一種天蘭草活性提取物的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)與鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種天蘭草活性提取物的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)與鑒別方法。將藥用植物天蘭草的根、莖、葉、果或全草的甲醇提取物經(jīng)過活性炭脫色、水-氯仿分配萃取、甲醇重結(jié)晶進一步純化得到白色晶體狀的天蘭草活性提取物。該提取物可通過硼氫化鈉處理后與乙酸酐-濃硫酸混合試劑混合呈現(xiàn)的特殊顯色反應(yīng)加以鑒別。體外抑菌試驗表明，該提取物具有顯著的抑菌活性，可作為活性添加劑應(yīng)用于抗菌藥物和日用保健品的制備。
【專利說明】一種天蘭草活性提取物的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)與鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明是關(guān)于一種天蘭草活性提取物的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)與鑒別方法，屬于生物化工【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]天蘭草為馬鞭草科一年生或多年生直立或半藤本狀灌木，高0.5-2米，莖枝無刺或有彎鉤刺，稍被毛。葉對生，卵形或矩圓狀卵形，長3-9厘米，寬2-3.5厘米，先端漸尖，基部闊楔形，邊緣有鈍齒，上面粗糙而有短刺毛，下面被小剛毛。全年開花，腋生，初為黃色、淡紅色，漸變橙色或深紅色，頭狀花序，稠密，苞片狹長，花冠長約I厘米。核果球形，肉質(zhì)，長約5毫米，成熟時紫黑色，有骨質(zhì)的小分核2顆。民間用其治療頭痛、小兒嗜睡和婦女陰癢，但其藥用價值還沒有得到全面開發(fā)利用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]技術(shù)問題:本發(fā)明的目的在于提供一種天蘭草活性提取物的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)與鑒別方法。
[0004]解決方案:本發(fā)明為了達到上述目的而采用的技術(shù)解決方案如下。
[0005]本發(fā)明所述天蘭草活性提取物的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)是將藥用植物天蘭草的根、莖、葉、果或全草的甲醇提取物經(jīng)過活性炭脫色、水-氯仿分配萃取、甲醇重結(jié)晶進一步純化，得到白色晶體狀的天蘭草活性提取物。該提取物經(jīng)硼氫化鈉處理后與乙酸酐-濃硫酸混合后可呈現(xiàn)特殊的顯色反應(yīng)，據(jù)此方法可快速對其進行定性鑒別。
[0006]發(fā)明有益效果:本發(fā)明的有益效果是采用本發(fā)明的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)可以高效獲得白色晶體狀的天蘭草活性提取物，并可以通過本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的特殊顯色反應(yīng)對其進行快速定性鑒別。另外，本發(fā)明的抗菌試驗結(jié)果證明，上述天蘭草活性提取物對供試病原菌具有顯著的抑制作用，可作為天然的具有抗菌消炎、祛疹止癢、清除頭皮屑等功效的活性添加劑應(yīng)用于抗菌藥物和日用保健品的制備。
[0007]【具體實施方式】:以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0008]實施例1天蘭草活性提取物的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)。
[0009]采集藥用植物天蘭草的根、莖、葉、果或全草，風(fēng)干，粉碎，稱取Ikg藥粉，加入5L甲醇于50°C以下浸泡提取24h，浸泡期間不時搖晃，過濾，得甲醇浸泡提取液和藥渣，藥渣再加入5L甲醇重復(fù)提取一次。甲醇浸泡提取液合并，加入200g活性碳于50°C以下攪拌脫色，抽濾得金黃色濾液，濾液于50°C以下減壓濃縮回收甲醇后得到提取浸膏，將提取浸膏懸浮于水中，用等體積氯仿萃取2次，氯仿萃取液合并于50°C以下減壓濃縮回收氯仿后得到氯仿萃取物，氯仿萃取物加適量甲醇微熱溶解，于-18°C靜置24h，析出大量白色晶體，抽濾，晾干，得天蘭草活性提取物。
[0010]實施例2天蘭草活性提取物定性鑒別。
[0011]乙酸酐-濃硫酸(9: I)混合試劑:用時新鮮制備，制備方法是在不斷攪拌下將預(yù)先冷卻好的濃硫酸加入到在冰浴冷卻下的乙酸酐中。
[0012]定性鑒別方法:取ImL濃度為lmg/mL的天蘭草活性提取物的甲醇溶液置于一干燥干凈的試管中，然后加入適量硼氫化鈉固體試劑，將試管置于沸水浴中加熱完全揮發(fā)掉甲醇試劑，待試管冷卻至室溫后，加入3mL乙酸酐-濃硫酸(9: I)混合試劑，顏色變化依次出現(xiàn)紅色、紫色、藍色，最后變?yōu)榫G色。紅色、紫色和綠色時間非常短暫，但藍色相對穩(wěn)定。這是本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的天蘭草活性提取物的特有顯色反應(yīng)，可據(jù)此進行鑒別。
[0013]實施例3天蘭草活性提取物體外抑菌活性藥敏實驗。
[0014]采用紙片瓊脂擴散法測定天蘭草活性提取物的抑菌活性，根據(jù)紙片擴散法抑菌結(jié)果判斷標準，抑菌圈直徑> 20 mm為極敏，15-20 mm為高敏，10_15mm為中敏，< IOmm為低敏，無抑菌圈則不敏感。供試細菌有金黃色葡萄球菌aarew)、大腸桿舊{Escherichia co7i )、綠胺桿菌aeruginosa )和枯草芽抱桿菌subtilis),供試真菌有腐皮鐮刀菌iFusarium solani )和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)0以DMSO為溶劑將上述天蘭草活性提取物配制成濃度為5mg/mL的藥液，以純?nèi)軇〥MSO為空白對照，鏈霉素為陽性對照，接種后細菌于37°C孵育24h (真菌48h)后測定抑菌圈直徑大小，平行實驗三次，取平均值。試驗結(jié)果抑菌圈直徑分別為:金黃色葡萄球菌20mm、大腸桿菌21mm、綠膿桿菌37mm和枯草芽孢桿菌22mm、腐皮鐮刀菌59mm和寄生曲霉30mmo
[0015]抑菌活性藥敏實驗結(jié)果表明，在濃度為5mg/mL時，天蘭草活性提取物具有有效抑制革蘭氏細菌和靶真菌增殖的作用。因而可作為天然的具有抗菌消炎、祛疹止癢、清除頭皮屑等功效的活性添加劑應(yīng)用于抗 菌藥物和日用保健品的制備。
【權(quán)利要求】
1.一種天蘭草活性提取物的關(guān)鍵生產(chǎn)技術(shù)，其特征是將藥用植物天蘭草的根、莖、葉、果或全草風(fēng)干后粉碎，稱取I kg藥粉，加入5 L甲醇于50 V以下浸泡提取24 h，浸泡期間不時搖晃，過濾，得甲醇浸泡提取液和藥渣，藥渣再加入5 L甲醇重復(fù)提取一次，甲醇浸泡提取液合并，加入200 g活性碳于50 °C以下攪拌脫色，抽濾得金黃色濾液，濾液于50 °C以下減壓濃縮回收甲醇后得到提取浸膏，將提取浸膏懸浮于水中，用等體積氯仿萃取2次，氯仿萃取液合并于50 °C以下減壓濃縮回收氯仿后得到氯仿萃取物，氯仿萃取物加適量甲醇微熱溶解，置于-18 °C靜置24 h，析出大量白色晶體，抽濾，晾干，得白色晶體狀天蘭草活性提取物。
2.—種天蘭草活性提取物的鑒別方法，其特征是取I mL濃度為I mg/mL的權(quán)利要求1所述天蘭草活性提取物的甲醇溶液置于一干燥干凈的試管中，然后加入適量硼氫化鈉固體試劑，將試管置于沸水浴中加熱完全揮發(fā)掉甲醇試劑，待試管冷卻至室溫后，加入9: I乙酸酐-濃硫酸混合 試劑3 mL，顏色變化依次出現(xiàn)紅色、紫色、藍色，最后變?yōu)榫G色，紅色、紫色和綠色時間非常短暫，但藍色相對穩(wěn)定，這是天蘭草活性提取物特有的顯色特征，可據(jù)此進行鑒別。
【文檔編號】A61K36/85GK103655945SQ201310730303
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月26日
【發(fā)明者】朱峰, 陳智剛, 陳志豪, 陳忻, 龐秀枰, 何忠東 申請人:佛山市夢莎美容化妝品有限公司, 佛山市安安美容保健品有限公司, 朱峰