一種含有艾塞那肽的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及到一種含有艾塞那肽的組合物，組合物制備采用醋酸艾塞那肽作為起始原料，在制備艾塞那肽微球的過(guò)程中，選擇適當(dāng)?shù)那逑匆杭捌溆昧?，在微球凍干過(guò)程中，選擇適當(dāng)?shù)脑俑稍餃囟裙袒⑶?，使得微球中醋酸的含量降至極低，獲得符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)且特性良好的微球產(chǎn)品，使微球的穩(wěn)定性提高，延長(zhǎng)藥物的儲(chǔ)存時(shí)間。
【專利說(shuō)明】一種含有艾塞那肽的組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到一種含有艾塞那肽的組合物，所述組合物是微球形式，本發(fā)明采用醋酸艾塞那肽作為起始原料制備微球，通過(guò)降低醋酸的濃度至極低含量，使微球的穩(wěn)定性提高，延長(zhǎng)藥物的儲(chǔ)存時(shí)間。
【背景技術(shù)】
[0002]艾塞那肽是人工合成的腸促胰島素類似物GLP-1家族的第一個(gè)成員，它模擬人體生理狀態(tài)下分泌GLP-1的生物模式，從腸內(nèi)釋放入循環(huán)中后可以增強(qiáng)葡萄糖依賴性胰島素分泌。艾塞那肽的氨基酸序列與人類GLP-1部分重疊，在體顯示可以結(jié)合并活化已知的人類GLP-1受體，通過(guò)包括cAMP和/或其他細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制使葡萄糖依賴性胰島素合成及胰島β細(xì)胞在體內(nèi)分泌胰島素增加。在葡萄糖濃度升高的情況下，艾塞那肽可促進(jìn)胰島素從β細(xì)胞中釋放同時(shí)艾塞那肽通過(guò)減少2型糖尿病患者空腹和餐后血糖濃度，從而改善血糖控制。
[0003]艾塞那肽已上市的產(chǎn)品主要有注射劑，僅用于皮下注射。推薦起始劑量為5 μ g，每日兩次，治療I個(gè)月后，可根據(jù)臨床反應(yīng)將劑量增加至10 μ g。該制劑每日兩次(bid)注射，平均達(dá)峰時(shí)間為2.lh，平均消除半衰期為2.4h，主要由腎臟消除。這種注射劑需要頻繁給藥，且不能持續(xù)活化GLP-1受體，對(duì)于需要長(zhǎng)期給藥的糖尿病患者而言依從性較差。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)已有采用相分離方法制備艾塞那肽微球，采用相分離方法生產(chǎn)操作步驟多，對(duì)設(shè)備工藝要求高，醫(yī)藥產(chǎn)品相關(guān)無(wú)菌及溶劑殘留等質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，也會(huì)使的相分離方法制備工藝制備的微球還需要多個(gè)工序的產(chǎn)品處理；因?yàn)橄喾蛛x生產(chǎn)艾塞那肽微球存在以上不足，一些研究機(jī)構(gòu)開(kāi)展采用溶劑揮發(fā)法生產(chǎn)艾塞那肽微球研究，其生產(chǎn)設(shè)備要求低，工作操作步驟較少，采用較少的后處理工序處理產(chǎn)品即可達(dá)到相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。艾塞那肽市售產(chǎn)品為艾塞那肽的醋酸鹽，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求:3% <醋酸含量< 12%，現(xiàn)有技術(shù)對(duì)生產(chǎn)的艾塞那肽微球過(guò)程未有相關(guān)醋酸含量控制，但是通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)艾塞那肽微球醋酸含量對(duì)儲(chǔ)存期內(nèi)艾塞那肽生物利用度有影響，當(dāng)醋酸含量超過(guò)0.01%，會(huì)產(chǎn)生使儲(chǔ)存期內(nèi)微球中的艾塞那肽生物利用度下降的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本發(fā)明人進(jìn)行深入研究，提供一種含有艾塞那肽的組合物，所述組合物是微球，起始原料采用艾塞那肽醋酸鹽(市售產(chǎn)品，3 <醋酸含量(12%)和聚丙交酯乙交酯(PLGA)，所述制備的艾塞那肽微球控制醋酸含量為0.01%以下。
[0006]制備的艾塞那肽微球中艾塞那肽含量相對(duì)于組合物總重量為2-10%,優(yōu)選3-8%,更優(yōu)
[0007]選4_6%。
[0008]制備的艾塞那肽微球中聚丙交酯乙交酯(PLGA)含量相對(duì)于組合物總重量為90-98%,優(yōu)選 92-97%，更優(yōu)選 94_96%。[0009]所述丙交酯-乙交酯共聚物，英文名稱為Poly (lactide-co-glycolide),簡(jiǎn)稱PLGA0所述PLGA的丙交酯和乙交酯的摩爾比為90:10 - 10:90，優(yōu)選75:25 — 25:75，更優(yōu)選 60:40-40:60，尤其是 50:50。
[0010]丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)的特性粘度為0.1-0.40dL/g,優(yōu)選范圍
0.10-0.35dL/g,更優(yōu)選為 0.10-0.30dL/g。PLGA 白勺特性粘度(inherent viscosity)測(cè)定方法:將PLGA用氯仿配制成約0.5% (w/ v)的溶液,于30°C采用Cannon-Fenske玻璃毛細(xì)管粘度計(jì)測(cè)定其特性粘度。
[0011]本發(fā)明所說(shuō)的丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)分子量為6000-45000道爾頓，優(yōu)選為10000-30000道爾頓，更優(yōu)選10000-25000道爾頓。所述分子量指“重均分子量”，簡(jiǎn)稱為“分子量”。
[0012]為方便描述，下文對(duì)丙交酯和乙交酯的摩爾比以及特性粘度在其括號(hào)中進(jìn)行表示。如“PLGA (50/50,0.20，16000)”表示丙交酯和乙交酯的摩爾比為50:50，特性粘度為
0.20dl/g，分子量為16000道爾頓的丙交酯-乙交酯共聚物。
[0013]本發(fā)明所述微球是通過(guò)溶劑揮發(fā)法制備獲得，所述溶劑揮發(fā)法，過(guò)程可以如下:稱量一定量的市售醋酸艾塞那肽，可以同時(shí)稱量一定量的助溶劑、蛋白保護(hù)劑、表面活性劑、致孔劑等輔料，可以先用蒸餾水溶解醋酸艾塞那肽，選用的輔料也可以溶解于蒸餾水中，稱量一定量的PLGA，用有機(jī)溶劑溶解，所述有機(jī)溶劑可以是二氯甲烷、丙酮、乙腈等可以溶解PLGA的有機(jī)溶劑，優(yōu)選二氯甲烷；將含有艾塞那肽和輔料的水溶液與有機(jī)溶劑混合，形成初乳，；將含有醋酸艾塞那肽和PLGA的初乳添加至所述水相(如聚乙烯醇溶液)中乳化，形成、W/0/W復(fù)乳，固化、揮發(fā)有機(jī)溶劑，清洗控制醋酸的含量，凍干進(jìn)一步減少醋酸的含量，最終獲得符合要求的微球。
[0014]在制備艾塞那肽微球的過(guò)程中，清洗液用量的選擇及凍干微球時(shí)間和溫度對(duì)制備的微球的醋酸含量減少起到關(guān)鍵作用，本發(fā)明可采用蒸餾水或堿性緩沖液作為清洗液對(duì)微球清洗，清洗液與微球的重量比為1:250以上，優(yōu)選重量比為1:330以上；在選定的重量比下清洗微球，為獲得極低醋酸含量的艾塞那肽微球打下基礎(chǔ)。
[0015]采用蒸餾水或堿性緩沖液作為清洗液對(duì)微球清洗，可以使清洗液的pH值穩(wěn)定在一定的范圍，采用的緩沖液可以是枸櫞酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、鄰苯二甲酸鹽緩沖液等緩沖液，為了減少清洗過(guò)程給微球帶來(lái)新的物質(zhì)，同時(shí)方便GMP無(wú)菌操作，優(yōu)選蒸餾水。
[0016]在制備艾塞那肽微球的過(guò)程中，凍干過(guò)程中的再干燥溫度對(duì)制備的微球醋酸的含量起到重要作用，本發(fā)明采用再干燥溫度為醋酸艾塞那肽+PLGA混合物玻璃化轉(zhuǎn)變溫度以下，可以獲得符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)且特性良好的微球產(chǎn)品。
[0017]再干燥為凍干過(guò)程當(dāng)升華干燥階段完成后，為盡可能除去殘余的水，需要進(jìn)一步的干燥。
[0018]本發(fā)明通過(guò)在制備微球過(guò)程中控制醋酸的含量制備艾塞那肽微球，使微球達(dá)到較長(zhǎng)的儲(chǔ)存期內(nèi)，生物利用度不變的特性，延長(zhǎng)產(chǎn)品的儲(chǔ)存期。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明加以進(jìn)一步的說(shuō)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。[0020]實(shí)施例1采用醋酸艾塞那肽+PLGA重量:清洗液=1:250制備艾塞那肽微球
[0021]制備方法:稱取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸餾水25ml攪拌溶解，配制成溶液，稱取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A16000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml攪拌溶解，將二個(gè)溶液混合均勻得初乳；將配制好的1%PVA溶液75L除菌過(guò)濾后加入至真空乳化攪拌機(jī)(以下簡(jiǎn)稱微球制備釜)中并冷卻至7~13°C，作為水相。將初乳加入至微球制備爸中，均質(zhì)乳化速度為400rpm,加料結(jié)束繼續(xù)乳化60s后，降低均質(zhì)攪拌速度為150rpm,維持5h，待微球固化后過(guò)濾收集微球，稱量37.5kg蒸餾水作為清洗液沖洗微球，轉(zhuǎn)移至凍干盤中，加入甘露醇注射液和適量水溶液，置冷凍干燥機(jī)中凍干；再干燥溫度設(shè)定為40°C (測(cè)定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為43°C )，干燥時(shí)間為36小時(shí)，凍干品經(jīng)過(guò)篩混勻，得到微球。
[0022]對(duì)微球的醋酸含量進(jìn)行測(cè)定，具體見(jiàn)表1[0023]實(shí)施例2采用醋酸艾塞那肽+PLGA重量:清洗液=1:300制備艾塞那肽微球
[0024]制備方法:稱取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸餾水25ml攪拌溶解，配制成溶液，稱取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A17000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml攪拌溶解，將二個(gè)溶液混合均勻得初乳；將配制好的1%PVA溶液75L除菌過(guò)濾后加入至真空乳化攪拌機(jī)(以下簡(jiǎn)稱微球制備釜)中并冷卻至7~13°C，作為水相。將初乳加入至微球制備釜中，均質(zhì)乳化速度為400rpm,加料結(jié)束繼續(xù)乳化60s后，降低均質(zhì)攪拌速度為150rpm,維持4h，待微球固化后過(guò)濾收集微球，稱量45kg蒸餾水作為清洗液沖洗微球，轉(zhuǎn)移至凍干盤中，加入甘露醇注射液和適量水溶液，置冷凍干燥機(jī)中凍干；再干燥溫度設(shè)定為40°C(測(cè)定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為43°C)，干燥時(shí)間為36小時(shí)，凍干品經(jīng)過(guò)篩混勻，得到微球。
[0025]對(duì)微球的醋酸含量進(jìn)行測(cè)定，具體見(jiàn)表1
[0026]實(shí)施例3采用醋酸艾塞那肽+PLGA重量:清洗液=1:330制備艾塞那肽微球
[0027]制備方法:稱取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸餾水25ml攪拌溶解，配制成溶液，稱取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A16000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml攪拌溶解，將二個(gè)溶液混合均勻得初乳；將配制好的1%PVA溶液75L除菌過(guò)濾后加入至真空乳化攪拌機(jī)(以下簡(jiǎn)稱微球制備釜)中并冷卻至7~13°C，作為水相。將初乳加入至微球制備爸中，均質(zhì)乳化速度為400rpm,加料結(jié)束繼續(xù)乳化60s后，降低均質(zhì)攪拌速度為150rpm,維持4h，待微球固化后過(guò)濾收集微球，稱量49.5kg蒸餾水作為清洗液沖洗微球，轉(zhuǎn)移至凍干盤中，加入甘露醇注射液和適量水溶液，置冷凍干燥機(jī)中凍干；再干燥溫度設(shè)定為40°C (測(cè)定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為43°C )，干燥時(shí)間為36小時(shí)，凍干品經(jīng)過(guò)篩混勻，得到微球。
[0028]對(duì)微球的醋酸含量進(jìn)行測(cè)定，具體見(jiàn)表1
[0029]實(shí)施例4采用醋酸艾塞那肽+PLGA重量:清洗液=1:400制備艾塞那肽微球
[0030]制備方法:稱取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸餾水25ml攪拌溶解，配制成溶液，稱取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A16000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml攪拌溶解，將二個(gè)溶液混合均勻得初乳；將配制好的1%PVA溶液75L除菌過(guò)濾后加入至真空乳化攪拌機(jī)(以下簡(jiǎn)稱微球制備釜)中并冷卻至7~13°C，作為水相。將初乳加入至微球制備釜中，均質(zhì)乳化速度為400rpm,加料結(jié)束繼續(xù)乳化60s后，降低均質(zhì)攪拌速度為150rpm,維持4h，待微球固化后過(guò)濾收集微球，稱量60kg蒸餾水作為清洗液沖洗微球，轉(zhuǎn)移至凍干盤中，加入甘露醇注射液和適量水溶液，置冷凍干燥機(jī)中凍干；再干燥溫度設(shè)定為40°C(測(cè)定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為43°C )，干燥時(shí)間為36小時(shí)，凍干品經(jīng)過(guò)篩混勻，得到微球。
[0031]對(duì)微球的醋酸含量進(jìn)行測(cè)定，具體見(jiàn)表1
[0032]實(shí)施例5采用再干燥溫度設(shè)定為38°C制備艾塞那肽微球
[0033]制備方法:稱取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸餾水25ml攪拌溶解，配制成溶液，稱取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A16000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml攪拌溶解，將二個(gè)溶液混合均勻得初乳；將配制好的1%PVA溶液75L除菌過(guò)濾后加入至真空乳化攪拌機(jī)(以下簡(jiǎn)稱微 球制備釜)中并冷卻至7~13°C，作為水相。將初乳加入至微球制備爸中，均質(zhì)乳化速度為400rpm,加料結(jié)束繼續(xù)乳化60s后，降低均質(zhì)攪拌速度為150rpm,維持4h，待微球固化后過(guò)濾收集微球，稱量49.5kg蒸餾水作為清洗液沖洗微球，轉(zhuǎn)移至凍干盤中，加入甘露醇注射液和適量水溶液，置冷凍干燥機(jī)中凍干；再干燥溫度設(shè)定為38°C (測(cè)定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為43°C )，干燥時(shí)間為96小時(shí)，凍干品經(jīng)過(guò)篩混勻，得到微球。
[0034]對(duì)微球的醋酸含量進(jìn)行測(cè)定，具體見(jiàn)表1
[0035]對(duì)比例I制備醋酸含量超過(guò)0.01%的艾塞那肽微球
[0036]稱取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸餾水25ml攪拌溶解，配制成溶液，稱取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A)，加二氯甲烷(CH2Cl2)675ml攪拌溶解，將二個(gè)溶液混合均勻得初乳；將配制好的1%PVA溶液75L除菌過(guò)濾后加入至真空乳化攪拌機(jī)(以下簡(jiǎn)稱微球制備釜)中并冷卻至7~13°C，作為水相。將已除菌過(guò)濾的油相加入至微球制備釜中，均質(zhì)乳化速度為400rpm,加料結(jié)束繼續(xù)乳化60s后，降低均質(zhì)攪拌速度為150rpm,維持4h,待微球固化后過(guò)濾收集微球，稱量15kg蒸餾水作為清洗液沖洗微球，轉(zhuǎn)移至凍干盤中，加入甘露醇注射液和適量水溶液，置冷凍干燥機(jī)中凍干；再干燥溫度設(shè)定為38°C(測(cè)定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為43°C)，干燥時(shí)間為36小時(shí)，凍干品經(jīng)過(guò)篩混勻，得到微球。
[0037]對(duì)微球的醋酸含量進(jìn)行測(cè)定，具體見(jiàn)表1
[0038]試驗(yàn)例I不同艾塞那肽微球醋酸含量檢測(cè)
[0039]檢測(cè)方法:照氣相色譜法[中國(guó)藥典2010年版二部附錄V E第(3)法]測(cè)定。
[0040]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱為長(zhǎng)10米，內(nèi)徑0.32mm,內(nèi)層涂有0.33 μ m的FFAP — CB熔融石英毛細(xì)管柱。進(jìn)樣口溫度:220°C ;檢測(cè)器溫度:250°C ;分流比100:1 ;柱溫程序:起始溫度50°C，停留時(shí)間0.10分鐘，升溫速率30°C /分鐘，最終溫度230°C，停留時(shí)間5分鐘；進(jìn)樣量I μ I ;理論塔板數(shù)按乙酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5000，乙酸峰與內(nèi)標(biāo)峰的分尚度應(yīng)付合規(guī)定。
[0041]校正因子測(cè)定取正十六烷1.0ml置50ml量瓶中，加二甲基甲酰胺30ml溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取乙酸對(duì)照品約625mg，精密稱定，置100mL量瓶中，用二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。精密量取上述溶液IOml至100mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5ml，用二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻。取Iy I注入氣相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣3 — 5次，按平均峰面積計(jì)算校正因子。[0042]供試品溶液的制備與測(cè)定按實(shí)施例1、制備的戈舍瑞林微球取約50mg,精密稱定，置2ml量瓶中，加二甲基甲酰胺Iml溶解，精密加入100 μ I內(nèi)標(biāo)溶液，用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。取1μ I注入氣相色譜儀，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算。
[0043]檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1
[0044]
【權(quán)利要求】
1.一種含有艾塞那肽的組合物，所述組合物是微球形式，其特征在于所述艾塞那肽微球起始原料采用醋酸艾塞那肽和聚丙交酯乙交酯(PLGA)，制備完成后的組合物醋酸含量小于 0.01%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述相對(duì)于組合物總重量，艾塞那肽的含量為2-10%，優(yōu)選3-8%，更優(yōu)選4-6%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于相對(duì)于組合物總重量，聚丙交酯乙交酯(PLGA)的含量為90-98%，優(yōu)選92_97%，更優(yōu)選94_96%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于所述聚丙交酯乙交酯(PLGA)的分子量為6000-45000道爾頓，優(yōu)選為10000-30000道爾頓，更優(yōu)選10000-25000道爾頓，PLGA的丙交酯和乙交酯的摩爾比為90:10 — 10:90，優(yōu)選75:25 — 25:75，更優(yōu)選60:40-40:60，尤其是50:50, PLGA的特性粘度為0.1-0.40dL/g，優(yōu)選范圍0.10-0.35dL/g，更優(yōu)選為0.10-0.30dL/g。
5.制備權(quán)利要求1所述的組合物采用溶劑揮發(fā)法，其特征在于選用與微球重量比為1:250以上重量的清洗液清洗微球，同時(shí)設(shè)定再干燥溫度為醋酸艾塞那肽+PLGA混合物玻璃化轉(zhuǎn)變溫度以下。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，所述溶劑揮發(fā)法采用的有機(jī)溶劑可以溶解丙交酯乙交酯(PLGA)，其可以是二氯甲烷、丙酮、乙腈等可以溶解PLGA的有機(jī)溶劑，優(yōu)選二氯甲烷。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述清洗液采用蒸餾水或堿性緩沖液，優(yōu)選蒸餾水。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于選用的清洗液的重量與微球的重量比為1:330以上。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述凍干微球設(shè)定再干燥溫度為醋酸艾塞那肽+PLGA混合物玻璃化轉(zhuǎn)變溫度以下3度。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述組合物在制備2型糖尿病治療藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K38/22GK103932992SQ201410153089
【公開(kāi)日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年4月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月16日
【發(fā)明者】王濤, 王麒麟, 徐錢錢, 孫麗芳, 孟瑩, 李菊 申請(qǐng)人:山東綠葉制藥有限公司