專利名稱：一種生物殺菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治果疏病害的生物殺菌劑，本發(fā)明還涉及該生物殺菌劑的制備方法。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的殺菌劑絕大部分都是使用化學(xué)農(nóng)藥，利用抗菌素中的化學(xué)物質(zhì)作用來抑制殺滅病菌。這類產(chǎn)品在生產(chǎn)和使用中勢(shì)必帶來污染和農(nóng)藥殘留等藥害問題。如長(zhǎng)期頻繁使用化學(xué)農(nóng)藥可導(dǎo)致病菌、蟲害出現(xiàn)抗藥性，使化學(xué)農(nóng)藥本身的藥效逐漸降低，為達(dá)到殺菌目的就需加大用藥量。這樣，不僅會(huì)提高農(nóng)業(yè)成本，還使農(nóng)藥殘留量激增，對(duì)人體健康十分不利，又嚴(yán)重污染環(huán)境；由于化學(xué)農(nóng)藥的廣譜滅殺作用，施用后還大量殺死害蟲天敵，破壞生態(tài)平衡。為了克服上述缺點(diǎn)，人們研發(fā)了許多生物農(nóng)藥，其中不少生物農(nóng)藥具有較好的防治能力，還能保護(hù)害蟲天敵，對(duì)人畜無害，不污染環(huán)境。但當(dāng)前國(guó)內(nèi)所研制生產(chǎn)的生物農(nóng)藥殺菌劑由于其防治機(jī)理是通過微生物活體細(xì)胞自身的代謝物來抑制有害微生物，其制備工藝是在制備過程中以提取活菌為目的，且是在活菌量最多時(shí)才進(jìn)行提取。在實(shí)踐過程中發(fā)現(xiàn)，生物農(nóng)藥殺菌劑存在防治穩(wěn)定性差、作用效果慢等缺點(diǎn)，大量實(shí)踐證明，導(dǎo)致上述作用效果慢的原因在于微生物殺菌劑施用后其活體細(xì)胞的存活率及其代謝強(qiáng)弱是和施用地的環(huán)境密切相關(guān)的，環(huán)境的差異就會(huì)帶來作用效果上的差異。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種穩(wěn)定性高、作用效果快的、以玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株及其代謝物中的抗菌物為主要?dú)⒕镔|(zhì)成份的生物殺菌劑。
本發(fā)明的另一目的是提供該生物殺菌劑的制備方法。
本發(fā)明使用的微生物是采用新篩選出的玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)的新菌種。該新菌種已委托“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”進(jìn)行保藏，菌株名稱玫瑰黃鏈霉菌0116，保藏編號(hào)CGMCCNO.1471見保存(存活)證明。
本發(fā)明的目的是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種生物殺菌劑，其組份及含量為玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株發(fā)酵液93---96％；苯乙基酚聚氧乙烯醚3---5％；醋酸鈉(CH3COONa)0.5---1％；醋酸(CH3COOH)0.3---1％；一種生物殺菌劑的制備方法，工藝流程包括新菌種的斜面菌活化培養(yǎng)——搖床培養(yǎng)——種子罐培養(yǎng)——發(fā)酵罐培養(yǎng)——發(fā)酵液沉淀去除殘?jiān)砑臃€(wěn)定劑—成品包裝，其特征是a.在進(jìn)行斜面菌種培養(yǎng)工序時(shí)，是采用新篩選出的玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)的新菌種；b.在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，發(fā)酵罐內(nèi)的攪拌速度為接種后先靜置4h，4-12h為140轉(zhuǎn)/min，12h后逐步提高至250轉(zhuǎn)/mn，至120h細(xì)菌代謝充分后，停止攪拌；
c.在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，罐內(nèi)的溫度控制為開機(jī)后0---20h為29±3℃，20h以后為32-34℃，過濾后保持為8-15℃。
d.在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，罐內(nèi)的PH值控制為0-24h的PH值為6.4-6.7，放罐提取前的PH值為7.5-7.8，停機(jī)沉淀后調(diào)PH值為4-4.5。
生物殺菌劑(以下簡(jiǎn)稱0116水劑)的田間藥效試驗(yàn)材料和方法試驗(yàn)材料試驗(yàn)對(duì)象為白粉病。
試驗(yàn)作物為黃瓜和甜瓜，選用感病品種。
試驗(yàn)地點(diǎn)試驗(yàn)地點(diǎn)安排在韓村河歷年發(fā)病重的地塊。2003年和2004年在進(jìn)行小區(qū)試驗(yàn)，2005年進(jìn)行大田試驗(yàn)。共3年的田間試驗(yàn).
供試藥劑和使用倍數(shù)2004年生物殺菌劑100倍和200倍；水劑300倍和600倍；對(duì)照藥劑仙生600倍；2005年生物殺菌劑水劑300倍 對(duì)照藥劑仙生600倍；試驗(yàn)設(shè)計(jì)2004年每個(gè)濃度重復(fù)四次，共計(jì)9個(gè)處理，36個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)面積25m2并要求發(fā)病重而均勻。
2005年三個(gè)大棚，重復(fù)3次。每個(gè)處理均以清水作對(duì)照。
施藥時(shí)間及方法在發(fā)病前按上述處理方法及濃度施藥，每隔7天一次，共3次。噴霧。
調(diào)查時(shí)間和次數(shù)初次調(diào)查藥劑處理前立即調(diào)查。
第二、三次調(diào)查在第二、三次噴藥前調(diào)查。
最終調(diào)查在第三次用藥后的8-10天。
調(diào)查方法每小區(qū)隨機(jī)取四點(diǎn)，每點(diǎn)調(diào)查二株的全部葉片，每片病斑占葉面積的百分率分級(jí)記錄。分級(jí)方法0級(jí)無病斑；1級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積5％以下；3級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積6-10％；5級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積11-20％；7級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積21-40％；9級(jí)病斑面積占整個(gè)葉面積40％以上。
防效計(jì)算方法病情指數(shù)按常規(guī)計(jì)算。
防治效果(％)＝(空白對(duì)照區(qū)施藥后病指-處理區(qū)施藥后病指)/空白對(duì)照區(qū)施藥后病指*100根據(jù)試驗(yàn)情況進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)并對(duì)相關(guān)結(jié)果進(jìn)行分析。
對(duì)作物的直接影響對(duì)作物有無藥害，記錄藥害的類型和程度。對(duì)作物有無其他有益影響，如刺激生長(zhǎng)等。
結(jié)果與分析2004年0116水劑田間防治黃瓜白粉病試驗(yàn)結(jié)果2004年在韓村河進(jìn)行試驗(yàn)。0116水劑采用300倍和600倍液噴霧3次，每次間隔7天，結(jié)果0116水劑300倍液與化學(xué)制劑62.25％仙生600倍噴霧的效果相當(dāng)如表1所示。
表1 2004年生防制劑防治黃瓜白粉病的溫室試驗(yàn)結(jié)果

2005年0116水劑田間防治黃瓜白粉病試驗(yàn)結(jié)果在2004年試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，2005年又在韓村河進(jìn)行擴(kuò)大面積和作物的試驗(yàn)。0116水劑采用300倍液噴霧3次，每次間隔7天，結(jié)果水劑300倍液顯著好于化學(xué)農(nóng)藥62.25％仙生600倍噴霧的效果如表2所示。
兩年試驗(yàn)均未發(fā)現(xiàn)藥害，葉色比空白對(duì)照濃綠，延緩了衰老。
表2 2005年生防制劑防治黃瓜白粉病的溫室試驗(yàn)結(jié)果

以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明采用本發(fā)明技術(shù)的配方及工藝生產(chǎn)的生物殺菌劑可以像一般農(nóng)藥一樣方便使用。
見效速度快，由于有效成份富含生化產(chǎn)物，可以直接作用于防治對(duì)象，所以一般情況下其作用效果快于活菌。使用時(shí)受環(huán)境影響較小，防治效果也就比普通生物農(nóng)藥穩(wěn)定。用于葉面噴霧防治農(nóng)作物的白粉病，效果顯著。
實(shí)施例1該生物殺菌劑的制備方法，工藝流程包括新菌種的斜面菌活化培養(yǎng)——搖床培養(yǎng)——種子罐培養(yǎng)——發(fā)酵罐培養(yǎng)——發(fā)酵液沉淀去除殘?jiān)砑臃€(wěn)定劑—成品包裝，其具體要求是在進(jìn)行斜面菌種培養(yǎng)工序時(shí)，是采用新篩選出的玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)的新菌種。其培養(yǎng)基配方主要包括淀粉、玉米漿及適量的磷酸二氫鉀(KH2PO4)、氯化鈉(NaCl)、硫酸鎂(MgSO4)、硫酸亞鐵(FeSO4)、碳酸鈣(CaCO3)，其余為潔凈水。其配方中淀粉，玉米漿干物質(zhì)占培養(yǎng)基的重量百分比是淀粉為1.5％，玉米漿干物質(zhì)為2％。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，發(fā)酵罐內(nèi)的攪拌速度為接種后先靜置4h，4-12h為140轉(zhuǎn)/min，12h后逐步提高至250轉(zhuǎn)/mn，至細(xì)菌充分代謝后，停止攪拌。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，罐內(nèi)的溫度控制為開機(jī)后0--20h為27℃，20h以后為32℃，過濾后保持為15℃。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，用NAOH或5％鹽酸水調(diào)罐內(nèi)的PH值，將其控制為0-24h的PH值為6.4，放罐提取前的PH值為7.5，停機(jī)沉淀后調(diào)PH值為4。
配制1000公斤生物殺菌劑，具體方法為稱取玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株發(fā)酵液950公斤；苯乙基酚聚氧乙烯醚40公斤；醋酸鈉(CH3COONa)5公斤；醋酸(CH3COOH)5公斤；加入到1000升調(diào)制釜中，攪拌至醋酸鈉完全溶解。按產(chǎn)品要求包裝成成品。
實(shí)施例2該生物殺菌劑的制備方法，工藝流程包括新菌種的斜面菌活化培養(yǎng)——搖床培養(yǎng)——種子罐培養(yǎng)——發(fā)酵罐培養(yǎng)——發(fā)酵液沉淀去除殘?jiān)砑臃€(wěn)定劑—成品包裝，其具體要求是a，在進(jìn)行斜面菌種培養(yǎng)工序時(shí)，是采用新篩選出的玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)的新菌種。其培養(yǎng)基配方主要包括淀粉、玉米漿及適量的磷酸二氫鉀(KH2PO4)、氯化鈉(NaCl)、硫酸鎂(MgSO4)、硫酸亞鐵(FeSO4)、碳酸鈣(CaCO3)，其余為潔凈水。其配方中淀粉，玉米漿干物質(zhì)占培養(yǎng)基的重量百分比是淀粉為2.5％，玉米漿干物質(zhì)為3％。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，發(fā)酵罐內(nèi)的攪拌速度為接種后先靜置4h，4-12h為140轉(zhuǎn)/min，12h后逐步提高至250轉(zhuǎn)/mn，至細(xì)菌充分代謝后，停止攪拌。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，罐內(nèi)的溫度控制為開機(jī)后0--20h為29℃，20h以后為33℃，過濾后保持為8℃。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，用NAOH或5％鹽酸水調(diào)罐內(nèi)的PH值，將其控制為0-24h的PH值為6.6，放罐提取前的PH值為7.6，停機(jī)沉淀后調(diào)PH值為4.3。
配制1000公斤生物殺菌劑，具體方法為稱取玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株發(fā)酵液930公斤；苯乙基酚聚氧乙烯醚60公斤；醋酸鈉(CH3COONa)5公斤；醋酸(CH3COOH)5公斤；加入到1000升調(diào)制釜中，攪拌至醋酸鈉完全溶解。按產(chǎn)品要求包裝成成品。
實(shí)施例3該生物殺菌劑的制備方法，工藝流程包括新菌種的斜面菌活化培養(yǎng)——搖床培養(yǎng)——種子罐培養(yǎng)——發(fā)酵罐培養(yǎng)——發(fā)酵液沉淀去除殘?jiān)砑臃€(wěn)定劑—成品包裝，其具體要求是在進(jìn)行斜面菌種培養(yǎng)工序時(shí)，是采用新篩選出的玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)的新菌種。其培養(yǎng)基配方主要包括淀粉、玉米漿及適量的磷酸二氫鉀(KH2PO4)、氯化鈉(NaCl)、硫酸鎂(MgSO4)、硫酸亞鐵(FeSO4)、碳酸鈣(CaCO3)，其余為潔凈水。其配方中淀粉，玉米漿干物質(zhì)占培養(yǎng)基的重量百分比是淀粉為2.5％，玉米漿干物質(zhì)為3％。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，發(fā)酵罐內(nèi)的攪拌速度為接種后先靜置4h，4-12h為140轉(zhuǎn)/min，12h后逐步提高至250轉(zhuǎn)/mn，至細(xì)菌充分代謝后，停止攪拌。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，罐內(nèi)的溫度控制為開機(jī)后0--20h為32℃，20h以后為34℃，過濾后保持為15℃。
在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，用NAOH或5％鹽酸水調(diào)罐內(nèi)的PH值，將其控制為0-24h的PH值為6.7，放罐提取前的PH值為7.8，停機(jī)沉淀后調(diào)PH值為4.5。
配制1000公斤生物殺菌劑，具體方法為稱取玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株發(fā)酵液960公斤；苯乙基酚聚氧乙烯醚30公斤；醋酸鈉(CH3COONa)5公斤；醋酸(CH3COOH)5公斤；加入到1000升調(diào)制釜中，攪拌至醋酸鈉完全溶解。按產(chǎn)品要求包裝成成品。
權(quán)利要求
1.一種生物殺菌劑，其特征在于，其組份及含量為玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株發(fā)酵液93---96％；苯乙基酚聚氧乙烯醚3---5％；醋酸鈉(CH3COONa)0.5---1％；醋酸(CH3COOH)0.3---1％；
2.一種生物殺菌劑的制備方法，工藝流程包括新菌種的斜面菌活化培養(yǎng)——搖床培養(yǎng)——種子罐培養(yǎng)——發(fā)酵罐培養(yǎng)——發(fā)酵液沉淀去除殘?jiān)砑臃€(wěn)定劑—成品包裝，其特征是a.在進(jìn)行斜面菌種培養(yǎng)工序時(shí)，是采用新篩選出的玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)的新菌種；b.在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，發(fā)酵罐內(nèi)的攪拌速度為接種后先靜置4h，4-12h為140轉(zhuǎn)/min，12h后逐步提高至250轉(zhuǎn)/mn，至120h細(xì)菌代謝充分后，停止攪拌；c.在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，罐內(nèi)的溫度控制為開機(jī)后0---20h為29±3℃，20h以后為32-34℃，過濾后保持為8-15℃。d.在進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)工序時(shí)，罐內(nèi)的PH值控制為0-24h的PH值為6.4-6.7，放罐提取前的PH值為7.5-7.8，停機(jī)沉淀后調(diào)PH值為4-4.5。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種生物殺菌劑，其組份及含量為玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces.roseoflaver)的誘變菌株0116菌株發(fā)酵液93－96％；苯乙基酚聚氧乙烯醚3－5％；醋酸鈉(CH
文檔編號(hào)A01P3/00GK1957711SQ20051011742
公開日2007年5月9日 申請(qǐng)日期2005年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月2日
發(fā)明者劉大群, 赤國(guó)彤, 孟慶芳, 李亞寧, 張立榮 申請(qǐng)人:河北農(nóng)業(yè)大學(xué)