本發(fā)明涉及中藥，尤其涉及一種復(fù)方海桐皮的提取方法及其有效成分含量測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

1、海桐皮湯，其經(jīng)典配方為：海桐皮、透骨草、乳香、沒(méi)藥各6g，當(dāng)歸(酒洗)4.5g，川椒9g，川芎、紅花各3g，威靈仙、白芷、甘草、防風(fēng)各2.4g。海桐皮湯始載于明·吳謙所著《醫(yī)宗金鑒·正骨心法要旨》，專洗一切跌打損傷，筋翻骨錯(cuò)，疼痛不止，該方劑的十二味藥中，海桐皮作為君藥，具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、止痛等功效；透骨草、防風(fēng)等藥材為臣藥。

2、現(xiàn)代中醫(yī)臨床常將海桐皮湯以熏洗之法治療骨關(guān)節(jié)炎(oa)，可減輕腫脹，緩解疼痛，增加關(guān)節(jié)屈伸活動(dòng)度，改善功能障礙，療效確切。

3、但是，采用海桐皮湯以熏洗治療o(wú)a，至少存在以下缺點(diǎn)：

4、操作繁瑣耗時(shí)，患者長(zhǎng)期應(yīng)用的依從性低、藥液的溫度不易控制，有燙傷的風(fēng)險(xiǎn)，藥液的應(yīng)用濃度沒(méi)有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，藥力效果無(wú)法保證，因此嚴(yán)重制約其發(fā)展。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的之一，就在于提供一種復(fù)方海桐皮的提取方法，以解決上述問(wèn)題。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是這樣的：一種復(fù)方海桐皮的提取方法，所述復(fù)方海桐皮的配方為：海桐皮、透骨草、乳香和沒(méi)藥，其提取方法為，將海桐皮與透骨草合并提取，乳香與沒(méi)藥合并提取。

3、原方(海桐皮湯)由12味藥組成，若全部作為原料將給制劑工藝帶來(lái)困難，為了用藥更方便、效果更確切，同時(shí)考慮到藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)原則，本申請(qǐng)經(jīng)過(guò)大量的理論分析和試驗(yàn)研究，將治療o(wú)a的經(jīng)典熏洗方劑海桐皮湯化裁為僅含有海桐皮(豆科植物喬木刺桐erythrinavariegate?l.的干燥樹(shù)皮)、透骨草(鳳仙花科植物鳳仙花impatiens?balsamina?l.的莖)、乳香(橄欖科植物乳香樹(shù)boswellia?carterii?birdw.及同屬植物boswelliabhaw-dajianabirdw.樹(shù)皮滲出的樹(shù)脂)、沒(méi)藥(橄欖科植物地丁樹(shù)commiphoramrrha?engl.或哈地丁樹(shù)commiphora?molmol?engl.的干燥樹(shù)脂)四味藥材的復(fù)方海桐皮方劑，并選擇東莨菪內(nèi)酯、槲皮素、山奈酚、β-乳香酸及豆甾醇5個(gè)成分作為復(fù)方海桐皮治療o(wú)a的有效成分，現(xiàn)有多項(xiàng)研究證明這五種成分均具有抗炎、抗氧化等藥理作用，與海桐皮湯治療o(wú)a的機(jī)制吻合。

4、為此，采用合適的提取方法將上述四味藥材中的相關(guān)有效成分提取出來(lái)，就非常關(guān)鍵。本發(fā)明一方面通過(guò)大量試驗(yàn)，確定了其中五種有效成分的含量測(cè)定方法；另一方面，在有效成分含量測(cè)定的基礎(chǔ)上，指導(dǎo)研究了有效成分的提取方法，以滿足化裁后的復(fù)方海桐皮(簡(jiǎn)稱chd)用于治療o(wú)a的有效性和安全性的需要。

5、由于乳香、沒(méi)藥均為樹(shù)脂類成分，粘性強(qiáng)，難以過(guò)濾，故本申請(qǐng)?jiān)谶M(jìn)行提取工藝研究時(shí)將chd分為2組，海桐皮與透骨草共同提取、乳香與沒(méi)藥共同提取，后者選用離心法收集提取液，利用hplc分別建立2個(gè)藥對(duì)中有效成分的含量測(cè)定方法并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，以有效成分的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，在單因素考察的基礎(chǔ)上，根據(jù)層次分析法(ahp)與一種客觀賦權(quán)法critic法相結(jié)合對(duì)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，利用box-behnken響應(yīng)面法的中心組合設(shè)計(jì)原理，對(duì)2組藥對(duì)中5種活性成分的提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化并通過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證其結(jié)果。

6、作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述海桐皮與透骨草共同提取的方法為：采用85vol.％～95vol.％乙醇溶液作為提取溶劑，超聲提取40～80min，料液比為1:20～1:40g·ml-1，提取次數(shù)為1次～3次。

7、作為進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方案，所述提取方法為：稱取0.5g海桐皮與0.5g透骨草混合，先加33ml的95vol.％乙醇超聲提取40.5min后，過(guò)濾；藥渣再加33ml的95vol.％乙醇再超聲提取40.5min；兩次提取液合并、濃縮，即得。

8、作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述乳香與沒(méi)藥共同提取的方法為：采用85vol.％～95vol.％乙醇溶液作為提取溶劑，超聲提取40～80min，料液比為1:10～1:30g·ml-1，提取次數(shù)為1次～3次。

9、作為進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方案，

10、稱取0.5g乳香與0.5g沒(méi)藥混合，先加19ml的90vol.％乙醇超聲提取63min后，過(guò)濾；藥渣再加19ml的90vol.％乙醇再超聲提取63min；兩次提取液合并后濃縮，即得。

11、本發(fā)明的目的之二，在于提供一種復(fù)方海桐皮有效成分含量測(cè)定方法，采用的技術(shù)方案為，所述復(fù)方海桐皮的配方為：海桐皮、透骨草、乳香和沒(méi)藥，所述含量測(cè)定方法為采用hplc方法測(cè)定，具體測(cè)定的色譜調(diào)節(jié)為：

12、所述海桐皮中東莨菪內(nèi)酯、槲皮素、山奈酚，透骨草中豆甾醇作為測(cè)定目標(biāo)，測(cè)定方法為：

13、色譜柱：c18柱；

14、流動(dòng)相：0.4vol.％磷酸水為a相、乙腈為b相，梯度洗脫；

15、檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；

16、所述乳香中的β-乳香酸、沒(méi)藥中的豆甾醇作為測(cè)定目標(biāo)，測(cè)定方法為：

17、色譜柱：c18柱，

18、流動(dòng)相：0.4vol.％磷酸水為a相、乙腈為b相，梯度洗脫；

19、檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。

20、作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述透骨草中豆甾醇測(cè)定時(shí)的梯度洗脫程序?yàn)椋?～20min，90～100％b；20～50min，100％b；50～60min，90％b。

21、作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述乳香中的β-乳香酸、沒(méi)藥中的豆甾醇測(cè)定時(shí)的梯度洗脫程序?yàn)椋?～20min，80％～90％b；20～35min，90％～100％b；35～65min，100％～100％b；65～65min，100％～80％b；65～75min，80～80％b。

22、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明的復(fù)方海桐皮的有效成分含量測(cè)定方法穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性都較高，其有效成分提取方法簡(jiǎn)單易行，利于工業(yè)化應(yīng)用；得到的復(fù)方海桐皮提取液，對(duì)于骨關(guān)節(jié)炎有確切療效。

技術(shù)特征：

1.一種復(fù)方海桐皮的提取方法，其特征在于，所述復(fù)方海桐皮的配方為：海桐皮、透骨草、乳香和沒(méi)藥，其提取方法為，將海桐皮與透骨草合并提取，乳香與沒(méi)藥合并提取。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方海桐皮的提取方法，其特征在于，所述海桐皮與透骨草共同提取的方法為：采用85vol.%～95vol.%乙醇溶液作為提取溶劑，超聲提取40～80min，料液比為1:20～1:40?g·ml-1，提取次數(shù)為1次～3次。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)方海桐皮的提取方法，其特征在于，所述提取方法為：稱取0.5g海桐皮與0.5g透骨草混合，先加33ml的95vol.%乙醇超聲提取40.5min后，過(guò)濾；藥渣再加33ml的95vol.%乙醇再超聲提取40.5min；兩次提取液合并、濃縮，即得。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方海桐皮的提取方法，其特征在于，所述乳香與沒(méi)藥共同提取的方法為：采用85vol.%～95vol.%乙醇溶液作為提取溶劑，超聲提取40～80min，料液比為1:10～1:30?g·ml-1，提取次數(shù)為1次～3次。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)方海桐皮的提取方法，其特征在于，

6.一種復(fù)方海桐皮有效成分含量測(cè)定方法，其特征在于，所述復(fù)方海桐皮的配方為：海桐皮、透骨草、乳香和沒(méi)藥，所述含量測(cè)定方法為采用hplc方法測(cè)定，具體測(cè)定的色譜調(diào)節(jié)為：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的含量測(cè)定方法，其特征在于，所述透骨草中豆甾醇測(cè)定時(shí)的梯度洗脫程序?yàn)椋?～20?min，90～100%b；20～50min，100%b；50～60min，90%b。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的含量測(cè)定方法，其特征在于，所述乳香中的β-乳香酸、沒(méi)藥中的豆甾醇測(cè)定時(shí)的梯度洗脫程序?yàn)椋?～20?min，80%～90%b；20～35?min，90%～100%b；35～65?min，100%～100%b；65～65?min，100%～80%b；65～75?min，80～80%b。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種復(fù)方海桐皮的提取方法及其有效成分含量測(cè)定方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，所述復(fù)方海桐皮的配方為海桐皮、透骨草、乳香和沒(méi)藥，其提取方法為，將海桐皮與透骨草合并提取，乳香與沒(méi)藥合并提??；所述有效成分測(cè)定方法是以東莨菪內(nèi)酯、槲皮素、山奈酚、豆甾醇和β?乳香酸為測(cè)定目標(biāo)，采用HPLC法進(jìn)行測(cè)定；本發(fā)明的復(fù)方海桐皮的有效成分含量測(cè)定方法穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性都較高，其有效成分提取方法簡(jiǎn)單易行，利于工業(yè)化應(yīng)用；得到的復(fù)方海桐皮提取液，對(duì)于骨關(guān)節(jié)炎有確切療效。

技術(shù)研發(fā)人員：游元元,吳銘,徐寶玲,劉鑫
受保護(hù)的技術(shù)使用者：成都醫(yī)學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21