一種用于全血dna中的jak2基因突變檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及一種用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，包括具有內(nèi)腔的盒體、盒蓋、設(shè)置在盒體內(nèi)將內(nèi)腔分隔成彼此獨(dú)立的多個(gè)容納腔的隔板組件、裝有JAK2突變檢測(cè)反應(yīng)液的第一保存管、裝有反應(yīng)酶的第二保存管、裝有陽(yáng)性對(duì)照的第三保存管及裝有去離子水的第四保存管，第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管分別置于不同的容納腔內(nèi)，設(shè)有第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管的容納腔內(nèi)分別設(shè)有用于固定保存管的襯墊。該試劑盒的設(shè)有隔板組件及襯墊，將裝有試劑的保存管置于襯墊中，有利于試劑避光，避免了試劑間的交叉污染，同時(shí)減少了震動(dòng)對(duì)試劑造成的影響，增加了試劑在運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性。
【專利說(shuō)明】
一種用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實(shí)用新型屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于全血DNA中的JAK2基因突變檢 測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] JAK2即Janus Kinase 2,是一種非受體型酪氨酸蛋白激酶，受到JAK基因家族的編 碼調(diào)控。JAK2酪氨酸激酶信號(hào)通路是細(xì)胞分化中一種主要的細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)通路。細(xì)胞 因子與JAK2結(jié)合使其活化，從而激活下游STAT蛋白，由STAT蛋白將信號(hào)導(dǎo)入細(xì)胞核內(nèi)，從而 起到調(diào)控基因表達(dá)的作用，參與造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等多條信號(hào)通路。然而，JAK2激酶的持 續(xù)激活，會(huì)導(dǎo)致下游STAT蛋白的持續(xù)激活，繼而便誘發(fā)骨髓增殖性腫瘤(MPN)等多種腫瘤。 骨髓增殖性腫瘤（My el oproliferat ive neoplasms，MPN)主要包括真性紅細(xì)胞增多癥 (Polycythemia vera，PV)、原發(fā)性血小板增生多癥（Essential thrombocythemia，ET)、原 發(fā)骨髓纖維化（Primary myelofibrosis，PMF )、慢性粒細(xì)胞性白血?。–hron i c myelogenous leukemia，CML)。研究表明，骨髓增殖性腫瘤(MPN)通常伴有JAK2基因1849位 (G/T)突變，導(dǎo)致該蛋白第617位的纈氨酸(V)改變?yōu)楸奖彼?F)，從而引起一系列病變。在 PV患者中JAK2-V617F大約有90%-95%的突變率，而在ET和PMF中突變率約為50-60%。2008 年，世界衛(wèi)生組織（WHO)明確將JAK2-V617F的突變作為MPN主要診斷指標(biāo)之一。（A Tefferiland Jff Vardiman,Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasms: The 2008fforId Health Organization criteria and point-of-care diagnostic algorithms) 因此，檢測(cè)JAK2-V617F突變對(duì)MPN患者的途斷具有重要的臨床意 義。
[0003] JAK2-V617F亦是骨髓增殖性腫瘤(MPN)的重要的靶點(diǎn)之一。目前的臨床藥物，如魯 索替尼(Ruxolitinib)等其他在研藥物，均是針對(duì)JAK2酪氨酸激酶開(kāi)發(fā)的抗腫瘤抑制劑，通 過(guò)抑制隔斷細(xì)胞JAK2酪氨酸激酶信號(hào)通路來(lái)抑制腫瘤的生長(zhǎng)增殖。因此，未來(lái)通過(guò)檢測(cè) JAK2-V617F突變，不但可以幫助醫(yī)生對(duì)患者進(jìn)行MPN臨床診斷，并且能夠?yàn)镴AK2抑制劑類藥 物的臨床使用提供參考依據(jù)。
[0004] JAK2-V617F基因突變主要的檢測(cè)方法包括DNA Sanger測(cè)序法或PCR-凝膠電泳法 等。然而，這些方法往往具有操作繁瑣，效率低，特異性和靈敏度欠佳等缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于全血DNA 中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，可以方便快速且保證高特異性高靈敏度地檢測(cè)全血DNA中 的JAK2基因突變。
[0006] 為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型采用如下技術(shù)方案：
[0007] -種用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，包括具有內(nèi)腔的盒體及一端與 所述盒體的一側(cè)壁相連用于打開(kāi)或關(guān)閉所述內(nèi)腔的盒蓋，所述試劑盒還包括設(shè)置在所述盒 體內(nèi)能夠?qū)⑺龊畜w的內(nèi)腔分隔成彼此獨(dú)立的多個(gè)容納腔的隔板組件、裝有JAK2突變檢測(cè) 反應(yīng)液的第一保存管、裝有反應(yīng)酶的第二保存管、裝有陽(yáng)性對(duì)照的第三保存管及裝有去離 子水的第四保存管，所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管分別置于不同 的所述容納腔內(nèi)，設(shè)有所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管的容納腔內(nèi) 分別設(shè)有用于固定所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管的襯墊。
[0008] 進(jìn)一步地，所述隔板組件包括第一隔板和多個(gè)第二隔板，所述第一隔板將所述盒 體的內(nèi)腔分隔成彼此獨(dú)立的第一腔室和第二腔室，多個(gè)所述第二隔板將所述第一腔室分隔 成多個(gè)彼此獨(dú)立的所述容納腔。
[0009] 更進(jìn)一步地，多個(gè)所述第二隔板將所述第一腔室平均分隔成彼此獨(dú)立的多個(gè)所述 容納腔。
[0010] 優(yōu)選地，所述第二隔板具有3個(gè)，3個(gè)所述第二隔板將所述第一腔室平均分隔成彼 此獨(dú)立的4個(gè)所述容納腔。
[0011] 更進(jìn)一步地，所述第一隔板的長(zhǎng)度比所述第二隔板的長(zhǎng)度長(zhǎng)。
[0012] 更進(jìn)一步地，所述第一隔板、多個(gè)所述第二隔板分別豎直設(shè)置在所述盒體內(nèi)。
[0013] 更進(jìn)一步地，所述試劑盒還包括八連管，所述八連管置于所述第二腔室內(nèi)。
[0014] 進(jìn)一步地，所述盒蓋的一端部與所述盒體的所述一側(cè)壁的上端部樞轉(zhuǎn)連接，所述 盒蓋的另一端部向下彎折延伸形成延伸部，當(dāng)所述盒蓋關(guān)閉所述盒體的內(nèi)腔時(shí)，所述延伸 部塞入所述盒體內(nèi)。
[0015] 進(jìn)一步地，所述襯墊為海綿襯墊，所述海綿襯墊上開(kāi)設(shè)有插孔，所述第一保存管、 第二保存管、第三保存管和第四保存管分別插設(shè)在所述插孔內(nèi)。
[0016] 更進(jìn)一步地，所述插孔為圓形插孔。
[0017] 于上述技術(shù)方案的實(shí)施，本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0018] 本實(shí)用新型的試劑盒，結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單合理，便于攜帶與保存;盒體內(nèi)設(shè)有隔板組件 及襯墊，將裝有試劑的保存管置于襯墊中，有利于試劑避光，并使得不同試劑得以存放于獨(dú) 立的空間，避免了試劑間的交叉污染，同時(shí)減少了震動(dòng)對(duì)試劑造成的影響，增加了試劑在運(yùn) 輸過(guò)程中的穩(wěn)定性。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1為本實(shí)用新型試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0020] 圖中：1、盒體;2、盒蓋;3、第一隔板;4、第二隔板;5、第一保存管;6、第二保存管;7、 第三保存管;8、第四保存管;9、襯墊;10、第二腔室；11、延伸部。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本實(shí)用新型并不限于 以下實(shí)施例。
[0022]如圖1所示，一種用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，包括具有內(nèi)腔的盒 體1及一端與盒體1的一側(cè)壁相連用于打開(kāi)或關(guān)閉該內(nèi)腔的盒蓋2,該試劑盒還包括設(shè)置在 盒體1內(nèi)能夠?qū)⒑畜w1的內(nèi)腔分隔成彼此獨(dú)立的多個(gè)容納腔的隔板組件、裝有JAK2突變檢測(cè) 反應(yīng)液的第一保存管5、裝有反應(yīng)酶的第二保存管6、裝有陽(yáng)性對(duì)照的第三保存管7及裝有去 離子水的第四保存管8,第一保存管5、第二保存管6、第三保存管7和第四保存管8分別置于 不同的容納腔內(nèi)，設(shè)有第一保存管5、第二保存管6、第三保存管7和第四保存管8的容納腔內(nèi) 分別設(shè)有用于固定第一保存管5、第二保存管6、第三保存管7和第四保存管8的襯墊9。
[0023] 本例中，隔板組件包括豎直設(shè)置在盒體1內(nèi)的第一隔板3和多個(gè)豎直設(shè)置在盒體1 內(nèi)的第二隔板4,第一隔板3將盒體1的內(nèi)腔分隔成彼此獨(dú)立的第一腔室和第二腔室10,多個(gè) 第二隔板4將第一腔室分隔成多個(gè)彼此獨(dú)立的容納腔。
[0024] 第一隔板3的長(zhǎng)度比第二隔板4的長(zhǎng)度長(zhǎng)。具體地，第一隔板3可將盒體1的內(nèi)腔平 均分隔成第一腔室和第二腔室10,多個(gè)第二隔板4也可將第一腔室平均分隔成多個(gè)容納腔。 具體地，第二隔板4具有3個(gè)，3個(gè)第二隔板4將第一腔室平均分隔成4個(gè)容納腔，4個(gè)容納腔內(nèi) 均設(shè)有襯墊9，襯墊9采用海綿襯墊，每個(gè)海綿襯墊上開(kāi)設(shè)有圓形插孔，第一保存管5、第二保 存管6、第三保存管7和第四保存管8分別插設(shè)在圓形插孔內(nèi)。
[0025] 本例中，試劑盒的盒蓋2的一端部與盒體1的一側(cè)壁的上端部樞轉(zhuǎn)連接，盒蓋2的另 一端部向下彎折延伸形成延伸部11，當(dāng)盒蓋2關(guān)閉盒體1的內(nèi)腔時(shí)，延伸部11塞入盒體1內(nèi)。
[0026] 本實(shí)用新型試劑盒還包括八連管，八連管置于第二腔室10內(nèi)，便于操作者使用。
[0027] 本實(shí)用新型試劑盒的JAK2突變檢測(cè)反應(yīng)液包括引物探針，其序列如下：
[0030]其中，所述JAK2突變檢測(cè)反應(yīng)液包括如下成分：
[0032]本實(shí)用新型試劑盒的具體使用步驟如下：
[0033] (1)使用常規(guī)方法提取全血樣本基因組DNA，并稀釋至lOng/μΙ。
[0034] (2)進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增；
[0035]其中，熒光定量PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系如下：
[0037]其中，熒光定量PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序如下：
[0039] (3)結(jié)果分析，方法如下：
[0040] 根據(jù)每個(gè)樣本反應(yīng)的熒光信號(hào)達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)Ct值來(lái)判斷，有擴(kuò)增曲線且 Ct值小于或等于30(前15個(gè)循環(huán)不采集熒光，實(shí)際循環(huán)數(shù)為40)為陽(yáng)性結(jié)果，說(shuō)明樣本中有 突變序列;無(wú)擴(kuò)增曲線或Ct值大于30為陰性結(jié)果，說(shuō)明樣本中無(wú)突變序列或突變序列拷貝 數(shù)低于最低檢測(cè)限。
[0041] 本實(shí)用新型試劑盒，結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單合理，便于攜帶與保存;盒體內(nèi)設(shè)計(jì)有隔板組件 及有圓形插孔的海綿襯墊，將試劑通過(guò)圓形插孔置于海綿襯墊中，有利于試劑避光，并使得 不同試劑得以存放于獨(dú)立的空間，避免了試劑間的交叉污染，同時(shí)減少了震動(dòng)對(duì)試劑造成 的影響，增加了試劑在運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性;本實(shí)用新型試劑盒還提供了檢測(cè)用八連管及 其放置區(qū)域，便于操作者使用;檢測(cè)反應(yīng)液為預(yù)混液，使用時(shí)加入反應(yīng)酶即可，無(wú)需再進(jìn)行 繁瑣的配制過(guò)程，進(jìn)一步減少實(shí)驗(yàn)污染；同時(shí)，本試劑盒檢測(cè)速度快、靈敏度高、特異性強(qiáng)。 能檢測(cè)到10個(gè)拷貝的突變基因。
[0042] 以上對(duì)本實(shí)用新型做了詳盡的描述，其目的在于讓熟悉此領(lǐng)域技術(shù)的人士能夠了 解本實(shí)用新型的內(nèi)容并加以實(shí)施，并不能以此限制本實(shí)用新型的保護(hù)范圍，凡根據(jù)本實(shí)用 新型的精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，包括具有內(nèi)腔的盒體及一端與所 述盒體的一側(cè)壁相連用于打開(kāi)或關(guān)閉所述內(nèi)腔的盒蓋，其特征在于:所述試劑盒還包括設(shè) 置在所述盒體內(nèi)能夠?qū)⑺龊畜w的內(nèi)腔分隔成彼此獨(dú)立的多個(gè)容納腔的隔板組件、裝有 JAK2突變檢測(cè)反應(yīng)液的第一保存管、裝有反應(yīng)酶的第二保存管、裝有陽(yáng)性對(duì)照的第三保存 管及裝有去離子水的第四保存管，所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管 分別置于不同的所述容納腔內(nèi)，設(shè)有所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存 管的容納腔內(nèi)分別設(shè)有用于固定所述第一保存管、第二保存管、第三保存管和第四保存管 的襯墊。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述隔板組件包括第一隔板和多個(gè)第二隔板，所述第一隔板將所述盒體的內(nèi)腔分隔成彼此獨(dú) 立的第一腔室和第二腔室，多個(gè)所述第二隔板將所述第一腔室分隔成多個(gè)彼此獨(dú)立的所述 容納腔。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于：多 個(gè)所述第二隔板將所述第一腔室平均分隔成彼此獨(dú)立的多個(gè)所述容納腔。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述第二隔板具有3個(gè)，3個(gè)所述第二隔板將所述第一腔室平均分隔成彼此獨(dú)立的4個(gè)所述容 納腔。5. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于： 所述第一隔板的長(zhǎng)度比所述第二隔板的長(zhǎng)度長(zhǎng)。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述第一隔板、多個(gè)所述第二隔板分別豎直設(shè)置在所述盒體內(nèi)。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述試劑盒還包括八連管，所述八連管置于所述第二腔室內(nèi)。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述盒蓋的一端部與所述盒體的所述一側(cè)壁的上端部樞轉(zhuǎn)連接，所述盒蓋的另一端部向下彎 折延伸形成延伸部，當(dāng)所述盒蓋關(guān)閉所述盒體的內(nèi)腔時(shí)，所述延伸部塞入所述盒體內(nèi)。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述襯墊為海綿襯墊，所述海綿襯墊上開(kāi)設(shè)有插孔，所述第一保存管、第二保存管、第三保存 管和第四保存管分別插設(shè)在所述插孔內(nèi)。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用于全血DNA中的JAK2基因突變檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所 述插孔為圓形插孔。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK205590700SQ201620434307
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月13日
【發(fā)明人】程雪濤, 林敏 , 張亞飛
【申請(qǐng)人】凱杰（蘇州）轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究有限公司