專(zhuān)利名稱(chēng)：：電泳用預(yù)制凝膠、其制造方法及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及在以生化醫(yī)藥分析為目的、利用電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)、核酸等的分離時(shí)使用的電泳用平板凝膠、其制造方法和使用該凝膠的電泳方法。
背景技術(shù)：
：電泳是指帶點(diǎn)顆?；蚍肿釉陔妶?chǎng)中移動(dòng)的現(xiàn)象，在分子生物學(xué)領(lǐng)域，將所述現(xiàn)象應(yīng)用于蛋白質(zhì)或核酸的分離的方法通常被稱(chēng)作電泳方法。不僅是分子生物學(xué)，電泳方法還被廣泛用作醫(yī)學(xué)、水產(chǎn)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等大量領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究方法。特別是近年來(lái)，基因組的解讀后，蛋白質(zhì)組解析得到廣泛研究，對(duì)于蛋白質(zhì)的功能解析以及利用其開(kāi)發(fā)新藥等來(lái)說(shuō)，電泳方法是必不可少的方法。通常，在進(jìn)行電泳的情況下，使用含有緩沖液的介質(zhì)。作為介質(zhì)，已知有瓊脂糖、瓊脂、乙酸纖維素膜、聚丙烯酰胺凝膠等，并結(jié)合目的分別使用。特別是聚丙烯酰胺凝膠，由于其是人工合成的物質(zhì)，所以能夠通過(guò)改變配方，容易地制成分離特性不同的凝膠。使用了聚丙烯酰胺凝膠的電泳方法是常用的方法。近年，由于研究的效率化以及擔(dān)心丙烯酰胺這樣的毒性強(qiáng)的試劑的處理的趨勢(shì)，預(yù)先填充了各種分離條件的凝膠的聚丙烯酰胺預(yù)制凝膠得到普及。以往，對(duì)于電泳用聚丙烯酰胺凝膠用于蛋白質(zhì)的生化醫(yī)藥分析，廣泛使用Ornstein(L0rnstein，Ann.N.Y.Acad.Sci.121，321-349(1964))禾口Davis(B.J.Davis，Ann.N.Y.Acad.Sci.121,404-427(1964))提出的方法或Laemmli(U.K.Laemmli，Nature227,680(1970))提出的方法，一直是使用者制造凝膠進(jìn)行使用。特別是通過(guò)將十二烷基硫酸鈉(以下簡(jiǎn)稱(chēng)為SDS)添加到凝膠或電泳用緩沖液中從而能夠容易地推測(cè)蛋白質(zhì)分子量的Laemmli方法得到了廣泛的普及。Laemmli方法中，作為凝膠緩沖液使用三(羥甲基)氨基甲烷(以下簡(jiǎn)稱(chēng)為T(mén)ris)的鹽酸部分中和物，作為電泳用緩沖液使用Tris、甘氨酸鹽(Laemmli電泳緩沖液)。該方法中的凝膠緩沖液中，將約1020摩爾％的Tris用鹽酸部分中和，以使pH為8.8(Laemmli凝膠緩沖液)。但是，在Laemmli凝膠緩沖液的pH的條件下，酰胺基隨時(shí)間推移發(fā)生水解反應(yīng)。水解反應(yīng)即使在低溫條件也進(jìn)行，并且聚丙烯酰胺凝膠變得部分具有陰離子基。結(jié)果導(dǎo)致蛋白質(zhì)的泳動(dòng)距離變短，并且分離像變得不明顯，所以不能長(zhǎng)期保存凝膠。因此，預(yù)先量產(chǎn)得到的用于供給凝膠的預(yù)制凝膠供給時(shí)必須限定保存期限，期待其具有良好的保存穩(wěn)定性。本申請(qǐng)人也像日本特許2588059號(hào)公報(bào)、日本特許2597145號(hào)公報(bào)、日本專(zhuān)利3076200號(hào)公報(bào)和日本專(zhuān)利3942001號(hào)公報(bào)等記載的那樣對(duì)電泳用聚丙烯酰胺凝膠的品質(zhì)提高、制造方法、使用方法進(jìn)行了深入研究，得到了解決上述課題的思路。應(yīng)用上述發(fā)明，能夠在聚丙烯酰胺預(yù)制凝膠的品質(zhì)、生產(chǎn)率方面實(shí)現(xiàn)技術(shù)的提高，有助于提高高品質(zhì)預(yù)制凝膠的生產(chǎn)率。對(duì)于電泳用聚丙烯酰胺凝膠的形狀，有在玻璃管內(nèi)制作凝膠進(jìn)行使用的方法、在3兩片玻璃板之間制作凝膠進(jìn)行使用的方法。后一類(lèi)型的凝膠被稱(chēng)作平板凝膠。聚丙烯酰胺平板凝膠通常使用玻璃板作為載體，作為預(yù)制凝膠，除了使用玻璃板之外，以歐美為首在日本國(guó)內(nèi)已經(jīng)有使用塑料板的預(yù)制凝膠出售。以往，聚丙烯酰胺平板凝膠的制造方法中，在夾著規(guī)定厚度的間隔物(spacer)的兩片玻璃板之間填充高濃度丙烯酰胺溶液(添加有氧化還原催化劑)，形成被稱(chēng)作分離層的凝膠后，填充低濃度丙烯酰胺溶液(同樣添加有氧化還原催化劑)，進(jìn)一步插入目的形狀的電泳梳(comb)，同時(shí)在分離凝膠上形成被稱(chēng)作濃縮層的凝膠和試樣注入口，制成聚丙烯酰胺平板凝膠。為了防止丙烯酰胺的未反應(yīng)單體在凝膠中有殘留，也可以在對(duì)丙烯酰胺溶液進(jìn)行脫氣后添加氧化還原催化劑，用于形成凝膠。但是，丙烯酰胺的反應(yīng)性強(qiáng)，脫氣氣氛下與催化劑混合時(shí)，急劇地發(fā)生凝膠化反應(yīng)。為了量產(chǎn)化，提出了將丙烯酰胺溶液保持在低溫的方法和調(diào)整催化劑濃度依次進(jìn)行反應(yīng)的方法(日本特開(kāi)平5-203621號(hào)公報(bào))。另外，基于向膜上涂布丙烯酰胺溶液的凝膠制造方法中，雖然能夠利用光聚合方法提高預(yù)制凝膠的生產(chǎn)率，但是基于涂布的制造方法的情況下，難以形成濃縮層和分離層這2層、并且難以制造高品位的濃度梯度聚丙烯酰胺凝膠。因此，提出了使凝膠的厚度變化的方法、提高丙烯酰胺溶液的粘性的方法(日本特開(kāi)平6-52254號(hào)公報(bào)、日本特開(kāi)平6-60885號(hào)公報(bào))。另外，為了制成膜厚均勻的凝膠，需要涂布機(jī)等特殊的裝置。也就是說(shuō)，為了制造最適合電泳用的聚丙烯酰胺預(yù)制凝膠，需要各種開(kāi)發(fā)研究，從確保生產(chǎn)率和品質(zhì)方面出發(fā)，現(xiàn)有技術(shù)難以提供高品位的預(yù)制凝膠。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人反復(fù)進(jìn)行了仔細(xì)研究，其結(jié)果實(shí)現(xiàn)了下述的發(fā)明。本發(fā)明還涉及電泳用平板凝膠的制造方法及其使用方法。S卩，本發(fā)明涉及下述技術(shù)方案。1)—種電泳用預(yù)制凝膠，其中，在載體中填充有含水凝膠，所述含水凝膠是通過(guò)光照使含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原引發(fā)劑、光敏劑的、pH在6.07.5的范圍的水溶液聚合得到的。2)如技術(shù)方案1所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述自由基聚合性單體是丙烯酰胺。3)如技術(shù)方案1或2所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述還原劑是四甲基乙二胺。4)如技術(shù)方案13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液含有三(羥甲基)氨基甲烷和鹽酸。5)如技術(shù)方案13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液含有三(羥甲基)氨基甲烷、鹽酸和兩性電解質(zhì)。6)如技術(shù)方案13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液含有甘氨酸和甘氨酸以外的兩性電解質(zhì)。7)如技術(shù)方案13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液是三4(羥甲基)氨基甲烷的由選自硼酸、乙酸和甘氨酸的一種以上酸所致的部分中和物。8)如技術(shù)方案13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液含有雙-三[雙(2-羥基乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷]和鹽酸。9)如技術(shù)方案18任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述水溶液的pH在6.07.0的范圍。10)如技術(shù)方案19任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述載體是在兩片玻璃板或者玻璃板與塑料板的兩條邊夾著規(guī)定厚度的間隔物而形成的盒。11)如技術(shù)方案19任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述載體是在厚度為O.lmm1.0mm的兩片塑料制片材的兩條邊或者三條邊夾著規(guī)定厚度的間隔物而形成的盒。12)如技術(shù)方案19任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述載體是通過(guò)注射成型形成的塑料盒。13)—種電泳用預(yù)制凝膠的制造方法，其特征在于，將下述水溶液填充到載體中，通過(guò)光照射進(jìn)行聚合，所述水溶液含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原聚合引發(fā)劑、光敏劑、且pH在6.07.5的范圍。14)如技術(shù)方案(13)所述的電泳用預(yù)制凝膠的制造方法，其特征在于，通過(guò)所述光照射，所述水溶液在5分鐘以?xún)?nèi)固化。15)—種電泳用平板凝膠的使用方法，其特征在于，使用含有三(羥甲基)氨基甲烷和甘氨酸的電泳用緩沖液，通過(guò)電泳用平板凝膠進(jìn)行蛋白質(zhì)或者核酸的分離分析，所述電泳用平板凝膠在載體中填充有含水凝膠，所述含水凝膠是通過(guò)光照使含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、氧化還原聚合引發(fā)劑、光敏劑的、pH在6.07.5的范圍的水溶液聚合得到的。16)如技術(shù)方案15所述的電泳用平板凝膠的使用方法，其特征在于，所述電泳用緩沖液含有十二烷基硫酸鹽。本說(shuō)明書(shū)包括本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)PCT國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)PCT/JP2007/066403號(hào)的說(shuō)明書(shū)和/或附圖記載的內(nèi)容。圖1是本發(fā)明的塑料制載體的分解立體圖。圖2是圖1所示的電泳預(yù)制凝膠盒的組裝好的狀態(tài)下的立體主視圖，是表示將兩片塑料制片材和間隔物粘合而制作的電泳用平板凝膠的盒(有三條邊被固定了)的立體圖。圖3是圖1所示的電泳預(yù)制凝膠盒的組裝好的狀態(tài)下的立體后視圖，是表示將兩片塑料制片材和間隔物粘合而制作的電泳用平板凝膠的盒(有三條邊被固定了)的立體圖。圖4是表明通過(guò)使用玻璃板作為載體的本發(fā)明而進(jìn)行的電泳的結(jié)果的圖。圖5是表明通過(guò)使用PET制盒作為載體的本發(fā)明而進(jìn)行的電泳的結(jié)果的圖。符號(hào)說(shuō)明1.前面塑料片2.間隔物3.背面塑料片4.通電用狹縫(slit)5.密封條具體實(shí)施例方式本發(fā)明的電泳用預(yù)制凝膠在載體中填充有含水凝膠，所述含水凝膠是通過(guò)光照將含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原聚合引發(fā)劑、光敏劑的、pH在6.07.5的范圍的水溶液聚合而得到的含水凝膠。所述自由基聚合性單體是非離子性的水溶性乙烯基單體，沒(méi)有特別限定，作為其例子，可以舉出(甲基)丙烯酰胺、N-甲基(甲基)丙烯酰胺、N-羥甲基(甲基)丙烯酰胺、N-乙基(甲基)丙烯酰胺、N-異丙基(甲基)丙烯酰胺、N，N-二甲基(甲基)丙烯酰胺、N，N-二乙基(甲基)丙烯酰胺、羥甲基(甲基)丙烯酰胺、羥乙基(甲基)丙烯酰胺、(甲基)丙烯酸羥乙酯、羥丙基(甲基)丙烯酰胺、二甘醇單(甲基)丙烯酸酯、N-乙烯基咔唑、N-乙烯基琥珀酰亞胺J-乙烯基甲酰胺J-乙烯基乙酰胺J-乙烯基-2-吡咯烷酮、雙丙酮丙烯酰胺等。所述自由基聚合性單體特別優(yōu)選是丙烯酰胺。所述交聯(lián)性單體是具有2個(gè)以上乙烯基的自由基聚合性單體，例如可以舉出亞甲基雙丙烯酰胺、(聚)乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、哌嗪二丙烯酰胺、N，N-二烯丙基酒石酸酰胺、1，3，5-三丙烯酰六氫-s-三嗪等。另外，相對(duì)所述自由基聚合性單體，在5重量％以下的范圍共聚所述交聯(lián)性單體的情況下，適合利用電泳分離蛋白質(zhì)或者核酸。所述光敏劑優(yōu)選使用核黃素或者核黃素磷酸鈉。所述由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原聚合引發(fā)劑是指由過(guò)氧化物或過(guò)氧化二硫酸鹽與還原劑的組合構(gòu)成的自由基聚合引發(fā)劑。作為過(guò)氧化物的例子，可以舉出過(guò)氧化二硫酸銨、過(guò)氧化二硫酸鉀、過(guò)氧化氫等。另外，作為還原劑的例子，可以舉出三甲胺、四甲基乙二胺等，特別優(yōu)選四甲基乙二胺。作為這些氧化劑/還原劑的組合的例子，可以舉出過(guò)氧化二硫酸銨/三甲胺或者四甲基乙二胺、過(guò)氧化二硫酸鉀/三甲胺或者四甲基乙二胺等。特別優(yōu)選的組合是過(guò)氧化二硫酸銨/四甲基乙二胺。所述緩沖液可以是含有三(羥甲基)氨基甲烷和鹽酸的緩沖液、含有三(羥甲基)氨基甲烷、鹽酸和兩性電解質(zhì)的緩沖液、含有三(羥甲基)氨基甲烷、鹽酸、甘氨酸和甘氨酸以外的兩性電解質(zhì)的緩沖液、含有三(羥甲基)氨基甲烷和硼酸的緩沖液、含有三(羥甲基)氨基甲烷和乙酸的緩沖液、含有三(羥甲基)氨基甲烷和甘氨酸的緩沖液、或者含有雙Tris和鹽酸的緩沖液。特別優(yōu)選是含有三(羥甲基)氨基甲烷、鹽酸、甘氨酸和甘氨酸以外的兩性電解質(zhì)且p朋.07.5的緩沖液。另外，對(duì)于所述含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原聚合引發(fā)劑、光敏劑的水溶液，該水溶液的pH為6.07.5、特別優(yōu)選為pH6.07.0的情況下，可以根據(jù)目的，混合成任意的濃度進(jìn)行使用。pH6.0以下時(shí)，基于電泳進(jìn)行的蛋白質(zhì)或者核酸的分離不明顯，不適合使用目的，而且PH7.5以上時(shí)，所述聚合物發(fā)生水解，作為預(yù)制凝膠，不能維持長(zhǎng)期穩(wěn)定性。本發(fā)明的電泳用預(yù)制凝膠是如下制造的在載體中添加水溶液，通過(guò)光照射進(jìn)行聚合，所述水溶液含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原聚合引發(fā)劑、光敏劑、且pH為6.07.5、特別優(yōu)選在p朋.07.0的范圍。特別是將光照射下產(chǎn)生自由基的光敏劑和氧化還原催化劑合用來(lái)聚合所述自由基聚合性單體時(shí)，與通常所知的利用僅通過(guò)自由基聚合引發(fā)劑來(lái)反應(yīng)的方法相比，能夠任意地調(diào)整聚合速度。相對(duì)于所述自由基聚合性單體，所述光敏劑和氧化還原催化劑的用量為0.00055%。這種情況下的光敏劑可以使用適合所用的光源的水溶性光敏劑。使用紫外光的情況下，可以舉出核黃素。用于光照射的光源可以使用通常已知的光源。溫度可以根據(jù)必要的聚合速度進(jìn)行選擇，但通常優(yōu)選55(TC的范圍。為了提高聚合物的強(qiáng)度或者盒與聚合物的粘結(jié)性等目的，除了自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體和緩沖液之外，所述水溶液中還可以含有瓊脂糖、聚丙烯酰胺、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基乙烯基醚、聚羥甲基丙烯酰胺等水溶性高分子、甘油等。所述水溶液還可以根據(jù)目的含有十二烷基硫酸鈉。本發(fā)明的電泳用預(yù)制凝膠是在載體中填充有含水凝膠的電泳用平板型預(yù)制凝膠。所述載體可以通過(guò)在玻璃板或者塑料板與上部具有凹狀切口的同尺寸玻璃板或者塑料板之間夾著厚度lmm的間隔物和防止單體液泄漏的硅密封墊來(lái)形成。另外，所述載體是如圖l和圖2所示的、在兩片塑料制片材間夾著U字型的厚度lmm的間隔物而形成的盒。塑料制片材的厚度優(yōu)選為O.lmm1.0mm。為了使聚合物與陽(yáng)極的電泳用緩沖液接觸通電，需要形成圖3所示那樣的狹縫。所述狹縫在制造時(shí)用膠帶等封住，使用時(shí)將膠帶剝下，由此可以作為通電狹縫發(fā)揮作用。另外，所述載體還可以使用通過(guò)注射成型形成的塑料制盒。所述塑料制片材或者塑料制盒的材質(zhì)可以舉出例如聚氯乙烯、聚偏二氯乙烯、聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯、聚萘二甲酸乙二醇酯、苯乙烯-丙烯腈類(lèi)樹(shù)脂、丙烯酸類(lèi)樹(shù)脂、聚碳酸酯等，但并不限于這些。既可以使用兩片同種材質(zhì)的塑料制片材形成盒，也可以將不同材質(zhì)的塑料制片材組合使用。所述塑料制片材優(yōu)選氧氣透過(guò)率為lOOcmVm2天atm以下。氧氣透過(guò)率為100cmVm2天atm以上的情況下，聚合時(shí)，由于盒所含有的氧而導(dǎo)致阻斷聚合，不能得到適合電泳的聚合物。另外，所述塑料制片材的彎曲模量?jī)?yōu)選為7000kg/cm2以上。彎曲模量是表示塑料的剛性的指標(biāo)，通常彎曲模量為7000kg/cm2以上的是指硬質(zhì)塑料。彎曲模量為7000kg/cm2以上時(shí)，能夠防止操作或傳輸時(shí)的沖擊導(dǎo)致盒發(fā)生破損或變形。本發(fā)明的電泳用預(yù)制凝膠可以使用含有三(羥甲基)氨基甲烷和兩性電解質(zhì)的水溶液(電泳用緩沖液)進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離。所述電泳用緩沖液可以還含有十二烷基硫酸鈉(SDS)。7另外，本發(fā)明的電泳用預(yù)制凝膠還可以使用含有三(羥甲基)氨基甲烷和兩性電解質(zhì)的水溶液(電泳用緩沖液)進(jìn)行核酸的分離。下面，舉出實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的電泳用預(yù)制凝膠及其制造方法及其使用方法進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但這些實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限定。實(shí)施例1作為載體，在橫寬12cm、縱10cm的長(zhǎng)方形玻璃板與上部具有凹狀切口的同尺寸玻璃板之間夾上厚度lmm的間隔物和防止單體液泄漏的硅密封墊，組裝玻璃板。作為分離層溶液，對(duì)由濃度10%(%T)的丙烯酰胺、濃度3%(%C)的BIS、8X的甘油以及表1記載的濃度的緩沖液組成構(gòu)成的單體溶液添加20iU/ml的0.1%核黃素磷酸鈉溶液、0.8iU/ml的TEMED和6y1/ml的10%APS溶液；作為濃縮層溶液，對(duì)由濃度5%T的丙烯酰胺、濃度3%C的BIS以及表1記載的濃度的緩沖液組成構(gòu)成的單體溶液添加5/ml的0.1%核黃素磷酸鈉溶液、1.2ii1/ml的TEMED和10y1/ml的10%APS溶液，并進(jìn)行攪拌。按分離層溶液、濃縮層溶液的順序在板內(nèi)設(shè)置注入后電泳梳，用400W高壓汞燈進(jìn)行1分鐘UV照射(365nm的光量為20mW/cm2)，使其凝膠化。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>使用得到的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠進(jìn)行電泳。電泳用緩沖液使用含有0.025mol/LTris、0.192mol/L甘氨酸、0.1重量％SDS的緩沖液。所述緩沖液作為L(zhǎng)aemmli緩沖液的組成是已知的。使用上述制作的電泳凝膠進(jìn)行電泳。作為電泳試樣，使用aprosci社制造的apro分子量marker(A)、BIO-RAD社制造的precisionplusmarker(B)、雞肉提取物(C)。電泳在200V恒定電壓下進(jìn)行50分鐘。使用振蕩機(jī)在O.05%CBB(考馬斯亮藍(lán))-G250、12X乙酸、30X甲醇溶液中進(jìn)行45分鐘染色，使用振蕩機(jī)在12%乙酸、15%甲醇溶液中進(jìn)行90分鐘脫色，最后在純水中浸泡60分鐘。染色、脫色后的結(jié)果見(jiàn)圖4。電泳的結(jié)果為蛋白質(zhì)的分離進(jìn)行的正常，能夠得到非常鮮明的良好的電泳像。另外，帶的位置也沒(méi)有變形或彎曲，全部橫向并列在一條線(xiàn)上。即使與以往通常使用的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠相比，帶的分離能、鮮明度、清晰度也大致同等。因此，通過(guò)本發(fā)明制作的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠表現(xiàn)出了與以往通常使用的電泳用聚丙烯酰胺凝膠同等的性能。電泳的結(jié)果為蛋白質(zhì)的分離進(jìn)行的正常，能夠得到非常鮮明的良好的電泳像。另外，帶的位置也沒(méi)有變形或彎曲，全部橫向并列在一條線(xiàn)上。即使與以往通常使用的使用了玻璃板的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠相比，帶的分離能、鮮明度、清晰度也大致同等。因此，通過(guò)本發(fā)明制作的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠表現(xiàn)出了與以往通常使用的使用了玻璃板的電泳用聚丙烯酰胺凝膠同等的性能。實(shí)施例2除了將載體改為PET(聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯)制造的如圖1圖3所示那樣的盒以外，與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行操作。與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行1分鐘UV照射，由此能進(jìn)行凝膠化。用得到的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠進(jìn)行電泳，與實(shí)施例1同樣，得到了非常鮮明的帶。其結(jié)果見(jiàn)圖5。實(shí)施例3由玻璃板換成PET(聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯)板，將載體改為通過(guò)注射成型形成的PET制盒，除此以外，與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行操作。與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行1分鐘UV照射，由此可以進(jìn)行凝膠化。用得到的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠進(jìn)行電泳，與實(shí)施例1同樣，得到了非常鮮明的帶。比較例1不進(jìn)行UV照射，在暗處進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行操作。完成凝膠化需要30分鐘左右的時(shí)間，聚合時(shí)的體積的減少導(dǎo)致在板上部的凝膠出現(xiàn)稍微的凹陷。用得到的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠在與實(shí)施例1相同的條件進(jìn)行電泳，與實(shí)施例1相比，得到的帶稍有不鮮明。比較例2不使用APS，除此以外，與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行操作。UV照射5分鐘，能夠進(jìn)行凝膠化，但濃縮層部分因聚合不良而成為了散亂的凝膠。用得到的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠進(jìn)行電泳，得到的帶不鮮明。比較例3用氮?dú)鈱?duì)丙烯酰胺溶液進(jìn)行脫氣，除此以外，與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行操作。凝膠化時(shí)間過(guò)短，不能確保充分的填充時(shí)間。比較例4不進(jìn)行UV照射，在暗處進(jìn)行反應(yīng)，除此以外，與實(shí)施例2同樣地進(jìn)行操作。30分鐘左右，發(fā)生表觀凝膠化，但濃縮層部分因聚合不良而成為了散亂的凝膠。用得到的電泳用聚丙烯酰胺平板凝膠進(jìn)行電泳，得到的帶不鮮明。以上的結(jié)果見(jiàn)表2。表29板核黃素TEMED10%uv氮脫氣凝膠化電泳磷酸鈉APS照射狀態(tài)結(jié)果實(shí)施例1玻璃有有有l(wèi)分鐘良好良好實(shí)施例2PET有有有l(wèi)分鐘力良好良好實(shí)施例3PET有有有l(wèi)分鐘無(wú)良好良好比較例1玻璃有有有無(wú)無(wú)稍有不良良好比較例2玻璃有有無(wú)5分鐘無(wú)不好帶不鮮明比較例3,玻璃有有有無(wú)、有不好-比較例4PET有有有無(wú)無(wú)不好帶不鮮明實(shí)施例1、2、3均用1分鐘完成了凝膠化，均可令人滿(mǎn)意地用作電泳用聚丙烯酰胺凝膠。該制造方法能在1分鐘完成凝膠化，并且板內(nèi)的凝膠化狀態(tài)好，所以對(duì)于進(jìn)行大量生產(chǎn)是非常有效的。就比較例1而言，雖然與實(shí)施例1、2同樣地能夠令人滿(mǎn)意地用作電泳用聚丙烯酰胺凝膠，但是完成凝膠化需要30分鐘左右的時(shí)間。另外，由于聚合時(shí)的體積的減少，導(dǎo)致在板上部的凝膠出現(xiàn)稍微的凹陷，其作為預(yù)制凝膠的產(chǎn)品價(jià)值低。就比較例2而言，不添加APS時(shí)，UV照射5分鐘，表觀發(fā)生凝膠化，但殘存AAm非常多，結(jié)果導(dǎo)致作為電泳用聚丙烯酰胺凝膠來(lái)利用并不令人滿(mǎn)意。就比較例3而言，基于短時(shí)間反應(yīng)的目的，用氮?dú)鈱?duì)單體溶液進(jìn)行脫氣后進(jìn)行注液，此時(shí)，填充前就開(kāi)始了凝膠化。室溫條件下進(jìn)行氮脫氣時(shí)就引發(fā)了聚合，所以難以填充液體。就比較例4而言，作為板使用PET板，不進(jìn)行UV照射，在暗處進(jìn)行反應(yīng)，這種情況下，在PET表面存在的氧阻斷聚合，導(dǎo)致濃縮層部分的凝膠散亂。電泳后的帶也不鮮明，作為電泳用聚丙烯酰胺凝膠來(lái)利用不令人滿(mǎn)意。使核黃素磷酸鈉、TEMED和APS共存，并利用UV照射進(jìn)行聚合，由此1分鐘就能完成凝膠化，并且，即使利用PET這樣的塑料板，也能制造與玻璃板同等的電泳用聚丙烯酰胺凝膠。由上述結(jié)果可知，本發(fā)明的電泳用聚丙烯酰胺預(yù)制凝膠對(duì)于電泳來(lái)說(shuō)是最合適的，并且從生產(chǎn)率、成本和確保品質(zhì)方面出發(fā)，還能提供高品位的預(yù)制凝膠。產(chǎn)業(yè)上的可利用性本發(fā)明的電泳用平板凝膠能夠通過(guò)比現(xiàn)有技術(shù)的時(shí)間短且簡(jiǎn)單的方法制造電泳用預(yù)制凝膠。因此，在生產(chǎn)率、成本和品質(zhì)方面，能夠制造高品位的電泳用預(yù)制凝膠，產(chǎn)業(yè)上的可利用性巨大。本說(shuō)明書(shū)引用的所有的出版物、專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)直接作為參考計(jì)入本說(shuō)明書(shū)。10權(quán)利要求一種電泳用預(yù)制凝膠，其中，在載體中填充有含水凝膠，所述含水凝膠是通過(guò)光照使含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原引發(fā)劑、光敏劑的、pH在6.0～7.5的范圍的水溶液聚合得到的。2.如權(quán)利要求1所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述自由基聚合性單體是丙烯酰胺。3.如權(quán)利要求1或2所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述還原劑是四甲基乙二胺。4.如權(quán)利要求13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液含有三(羥甲基)氨基甲烷和鹽酸。5.如權(quán)利要求13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液含有三(羥甲基)氨基甲烷、鹽酸和兩性電解質(zhì)。6.如權(quán)利要求13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液含有甘氨酸和甘氨酸以外的兩性電解質(zhì)。7.如權(quán)利要求13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液是三(羥甲基)氨基甲烷的由選自硼酸、乙酸和甘氨酸的一種以上酸所致的部分中和物。8.如權(quán)利要求13任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述緩沖液含有雙-三[雙(2-羥基乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷]和鹽酸。9.如權(quán)利要求18任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述水溶液的pH在6.07.0的范圍。10.如權(quán)利要求19任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述載體是在兩片玻璃板或者玻璃板與塑料板的兩條邊夾著規(guī)定厚度的間隔物而形成的盒。11.如權(quán)利要求19任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述載體是在厚度為O.lmm1.0mm的兩片塑料制片材的兩條邊或者三條邊夾著規(guī)定厚度的間隔物而形成的12.如權(quán)利要求19任一項(xiàng)所述的電泳用預(yù)制凝膠，其特征在于，所述載體是通過(guò)注射成型形成的塑料盒。13.—種電泳用預(yù)制凝膠的制造方法，其特征在于，將下述水溶液填充到載體中，通過(guò)光照射進(jìn)行聚合，所述水溶液含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原聚合引發(fā)劑、光敏劑、且pH在6.07.5的范圍。14.如權(quán)利要求13所述的電泳用預(yù)制凝膠的制造方法，其特征在于，通過(guò)所述光照射，所述水溶液在5分鐘以?xún)?nèi)固化。15.—種電泳用平板凝膠的使用方法，其特征在于，使用含有三(羥甲基)氨基甲烷和甘氨酸的電泳用緩沖液，通過(guò)電泳用平板凝膠進(jìn)行蛋白質(zhì)或者核酸的分離分析，所述電泳用平板凝膠在載體中填充有含水凝膠，所述含水凝膠是通過(guò)光照使含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、氧化還原聚合引發(fā)劑、光敏劑的、pH在6.07.5的范圍的水溶液聚合得到的。16.如權(quán)利要求15所述的電泳用平板凝膠的使用方法，其特征在于，所述電泳用緩沖液含有十二烷基硫酸鹽。全文摘要本發(fā)明涉及一種電泳用預(yù)制凝膠，其中，在載體中填充有含水凝膠，所述含水凝膠是通過(guò)光照使含有自由基聚合性單體、交聯(lián)性單體、緩沖液、由氧化劑/還原劑構(gòu)成的氧化還原引發(fā)劑、光敏劑的、pH在6.0～7.5的范圍的水溶液聚合得到的。本發(fā)明的電泳用平板凝膠能夠通過(guò)比現(xiàn)有技術(shù)的時(shí)間短且簡(jiǎn)單的方法制造電泳用預(yù)制凝膠。因此，在生產(chǎn)率、成本和品質(zhì)方面，能夠制造高品位的電泳用預(yù)制凝膠，產(chǎn)業(yè)上的可利用性巨大。文檔編號(hào)G01N27/447GK101779123SQ20088010302公開(kāi)日2010年7月14日申請(qǐng)日期2008年7月8日優(yōu)先權(quán)日2007年8月17日發(fā)明者峰岸由希子,鈴木和久,鈴木美香申請(qǐng)人:海茂株式會(huì)社