一種乙烯基膠原蛋白的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，先對(duì)膠原蛋白進(jìn)行溶解；隨后對(duì)膠原蛋白進(jìn)行接枝改性。本發(fā)明采用甲基丙烯酸酐接枝改性膠原蛋白，操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間短，反應(yīng)條件更為溫和；本發(fā)明所使用的儀器及藥品，設(shè)備要求低，成本低，可操作性強(qiáng)；本發(fā)明乙烯基膠原蛋白，為膠原蛋白自身成膜交聯(lián)，以及與其他可反應(yīng)高分子材料接枝交聯(lián)等奠定了基礎(chǔ)。
【專利說(shuō)明】
一種乙烯基膠原蛋白的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于高分子材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種乙烯基膠原蛋白的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 膠原蛋白也稱膠原，是哺乳動(dòng)物體內(nèi)含量最豐富的蛋白質(zhì)，約占蛋白質(zhì)總量的 25%~30%。膠原蛋白因其優(yōu)良的低免疫活性、生物相容性和可生物降解等特性而得到廣 泛地應(yīng)用，但未改性的膠原蛋白往往存在熱穩(wěn)定性差、降解速率過(guò)快和機(jī)械強(qiáng)度低等缺點(diǎn)， 不能滿足眾多使用環(huán)境的需求。隨著功能化需求越來(lái)越多樣性，膠原蛋白的改性成為研究 的熱點(diǎn)。通過(guò)對(duì)膠原蛋白改性，來(lái)提高膠原蛋白的熱穩(wěn)定性和機(jī)械性能，降低膠原蛋白的降 解速率。
[0003] 目前，膠原蛋白的改性大致分為交聯(lián)改性、改變活性基團(tuán)改性和引入聚合物改性。 交聯(lián)改性分為物理改性和化學(xué)改性。物理交聯(lián)法主要有光氧化法、熱脫氫及紫外輻射法。通 過(guò)物理改性方法改性的膠原蛋白可有效避免外源性有毒害化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入膠原內(nèi)，缺點(diǎn)是難 以獲得均勻一致的交聯(lián)產(chǎn)物。陳以會(huì)等用N-羥基琥珀酰亞胺己二酸酯(NHS-AA)對(duì)膠原蛋白 溶液進(jìn)行改性;A. Sionkowska等以膠原蛋白為基質(zhì)，添加羥基磷灰石制備出三維立體結(jié)構(gòu) 復(fù)合多孔支架;周磊等用γ-硫代丁內(nèi)酯對(duì)膠原蛋白進(jìn)行硫代交聯(lián)改性;嚴(yán)霞波等用乙二胺 四乙酸二酐（EDTAD)對(duì)明膠進(jìn)行?；男裕岣呙髂z蛋白的溶脹性；李季衡等用戊二醛對(duì) 1%的膠原溶液進(jìn)行改性，改善其動(dòng)態(tài)熱變性;隋智慧等用丙烯酸酯類單體對(duì)從鉻革肩中 提取的膠原蛋白進(jìn)行接枝改性，提高其與聚乙烯醇的共混能力;張昭環(huán)等在硫氰酸鈉的濃 水溶液中對(duì)膠原蛋白進(jìn)行丙烯腈接枝聚合改性;丁志文等研究了聚氨酯改性膠原蛋白的機(jī) 理、合成及在皮革化工材料中的應(yīng)用。蘭云軍等以雙氰胺、甲醛、硫代硫酸鈉和膠原蛋白為 原料，合成出雙氰胺改性膠原蛋白復(fù)鞣填充劑。然而上述改性方法，在膠原蛋白的熱穩(wěn)定 性、物理機(jī)械性能等方面改善效果并不令人滿意，且改性步驟復(fù)雜，改性時(shí)間長(zhǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，解決了現(xiàn)有接枝方法改性 后膠原蛋白的熱穩(wěn)定性及物理機(jī)械性能差的問(wèn)題。
[0005] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為，一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，具體按照以下步 驟實(shí)施：
[0006] 步驟1，稱取膠原蛋白置于磷酸緩沖溶液中攪拌，使其充分溶解，得膠原蛋白溶液；
[0007] 步驟2,在30~80°C溫度下水浴條件下將甲基丙烯酸酐滴加到步驟1所得溶液中， 攪拌1~6h，得改性后的膠原蛋白溶液；
[0008] 步驟3,將步驟2處理后的膠原蛋白溶液透析、凍干后，即得。
[0009] 本發(fā)明的特征還在于，
[0010] 步驟1中，磷酸緩沖溶液的pH為7.4,膠原蛋白與磷酸緩沖溶液的質(zhì)量體積比為1:8 ~1:12(g/mL)〇
[0011 ] 步驟1中，攪拌過(guò)程在70 °C ± 2 °C條件下，攪拌0.5~1 h。
[0012]步驟2中，甲基丙烯酸酐的質(zhì)量濃度為94%，滴加速度為lmL/min。
[0013] 步驟2中，甲基丙稀酸酐與膠原蛋白的體積質(zhì)量比為0.1:5~2.4:5(mL/g)。
[0014] 步驟3中，透析、凍干過(guò)程為:將步驟2所得溶液倒入透析袋中，用去離子水作為透 析液，在40°C ± 2°C的溫度下，透析24h，隨后在-20°C的溫度下預(yù)冷凍，再繼續(xù)冷凍直至干 燥。
[0015] 本發(fā)明的有益效果是，采用甲基丙烯酸酐與膠原蛋白直接接枝反應(yīng)，操作簡(jiǎn)單，反 應(yīng)時(shí)間短，反應(yīng)條件溫和;本發(fā)明所使用的儀器及藥品，設(shè)備要求低，成本低，可連續(xù)化操 作;本發(fā)明乙烯基膠原蛋白，可以廣泛應(yīng)用于新材料、化妝品、涂料及生化工程中。
【附圖說(shuō)明】
[0016] 圖1為本發(fā)明一種乙烯基膠原蛋白的制備方法中膠原蛋白改性后1H-NMR圖；
[0017]圖2為本發(fā)明一種乙烯基膠原蛋白的制備方法中膠原蛋白未改性1H-NMR圖；
[0018] 圖3為本發(fā)明一種乙烯基膠原蛋白的制備方法中膠原蛋白改性前后紅外光譜圖；
[0019] 圖4為本發(fā)明一種乙烯基膠原蛋白的制備方法中膠原蛋白分子量對(duì)改性膠原蛋白 取代度影響；
[0020] 圖5為本發(fā)明一種乙烯基膠原蛋白的制備方法中甲基丙烯酸酐的用量對(duì)改性膠原 蛋白取代度的影響；
[0021] 圖6為本發(fā)明一種乙烯基膠原蛋白的制備方法中反應(yīng)時(shí)間對(duì)改性膠原蛋白取代度 的影響；
[0022] 圖7為本發(fā)明一種乙烯基膠原蛋白的制備方法中反應(yīng)溫度對(duì)改性膠原蛋白取代度 的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0024]本發(fā)明一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，具體按照以下步驟實(shí)施：
[0025] 步驟1，稱取膠原蛋白（重均分子質(zhì)量為4825、145508或181266)與磷酸緩沖溶液 (pH為7.4)混合，在70°C±2°C的溫度下攪拌0.5~lh，使之充分溶解，得膠原蛋白溶液。其 中，膠原蛋白與磷酸緩沖溶液的質(zhì)量體積比為1:8~1:12(g/mL)。
[0026] 步驟2,將步驟1溶解后的膠原蛋白置于30~80°C溫度下水浴環(huán)境中，以lmL/min的 速率向其中加入質(zhì)量濃度為94%的甲基丙烯酸酐，攪拌反應(yīng)1~6h，得改性后膠原蛋白溶 液;其中，甲基丙稀酸酐與膠原蛋白的體積質(zhì)量比為〇. 1:5~2.4:5(mL/g)。
[0027]步驟3,將步驟2改性后膠原蛋白溶液置于適宜的分子量大小（500D或3500D)的透 析袋中，用去離子水作為透析液，在40°C±2°C溫度下透析24h，經(jīng)透析后的膠原蛋白溶液放 置在冷凍干燥機(jī)中，_20°C預(yù)冷凍，然后冷凍干燥，即得。
[0028]以下從原理方面對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明：
[0029] 1)膠原蛋白的溶解
[0030] 膠原蛋白與磷酸緩沖溶液的質(zhì)量體積比為1:8~l:12(g/mL)，置于70°C±2°C溫度 下攪拌0.5~lh。其中，磷酸緩沖溶液的pH為7.4,主要目的是將膠原蛋白充分溶解，提供相 對(duì)穩(wěn)定的pH環(huán)境。
[0031] 2)甲基丙烯酸酐改性膠原蛋白
[0032] 甲基丙烯酸酐在加熱的條件下可以和膠原蛋白中的賴氨酸殘基中伯氨-NH2發(fā)生 反應(yīng)生成酰胺鍵，使甲基丙烯酸酐中的C = C引入到膠原蛋白結(jié)構(gòu)中。在反應(yīng)過(guò)程中磷酸緩 沖溶液主要是用來(lái)溶解膠原蛋白，提供一個(gè)相對(duì)溫和的反應(yīng)環(huán)境。甲基丙烯酸酐用量的多 少直接關(guān)系到接枝后C = C雙鍵數(shù)目的多少，甲基丙烯酸酐用量太少，在膠原蛋白表面接枝 形成的C = C雙鍵數(shù)目就少，不會(huì)再膠原蛋白間形成交聯(lián)作用。一般情況下反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng) 溫度之間是有交互作用的，溫度高分子運(yùn)動(dòng)加快，反應(yīng)效率提升，反應(yīng)時(shí)間縮短;溫度低分 子運(yùn)動(dòng)減慢，反應(yīng)效率降低，反應(yīng)時(shí)間增長(zhǎng)。
[0033] 實(shí)施例1
[0034] 步驟1，稱取重均分子質(zhì)量為181266的膠原蛋白5g與50mL磷酸緩沖溶液(pH為7.4) 混合，在70°C的溫度下攪拌0.5h，使之充分溶解。
[0035] 步驟2,將步驟1的膠原蛋白溶液置于40°C溫度下水浴環(huán)境中，以lmL/min的速率向 其中加入甲基丙烯酸酐O.lmL，攪拌反應(yīng)2h，得不同取代度的乙烯基膠原蛋白（CMA)溶液。 [0036] 步驟3,將步驟2的CMA溶液置于適宜的分子量大小為3500D的透析袋中，用去離子 水作為透析液，在40 °C溫度下透析24h，經(jīng)透析后的膠原蛋白溶液放置在冷凍干燥機(jī)中，-20 °C預(yù)冷凍，然后冷凍干燥，待用。
[0037] 實(shí)施例2~實(shí)施例9
[0038]參見實(shí)施例1，與實(shí)施例1不同的是，步驟2中，甲基丙烯酸酐的加入量依次為 0·3mL、0·6mL、0·9mL、1·2mL、1·5mL、1·8mL、2·lmL和2·4mL〇
[0039] 實(shí)施例10
[0040] 步驟1，稱取重均分子質(zhì)量為181266的膠原蛋白5g與50mL磷酸緩沖溶液(pH為7.4) 混合，在70°C的溫度下攪拌0.5h，使之充分溶解。
[0041] 步驟2,將步驟1的膠原蛋白溶液置于50°C溫度下水浴環(huán)境中，以lmL/min的速率向 其中加入甲基丙烯酸酐1.5mL，攪拌反應(yīng)時(shí)間為lh，得不同取代度的乙烯基膠原蛋白（CMA) 溶液。
[0042]步驟3,將步驟2改性后膠原蛋白溶液置于適宜的分子量大小3500D的透析袋中，用 去離子水作為透析液，在40 °C溫度下透析24h，經(jīng)透析后的膠原蛋白溶液放置在冷凍干燥機(jī) 中，-20 °C預(yù)冷凍，然后冷凍干燥，待用。
[0043] 實(shí)施例11~15
[0044]參見實(shí)施例10,與實(shí)施例10不同的是，步驟2中，攪拌反應(yīng)時(shí)間依次為2h、3h、4h、5h 和6h。
[0045] 實(shí)施例16
[0046] 步驟1，稱取重均分子質(zhì)量為181266的膠原蛋白5g與50mL磷酸緩沖溶液(pH為7.4) 混合，在70°C的溫度下攪拌0.5h，使之充分溶解。
[0047]步驟2,將步驟1的膠原蛋白溶液分別置于30°C水浴溫度下，以lmL/min的速率向其 中加入甲基丙烯酸酐1.5mL，攪拌反應(yīng)分別為2h，得不同取代度的乙烯基膠原蛋白（CMA)溶 液。
[0048]步驟3,將步驟2改性后膠原蛋白溶液置于適宜的分子量大小3500D的透析袋中，用 去離子水作為透析液，在40 °C溫度下透析24h，經(jīng)透析后的膠原蛋白溶液放置在冷凍干燥機(jī) 中，-20 °C預(yù)冷凍，然后冷凍干燥，待用。
[0049] 實(shí)施例17~21
[0050]參見實(shí)施例16,與實(shí)施例16不同的是，步驟2中，將步驟1的膠原蛋白溶液依次置于 40 °C、50 °C、60 °C、70 °C、80 °C 水浴溫度下。
[0051 ] 實(shí)施例22
[0052] 步驟1，稱取重均分子質(zhì)量為G1是4825、G2是145508、G3是181266的膠原蛋白5g與 50mL磷酸緩沖溶液(pH為7.4)混合，在70°C的溫度下攪拌0.5h，使之充分溶解。
[0053] 步驟2,將步驟1的膠原蛋白溶液分別置于50°C水浴溫度下，以lmL/min的速率向其 中加入甲基丙烯酸酐O.lmL，攪拌反應(yīng)分別為2h，得不同取代度的乙烯基膠原蛋白（CMA)溶 液。
[0054]步驟3,將步驟2改性后膠原蛋白溶液置于適宜的分子量大小3500D的透析袋中，用 去離子水作為透析液，在40 °C溫度下透析24h，經(jīng)透析后的膠原蛋白溶液放置在冷凍干燥機(jī) 中，-20 °C預(yù)冷凍，然后冷凍干燥，待用。
[0055] 實(shí)施例23~30
[0056] 參見實(shí)施例22,與實(shí)施例22不同的是，步驟2中，甲基丙烯酸酐的加入量依次為 0·3mL、0·6mL、0·9mL、1·2mL、1·5mL、1·8mL、2·lmL和2·4mL〇
[0057] 利用本發(fā)明方法所得膠原蛋白改性前后的試樣進(jìn)行的核磁OH-匪R)分析檢測(cè)如 圖1、圖2，與未改性的（圖2) h-NMR譜圖對(duì)比分析得，經(jīng)改性后（圖1)膠原蛋白的1H-NMR譜圖 在5.5ppm和5.8ppm處有出峰，這是端稀(C = CH2)碳上的氫的同碳親合峰，說(shuō)明通過(guò)甲基丙 烯酸酐對(duì)膠原蛋白的改性在膠原蛋白分子鏈上成功的引入了雙鍵。圖3為甲基丙烯酸酐對(duì) 膠原蛋白改性以后得到的紅外譜圖，未改性膠原蛋白在1030CHT 1處的峰為脂肪胺的出峰，SP 賴氨酸殘基上伯氨的C-N峰，經(jīng)過(guò)甲基丙烯酸酐對(duì)膠原蛋白改性以后得到的紅外譜圖中此 處的C-N峰（K^Ocnf1)消失，由此判斷甲基丙烯酸酐主要與膠原蛋白中賴氨酸的氨基發(fā)生反 應(yīng)，證明膠原蛋白分子鏈上賴氨酸殘基的伯氨參與了反應(yīng)。
[0058] 圖4為不同分子量的膠原蛋白的取代度與甲基丙烯酸酐加入量的關(guān)系，甲基丙烯 酸酐(MA)的加入量大于0.6mL時(shí)，G1和G3取代度增加緩慢，G2的取代度不再增加。當(dāng)MA的用 量為1 . 5mL時(shí)，G1的取代度最大，即93 % ;當(dāng)MA的用量為0.9mL時(shí)，G2的取代度最大，即 77.2% ;當(dāng)MA的用量為1.8mL時(shí)，G3的取代度最大，即83%。分別對(duì)G1、G2和G3的分子質(zhì)量的 大小進(jìn)行檢測(cè)，G1的重均分子質(zhì)量(Mw)為4825，G2的Mw是145508，G3的Mw是181266,且G2的 分散系數(shù)為4.9，G3的分散系數(shù)為1.0,這說(shuō)明G2有很多小分子質(zhì)量的膠原蛋白存在。所以相 對(duì)分子質(zhì)量較小的膠原蛋白的ε_(tái)氨基暴露的更多，與MA的反應(yīng)幾率增加，取代度相對(duì)比較 大。
[0059] 本發(fā)明還研究了甲基丙烯酸酐、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度對(duì)膠原蛋白改性取代度的影 響：
[0060] 甲基丙烯酸酐用量對(duì)膠原蛋白改性取代度的影響：如圖5所示，隨著甲基丙烯酸酐 的加入量的增加，改性膠原蛋白的取代度在增加，當(dāng)甲基丙烯酸酐的量加入到一定程度時(shí)， 改性膠原蛋白的取代度增加不明顯，當(dāng)甲基丙烯酸酐的用量大于1.5ml時(shí)，改性膠原蛋白的 取代度不再有明顯增加。由改性膠原蛋白取代度公式（1)得出，當(dāng)甲基丙烯酸酐量為1.5mL 時(shí)，改性膠原蛋白的取代度為79.766%。這是因?yàn)殡S著甲基丙烯酸酐用量的增加，膠原蛋白 上賴氨酸殘基上的伯氨在逐步的與甲基丙烯酸酐進(jìn)行反應(yīng)，改性膠原蛋白的取代度在逐漸 增加，但膠原蛋白上的賴氨酸的數(shù)量一定，當(dāng)甲基丙烯酸酐的數(shù)量再繼續(xù)增加時(shí)，賴氨酸殘 基上的氨已經(jīng)反應(yīng)完，所以再繼續(xù)增加甲基丙烯酸酐的量時(shí)，改性膠原蛋白的取代度將不 再增加或增加不明顯。
[0061] 反應(yīng)時(shí)間對(duì)膠原蛋白改性取代度的影響：如圖6所示，改性膠原蛋白的取代度隨 著反應(yīng)時(shí)間的增加是先增加后趨于平衡，當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行到2~3h時(shí)，改性所得的膠原蛋白的取 代度最大，反應(yīng)上去的甲基丙烯酸酐的量越多。由改性膠原蛋白取代度公式（1)得出，當(dāng)反 應(yīng)時(shí)間為2h時(shí)，改性膠原蛋白的取代度為78.787%。當(dāng)再繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)間時(shí)改性膠原蛋白的 取代度不再增加。說(shuō)明隨著時(shí)間的增加反應(yīng)在逐步的進(jìn)行，當(dāng)反應(yīng)到達(dá)2~3h時(shí)，膠原蛋白 上的氨基已經(jīng)被完全反應(yīng)，所以再繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)間，改性膠原蛋白的取代度不再繼續(xù)增加。
[0062] 反應(yīng)溫度對(duì)膠原蛋白改性取代度的影響：如圖7所示，隨著溫度的提升改性膠原蛋 白的取代度先增加后降低，當(dāng)反應(yīng)溫度為50°C時(shí)，改性膠原蛋白的取代度最大，再繼續(xù)逐步 升高反應(yīng)溫度時(shí)，改性膠原蛋白的取代度不但沒(méi)有增加反而在減小。這是因?yàn)?，隨著反應(yīng)溫 度的增加，分子運(yùn)動(dòng)加劇，分子碰撞幾率增加，反應(yīng)效率提高，所以當(dāng)溫度升高到50°C時(shí)膠 原蛋白的氨基和甲基丙烯酸酐的反應(yīng)效率最高。由改性膠原蛋白取代度公式（1)得出，當(dāng)反 應(yīng)溫度為50°C時(shí)，改性膠原蛋白的取代度為81.289%。
[0063]其中，乙烯基化膠原蛋白取代度的測(cè)定：乙烯基化膠原蛋白的取代度測(cè)定主要使 用Habeeb法進(jìn)行測(cè)定。本檢測(cè)方法采用的標(biāo)準(zhǔn)物為甘氨酸，測(cè)量出甘氨酸在不同濃度下的 吸光度，繪制甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而測(cè)得乙烯基化膠原蛋白中的自由氨基濃度，進(jìn)而得到乙 烯基化膠原蛋白的取代度。具體檢測(cè)方法:將甘氨酸配制成不同的濃度梯度，做甘氨酸的標(biāo) 準(zhǔn)曲線。將乙烯基化膠原蛋白配制為0.6~lmg/mL的乙烯基化膠原蛋白溶液然后取lmL待測(cè) 溶液于5mL棕色容量瓶中，并向棕色容量瓶中加入lmL碳酸氫鈉緩沖溶液（pH = 8.4)和 lmLO. 1 %的三硝基苯磺酸(TNBSA)溶液。置于水浴恒溫振蕩器中，在38°C的條件下振蕩培養(yǎng) 2小時(shí)后，取出。再向棕色容量瓶中加入lmL( 10 % )的十二烷基硫酸鈉水溶液和0.5mL (lmol/L)的鹽酸溶液。隨后測(cè)溶液在345nm下的吸光度。從而得到改性膠原蛋白的氨基含 量，根據(jù)公式(1)計(jì)算得到相應(yīng)的取代度。
[0065] 式中：A--取代度；
[0066] No--未改性明膠自由氨基濃度(mm〇l/L);
[0067] Nf--改性明膠中自由氨基濃度(mm〇l/L)。
[0068] 未改性的膠原蛋白往往存在熱穩(wěn)定性差、降解速率過(guò)快和機(jī)械強(qiáng)度低等缺點(diǎn)，本 發(fā)明利用甲基丙烯酸酐在加熱的條件下可以和膠原蛋白中的賴氨酸殘基中伯氨-NH 2發(fā)生 反應(yīng)生成酰胺鍵，使甲基丙烯酸酐中的C = C引入到膠原蛋白結(jié)構(gòu)中，增大膠原蛋白分子鏈 之間的交聯(lián)度，提高膠原蛋白的熱穩(wěn)定性。在膠原蛋白的三維結(jié)構(gòu)中引入C = C雙鍵，增加結(jié) 構(gòu)的穩(wěn)定性，提高膠原蛋白的物理機(jī)械強(qiáng)度。通過(guò)膠原蛋白溶解、改性、透析凍干三步，改性 膠原蛋白，提出一種易操作、時(shí)間短的膠原蛋白改性方案，可以廣泛應(yīng)用于新材料、化妝品、 涂料及生化工程中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，其特征在于，具體按照以下步驟實(shí)施： 步驟1，稱取膠原蛋白置于磷酸緩沖溶液中攪拌，使其充分溶解，得膠原蛋白溶液； 步驟2,在30~80°C溫度下水浴條件下將甲基丙烯酸酐滴加到步驟1所得溶液中，攪拌1 ~6h，得不同取代度的乙烯基膠原蛋白溶液； 步驟3,對(duì)步驟2處理后的膠原蛋白透析、凍干后，待用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟1中，磷酸 緩沖溶液的pH為7.4,膠原蛋白與磷酸緩沖溶液的質(zhì)量體積比為1:8~1:12。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟1中，攪拌 過(guò)程在70°C ± 2°C條件下，攪拌0.5~lh。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟2中，甲基 丙烯酸酐的質(zhì)量濃度為94%，滴加速度為lmL/min。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟2中，甲基 丙稀酸酐與膠原蛋白的體積質(zhì)量比為〇. 1:5~2.4:5。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乙烯基膠原蛋白的制備方法，其特征在于，步驟3中，透 析、凍干過(guò)程為:將步驟2所得溶液倒入截留分子量為500或3500的透析袋中，用去離子水作 為透析液，在40°C ±2°C的溫度下，透析24h，隨后在-20°C的溫度下預(yù)冷凍，再繼續(xù)冷凍直至 干燥。
【文檔編號(hào)】C08H1/00GK105936671SQ201610395101
【公開日】2016年9月14日
【申請(qǐng)日】2016年6月6日
【發(fā)明人】徐娜, 王學(xué)川, 任龍芳, 馬向東, 強(qiáng)濤濤, 石葉葉, 董佳琳
【申請(qǐng)人】陜西科技大學(xué)