減少了樣品中雜質的干擾，使結果更為準確、靈敏、可靠。(2)本發(fā)明的測定方法具有操作簡單快捷，回收率高，靈敏度高，雜質干擾小的特
點ο


圖1為混合標樣色譜圖；圖2為添加色譜圖。
具體實施例方式為了更充分的解釋本發(fā)明的實施，提供棉花中噻苯隆和敵草隆及其代謝物的殘留 量測定方法的制備實施實例。這些實施實例僅僅是解釋、而不是限制本發(fā)明的范圍。其中 所用的原料均有市售。實施例1(1)提取稱取棉花20. 0g，置于具塞錐形瓶中，加入50mL乙腈，IOmL蒸餾水，在振 蕩器上振蕩提取60min，濾液加入6. Og氯化鈉，振蕩2min，靜止分層，收集上層有機相，經無 水硫酸鈉脫水，在40°C水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，加入IOmL乙酸乙酯，待凈化；(2)凈化采用C18柱，5mL乙酸乙酯預淋，上樣，IOmL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液， 在40°C水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，甲醇2mL定容，濾膜過濾。(3)測定采用DAD檢測器測定，其中流動相甲醇/水，50/50 (V/V)流速0. 5mL/ min 色譜柱父08-(18，1.8“111，4.6\50讓，進樣5yL，柱溫40°C波長0_4min 290nm，4min
6后 254nm。實施例2(1)提取稱取棉花20. Og,置于具塞錐形瓶中；加入SOmL乙腈，20mL蒸餾水，在振 蕩器上振蕩提取lOOmin，濾液加入IOg氯化鈉，振蕩5min，靜止分層，收集上層有機相，經無 水硫酸鈉脫水，在40°C水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，加入20mL乙酸乙酯，待凈化；(2)凈化采用C18柱，5mL乙酸乙酯預淋，上樣，IOmL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液， 在40°C水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，甲醇2mL定容，濾膜過濾。(3)測定采用DAD檢測器測定，其中流動相甲醇/水，50/50 (V/V)流速0. 5mL/ min 色譜柱父08-(18，1.8“111，4.6\50讓，進樣5yL，柱溫40°C波長0_4min 290nm，4min 后 254nm。實施例3(1)提取稱取棉花20. Og，置于具塞錐形瓶中，加入50mL乙腈，IOmL蒸餾水，在振 蕩器上振蕩提取60min，濾液加入8g氯化鈉，振蕩4min，靜止分層，收集上層有機相，經無水 硫酸鈉脫水，在40°C水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，加入IOmL乙酸乙酯，待凈化；(2)凈化采用C18柱，5mL乙酸乙酯預淋，上樣，IOmL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液， 在40°C水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，甲醇2mL定容，濾膜過濾。(3)測定采用DAD檢測器測定，其中流動相甲醇/水，50/50 (V/V)流速0. 5mL/ min 色譜柱父08-(18，1.8“111，4.6\50讓，進樣5yL，柱溫40°C波長0_4min 290nm，4min 后 254nm。保留時間噻苯隆代謝物，1. 048min,噻苯隆thidiazolylurea，3. 625min,敵草隆 代謝物 DCPU，5. 214min,敵草隆代謝物 DCPMU，6. 879min,敵草隆，7. 621min。在詳細說明的較佳實施例之后，熟悉該項技術人士可清楚地了解，在不脫離上述 申請專利范圍與精神下可進行各種變化與修改，凡依據本發(fā)明的技術實質對以上實施例所 作任何簡單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術方案的范圍。且本發(fā)明亦不受說明書 中所舉實例實施方式的限制。
權利要求
棉花中噻苯隆和敵草隆及其代謝物的殘留量測定方法，其特征在于按如下的步驟進行(1)提取稱取樣品20.0g，置于具塞錐形瓶中，加入50 80mL乙腈，10 20mL蒸餾水，在振蕩器上振蕩提取60 100min，濾液加入6.0 10g氯化鈉，振蕩2 5min，靜止分層，收集上層有機相，經無水硫酸鈉脫水，在40℃水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，加入10 20mL乙酸乙酯，待凈化；(2)凈化采用C18柱，5mL乙酸乙酯預淋，上樣，10mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40℃水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，甲醇2mL定容，濾膜過濾。(3)測定采用DAD檢測器測定，其中流動相甲醇/水，50/50(V/V)流速0.5mL/min色譜柱XDB C18，1.8μm，4.6×50mm，進樣5μL，柱溫40℃波長0 4min 290nm，4min后254nm。
2.權利要求1所述的殘留量測定方法，其中噻苯隆代謝物為thidiazolylurea，敵草隆 代謝物為DCPU，DCPMU。
全文摘要
本發(fā)明涉及棉花中噻苯隆和敵草隆及其代謝物的殘留量測定方法，具體是稱取樣品20.0g，置于具塞錐形瓶中，加入50mL乙腈，10mL蒸餾水，在振蕩器上振蕩提取60min，濾液加入6.0-10g氯化鈉，振蕩2-5min，靜止分層，收集上層有機相，經無水硫酸鈉脫水，在40℃水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，加入10-20mL乙酸乙酯，然后采用C18柱，5mL乙酸乙酯預淋，上樣，10mL乙酸乙酯淋洗，收集淋洗液，在40℃水浴下減壓濃縮近干，氮氣吹干，甲醇2mL定容，濾膜過濾，采用DAD檢測器測定。本發(fā)明的測定方法簡化了提取步驟，減少了二氯甲苯等溶劑的使用量，通過使用固相萃取凈化，減少了樣品中雜質的干擾，使結果更為準確、靈敏、可靠。
文檔編號G01N30/06GK101943685SQ20091022893
公開日2011年1月12日 申請日期2009年12月2日 優(yōu)先權日2009年12月2日
發(fā)明者劉磊, 宋淑榮, 張玉婷, 李娜, 李輝, 程奕, 邵輝, 郭永澤 申請人:天津市農業(yè)科學院中心實驗室